青蒿琥酯在制备抗破骨细胞分化类药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物领域，特别是青蒿琥酯的一种新的药物分类用途。
【背景技术】
[0002] 骨代谢的稳定需要破骨细胞（Osteoclasts, OCs)介导的骨吸收和成骨细胞 (Osteoblasts, OBs)介导的骨形成作用间的动态平衡和偶联，在健康个体中，二者维持功能 平衡，而平衡一旦打破则可能导致骨骼疾病的发生。
[0003] 破骨细胞是体内唯一负责骨吸收的细胞。它可由破骨前体细胞经过激活后分化形 成具有功能的成熟的破骨细胞。由于分化成熟的破骨细胞可吸收骨质，其过度激活会造成 骨质丢失、骨质疏松，引发骨折疼痛，继发反应性骨增生，甚至残疾。破骨细胞过度活化相 关的疾病不少，经典的有绝经后骨质疏松，此外比较重要的还有肿瘤转移骨破坏、炎症相关 骨破坏（类风湿性关节炎、脓毒性关节炎、牙周炎等）等。另有糖尿病[刘海叶，刘泽，邓伟 民.糖尿病引发骨质疏松症的机制及防治.中国骨质疏松杂志.2008年7月第14卷第7 期]、结肠炎[周锋利，王文仙，王玉刚，韦欣.溃疡性结肠炎患者骨质疏松及相关危险因素 分析.现代医药卫生.2005年04期]等多种疾病骨质疏松亦显著增加。破骨细胞活化相 关骨破坏病人数量庞大，仅原发性骨质疏松（主要包含绝经后骨质疏松等）全世界就有上 亿病人。
[0004] 破骨细胞过度活化相关骨破坏疾病种类多样，病因也非常多样化，甚至一个疾病 都会有多种发病相关因素，而其中一些又属于病因不明确或多元化病因的难治性疾病。但 是直接针对破骨细胞，抑制破骨细胞分化形成的药物，可跨越疾病病因，直接改善相关的疾 病骨破坏症状，并有效减轻病人骨折、疼痛等相关的痛苦。因此，破骨细胞分化抑制剂近些 年成为一类药物，可用于绝经后骨质疏松等多种破骨细胞过度活化相关骨破坏疾病。
[0005] 虽然，目前通过改善激素水平、抗炎等不同途径，治疗上述疾病的多种药物最终能 够改善疾病，但是现在临床能够直接针对破骨细胞的破骨细胞抑制剂很少。另外，尽管有些 药物能够针对病因譬如抗炎治疗骨破坏疾病如类风湿性关节炎，理论上具有直接或间接抑 制破骨细胞生成和炎症性骨破坏的可能性，但事实上很多常用药物反而被报导能够诱导破 骨细胞形成、或加重骨质疏松。譬如治疗类风湿性关节炎的两个常用代表药物：糖皮质激素 (如地塞米松）、甲氨蝶呤均能抑制外周或病变关节炎症因子包括TNF α的产生，但两个药 却都能引起骨破坏。糖皮质激素（如地塞米松）能体外促进诱导破骨细胞生成，体内在动物 和病人都容易引骨质疏松；甲氨蝶呤使用后也会促进破骨细胞形成、引起骨破坏；并有SCI 论文报道，例如：[King TJ 等（2012)Methotrexate Chemotherapy Promotes Osteoclast Formation in the Long Bone of Rats via Increased Pro-Inflammatory Cytokines and Enhanced NF-kappaB Activation. Am J Pathol 181:121-9] ;[Kaji H 等（1997) Dexamethasone stimulates osteoclast-like cell formation by directly acting on hemopoietic blast cells and enhances osteoclast-like cell formation stimulated by parathyroid hormone and prostaglandin E2. J Bone Miner Res 12:734-41]〇
[0006] 而目前常用的破骨细胞抑制剂是双磷酸盐类（如唑来膦酸）和RANKL的抑制剂 Denosumab (地诺单抗）。这两种破骨细胞抑制剂最初均作为治疗绝经后骨质疏松的药物被 批准上市（引文 l:Deeks ED, Perry CM. Zoledronic acid:a review of its use in the treatment of osteoporosis. Drugs Aging. 2008 ；25 (11):963-86. doi:10. 2165/0002512 -200825110-00007.引文 2:Medical Coverage Policy|Denosumab https://www.bcbsri. com/sites/default/files/polices/denosumab. pdf)，近年都被批准增加了新的临床适应 症-肿瘤转移骨破坏。然而，双磷酸盐类多数需要注射给药、容易引发颁骨坏死等严重不良 反应；而针对破骨细胞激活因子RANKL的生物抗体制剂地诺单抗，需皮下注射给药，价格更 为昂贵。因此，临床需要更多可方便服用、经济有效的破骨细胞抑制剂类药物。
[0007] 靶向抑制破骨细胞（OCs)分化被认为是逆转骨破坏最有效的治疗策略，目前已 经成为该领域的一个研宄热点。破骨细胞起源于骨髓单核-巨噬细胞谱系细胞，在体内 必须依赖于一些诱因诱导分化发育为多核的成熟破骨细胞，最后被活化。目前认为最直 接活化破骨细胞的内源性分子是成骨细胞或骨髓基质细胞分泌的激活核因子NF-κ B受 体的配体（receptor activation of nuclear factor NF-κ B ligand, RANKL)。RANKL 通过和破骨细胞膜上激活核因子NF-kB受体（receptor activation of nuclear factor NF-K B，RANK)结合，募集形成肿瘤坏死因子相关受体6 (tumor neerosis factor receptor-associated factor 6，TRAF6)和 c_Src 酪氨酸激酶（c-Src tyrosine kinase， c-Src)复合体，激活下游信号通路（NF-κΒ、MPK和Ca2+通路）通过胞内信号传导途径 激活核转录因子核因子 1^〇11161631 factor kappa B，NF_kB)、激活蛋白l(activator protein 1，AP_1)和活化 T 细胞核因子 cl (nuclear factor of activated T cells cl， NFATcI)，激活破骨细胞相关基因表达，例如抗酒石酸碱性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase，TRAP)，金属基质蛋白酶 9(tartrate resistant acid phosphatase， MMP-9)，整合素|3 3(integrin|3 3)和组织蛋白酶K(cathepsin K)，促进破骨细胞分化，增 强骨吸收活性，抑制其凋亡，最终导致破骨细胞数量增多、功能亢进。参见文献[Li X，He L, Hu Y, et al. Sinomenine suppresses osteoclast formation and Mycobacterium tuberculosis H37Ra-induced bone loss by modulating RANKL signaling pathways[J]. PLoS One, 2013, 8 (9) : e74274.]。
[0008] 青蒿琥酯是从中国传统药物菊科艾属植物黄花蒿中分离出的一种有抗疟作用的 成分，是作为临床上有效的抗疟药。如果能挖掘出青蒿琥酯的新作用，扩大其临床应用，将 节省大量时间和金钱，也能造福广大病患者。
【发明内容】
[0009] 为解决上述问题，本发明的目的是提供青蒿琥酯在制备抗破骨细胞分化类药物制 剂中的应用。
[0010] 本发明的目的是这样实现的：青青蒿琥酯在制备抗破骨细胞分化类药物中的应 用。
[0011] 所述的抗破骨细胞分化类药物为抗绝经后骨质疏松药物。
[0012] 所述的抗破骨细胞分化类药物为治疗双磷酸盐、地诺单抗临床适应症的药物。
[0013] 所述的抗破骨细胞分化类药物为口服剂型或外用剂型。
[0014] 所述的抗破骨细胞分化类药物包括活性成分青蒿琥酯和医学上可接受的药用辅 料。
[0015] 本发明经过试验证明，青蒿琥酯能够显著抑制体外RANKL诱导破骨前体细胞 RAW264. 7细胞和BMMs细胞形成破骨细胞，直接抑制破骨细胞的分化形成，抑制破骨细胞骨 吸收功能，治疗改善卵巢切除骨质疏松小鼠的骨破坏，可用于治疗绝经后骨质疏松，具有方 便服用、经济有效等优点。青蒿琥酯对破骨细胞生成、破骨活性的具有直接而显著地抑制作 用特点，使其可以作为一个破骨细胞分化抑制剂类药物，用于破骨细胞分化抑制剂所治疗 疾病；还可作为活性药物前体用于破骨细胞抑制剂类药物研发。
【附图说明】
[0016] 图1是本发明实验例1青蒿琥酯对RAW264. 7细胞的细胞生存作用试验结果
[0017] 图2是本发明实验例2青蒿琥酯对破骨前体Raw264. 7细胞分化成破骨细胞的影 响的实验结果，其中：RANKL为激活核因子NF-κ B受体的配体，Art为青蒿琥酯（注：与空 白对照组比较，###P〈〇. 001 ;与RANKL组比较广*P〈0. 001);
[0018] 图3是本发明实验例3青蒿琥酯对小鼠骨髓巨噬细胞（BMMs)分化成破骨细胞的 影响的实验结果，其中：RANKL为激活核因子NF- κ B受体的配体，M-CSF为巨噬细胞集落刺 激因子，Art为青蒿琥酯（注：与空白对照组比较，###P〈0. 001 ;与RANKL组比较，呷〈0. 01， ***Ρ<0. 001)；
[0019] 图4是本发明实验例4青蒿琥酯对破骨细胞破骨活性的影响的实验结果，其 中：RANKL为激活核因子NF-κ B受体的配体，Art为青蒿琥酯