8,在100°C下加压提取4次，压力控制在10个大气压，每次提取3h，将提 取液合并得到提取液A ;
[0034] (2)将提取液A在18倍乙醇浸泡回流4次，过滤浓缩，冷冻干燥得到提取物C ;
[0035] (3)取上述提取物C溶于适量水中，加入正丁醇，搅拌后低温静置分层，上层水相 重复操作4次后，用截留分子量为10000的透析膜透析2天，取出透析袋内液体，过滤，减压 浓缩后，冷冻干燥得到提取物D ;
[0036] (4)将上述提取物D用阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主 峰合并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，得到青钱柳提取物。
[0037] 下面通过试验例用于进一步说明本发明。
[0038] 试验例1 :青钱柳提取物在体外抑制人胃癌细胞生长
[0039] 使用5种人的恶性胃肿瘤（SGC7901，MNK45，BGC8223，HCG27，GC9811)细胞系，采用 MTT法测定了青钱柳提取物体外抗癌活性，测定浓度范围为0-500mg/ml，处理时间为72h， 结果见表1。
[0040] 表1青钱柳提取物对5种人肿瘤细胞IC50 ( μ g/ml) (M± SE)
[0042] 由表1可见，青钱柳提取物在体外可抑制人胃癌细胞生长，而且不同的细胞系之 间对青钱柳提取物敏感性明显不同。
[0043] 试验例2 :青钱柳提取物联合5-FU在体外抑制人胃癌细胞生长
[0044] 使用 5 种人恶性胃肿瘤（SGC7901，MNK45, BGC8223, HCG27, GC9811)细胞系，采用 MTT法测定了青钱柳提取物单独应用及与5-FU联合应用的体外抗癌活性，处理时间为72h， 结果见表2。
[0045] 表2 5-FU联合青钱柳提取物对5种人肿瘤细胞IC50 ( μ mol/L) (M± SE)
[0047] 由表2可见，联合用药后，青钱柳提取物能够明显降低5-FU在不同的细胞系的工 C50 值。
[0048] 试验例3 :青钱柳提取物抑制B (a) P诱导的小鼠胃前癌的发生
[0049] 实验动物，健康昆明种小鼠120只，6周龄，体重20-22g，雄性；所有动物均在同样 环境下饮水、摄食、保持自然光照；温度25°C，湿度60-70%。
[0050] 实验共分6组：溶剂对照组；B (a) P荷瘤对照组（ig仅给予B (a) P) ;5mg/kg青钱柳 提取物组；2. 5mg/kg青钱柳提取物+B (a) P组；5mg/kg青钱柳提取物+B (a) P组；10mg/kg青 钱柳提取物+B (a) P组；小鼠按体重随机共分成6组，每组20只，分别于灌胃给予B (a) P，隔 日1次，连续给予B(a)P 2周。之后分别饮食给予不同剂量青钱柳提取物（mg/kg体重）或 溶剂对照连续给药36周。给青钱柳提取物结束次日，将动物称体重后脱白处死，肿瘤病理 学分析，进行统计处理，计算抑瘤率。青钱柳提取物对B (a) P诱导的小鼠前胃肿瘤抑制作用 的结果见表3。统计学处理方法采用组间"t"检验。
[0051] 表3青钱柳提取物对B (a) P诱导的小鼠胃前肿瘤抑制作用的结果
[0052]
[0053] 由表3可见，青钱柳提取物能够显著降低B(a)P诱导的小鼠胃前癌的发生率。
[0054] 试验例4 :青钱柳提取物抑制人胃癌细胞BGC823异植小鼠胃肿瘤的发生
[0055] 4周龄BALE/C(nu/nu)裸鼠，由中国生物药品鉴定所提供，鼠龄4周，雌雄兼 用，其实验和饲养均在无菌条件下的超净层流架中进行，灭菌水和饲料供动物自由摄入， BGC823 (人胃癌细胞系），常规传代，收集体外培养的对数生长期的BGC823细胞，调节细胞 数为2X 107cellS/ml，每只裸鼠取0. 2ml细胞悬液1P注入右大腿背侧皮下，当皮下移植瘤 长至直径为lcm左右时，小鼠按体重随机分租，共分成3组，分别隔日IP(10mg/kg，20mg/kg 体重）瘤内注射给予青钱柳提取物，连续给药4周。4周后，小鼠称体重后脱臼处死，取出观 察小鼠肿瘤体积变化情况，青钱柳提取物对人胃癌细胞BGC823异植小鼠胃肿瘤的抑制作 用见表4。
[0056] 表4青钱柳提取物抑制人胃癌细胞BGC823异植小鼠胃肿瘤的发生
[0058] 由表4可见，青钱柳提取物对人胃癌细胞BGC823异植小鼠前胃肿瘤的发展有明显 的抑制作用。
[0059] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在 不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论 从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权 利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有 变化囊括在本发明内。
【主权项】
1. 一种青钱柳提取物在制备胃癌药物中的应用，其特征在于，所述青钱柳提取物的制 备方法如下： (1) 以青钱柳叶为原料，经清洗、烘干、粉碎过筛后置于提取罐中，加入蒸馏水，料液质 量比为1 : 6~8,在80~120°C下加压提取2~4次，压力控制在8~10个大气压，每次 提取2~3h，将提取液合并得到提取液A ; (2) 将提取液A在8~20倍乙醇浸泡回流3~5次，过滤浓缩，冷冻干燥得到提取物 C； (3) 取上述提取物C溶于适量水中，加入正丁醇，搅拌后低温静置分层，上层水相重复 操作3~4次后，用截留分子量为8000~12000的透析膜透析1~2天，取出透析袋内液 体，过滤，减压浓缩后，冷冻干燥得到提取物D ; (4) 将上述提取物D用阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主峰合 并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，得到青钱柳提取物。2. 根据权利要求1所述的青钱柳提取物在制备胃癌药物中的应用，其特征在于，所述 青钱柳叶为新叶、老叶或落叶。3. -种如根据权利要求1所述的青钱柳提取物作为活性成分在制药学上接受附加剂 的药物组合物在制备治疗胃癌药物中的应用。4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述治疗胃癌药物制成固体制剂或液体 制剂，所述固体制剂为颗粒剂、片剂、滴丸剂、粉针剂或胶囊，液体制剂为口服液。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述固体制剂中青钱柳提取物的质量含 量为12~16%，液体制剂中青钱柳提取物的质量含量为8~12%。
【专利摘要】本发明公开了一种青钱柳提取物在制备胃癌药物中的应用，通过对青钱柳叶进行水提、萃取、膜透析、以及纯化，得到高含量的活性青钱柳提取物。本发明采用青钱柳叶为原料，通过对青钱柳的有效成分进行提取，并将该有效成分用于制备治疗胃癌的药物，不仅提高青钱柳叶的利用率，而且通过对体外多种人胃肿瘤细胞及体内肿瘤动物模型的抗癌实验研究，发现青钱柳提取物对体内外肿瘤细胞具有较好的抑制作用，对于胃癌的防治有着非常显著的效果。
【IPC分类】A61P35/00, A61K36/52, A61K127/00
【公开号】CN105232623
【申请号】CN201510788362
【发明人】吴申龙
【申请人】吴申龙
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年11月16日