一种羌活提取物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种羌活提取物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 肾脏是人体的重要器官，用于保证机体内环境的稳定，是新陈代谢得以正常进行。 肾损伤时泌尿外科常见的急症之一，对肾损伤做出适当的治疗方案，对减轻患者的伤情，改 善预后情况至关重要。因此，近年来肾损伤保护药物在不断的研究和开发中。
[0003] 研究发现中药对肾损伤具有明显的保护作用，而且相对于西药来说，中药更加温 和安全，副作用较小。羌活，伞形科、羌活属植物，性温，散表寒；祛风湿；利关节；止痛。主 外感风寒；头痛无汗；风水浮肿；疮疡肿毒。用于阳痿遗精，遗尿尿频，腰膝冷痛，肾虚作喘， 五更泄泻；外用治白癜风，斑秃。解表散寒，祛风胜湿，止痛。生长于海拔2000-4000米的林 缘及灌丛内，分布于中国的陕西、四川、甘肃、青海、西藏。此外，羌活还常与防风、白芷和细 辛等中药组成复方使用。但是，目前并未见文献报道羌活具有防止肾损伤的功效。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种羌活提取物及其制备方法和应用，使得所 述羌活提取物具有防止肾损伤、保护肾损伤细胞的功效，能够应用于肾损伤保护药物的制 备中。
[0005] 同时，本发明的另一个发明目的是提供羌活在制备肾损伤保护药物中的应用。
[0006] 其中，本发明所述羌活提取物的制备方法，包括：
[0007] 步骤1、粉碎羌活根茎，加入乙醇溶液提取，提取液过滤、浓缩后加盐酸调节pH为 2,加热回流并浓缩蒸干获得粗提物；
[0008] 步骤2、粗提物加入乙醇溶液复溶，通过大孔树脂柱吸附，依次水洗脱、由低到高的 梯度浓度乙醇溶液洗脱，收集60 %乙醇洗脱液，除去溶剂，浓缩至浸膏，然后加入乙酸乙酯 溶解、过滤，滤液除去溶剂，浓缩、干燥，获得所述羌活提取物。
[0009] 其中，作为优选，步骤1所述羌活根茎与乙醇溶液的体积质量比为lg:6-10mL。
[0010] 作为优选，步骤1所述乙醇溶液的体积百分浓度为70%。
[0011] 作为优选，步骤2所述粗提物加入乙醇溶液复溶为粗提物加入羌活根茎总重1倍 量的40%乙醇溶液溶解。
[0012] 作为优选，所述大孔树脂柱为D-101型大孔树脂柱。
[0013] 作为优选，所述大孔树脂柱重量为为羌活根茎总重的2倍。
[0014] 作为优选，所述依次水洗脱、由低到高的梯度浓度乙醇溶液洗脱具体为：
[0015] 依次水洗脱4个柱体积，40 %乙醇洗脱3个柱体积，60 %乙醇洗脱6个柱体积。
[0016] 根据上述制备方法，本发明提供由本发明所述制备方法制备的羌活提取物，其包 含凯林内酯、紫花前胡苷元、异虎耳草素、茴香酸对羟基苯乙酯和比克白芷内酯，总香豆素 含量大于50%。
[0017] 本发明制备的羌活提取物在对顺铂所致HK-2细胞肾损伤模型的试验中表现出对 正常HK-2细胞的安全性以及对肾损伤细胞的保护作用。因此，本发明提供了羌活以及所述 羌活提取物在制备肾损伤保护药物中的应用。作为优选，所述肾损伤为由顺铂所致肾损伤。
[0018] 由以上技术方案可知，本发明提供了羌活及其经过特殊方法提取的提取物在保护 肾损伤细胞中的应用，从而为临床上防止肾损伤提供多一种安全有效的中药选择。羌活提 取物在安全剂量内能够有效地保护肾损伤细胞，可进一步开发为肾损伤保护药物，具有广 泛的应用前景。
【附图说明】
[0019] 图1所示为本发明羌活提取物高压制备液相色谱图。
【具体实施方式】
[0020] 本发明公开了一种羌活提取物及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本 文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术 人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述产品和制备方法以及应 用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内 对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0021] 依照本发明所述羌活提取物的制备方法，其可根据优选方案具体如下：
[0022] 将羌活根茎粉碎成粗粉，按体积/质量加入6~10倍的70%乙醇溶液提取两次， 每次1. 5小时，合并过滤液，浓缩至无醇味后加水至药材重量的1倍；浓缩液加入浓盐酸调 节pH至2,加热回流0. 5个小时，浓缩蒸干，加入药材重量1倍量的40%乙醇溶液使其完全 溶解。水解液通过2倍药材重量的D-101大孔树脂柱（径高比为1:8)吸附后，水洗脱4个 柱体积，40 %乙醇洗脱3个柱体积，60 %乙醇洗脱6个柱体积。60 %乙醇洗脱液合并，回收溶 剂，浓缩至浸膏。浸膏加入乙酸乙酯溶液，使其溶解完全，滤过，回收溶剂，浓缩至浸膏，60°C 真空干燥，粉碎即得所述羌活提取物。
[0023] 以下就本发明所提供的一种羌活提取物及其制备方法和应用做进一步说明。
[0024] 实施例1 :制备本发明所述羌活提取物
[0025] 将羌活根茎粉碎成粗粉，按体积/质量加入6~10倍的70%乙醇溶液提取两次， 每次1. 5小时，合并过滤液，浓缩至无醇味后加水至药材重量的1倍；浓缩液加入浓盐酸调 节pH至2,加热回流0. 5个小时，浓缩蒸干，加入药材重量1倍量的40%乙醇溶液使其完全 溶解。水解液通过2倍药材重量的D-101大孔树脂柱（径高比为1:8)吸附后，水洗脱4个 柱体积，40 %乙醇洗脱3个柱体积，60 %乙醇洗脱6个柱体积。60 %乙醇洗脱液合并，回收溶 剂，浓缩至浸膏。浸膏加入乙酸乙酯溶液，使其溶解完全，滤过，回收溶剂，浓缩至浸膏，60°C 真空干燥，粉碎即得所述羌活提取物。
[0026] 实施例2 :所述羌活提取物总香豆素含量检测
[0027] 采用紫外分光光度发测定羌活提取物中总香豆素含量：精密称取异紫花前胡内酯 标品2. 52mg，置入IOOmL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配置成对照品母液。取对照品母液 I. 5mL、2. 0mL、2. 5mL、3. 0mL、3. 5mL，分别置于5个IOmL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配置 成对照品溶液。精密称取实施例1所得提取物6. 34mg，置入50mL容量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，配置成供试品母液。取供试品母液6. 5mL置于50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配 置成供试品溶液。在200~400nm分别扫描异紫花前胡内酯对照品母液及供试品溶液，二 者在300nm处均有一个吸收峰，且峰形变化平缓，便于定量测定，因此，将300nm作为测定波 长。分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照紫外分光光度法，在300nm波 长处测定吸光度，计算，即得羌活提取物中总香豆素含量为52. 1 %。
[0028] 实施例3 :所述羌活提取物主要成分的分离鉴定
[0029] 实施例1羌活提取物加适量甲醇溶解后，加入等量的粗硅胶（80-100目）中搅拌 均匀，烘干后倒入到含4~5倍量的硅胶（200-300目）柱中。石油醚平衡D-101柱子以 后，利用石油醚-乙酸乙酯50:1、20:1、10:1各洗脱4个柱体积，10:1部位浓缩蒸干。石油 醚-乙酸乙酯10:1洗脱部位加甲醇溶解后，离心，取上清液，利用高压制备液相进行制备分 离。
[0030] 高压制备液相色谱条件：安捷伦1260型制备色谱仪，色谱柱为Fuji C18(250X50mm);流动相为乙腈（A)-水（B);检测波长为310nm;洗脱程序为0~60min， A30%，B70%;流速为SOmL.min 1;柱温为30°C。收集各主要色谱峰（见图1)，浓缩干燥后 分别得凯林内酯、紫花前胡苷元、异虎耳草素、茴香酸对羟基苯乙酯、比克白芷内酯，鉴定结 果如下：
[0031] (-)-反式凯林内酯：111匪1?(4001取，0)300)8:6.25(111，(1，了 = 9.5Hz，H-3)，7.88(lH，d，J = 9.5Hz, H-4), 7.46 (lH，d, J = 8.6Hz, H-5), 6.80 (lH，d, J = 8. 6Hz, H-6), 3. 74 (1H, d, J = 4. 3Hz, H-3r ), 4. 92 (1H d, J = 4. 3Hz, H-4r ), L 38 (3H, s, -C 氏），1.45(3氏8，-〇13)。13〇 NMR (100MHz, CD3OD) S :163. 5 (C-2), 112.7 (C-3), 146.4 (C-4), 129 .9(C-5), 113. 8(C-6), 156. 0(C-7), 115. 9(C-8), 158. 0(C-9), 112. 2 (C-10), 79. 9 (C-2r ),66. l(C-3' ),75. 0(C-4' ),23. 2 (C-5' ),25. 0(C-6')。
[0032] (+)-顺式凯林内酯：? 匪 R (400MHz, CD3OD) S :6. 24(1H, d, J = 9. 5Hz,H-3),7. 86(1H, d, J = 9. 5Hz, H-4), 7. 44 (1H, d, J = 8. 6Hz, H-5), 6. 76 (1H, d, J = 8. 6Hz, H-6)，3. 75 (1H, d, J = 4. 7Hz, H-3，），5. 07 (1H d, J = 4. 7Hz, H-4，），I. 42 (3H, s, -C 氏），1.43(3氏8，-〇13)。13〇 NMR (100MHz，CD3OD) S :163. 4 (C-2)，112.8 (C-3)，146.3 (C-4)，129 .9(C-5), 113. 7(C-6), 155. 8(C-7), 115. 8(C-8), 157. 9(C-9), 112. 7 (C-10), 80. 2 (C-2r ),62. KC-Sr ),73. I (C-4r ),21.4(C-5, ),26.9(C-6r )〇
[0033] 异虎耳草素：1H NMR (400MHz, CD3OD) S : 6. 34 (1H, d, J = 9. 8Hz, H-3), 8. 18 (1H, d, J =9. 8Hz, H-4), 8. 09 (1H, d, J = 2. 3Hz, H-2r ), 7. 40 (1H, d, J = 2. 3Hz, H-3r ), 4. 17 (3H, s, 5