一种抗辐射组合物及其制备方法_2

文档序号:8478837阅读:来源:国知局
聚集生长物。
[0050] 在一些实施例中,继代培养为暗培养;温度为25°C;时间为10天。
[0051] 在本发明的实施例中,继代培养采用遇到培养基,每g形成层细胞接种于IOcm2的 诱导培养基。
[0052] 经10天的继代培养,形成层细胞形成愈伤组织,每IOcm2的诱导培养基上约有愈 伤组织20. 8g。
[0053] -些实施例中,增殖培养基中,2, 4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的质量比为 2:1:1:1〇
[0054] 优选的,增殖培养基中2, 4-D的浓度为2.Omg/L。
[0055] 优选的,增殖培养基中BA的浓度为I.Omg/L。
[0056] 优选的,增殖培养基中水解酪蛋白的浓度为I.Omg/L。
[0057] 优选的,增殖培养基中活性炭的浓度为I.Omg/L。
[0058] 作为优选,增殖培养基的pH值为6.0。
[0059] 在本发明的实施例中,每g愈伤组织接入20mL增殖培养基。
[0060] 作为优选,摇床培养时,增殖培养基中还添加经灭菌的直径为0. 5cm的玻璃珠。
[0061] 优选的,玻璃珠的添加量为l〇〇g/L增殖培养基。
[0062] 实施例中,培养采用三角瓶,1000 mL三角瓶中加入200mL增殖培养基。
[0063] 在本发明的实施例中,摇床培养的条件为每小时用20W的白炽灯照射10min。
[0064] 在一些实施例中,摇床培养的温度为25°C;转速为120转/分钟;时间为14天。
[0065] 作为优选,在摇床培养7天后加入新鲜的增殖培养基。
[0066] 作为优选,加入新鲜的增殖培养基的体积为原增殖培养基的2倍。
[0067] 添加新鲜的增殖培养基后,其中细胞的密度为lX105/ml。
[0068] 采用本发明提供的方法进行摇床培养,愈伤组织成为单细胞悬液,细胞增殖速度 较快,用1〇〇目的不锈钢筛网过滤,除去细胞团、玻璃珠和残渣,获得细胞密度约〇. 5~ IXlOVmlo
[0069] 作为优选,步骤3中接种的密度为IX104/ml。
[0070] 在一些实施例中,扩大培养具体为:于20L的生物反应器中添加5L增殖培养基,培 养7天后添加增殖培养基至细胞浓度为IXIO5Ail,再培养7天。
[0071] 本发明提供的抗辐射组合物的制备方法,将苹果干细胞冻干粉、灵芝提取物和红 景天提取物混合,制得抗辐射组合物。
[0072] 本发明还提供了一种抗辐射保健品,包括本发明提供的抗辐射组合物。
[0073] 本发明提供的抗辐射保健品还包括保健品中可接受的辅料。
[0074] 本发明提供的抗辐射保健品的剂型为片剂或胶囊剂。
[0075] 作为优选,片剂为咀嚼片或普通压制片。
[0076] 作为优选,胶囊剂为软胶囊或普通胶囊剂。
[0077] 本发明提供了一种抗辐射胶囊,包括本发明提供的抗辐射组合物、润滑剂和崩解 剂。
[0078] 作为优选,润滑剂为硬脂酸镁;崩解剂为淀粉、交联羧甲基纤维素纳或交联聚维 酮。
[0079] 崩解剂可用来填充制剂的体积,以便于制剂成型,且能促使制剂在胃肠道中迅速 崩解成小粒子的辅料,润滑剂能够降低制备过程中药物与胶囊填充机中冲模孔壁之间摩擦 力的物质。
[0080] 本发明的实施例中,抗辐射胶囊中,本发明提供的抗辐射组合物、崩解剂和润滑剂 的质量比为(45~75) : (30~40) :0? 5。。
[0081] 在一些实施例中,抗辐射胶囊中,本发明提供的抗辐射组合物、崩解剂和润滑剂的 质量比为60 :35 :0. 5。
[0082] 本发明提供的抗辐射胶囊的制备方法为将本发明提供的抗辐射组合物粉碎后,与 崩解剂和润滑剂混合,填充胶囊,制得抗辐射胶囊。
[0083] 本发明将苹果干细胞冻干粉、灵芝提取物和红景天提取物进行复配后能够具有显 著的抗辐射功能,实验表明,本发明提供的组合物的抗辐射效果显著优于单独使用各组分 的作用,经30天内多次辐照小鼠睾丸染色体畸变情况测试显示,空白对照组的畸变细胞率 为21. 67%,而采用本发明提供的组合物能够将畸变细胞率降至7. 33%,其效果显著优于 单独使用苹果干细胞或灵芝提取物和红景天提取物。而经30天内多次辐照小鼠骨髓细胞 微核实验情况显示,空白对照组的微核率为〇. 117%,而采用本发明提供的组合物能够将微 核率提升至1. 27%,其效果显著优于单独使用苹果干细胞或灵芝提取物和红景天提取物。
【具体实施方式】
[0084] 本发明提供了一种抗辐射组合物及其制备方法,本领域技术人员可以借鉴本文内 容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员 来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施 例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文的方法和应用 进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
[0085] 本发明采用的仪器皆为普通市售品,皆可于市场购得。
[0086] 下面结合实施例,进一步阐述本发明:
[0087] 实施例1苹果干细胞冻干粉的制备
[0088] 1、培养基的配方:
[0089] L1 诱导培养基:MS固体培养基 +NAAO. 5mg/L+BA2mg/L+CHlmg/L,pH值为 6. 0;
[0090] I. 2增殖培养基:MS液体培养基+2,4-D2. Omg/L+BA 1.0 mg/L+CH 1.0 mg/L+AC 1.〇11^/1,?11值为6.0;
[0091] 2、苹果枝条的杀菌
[0092] 选择无化肥农药污染、绿色种植的苹果树,按照一定的评判标准挑选10支IOcm长 新生枝条;用无菌水2L洗涤新生枝条表面附着物;将新生枝条放进120mg/LL-抗坏血酸中 浸泡1分钟;将新生枝条放入75%的乙醇溶液中杀菌1分钟,用2L无菌水冲洗干净;再放 入30 %的过氧化氢溶液中杀菌20分钟,并用无菌水冲洗10分钟。
[0093] 3、形成层组织的诱导
[0094] 将灭菌的苹果新生枝条用接种刀剥离形成层、韧皮部、皮质和表皮等组织,丢弃木 质部和髓;将获得的组织接种至新鲜的固体培养基中,以每Ig组织接种IOcm2固体培养基 的密度进行接种,在受控的暗室内25°C连续培养10天,获得形成层组织。
[0095] 4、继代培养形成层组织
[0096] 将再生的形成层组织与其他组织分离开;以每Ig组织接种IOcm2固体培养基的 密度,将再生的形成层组织接种至新鲜的固体培养基中,在受控的暗室内25°C连续培养10 天,获得愈伤组织。
[0097] 5、单细胞培养
[0098] 在1000 ml三角瓶中加入200ml液体培养基、灭菌处理的20g、直径0.5cm的玻璃 珠;将IOg愈伤组织转移到三角瓶中;将三角瓶置于25°C、120转/分钟的摇床上进行培养, 每小时用20W的白炽灯照射10分钟;第7天,加入400ml新鲜的液体培养基至细胞密度为 其中细胞的密度为IX105/ml,然后继续培养7天;培养后用100目的不锈钢筛网过滤,除去 细胞团、玻璃珠和残渣,得到单细胞悬液,
[0099] 6、放大培养
[0100] 将单细胞悬液转移至20L生物反应器中进行大规模培养,生物反应器中容纳5L的 增殖培养基。培养第7天时,加入IOL的新鲜液体培养基,继续培养后获得细胞悬液。
[0101] 7、冻干粉的制备
[0102] 苹果干细胞悬液用Ium过滤器过滤,去掉培养基,收获截留的黏胶状细胞取出;将 细胞放入_30°C的冰箱内预冻3小时;放入液氮罐中超低温速冻2小时;取出解冻30分钟 后,再放入-30°C冰箱内预冻和液氮罐内速冻,依次2遍;将细胞取出,室温下维持10分钟, 入低温冷冻真空干燥机内,真空冷冻干燥后,高速粉碎成60目冻干粉。
[0103] 实施例2抗辐射组合物的制备
[0104] 先将苹果干细胞冻干粉100g、灵芝提取物100g、红景天提取物100g,分别进行粉 碎(其中,对苹果干细胞冻干粉液氮研磨,红景天提取物和灵芝提取物进行普通研磨),过 30目筛,然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0105] 实施例3抗辐射组合物的制备
[0106] 先将苹果干细胞冻干粉90g、灵芝提取物90g、红景天提取物150g,分别进行粉碎 (其中,对苹果干细胞冻干粉液氮研磨,红景天提取物和灵芝提取物进行普通研磨),过30 目筛,然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0107] 实施例4抗辐射组合物的制备
[0108] 先将苹果干细胞冻干粉90g、灵芝提取物150g、红景天提取物90g,分别进行粉碎 (其中,对苹果干细胞冻干粉液氮研磨,红景天提取物和灵芝提取物进行普通研磨),过30 目筛,然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0109] 实施例5抗辐射组合物的制备
[0110] 先将苹果干细胞冻干粉90g、灵芝提取物150g、红景天提取物150g,分别进行粉碎 (其中,对苹果干细胞冻干粉液氮研磨,红景天提取物和灵
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