体积比为2 %的粘合剂乙醇溶液，在前面获得的混匀浸膏中，加入矫味 剂枸橼酸l〇g，填充剂山梨醇200g，混合均匀后，用制备的粘合剂乙醇溶液制软材，20目筛 制粒，60°C干燥20分钟，整粒，加入润滑剂硬脂酸镁8g，充分混合均匀后压片即得，每片重 0. 8g〇
[0062] 实施例2护肝片2
[0063]称取薄荷25g，在粉碎机中粉碎成以0. 1-10 ym粒径的微米级颗粒为主的粉料，并 按至少95%的得粉率留取备用，称取黄柏358、胡黄连2(^、篇蓄158、白芍258、莪术158、水 飞蓟20g、熟地黄25g、川考20g、山豆根15g、佛手15g、白仙茅15g和岩春草15g分别粉碎， 混合在一起，置于提取器中，加相对于混合物质量4倍的水并水煮3次，每次2小时，提取液 合并，过滤，而后在浓缩器中浓缩成50°C时相对密度为1. 05,用高速离心机去杂，离心液减 压浓缩至50°C时相对密度为1. 30,得到第一浸膏，将绞股蓝30g、黄精35g、淫羊藿30g、鸡血 藤35g、白茅根25g、突实20g、山麦冬15g、朱蕉30g、半边苏20g分别粉碎，混合在一起，置于 提取器中，用醇浓度为80%的乙醇回流提取，乙醇的添加量是该步获得的混合物质量5倍， 共提取3次，每次2小时，提取液合并，过滤，合并滤液，回收乙醇，待滤液冷却，减压浓缩至 50°C时相对密度为1. 05,用高速离心机去杂，离心液减压浓缩至50°C时相对密度为1. 30， 得到第二浸膏，将获得的粉料、第一浸膏和第二浸膏混匀，第四步，将第一步获得的粉料、第 二步和第三步获得的浸膏混匀，取l〇〇g的混合物，将2g粘合剂溶解于60ml醇浓度为70% 乙醇溶液，配成重量体积比为2 %的粘合剂乙醇溶液，在前面获得的混匀浸膏中，加入矫味 剂枸橼酸l〇g，填充剂山梨醇200g，混合均匀后，用制备的粘合剂乙醇溶液制软材，20目筛 制粒，60°C干燥20分钟，整粒，加入润滑剂硬脂酸镁8g，充分混合均匀后压片即得，每片重 0. 8g〇
[0064] 实施例3护肝片3
[0065] 称取薄荷35g，在粉碎机中粉碎成以0. 1-10 ym粒径的微米级颗粒为主的粉料，并 按至少95%的得粉率留取备用，称取黄柏458、胡黄连3(^、篇蓄258、白芍358、莪术258、水 飞蓟30g、熟地黄35g、川芎30g、山豆根25g、佛手25g、白仙茅25g和岩春草25g分别粉碎， 混合在一起，置于提取器中，加相对于混合物质量4倍的水并水煮3次，每次2小时，提取液 合并，过滤，而后在浓缩器中浓缩成50°C时相对密度为1. 05,用高速离心机去杂，离心液减 压浓缩至50°C时相对密度为1. 30,得到第一浸膏，将绞股蓝35g、黄精40g、淫羊藿35g、鸡血 藤40g、白茅根30g、突实25g、山麦冬20g、朱蕉35g、半边苏25g分别粉碎，混合在一起，置于 提取器中，用醇浓度为80%的乙醇回流提取，乙醇的添加量是该步获得的混合物质量5倍， 共提取3次，每次2小时，提取液合并，过滤，合并滤液，回收乙醇，待滤液冷却，减压浓缩至 50°C时相对密度为1. 05,用高速离心机去杂，离心液减压浓缩至50°C时相对密度为1. 30， 得到第二浸膏，将获得的粉料、第一浸膏和第二浸膏混匀，第四步，将第一步获得的粉料、第 二步和第三步获得的浸膏混匀，取l〇〇g的混合物，将2g粘合剂溶解于60ml醇浓度为70% 乙醇溶液，配成重量体积比为2 %的粘合剂乙醇溶液，在前面获得的混匀浸膏中，加入矫味 剂枸橼酸l〇g，填充剂山梨醇200g，混合均匀后，用制备的粘合剂乙醇溶液制软材，20目筛 制粒，60°C干燥20分钟，整粒，加入润滑剂硬脂酸镁8g，充分混合均匀后压片即得，每片重 0. 8g〇
[0066] 实施例4毒性检测
[0067] 急性毒性实验
[0068] 将本发明护肝片最大浓度、最大容积灌胃给药，在24h内连续给药3次，每次间隔 4h，累积药物总量达125g生药/kg，相当于人临床拟用量的298倍。给药后7d内，小鼠活 动、进食、排泄均正常，生长良好，毛色光亮，其平均体重均随试验时间的延长而增加。第8d 处死后解剖每只小鼠肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、胃、肠等均未发现颜色及形态异 常，未能测出LD 5。。表明本发明护肝片无急性毒性反应。
[0069] 长期毒性实验
[0070] 将本发明护肝片分为低、中、高剂量组，分别为8、16、32g生药/kg/d，相当于临床 剂量的19. 0、38. 1、76. 2倍，灌胃给药12周后，本发明护肝片对动物的一般状况、血液学指 标、血液生化指标均无明显的影响，系统解剖、脏器系数及组织病理学检查也未发现异常病 理改变。停药2周也未见明显改变。本发明护肝片在长期毒性试验中，未发现明显毒性反 应和延迟毒性反应。可见，本发明护肝片无毒性反应，长期用药安全可靠。
[0071] 实施例5动物试验
[0072] 统计学方法
[0073] 计量资料采用又士s表示，组间比较采用x 2检验，所有资料均采用SPSS12. 0统 计软件处理。
[0074] 对四氯化碳引起的肝功能损伤的影响
[0075] 选择SD系大白鼠60只，雌雄各半，体重150~180g，随机分成3组，每组20只。空 白对照组与四氯化碳中毒对照组灌胃等体积的生理盐水；本发明护肝片组灌胃给药3. 2g 生药/kg。连续给药10d，每天一次，第10d灌胃15%四氯化碳麻油液0. 2ml/100mg(空白对 照除外）。24h后处死小鼠，取血离心，取血清按赖氏法测定血清谷丙转氨酸（SGPT)与谷草 转氨酶（SG0T)的活性，结果见表1。
[0076] 表1四氯化碳引起的肝功能的损伤的影响
[0077]
[0078] 本发明扩肘斤纽Jg明Mffl」市丨」四虱1七恢引?入畝皿涫WKr W WUT的升高，对肝损 伤具有明显保护的作用，与对照组比有极显著性差异（P < 〇. 01)。
[0079] 对雏鸭乙肝模型鸭乙型肝炎病毒（DHBSAG)的表达和影响
[0080] 取1 : 10稀释的鸭乙型肝炎病毒阳性血清200 iil，腹腔接种一日龄北京雏鸭，正 常饲养7天后，足静脉取血，分离血清，测定鸭乙型肝炎病毒。
[0081] 取其中成阳性的鸭60只，随机分为3组，即护肝片组、无环鸟苷治疗组和对照组。 护肝片组分别给予护肝片（40mg/kg，ig，Big)，无环鸟苷治疗组（25mg/kg，ip，Bid)，对照组 给予等量的生理盐水，于给药后的第10天和停药后的第3天足静脉取血，分离血清，-20°C 冰箱保存待测。
[0082] 用pH9. 6的碳酸盐缓冲液稀释纯化鼠抗鸭乙型肝炎病毒至1 : 10000,加入40孔 聚乙烯塑料，链霉素（ST)液洗三次，每次5分钟，每孔加入100 y 1包被液37°C水浴1小时， 倾去包被液，以磷酸-链霉素（PB-ST)液洗三次，每次5分钟，每孔加200 y 1的10 %牛血清 (CFS)封闭，37°C水浴2小时，PB-ST洗板后，每孔加入100 y 1待测血清样品，同时设阳性、 阴性和空白对照孔。37°C水浴1小时，PB-ST洗板，每孔加入1 : 600稀释的酶标鼠抗-鸭 乙型肝炎病毒100 y 1，37°C水浴1. 5小时，每孔加入100 y 1的邻苯二胺（0PD)底物，37°C避 光放置15分钟，加1滴2M的硫酸终止反应，用DG-3022型酶联免疫检测仪测定光密度0D49。 的值。
[0083] 按照以下公式计算出各组动物鸭乙型肝炎病毒表达水平（P/N)
[0084] P/N =(标本0D值-空白对照孔0D值）八阴性对照0值_空白对照孔00值）
[0085] 判定：P/N > 2. 1为阳性，P/N在1. 5-2. 1之间为可疑，P/N < 1. 5为阴性。各试验 组的测定结果如下。
[0086] 表2各组治疗前后表达水平
[0087]
[0088] 从表2可以看出，采用护肝片治疗后鸭乙型肝炎病毒表达水平呈显著下降，阳性 对照物无环鸟苷治疗后鸭乙型肝炎病毒表达水平亦呈下降，护肝片的治疗效果要好于无环 鸟苷，P〈0. 05,停药后3天，两组的鸭乙型肝炎病毒表达水平与治疗后相比没有显著变化。
[0089] 三组转阴率情况比较，结果见表3。
[0090] 表3三组转阴率情况比较
[0091]
[0092] 从表3可以看出，采用本发明护肝片的转阴率要显著高于阳性对照组，p〈0.01，而 两个治疗组较生理盐水组有显著差异，P〈〇. 01，护肝片对雏鸭乙型肝炎模型病毒有明显的 以致作用。
[0093] 实施例6临床资料
[0094] 统计学方法
[0095] 计量资料采用X士S表示，组间比较采用x 2检验，所有资料均