水漂洗两次，每次15分钟；
其中，含过氧乙酸和乙醇的水溶液中，过氧乙酸的体积百分含量为0.1%，乙醇的体积百分含量为20% ；
(7)将经步骤(6)处理的阴道基质在-50°C真空冷冻干燥机冻干48小时，然后使用25KGy剂量的γ射线再次消毒处理即可，所制备的阴道机制材料于_20°C保存备用。
[0037]对比实施例1
本对比实施例采用现有技术中ZL200810150792.5所公开的方法制备脱细胞小肠粘膜下层基质: 1)前置处理:将猪空肠去除肠道内容物，用蒸馏水冲洗干净，切成所需片段，将其置于含有0.2%过氧乙酸和10%乙醇的水溶液中浸泡消毒I小时，用PBS漂洗干净；机械刮除小肠粘膜、肌层和浆膜，用PBS漂洗干净，获得小肠粘膜下层；
2)脱细胞处理:将前置处理的小肠粘膜下层置入0.5M的NaOH溶液中，于6±20°C条件下浸泡20分钟，用PBS漂洗至中性；
3)酶处理:将脱细胞的粘膜下层置入含有40U/mLDNA酶和10U/mL α -半乳糖苷酶的混合溶液中，于35°C条件下浸泡I小时，用PBS漂洗干净；
4)脱细胞小肠粘膜下层膜状产品的制备:将酶处理后的粘膜下层浸泡于冷冻保护液中30分钟，冷冻保护液为Hanks平衡盐溶液中加有1%葡聚糖、2%蔗糖、4%聚维酮、2%棉子糖(均为重量比)；再将粘膜下层铺展，经真空冷冻干燥后形成脱细胞小肠粘膜下层膜状产品，环氧乙烷灭菌消毒。
[0038]实验例1:实施例1与对比实施例1所制备的材料的生物学性能检测与评价: 本实验例通过试验一~试验六对本发明实施例1所制备的阴道基质材料的生物学性能进行检测及评价，并与对比实施例1所制备的脱细胞小肠粘膜下层基质的性能进行了对比。
[0039]由于阴道外段1/3 (即阴道下1/3)和阴道内段2/3 (即阴道上2/3)是由不同的胚层分化而来，所以以下实验均对实施例1所制备的阴道粘膜层的下1/3和上2/3分别检测:
试验一:残留细胞检测
将本发明实施例1制备的阴道基质材料经常规苏木素-伊红染色(X200)和DAPI(X 200)染色，结果如图1中A~H所不。A~H所不结果证实所制备的阴道基质材料中无细胞结构存在。
[0040]试验二:残留DNA检测
将本发明实施例1制备的阴道基质材料与未处理过的阴道粘膜层经DNA检测试剂盒检测，结果显示，未处理过的阴道粘膜层下1/3和上2/3的DNA含量分别为6163.77±453.98ng/mg和4467.82±209.20ng/mg干重组织，而本发明所制备的阴道基质材料下 1/3 和上 2/3 的 DNA 含量分别为 33.64667±2.994417 ng/mg 和 30.73±3.035605ng/mg干重组织。
[0041]上述结果经统计学分析有显著差异，证实本发明的方法能显著降低阴道粘膜层中核酸含量，进一步证明本发明的方法能完全去除阴道粘膜层的细胞。
[0042]试验三:扫描电镜观察
对本发明实施例1所制备的阴道基质材料(下1/3和上2/3)的腔面及外表面进行扫描电镜观察，结果如图2中A~D所示。由A~D可证实所制备的基质材料无细胞成分残留，腔面较光滑，外表面可见粗大纤维走行。
[0043]E和F分别是对比实施例1所制备的脱细胞小肠粘膜下层基质的腔面和外表面电镜扫描结果，由E和F可以看出所制备的小肠粘膜下层基质材料与本发明所制备的基质材料结构差别很大，其内表面比较粗糙，且外表面的纤维较细且稀疏。
[0044]试验四:力学性能检测
检测材料:本发明实施例1所制阴道基质材料、未经处理的阴道粘膜层、对比实施例1所制小肠粘膜下层基质、未经处理的小肠粘膜下层。
[0045]检测项目:单位长度最大载荷、屈服强度、屈服伸长率、弹性模量、缝线保持能力。
[0046]检测结果见图3:
(I)单位长度最大载荷(Peak Force/width (N/cm)):利用万能材料试验机对材料的单位长度最大载荷进行检测，结果如下:
由图3中A可以看出:
①所有检测材料的同一部位的纵向单位长度最大载荷均大于横向单位长度最大载荷，除未经处理的阴道粘膜层的上2/3外其余均有统计学差异(P〈0.05);
②本发明实施例1所制阴道基质材料的下1/3的纵向单位长度最大载荷大于上2/3的纵向单位长度最大载荷(P〈0.05);
③本发明实施例1所制阴道基质材料的下1/3的纵向单位长度最大载荷大于未经处理的阴道粘膜层的下1/3的纵向单位长度最大载荷(P〈0.05)。
[0047]④本发明实施例1所制阴道基质材料的纵向单位长度最大载荷大于对比实施例1所制备的脱细胞小肠粘膜下基质(P〈0.05)。
[0048]以上统计结果表明，本发明所制备的阴道基质材料单位长度最大载荷比对比实施例I所制备的脱细胞小肠粘膜下基质更强，特别是阴道粘膜层下1/3的纵向载荷效果更佳。
[0049](2)屈服强度(stress (MPa)):
由图3中B可以看出:
①所有材料的同一部位的纵向屈服强度大于其横向屈服强度，除未经处理的阴道粘膜层的上2/3外其余均有统计学差异(P〈0.05);
②本发明实施例1所制阴道基质材料的下1/3的纵向屈服强度大于上2/3的纵向屈服强度(Ρ〈0.05);
③本发明实施例1所制阴道基质材料的下1/3的纵向屈服强度大于未经处理的阴道粘膜层下1/3的纵向屈服强度(Ρ〈0.05)。
[0050]④本发明实施例1所制阴道基质材料的下1/3的纵向屈服强度大于对比实施例1所制备的脱细胞小肠粘膜下基质(Ρ〈0.05)。
[0051]以上统计结果表明，本发明所制备的阴道基质材料屈服强度更优。
[0052](3)屈服伸长率(strain(%)):
由图3中C可以看出:
本发明实施例所制阴道基质材料的屈服伸长率好于比实施例所制小肠粘膜下层基质的屈服伸长率。
[0053](4)弹性模量(Elastic Modulus (Mpa)):
由图3中D可以看出:
①所有材料的同一部位的纵向的弹性模量大于其横向的弹性模量(P〈0.05);
②本发明实施例所制阴道基质材料的下1/3的纵向弹性模量大于上2/3的纵向弹性模量(Ρ〈0.05)；
③本发明实施例所制阴道基质材料的下1/3的纵向弹性模量大于未经处理的阴道粘膜层下1/3的纵向弹性模量(Ρ〈0.05)。
[0054]以上统计结果表明:本发明的方法显著提高了阴道粘膜层特别是阴道粘膜层的下1/3的纵向弹性模量。
[0055]综上，本发明所制备的阴道基质材料(AVM)特别是阴道基质材料的下1/3 (AVML)具有良好的生物力学性能，其各项指标检测结果整体优于对比实施例1所制备的基质材料(SIS)o
[0056]试验五:生长因子含量测定
Elisa定量检测实施例1所制备的阴道基质材料和对比实施例1所制脱细胞小肠粘膜下层基质材料冻干后所含VEGF、FGF、PDGF-BB及TGF- β I的含量。
[0057]从图4可见本发明所制的阴道基质材料的下1/3部分富含多种生物因子，其中所含TOGF-BB及TGF- β I大大高于SIS材料，其所含VEGF的量大大高于上2/3部分，且下1/3部分所含各种生物因子含量都比较均衡，此种差异更适合盆底修复和阴道重建的微环境，更利于进行盆底修复或阴道的重建。
[0058]试验六:皮下移植试验
取4周龄体重160-200g的健康SD大鼠，本发明实施例1所制阴道基质材料的和未经处理的阴道粘膜层各5片，裁剪为Icm2大小，移植到大鼠脊柱两侧皮下，均分别于1、