] 从新鲜巨藻的萃取产率以湿基计在2. 9-6. 6% (w/w)范围内，而干燥藻的萃取产 率在27. 7和57. 3% (w/w)之间的范围内；表2包含了分析的各个藻种的产率。
[0039] 相对于水空白，被冻干并随后再溶解在水中的该萃取物的最大吸光度在250nm和 280nm之间，如图3所示。
[0040] 总多酚含量：
[0041] 术语多酚被理解为意指存在于植物中的这样的化合物的整个家族，所述化合物包 含酚基或衍生自酚基：苯甲酸衍生物、肉桂酸衍生物、类黄酮等。
[0042] 1965 年，由Singleton&Rossi,Singleton,V.L. ;Rossi,J.J.发表于美国葡萄栽培 与酿酒学报第16卷H4-158页的利用磷钼酸磷钨酸试剂的总酚比色法（Colorimetryof totalphenolicswithphosphomolybdicphosphotungsticacidreagents.Singleton& Rossi,Singleton,V.L. ;Rossi,J.J.Am.J.Enol.Vitic. , 16, 144 - 158, 1965.)中提出的方 法经略微改进被用于测定得到的萃取物的多酚含量。因此，使用500μ1溶于水中的样品， 向其加入2. 5ml的福林-乔卡梯奥试剂和2. 0ml的Na2C03。在45°C下温育样品15min后， 在765nm下读取吸光度。
[0043]
[0044] 表2-以干基计和以湿基计水性萃取物的产率。d.b.:考虑24hX45°C干燥。
[0045] 1995 年由Brand-WilliamsW、CuvelierME和BersetC.发表在LWT食品科学 技术杂志第28卷5-3018的自由基方法评价抗氧化活性的应用（Useofafreeradical methodtoevaluateantioxidantactivity'，，Brand-Williamsff,CuvelierME,Berset C.LWTFoodSciTechnol28:5 - 30181995)中提出的DPPH自由基抑制试验用来测定萃 取物的供质子能力。该方法经略微改进被应用如下，其中20μ1的萃取物水溶液被加入 至IJ980μ1的自由基的甲醇溶液（6. 9Χ10 5mol/l)中。16min后在515nm下记录吸光度 的下降。针对空白的记录计算DPPH自由基抑制百分比。在5和40mg/ml之间的泡叶藻 和双叉藻萃取物的浓度范围被评估以测定EC50,其结果分别为23. 73±3. 83mg萃取物/ ml和17.68±2.2mg萃取物/ml。这些以没食子酸当量（GAE)表示的相同值分别对应于 1. 08±0· 16 和 1. 04±0. 13mgGAE/ml。
[0046]
[0047] 表3-来自四种褐藻品种的冷冻干燥萃取物的特征。
[0048] 多糖含量：
[0049] 术语多糖被理解为意指由糖（主要是己糖和/或戊糖）形成的聚合物，其在植物 中的功能为结构组成和能量储备。
[0050] 多糖含量是通过 1956 年由Dubois,M.、Gilles,K.A.、Hamilton,J.K.、Rebers,P. A.和Smith，F.发表于分析化学杂志第28卷第350-356页的用于糖和相关物质测 定的比色法(Colorimetricmethodfordeterminationofsugarsandrelated substances,Dubois,M. ；Gilles,K.A. ；Hamilton,J.K. ；Rebers,P.A. ；Smith,F.Anal. Chem.，28, 350 - 356, 1956)中提出的苯酚-硫酸法进行测定。从巨藻双叉藻中得到的萃取 物每克冻干物156. 7mg葡萄糖的平均糖含量被获得，其比在相同条件下从泡叶藻中得到的 尚 29 %。
[0051] 岩藻多糖被理解为意指藻类的多糖特征的家族，其通过岩藻糖衍生物硫酸化糖的 聚合而形成。
[0052] 平均岩藻多糖含量通过1961年由Dodgson,Dodgson,K.S.发表于生化杂志 第78卷第312-317页的糖类和其他硫酸酯的酶或非酶水解研究中无机硫酸盐的测定 (Determinationofinorganicsulphateinstudiesontheenzymicandnon-enzymic hydrolysisofcarbohydrateandothersulphateesters,Dodgson,Dodgson,K. S.，Biochem.J.，78,pp. 312-317, 1961)中描述的方法测定，并且被表示为消化样品后的总 硫酸盐。双叉藻萃取物中的平均值为每克冻干物118mg硫酸盐，比在相同条件下得到的泡 叶藻萃取物高134%。通过ICP-0ES技术测定的硫水平（平均每克冻干物36. 3mgS)是针 对泡叶藻获得的那些（平均18. 14mg/g)的两倍。
[0053] 在藻类中主要的多糖是所谓的藻酸盐，其主要通过葡萄糖醛酸聚合形成。
[0054] 藻酸盐含量是根据1973年由Blumenkrantz等人（Blumenkrantz,N.和 Asboe-Hansen,G.)发表于分析生物化学杂志第54卷第484-489页的定量测定糖醛酸的新 方法（Newmethodforquantitativedeterminationofuronicacids,Blumenkrantzet al.，Blumenkrantz,N.andAsboe-Hansen,G.Anal.Biochem,f54,pp. 484_489,I973)中提出 的方法从糖醛酸含量估算的。双叉藻萃取物显示以糖醛酸表示并且用葡萄糖醛酸作为标准 的平均藻酸盐含量为每克冻干物55.lmg，其比在相同条件下从泡叶藻得到的高15%。
[0055] 分光光度法测定总多酚
[0056] 用间苯三酚作为标准品使用福林-乔卡梯奥法测定总多酚。在双叉藻萃取物中平 均总多酚含量（其多酚主要是褐藻多酚）为每克冻干物62. 4mg当量的间苯三酚，其比从泡 叶藻中获得的高7. 3%。
[0057] 色谱法检测褐藻多酚
[0058] 术语褐藻多酚被理解为意指通过间苯三酚（1，3, 5-三羟基苯）的聚合产生的聚合 物，与由儿茶酚/表儿茶酸及衍生物聚合而形成的名称鞣酸类似。鞣酸是植物的细胞壁成 分并且褐藻多酚是巨藻的细胞壁成分。
[0059] 褐藻多酸是根据 2007 年由Koivikko等（Koivikko,R.、Loponen,J.、Pihlaja,K. 和Jormalainen,V.)发表于植物化学分析杂志第18卷第326-332页的来自褐藻墨角藻的 褐藻多酸的高效液相色谱分析（High-performanceliquidchromatographicanalysis ofphlorotanninsfromthebrownalgaFucusvesiculosusPhytochem,Koivikko etal. , 2007,Koivikko,R. ,Loponen,J. ,Pihlaja,K.andJormalainen,V. ,Anal. 18, pp. 326-332, 2007.)中提出的方法学从冻干的萃取物中萃取的，其中用己烷洗涤的步骤被 去除。
[0060] 称量95mg双叉藻萃取物并且溶解在25ml水中；随后用10ml的丙酮/水：7/3混 合物萃取褐藻多酚4次。离心样品以分离上清液。合并上清液部分并用队流除去丙酮。 残渣再悬浮于水中并随后冷冻干燥。冻干物溶解于lml蒸馏水中并准备注入高效液相色 谱设备。色谱分离方法是 2008 年由Zaragoza,M.C.、L0pez,D.、S<iiz，Μ·P.、Poquet,M.、 Perez，J.、Puig-Parellada，Ρ·、Μ?ηηο?，F.、Simonetti，Ρ·、Gardana，C.、Lerat，Υ·、Burtin，P.、Inisan，C.、Rousseau，I.、Besnard，M.和Mitjavila，Μ·T.发表于农业食品化 学杂志第56卷第7773-7780页的两种墨角藻萃取物在体外和体内的毒性和抗氧化活性 (ToxicityandantioxidantactivityinvitroandinvivooftwoFucusvesiculosus extracts,Zaragoza,M.C. ,Lopez,D. ,Saiz,Μ.P. ,Poquet,M. ,Perez,J. ,Puig-Parellada,P .,Marmol,F. ,Simonetti,P. ,Gardana,C. ,Lerat,Y. ,Burtin,P. ,Inisan,C. ,Rousseau,I., Besnard，M.，andMitjavila，M.T.J.Agric.FoodChem，56,pp. 7773-7780, 2008.)中提出的 色谱分离方法。
[0061] 图2显示了主峰（5-6、11和18)，其信号分别在25-26、30和37min被检测到。褐 藻多酚混合物的最大吸光度在273nm处被观察到，如图3所示。紫外-可见光谱图谱与间 苯三酚分子标准品的图谱吻合。
【主权项】
1. 从褐色巨藻中得到的冻干的抗氧化剂萃取物，其特征在于： a) 糖含量在每克冻干物33和156mg葡萄糖之间； b) 岩藻多糖含量在每克冻干物44和118mg硫酸盐之间，所述岩藻多糖被表示为消化样 品后的总硫酸盐； c) 褐藻多酚含量在每克冻干物12和62. 4mg当量间苯三酚之间，所述褐藻多酚被表示 为间苯二酸；和 d) 藻酸盐含量在每克冻干物10和55mg当量葡萄糖醛酸之间。2. 根据权利要求1所述的萃取物，其特征在于，紫外区域的最大吸光度在260-280nm之 间。3. 根据权利要求1所述的萃取物，其特征在于，DPPH自由基抑制能力的EC5(^为每毫 升17. 7至23. 7mg萃取物。4. 根据权利要求1-3所述的萃取物，其中所述褐色巨藻是双叉藻、泡叶藻、欧非囊根藻 和钝马尾藻。5. 从新鲜或干燥褐色巨藻中获得根据权利要求1-4表征的冻干的抗氧化剂萃取物的 方法，包括： a) 如果使用新鲜巨藻，用水洗涤所述巨藻； b) 将所述巨藻与水以3和5g/g之间的液体/固体（L/S)比进行混合； c) 研磨混合物以获得粒径小于3mm的研磨的巨藻； d) 当以新鲜巨藻为起始时，将所述研磨的巨藻与液体溶剂以5和15(g/g)之间的液 体/固体（L/S)比混合；当以干燥巨藻为起始时，将所述研磨的巨藻与液体溶剂以50和 150 (g/g)之间的液体/固体（L/S)比混合；所述液体溶剂包括纯乙醇或1:1 (v/v)比的乙 醇：水混合物； e) 通过持续应用超声使混合物经受细胞破碎过程，所述超声具有在3和13W/cm3之间 范围的功率密度； f) 在前一步得到的固体藻残渣通过沉降并随后离心或过滤进行分离； g) 于小于40°C的温度下在真空下除去乙醇或50%的水，得到浓缩的萃取物； h) 将所述浓缩的萃取物冷冻干燥，得到冻干的萃取物。6. 根据权利要求5所述的方法，其中研磨的粒径对于干燥巨藻在0. 5和2mm之间，而对 于新鲜巨藻在0. 5和3mm之间。7. 根据权利要求1-4表征的抗氧化剂萃取物作为化妆品和食品配方中的成分的用途。
【专利摘要】该发明涉及利用超声辅助连续水性萃取从巨藻中获得抗氧化剂萃取物的方法。该过程可以利用新鲜藻类或干燥藻类在将其重悬浮于水中后进行。藻类在水中的悬浮液以在10和30％之间的固体浓度进行制备。混合物进料到超声破碎系统。萃取物经过过滤和冷冻干燥，得到总多酚浓度为每克冻干物62.4mg当量间苯三酚(对于双叉藻)和每克冻干物44mg当量间苯三酚(对于泡叶藻)。萃取物能够被用作化妆品和食品配方中的成分。
【IPC分类】A61K36/03, A61K8/96, A23L33/105
【公开号】CN105377232
【申请号】CN201480033395
【发明人】J·西内罗托雷斯, M·桑切斯格雷罗, M·J·努涅斯加西亚
【申请人】圣地亚哥大学
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2014年4月10日
【公告号】EP2997963A1, US20160074317, WO2014167162A1