Dr5配体药物偶联物的制作方法
【专利说明】DR5配体药物偶联物
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2012年4月24日提交的美国临时申请序号61/637, 808的优先权；后 者的内容为所有目的通过引用整体结合在此。
[0003] 在联邦资助研发下做出的发明的声明
[0004] 不适用
[0005] 对以ASCII文本文件提交的"序列表"、表格或计算机程序列表附录的引用
[0006] 在文档-75-lPC.TXT中列出的序列表，生成于2013年4月22日，20,480字节，机 器格式IBM-PC，MS-Windows操作系统，为所有目的通过引用整体结合在此。
[0007] 发明背景
[0008] 参与细胞凋亡诱导的细胞表面受体，如含死亡结构域的受体，因为细胞内 的配体结合和凋亡信号的生物触发诱导而在细胞膜表面多聚化（CelI Death and Differentiation，10:66-75(2003))。此类细胞表面受体的例子包括肿瘤坏死因子（下文 称为TNF)-相关的凋亡诱导配体（下文称为TRAIL)受体家族。TRAIL是TNF蛋白家族的一 员，其包括 Fas 配体和 TNF-a (Wiley SR，等。Immunity 1995 年 12 月；3 (6): 673-82)。这 些蛋白是强有力的凋亡诱导剂。
[0009] TNF家族蛋白的受体的特征在于胞外域中半胱氨酸富集的重复序列。其中，作为 Fas配体受体的Fas和作为TNF- α受体的TNF受体I (下文称为TNFRI)都是指含有死亡 域（death domain)的受体。这些受体具有对凋亡信号传导必不可少的胞内域，该胞内域被 称为死亡域并且和果幡自杀基因，reaper同源（Golstain，P，等，（1995)Cell. 81，185-186， White，K，等，（1994) Science 264,677-683) 〇
[0010] 现已鉴定了 5个TRAIL受体，其中两个（DR4[TRAIL-R1]和DR5[TRAIL-R2])可以 诱导凋亡信号传导，而其他三个（DcRl[TRAIL-R3]，DcR2[TRAIL-R4]，和骨保护素[0PG]) 不能诱导凋亡信号传导。与Fas和TNFRI相似，DR4和DR5的胞内区段都含有死亡域并 且经由包括Fas结合死亡域蛋白（下文称为FADD)和胱冬酶-8的通路诱导凋亡信号 传导（Chaudhary PM，等· Immunity 1997Dec ;7 (6) :821-30 ;Schneider P 等· Immunity 1997Dec ;7 (6):821-30)。
[0011] 对于上述的Fas，TNFRl，DR4,和DRS，分别结合这些分子的激动性抗体 对在其表面上有目标分子的细胞具有诱导凋亡的活性（Journal of Cellular Physiology,209:1021-1028(2006) ；Leukemia, Apl ；21 (4):805-812(2007) ；Blood, 99:1666-1675(2002) ;Cellular Immunology， Jan ;153(1):184-193(1994))。 这 些激动性抗体的效能通过与二抗或效应细胞的交联而得到增强（Journal of Immunology,149:3166-3173(1992) ；European Journal of immunology, Oct ； 23(10):2676-2681(1993))。
[0012] 具有结合参与凋亡诱导的细胞表面受体能力的抗_DR5抗体目前正在临床开发作 为治疗剂，并有望表现出治疗效果和杀伤以特异性和激动性方式表达受体的细胞（癌症细 胞和免疫疾病相关的细胞）。有人提出，该抗体的作用机制通过在抗体与受体结合之前或之 后，抗体分子交联在一起形成多聚体来介导。抗体的这种多聚化随后导致抗原受体的多聚 化（即，凋亡诱导）。在体外实验中显示通过加入针对该抗体的二抗进行人工交联是提高 抗体活性所需，以及在体内，经由免疫效应细胞上Fc受体的交联是产生该抗体活性所需的 作用机制。近来，已经尝试通过改变抗体的结构以进一步提高抗体的原始功能。例如，据报 道，去除抗体上特定的碳水化合物结构提高了 Fc受体的亲和力。此类作用机制提示，细胞 表面受体的非内化抗体是优选的。
[0013] 然而，本领域仍需要用于治疗表达DR5的癌症的方法。
[0014] 发明概述
[0015] 本发明提供了将药物靶向递送到表达DRS的细胞的配体药物偶联物，等等。发明 人进行了广泛的研宄并发现，含有能诱导细胞凋亡的抗体的抗体-药物偶联物对癌症的治 疗比单用这样的抗体效果更显著。通过使用本发明的抗体-药物偶联物，抗体本身表现出 凋亡诱导作用，而偶合到抗体的药物也表现出治疗效果。因为这些原因，抗体-药物偶联物 对那些单用抗体无法治疗的患者具有有效的治疗效果。本文描述的配体药物偶联物对表达 DR5的细胞，例如表达DR5的癌症细胞具有强效的细胞毒性和/或细胞抑制性活性。在一些 实施例中，配体药物偶联物具有如下式：
[0016] L- (LU-D) p (I)
[0017] 其中，L为配体单元，LU是连接体单元和D是药物单元（或细胞毒性剂）。下标p 是从1到20的整数。因此，配体药物偶联物包含共价连接于至少一个药物单元的配体单元。 所述药物单元可直接或通过连接单元（-LU-)共价连接。下文将更全面描述的配体单元是 DR5结合剂，如抗-DR5抗体。因此，本发明还提供治疗，例如各种癌症的方法。这些方法包 括使用配体药物偶联物，其中配体单元是特异性结合DR5的抗DR5结合剂。DR5结合剂可以 是，例如，抗DR5抗体，抗DR5抗原结合片段，或包含人源化抗体重链和/或轻链可变区的氨 基酸序列的其他DR5结合剂，或其衍生物。
[0018] 在一些实施例中，配体药物偶联物包含共价连接于细胞毒性剂的DR5结合剂。在 一些实施例中，配体药物偶联物具有如下式：
[0019] L- (LU-D) p (I)
[0020] 或其药学上可接受的盐，偶联物对表达DR5的靶细胞有特异性，其中：
[0021] L是作为DR5结合试剂的配体单元；和
[0022] (LU-D)是连接体单元-药物单元部分，其中LU是连接体单元，D是对所述革巴细胞 具有细胞抑制性或细胞毒性活性的药物单元；和
[0023] 下标p是从1到20的整数。
[0024] 在一些实施例中，具有式（I)的配体药物偶联物包含具有式叫或D F的药物单元：
[0025]
【主权项】
1. 一种具有如下式的配体药物偶联物： L-(LU-D)P (I) 或其药学上可接受的盐，对表达DR5的靶细胞具有特异性，其中： L是配体单元，是抗DR5的抗体，包含（a)具有⑶R1XDR2和⑶R3的重链免疫球蛋白， 所述CDR1由SEQIDNO: 11的氨基残基1-5组成，所述CDR2由SEQIDNO: 12的氨基残基 1-17组成，CDR3由SEQIDNO: 13的氨基残基1-13组成；和（b)具有CDR1、CDR2和CDR3的 轻链免疫球蛋白，所述⑶R1由SEQIDNO: 14的氨基残基1-16组成，所述⑶R2由SEQID NO: 15的氨基残基1-7组成，所述⑶R3由SEQIDNO: 16的氨基残基1-9组成；和 (LU-D)是连接体单元-药物单元部分，其中 LU是连接体单元，和 D是药物单元，其中所述药物单元是奥瑞他汀；和 所述下标P是1至20的整数。
2. 如权利要求1所述的配体药物偶联物，其特征在于，所述奥瑞他汀是奥瑞他汀 E，AEB，AEVB，AFP，MMAF,或MMAE。
3. 如权利要求1所述的配体药物偶联物，具有如下式：
或其药学上可接受的盐形式，其中； S是所述配体单元的硫原子； 每一个W独立为氨基酸单元； 所述下标w是0至12的整数； Y是间隔单元；以及 所述下标y是〇, 1，或2。
4. 如权利要求3所述的配体药物偶联物，其特征在于，Ww是缬氨酸-瓜氨酸。
5. 如权利要求1所述的配体药物偶联物，具有如下式：
或其药学上可接受的盐形式，其中： mAb是所述抗DR5抗体； S是所述抗体的硫原子；和 P是1至8的整数。
6. 如权利要求1所述的配体药物偶联物，其特征在于，所述的抗DR5抗体包含重链可变 区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQIDNO:9的氨基酸残基1-122和所述轻链可变 区包含SEQIDNO: 10的氨基酸残基1-114。
7. 如权利要求1所述的配体药物偶联物，其特征在于，所述的抗DR5抗体包含SEQID NO:9的氨基酸残基1-452组成的重链和SEQIDNO: 10的氨基酸残基1-219组成的轻链。
8. 如权利要求1所述的配体药物偶联物，其特征在于，所述的抗DR5抗体包含SEQID NO:9的氨基酸残基1-451组成的重链和SEQIDNO: 10的氨基酸残基1-219组成的轻链。
9. 如权利要求1所述的配体药物偶联物，其特征在于，p从1至8。
10. -种药物组合物，其包含与药学上可接受的赋形剂相混合的如权利要求1-9任一 所述的配体药物偶联物。
11. 一种包含如权利要求1-9任一所述的配体药物偶联物的混合物的组合物，其特征 在于，平均P值在1至20之间。
12. 如权利要求11所述的组合物，其特征在于，平均p值从约3. 5至约4. 5。
13. -种包含如权利要求1-9任一所述的配体药物偶联物作为有效成分的抗肿瘤剂。
14. 一种治疗癌症的方法，所述癌症表达DR5蛋白，所述方法包括给予有此需要的对象 有效量的如权利要求1-9任一所述的配体药物偶联物。
15. 如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述表达DR5蛋白的癌症选自下组：黑色 素瘤，结肠直肠癌，非小细胞肺癌，子宫癌，胰腺癌，前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，和血液癌症。
16. 如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述DR5蛋白的癌症是胰腺癌。
17. 如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述DR5蛋白的癌症是黑色素瘤。
18. 如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述DR5蛋白的癌症是乳腺癌。
19. 如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述DR5蛋白的癌症是卵巢癌。
20. 如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述表达DR5蛋白的癌症是结肠直肠癌。
21. 如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述表达DR5蛋白的癌症是肾癌。
22. 如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述表达DR5蛋白的癌症是胶质母细胞 瘤。
【专利摘要】提供了具有通过连接基团和/或间隔物连接到能有效地治疗各种癌症的治疗剂的DRS结合部分的配体药物偶联物。在某些实施例中，配体-药物偶联具有下式：L-(LU-D)p，其中L为配体单元，LU是连接体单元和D是药物单元(或细胞毒性剂)。下标p是从1到20的整数。因此，配体药物偶联物包括共价连接至至少一个药物单元的配体单元。药物单元可以直接或经由连接体单元(-LU-)共价连接。配体单元是DR5结合剂，如抗-DRS抗体。
【IPC分类】A61K39-395
【公开号】CN104619339
【申请号】CN201380021880
【发明人】大塚敏明, 市川公久, 矢田亚由美
【申请人】西雅图基因公司, 第一三共株式会社
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2013年4月23日
【公告号】CA2869846A1, EP2841103A1, US20130280282, US20150079114, WO2013163229A1