中，配成浓度 为0. 4mmol/L的黄嘌呤底物溶液；
[0077] 3、黄嘌呤氧化酶溶液的配制：取黄嘌呤氧化酶5U，用上述磷酸盐缓冲溶液稀释至 160mL，配成浓度为80U/L的黄嘌呤氧化酶溶液，4°C保存；
[0078] 4、样品和阳性对照溶液的配制：精密称取样品组毛诃子提取物（TB-1、TB-2、 TB-3、TB-1W、TB-15、TB-19、TB-2W、TB-23、TB-27)、别嘌呤醇（作为阳性对照），分别用二甲 亚砜溶解、蒸馏水稀释，配成浓度为〇. 〇5mg/mL的溶液进行测试（其中二甲亚砜的最终浓度 小于1% )。
[0079] 5、抑制作用测试：
[0080] 样品组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200 μ L、样品溶液100 μ L 和黄嘌呤氧化酶溶液200 μ L，涡旋震荡5秒后置于25°C水浴锅中反应5分钟，反应完毕后 加入I. 5mL无水乙醇，涡旋震荡5秒终止反应。反应液经3500rpm离心5分钟，吸取200 μ L 到I. 5mL离心管中，用生化分析仪分别检测每个样品的UA值，每个样品平行操作三次取平 均值。
[0081] 空白对照组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200 μ L、磷酸盐缓冲 溶液100 μ L和黄嘌呤氧化酶溶液200 μ L，同法检测空白对照组的UA值，平行操作三次取平 均值。
[0082] 阳性对照组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200 μ L、阳性对照溶 液100 μ L和黄嘌呤氧化酶溶液200 μ L，同法检测阳性对照组的UA值，平行操作三次取平均 值。
[0083] ⑵测试结果
[0084] 根据黄嘌呤氧化酶抑制率=[(空白对照组UA值一样品组UA值）/空白对照组UA 值]*100,计算抑制率，结果如表3所示。
[0085] 表3毛诃子提取物抑制黄嘌呤氧化酶的活性
[0087] 从表 3 可以看出，毛诃子提取物（TB-1、TB-2、TB-3、TB-1W、TB-15、TB-19、TB-2W、 TB-23、TB-27)对黄嘌呤氧化酶都有不同程度的抑制作用。其中总多酚含量高（TB-1W、 TB-2W)的毛诃子提取物抑制作用强，验证了毛诃子提取物中的毛诃子多酚可能为抑制高尿 酸血症的关键活性部位。
[0088] 实施例10毛诃子提取物对高尿酸血症小鼠的影响实验
[0089] 本实验为通过动物实验验证毛诃子提取物对高尿酸血症小鼠的影响。
[0090] (1)实验方法
[0091] 取健康雄性KM小鼠130只，体重为15-18g，由上海灵畅生物科技有限公司提供； 按每笼5只进行分笼处理后，在公司的屏障系统内适应性饲养4天，从130只小鼠中选取体 重集中的120只小鼠按体重随机平均分为12组，每组10只，分别为空白对照组，高尿酸血 症模型组，阳性对照组，受试样品组，其中受试样品组共9组，分别为编号ΤΒ-1、ΤΒ-2、ΤΒ-3、 TB-1W、TB-15、TB-19、TB-2W、TB-23、TB-27 的毛诃子提取物。
[0092] 高尿酸血症的造模：
[0093] 适应期过后随即对小鼠进行灌胃给药，每天上午灌胃1次，其中受试样品组，样品 用纯水进行混悬，按照30mg/kg进行灌胃；阳性对照组非布索坦用纯水进行混悬，按照Img/ kg进行灌胃；空白对照组和高尿酸血症模型组均用纯水灌胃进行对照，连续灌胃7天；
[0094] 在第7天上午灌胃0. 5小时后对小鼠进行腹腔注射造模，其中空白对照组腹腔注 射0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na)溶液；高尿酸血症模型组、阳性对照组和受试样品组注 射氧嗪酸钾（OA)，用羧甲基纤维素钠（CMC-Na)溶液进行溶解，注射量均为300mg/kg体重；
[0095] 腹腔注射1. 5小时后摘除小鼠的眼球进行采血，采血容量不低于0. 5mL，血样采集 后于室温放置约1小时，待血液完全凝固后于3500rpm/4°C条件下离心10分钟，取血清在同 等条件下复离5分钟，而后取0. 2mL血清使用生化分析仪检测尿酸值（UA);
[0096] 用Excel和SPSS对数据进行统计分析，计算平均数和标准差（SD)，经单因素方差 分析后比较各实验组的组间差异，与空白对照组相比，高尿酸血症模型组、阳性对照组和受 试样品组小鼠的血清尿酸水平显著提高，有显著性差异，表明造模成功。
[0097] (2)实验结果
[0098] 表4毛诃子提取物对高尿酸血症模型小鼠血清尿酸含量的影响
[0101] (表示和空白对照组相比P〈〇. 001 :与模型组比，P〈〇. 05 表示和模型组相 比P〈0. 01 表示和模型组相比Ρ〈0· 001) (t-test检验）
[0102] 从表4看出，受试样品组与高尿酸血症模型组相比，毛诃子各粗提物具有一定的 降尿酸效果，使用的三种不同溶剂提取物没有显著性差异。精制毛诃子提取物中，两种不同 树脂的水洗脱部位都具有非常显著的降低尿酸的效果，其效果由于其他不同乙醇浓度洗脱 部位。上述结果可以证明，毛诃子提取物具有降低尿酸的作用，而毛诃子总多酚富集的毛诃 子提取物具有更为显著的降低尿酸的作用。
[0103] 显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对 于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或 变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或 变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
【主权项】
1. 毛河子提取物在制备治疗尚尿酸血症药物中的应用。2. 毛诃子提取物在制备治疗由于高尿酸血症而导致的急性痛风、慢性痛风、痛风关节 炎、痛风发作、尿酸性肾石病和痛风性肾病药物中的应用。3. 根据权利要求1或2中所述的应用，其特征在于，所述毛诃子提取物由以下方法制备 得到：将毛诃子在20-80°C下浸泡于溶剂中，过滤，得到毛诃子提取液，浓缩，得毛诃子提取 物，所述溶剂为水、甲醇、乙醇中的一种或多种的混合液。4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，制备方法还包括将毛诃子提取物进一步 精制提纯，所述精制提纯为大孔吸附树脂层析。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述大孔吸附树脂层析包括以下步骤：取 大孔吸附树脂进行层析，依次用水、25v% -50v%的乙醇溶液洗脱，再用65v% -95v%的乙 醇溶液洗脱，洗脱结束后，将水洗脱液浓缩至干，即得到精制的毛诃子提取物。6. 根据权利要求3-5中任一所述的应用，其特征在于，所述毛诃子提取物中毛诃子总 多酚含量为10% -80%。7. 毛诃子总多酚在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。8. 毛诃子总多酚在制备治疗由于高尿酸血症而导致的急性痛风、慢性痛风、痛风关节 炎、痛风发作、尿酸性肾石病和痛风性肾病药物中的应用。9. 一种用于治疗高尿酸血症的药物，其特征在于，所述药物以毛诃子总多酚为活性成 分，向含有毛诃子总多酚的毛诃子提取物中加入常规辅料按照常规工艺制成临床上可接受 的胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、膏剂、合剂、混悬剂。10. 权利要求9所述的药物在制备治疗高尿酸血症的药物中的用途。
【专利摘要】本发明公开了一种毛诃子提取物的药物用途，具体涉及毛诃子提取物和毛诃子多酚在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。上述毛诃子提取物和毛诃子多酚具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性，可有效的降低高尿酸血症模型小鼠血液中的尿酸浓度，具有治疗高尿酸血症的作用，同时对与高尿酸血症相关的代谢性病症：痛风可起到较好的疗效。
【IPC分类】A61K36/185, A61P19/06
【公开号】CN104983758
【申请号】CN201510341609
【发明人】夏增华
【申请人】苏州禾研生物技术有限公司
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年6月18日