一种用于治疗缺血性中风的土鳖虫小肽药物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种具有治疗缺血性中风作用的中药有效部位组合物及其制备方法， 具体地说从土鳖虫、三七、葛根、当归中提取的中药有效部位组合物及其制备方法，属于中 药领域。
【背景技术】
[0002] 缺血性中风是指脑血栓形成或脑血栓的基础上导致脑梗塞、脑动脉堵塞而引起的 偏瘫和意识障碍，是世界范围中、老年人群的常见病和多发病，近年来随着人口老龄化及人 们生活条件和生活方式的明显改变，中风病的发生也显出了新的趋势，其一即是发病呈上 升和低龄化趋势(瑞士有一临床数据报道，年轻型卒中在1661例率中患者中占225人，为 13. 5%)。同时中风病又因其高发病率、高致残率、高死亡率、高复发率及低治愈率的临床特 点，严重危害着中老年人的身体健康，生存质量和生命，给家庭、社会造成了沉重的经济负 担，精神负担，由此也产生了一些社会问题。
[0003] 缺血性中风的治疗，目前，中西医均有基本的治疗原则，并在原则的指导下，随着 对该病病因病理的进一步认识有许多被认为有效的治疗方法应用于临床，中西医均不断有 新的疗法问世，其中有不少是在实验室或在个体病例中显示较好效果，然而经多中心协作 的大样本，前瞻性，随机双盲研究，尚未确证哪一种药物或方法能获得最理想的疗效。目前 西医治疗缺血性中风的药物主要是一些溶栓、降纤及抗凝的药物，如尿激酶、巴曲酶、蚓激 酶低分子肝素、阿司匹林、神经保护剂等。
[0004] 缺血性中风属中医"中风"、"中经络"、"偏枯"、"偏风"等范畴。缺血性中风的病因 以内因引发者居多，如情志郁怒，心火暴甚，引动内风而发卒中；或饮食不节，脾失健运，痰 郁化热，引动肝风；劳累过度，阴血黯耗，虚阳化风扰动。此外与气候变化有关。病理变化 为患者平素气血亏虚，心、肝、肾、牌等脏阴阳失调，内生风、痰、湿、火，加之忧思恼怒，或饮 酒饱食，或房室劳累，或外邪侵袭等诱因，以致气血运行受阻，肌肤筋脉失于儒养，或阴亏于 下，肝阳暴张，阳化风动，气血逆乱，夹痰夹火，横窜经隧，蒙蔽清窍，而形成上实下虚，阴阳 互不维系之证。目前传统中医药对缺血性中风的治疗作用逐渐成为热点，中医根据辨证特 点能从根源上治疗缺血性中风。而中药的现代研究证明，中药治疗中风成分明确、可行，为 新的治疗缺血性中风疾病药物的研制开发提供了良好的基础。
[0005] 本发明的用于治疗缺血性中风的药物是在中医理论指导下，从整体出发，辨证论 治，缓解症状明显，疗效满意，与西药相比具有更有效、更经济、副作用少、复发率低等优势， 因而具有良好的前景。
【发明内容】
[0006] 本发明的一个目的在于提供一种具有治疗缺血性中风的中药有效部位组合物； 本发明的另一个目的在于提供上述中药组合物的制备方法和用途。
[0007] 本发明的第一目的：以土鳖虫小肽、三七总皂苷、葛根总黄酮和当归总挥发油环糊 精包合物为原料，加入适当药用辅料，制成相关的剂型。
[0008] 本发明药物的组合物的原料药的组成及配比为：土鳖虫小肽6~12重量份、三七 总皂苷2~7重量份、葛根总黄酮6~12重量份、当归挥发油环糊精包合物5~10重量 份。
[0009] 本发明中药药物组合物优选的组成及配比为：土鳖虫小肽9重量份、三七总皂苷5 总量份、葛根总黄酮9重量份、当归挥发油环糊精包合物7重量份。
[0010] 上述小肽有效部位中小肽的含量不低于提取物的40%，总皂苷有效部位中总皂苷 不低于提取物的60% (w/w)，总黄酮有效部位中总黄酮不低于提取物的50%，当归挥发油环 糊精包合物中挥发油包封率为85%。
[0011] 该药物组合物可以加入相应辅料，制成丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂中 的任一种。然后可以再加入其他具有治疗缺血性中风的有效部位、有效成分、化学合成品或 者半合成品，然后再加入相应辅料，制成丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂中的任一 种。
[0012] 本发明中药组合物的制备方法包括以下步骤： ① 土鳖虫小肽的制备：取土鳖，适当粉碎，加10倍量水勾衆lOmin，加热煮沸15min，放 冷至室温，采用盐酸调pH至1. 5~2. 0,然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40°C条件下酶解 lh，然后采用氢氧化钠溶液调节pH7. 5~8. 0,加入底物量1%的胰蛋白酶，在40°C条件下酶 解3h，，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，用截留相对分子质量为 3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D~300D的陶瓷膜 进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得土鳖虫小肽；其中土鳖虫小肽的含量为30%~ 50% ； ② 三七总皂苷的制备：取三七根茎，粉碎后加入15倍量70%的乙醇回流提取3次，每 次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用少量水溶解后，按 树脂量与药材比例1:1通过D101大孔吸附树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用80%乙醇 以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液；减压条件下浓缩，蒸干，得三七总皂苷；其中总皂 苷的含量不得低于总提取物的50%。
[0013] ③葛根总黄酮的制备：取葛根药材，粉碎后加入15倍量70%的乙醇回流提取3次， 每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用少量水溶解后， 安树脂量与生药量比例为1 :1通过AB-8大孔吸附树脂柱，先用6倍量去离子水洗脱，再用 80%乙醇以lBV/h的速度进行洗脱，合并6BV乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，得葛根总黄酮； 其中总黄酮的含量不得低于总提取物的50% ; ④当归挥发油环糊精包合物的制备：取当归药材，加水10倍量，浸泡1小时，水蒸气蒸 馏4小时，收集挥发油，制得当归总挥发油。按照当归挥发油与环糊精的比例1:5,加水5倍 量，搅拌2小时，制得当归挥发油包合物。
[0014] ⑤按照比例取上述小肽、总皂苷、总黄酮和挥发油环糊精包合物，不加辅料或加入 辅料，制成药学上可以接受的剂型。
[0015] 增加：各树脂的型号可以是D101大孔树脂、D201大孔树脂、AB-8大孔树脂。
[0016] 小肽、总皂苷、总黄酮的含量测定方法为： 小肽含量测定方法：取牛血清白蛋白对照品适量，精密称定，加水制成每毫升含 0. 25mg的溶液，即得。精密量取对照品溶液0,0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1.0ml，分别置具塞试管 中，各精密加水至1. 〇ml，再分别精密加碱性铜试液1. 0ml，摇匀，各精密加入福林酚试液 [取福林试液储备液（1 - 16) ]4. 0ml，摇匀，于55°C水浴中保温5min，取出，置冷水浴中冷 却lOmin，迅速测定，以0管为空白，照紫外一可见分光光度法，在650nm波长处测定吸光度 以吸光度为纵坐标，牛血清白蛋白质量为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。精密量 取提取液lml，别置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液；照标准曲线的制备 项下自分别精密加碱性铜试液1. 〇ml起，依法测定吸光度，从回归方程中计算多肽的含量。
[0017] 总皂苷含量测定方法：精密称取三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含 0. 962mg的溶液，既得。分别精密吸取10. 0, 20. 0, 30. 0, 40. 0, 50.0 ul，分别置磨口具塞试 管中，热水浴挥干溶剂，加5%香草醛-冰醋酸溶液（新配制）0.2ml，高氯酸0.8ml，于60 恒温水浴15min，立即置冰水浴内冷却，精密移取冰醋酸5mL，摇匀