用于治疗和/或护理皮肤、粘膜和/或指甲的外泌多糖的制作方法_5

文档序号:9692020阅读:来源:国知局
素、假二肽类、维生素 a酸类及其衍生物例如视黄醇或棕榈酸视黄酯 等或类肝素类等。
[0061 ]在另一个具体的实施例中,刺激愈合的活性剂、愈合剂辅佐剂、刺激表皮细胞再生 的活性剂和/或表皮细胞再生剂辅佐剂选自,例如但不限于:铁线莲叶马兜铃 (Aristoloquia clematis)、积雪草(Centella asiatica)、麝香玫瑰(Rosa moschata)、狭 叶松果菊(Echinacea angust if olia)、聚合草(Symphy turn off icinale)、问荆(Equisetum arvense)、贯叶连翅(Hypericum perforatum)、细花含羞草(Mimosa tenuif Iora)、鳄梨 (Persea gratissima)、非洲李(Prunus africanum)、直立委陵菜(Tormentilla erectea)、 芦荟(Aloe vera)的提取物、由宝唯特公司(Provital)销售的P〇Iyplani?Epithelizing [INCI:金盏花、贯叶连翘、母菊、迷迭香]、由Laboratories Serobiologiques/科宁/巴斯夫 公司销售的Cytoklnol?LS9〇28[iNCi:水解酪蛋白、水解酵母蛋白、盐酸赖氨酸]或由科 莲/安格公司销售的:Deliner?[iNCi:玉蜀黍(玉米)仁提取物]、尿囊素、钙粘着蛋白、整合 素、选择素、透明质酸受体、免疫球蛋白、成纤维细胞生长因子、结缔组织生长因子、血小板 源生长因子、血管内皮生长因子、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、角质形成细胞生长因 子、集落刺激因子、转化生长因子-β、肿瘤坏死因子-α、干扰素、白细胞介素、基质金属蛋白 酶、受体蛋白酪氨酸磷酸酶、Lipotec/Lubrizol公司销售的:Antarctieine?:[ INCI:假交 替单胞菌发酵提取物]、Bodyfensine? [INCI:乙酰基二肽-3氨基己酸酯]或Decorinyl?
[INCI:三肽-10瓜氨酸]、Try丨ageiv? [ INCI:假交替单胞菌发酵提取物、水解小麦蛋白、水 解大豆蛋白、三肽-10瓜氨酸、三肽-I ]、Xpertm〇istTM[ INCI:甘油、假交替单胞菌发酵提取 物、黄原胶、脯氨酸、丙氨酸、丝氨酸、乙基己基甘油、辛甘醇]、Seri丨esine? [INCi :六肽-10 ]或Thermos tress ine?[ INCI:乙酰基四肽-22 ]和/或其混合物。
[0062]在另一个具体的实施方案中,美容除臭剂和/或体臭吸附剂和/或体臭掩蔽剂和/ 或止汗药、香精和/或香味油选自,例如、但不限于:蓖麻油酸的锌盐配合物、非生物酸 (abiotic acid)的衍生物、鼠尾草精、黄春菊精、康乃馨精、香蜂叶精、薄荷精、肉桂叶精、莱 姆花精、杜松子精、岩石草精、乳香精、古蓬香胶精、劳丹脂精、熏衣草精、薄荷精、安息香、佛 手柑、二氢羟基月桂烯醇、铃兰醛、新铃兰醛、香茅醇、柠檬精、柑橘精、橙精、肉豆蔻酒、天竺 葵精、茴香籽、芫荽叶、小茴香子、杜松属、鸢尾提取物、百合、玫瑰花、茉莉、橙花油;乙酸苄 酯、乙酸对叔丁基环己酯、乙酸沉香酯、乙酸苯乙酯、甘氨酸乙基甲基苯酯、苯甲酸沉香酯、 甲酸节酯(benzyl formiate)、丙酸稀丙基环己酯(alylcyclohexyl propionate)、 stiralyI propionate、水杨酸节酯、苄基乙醚、具有8-18个碳原子的支链烧醛、梓檬醛、顺 蓖麻酸、香茅醛、香茅基氧基乙醛、兔耳草醛、羟基香茅醛、波吉洪醛(bourgeonal)、紫罗酮、 甲基柏木基酮、茴香脑、丁香酚、异丁香油酚、香叶醇、沉香醇、萜品醇、苯乙醇、α-己基肉桂 醛、香叶醇、苄丙酮、兔耳草醛、降龙涎香醚(ambroxan)、吲哚、二氢茉莉酮酸甲酯 (hedione)、sandelice、eyeIovertaU-大马酮、轻乙酸稀丙基戊酯、二羟基月桂稀醇、异丁 酸苯氧基乙烯酯、水杨酸环己酯、苯乙酸、醋酸牛龙牛儿酯、romilate、依罗酯(irotyl)、 floramate、铝盐例如明矾、氯化铝、水合氯化铝、二氯水合铝、倍半氯水合铝、羟基尿囊素铝 (aluminum hydroxy allantoinate)、氯酒石酸错、三水合错和三水合错、四氯水合错和四 氯水合错、五氯水合错和五氯水合错和/或其混合物;Lipo tec/Lubri zo 1销售的 Leuphasyl? [INCI:五肽-18]、SNAP-7[ INCI:乙酰基六肽-4]、SNAP-8[INCI:乙酰基八肽- 3]、ArgireMneii [ INCI:乙酰基六肽-8]或Inyline?[ INCI:乙酰基六肽-30]、Pentapharm/ DSM和BONT-L-P印tide销售的 Vialox? [ INCI:五肽3]或 Syn? Ake? [ INCI:二肽二氨基丁 酰基节胺二乙酸酯]、Infinitec Activos销售的[INCI:棕榈酰六肽-19]等或其混合物。 [0063] 座里
[0064]在另一个方面,本发明涉及具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种菌株在制备用 于治疗和/或护理皮肤、粘膜、毛发和/或指甲的化妆品或皮肤药物组合物中的用途。特别 地,所述治疗涉及治疗和/或预防疼痛、炎症、瘙痒或多汗,皮肤和/或粘膜的上皮再生和/或 愈合治疗,治疗和/或预防皮肤衰老、治疗和/或预防皮肤皱纹、优选面部皱纹、治疗和/或预 防皮肤坚实度缺失、治疗和/或预防多汗或出汗、治疗和/或护理选自疣、胼胝的皮肤病、治 疗性刺激毛发生长和/或预防脱发。
[0065]在另一个具体的实施方案中,本发明涉及具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种 菌株在制备用于抑制神经元胞吐作用的化妆品或皮肤药物组合物中的用途。
[0066]在另一个具体的实施方案中,本发明涉及具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种 菌株在制备用于刺激成纤维细胞增殖的化妆品或皮肤药物组合物中的用途。
[0067] 本发明的另一个方面涉及治疗和/或护理皮肤、粘膜、毛发和/或指甲的方法,该方 法包含施用化妆品和/或皮肤药学有效量的具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种菌株的 外泌多糖。特别地,所述治疗涉及治疗和/或预防疼痛、炎症、瘙痒或多汗,使皮肤和/和/或 粘膜的上皮再生和/或愈合治疗、治疗和/或预防皮肤衰老、治疗和/或预防皮肤皱纹、优选 面部皱纹、治疗和/或预防皮肤坚实度缺失、治疗和/或预防多汗或出汗、治疗和/或护理选 自疣、胼胝的皮肤病、治疗性刺激毛发生长和/或预防脱发。
[0068] 在一个优选的实施方案中,疼痛选自与病症、疾病和/或障碍相关的疼痛,例如、但 不限于接触敏感性、对冷敏感、对热敏感、皮肤刺激、毛发去除后皮肤刺激、剃毛后皮肤刺 激、银肩病、敏感性皮肤、皮炎、特应性皮炎、接触性皮炎、尿布皮炎、脂溢性皮炎、湿疹、扁平 苔藓、烧伤、晒伤、关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎牛皮癣关节炎、超敏反应、术后、强脉 冲光线疗法(IPL)后、用单色脉冲光(激光)处理后、用化学脱肩剂治疗后或过度暴露于外部 攻击性试剂治疗后的皮肤疼痛或刺激等。
[0069] 在另一个优选的实施方案中,炎症选自,例如、但不限于银肩病、敏感性皮肤、皮 炎、特应性皮炎、接触性皮炎、尿布皮炎、脂溢性皮炎、湿疹、酒渣鼻、痤疮、过度增生性皮肤 病、烧伤、晒伤、爪间鬃、术后、强脉冲光线疗法(IPL)后、用单色脉冲光(激光)处理后、用化 学脱肩剂治疗后或过度暴露于外部攻击性试剂治疗后的皮肤炎症、阴道粘膜炎症、口腔粘 膜炎症、牙龈炎、牙周炎、鼻炎、过敏性鼻炎等。
[0070] 在另一个优选的实施方案中,瘙痒选自与病症、疾病和/或障碍相关的瘙痒,例如、 但不限于皮炎、特应性皮炎、接触性皮炎、尿布皮炎、疱疹样皮炎、光照性皮肤病、光敏感性、 妊娠相关皮炎、绝经相关皮炎、湿疹、敏感性皮肤、银肩病、水痘、疱疹、带状疱疹、结节性裂 毛综合征、剥脱皮肤综合征、扁平苔藓、痤疮、头皮肩、皮脂溢、脂溢性皮炎、脱发、足癣、念珠 菌病、痔疮、阴道瘙痒、肛周瘙痒、阴肛部瘙痒、晒伤、荨麻疹、瘙痒性耳炎、眼痒、老年皮肤搔 痒症、水源性瘙痒症、结节性痒疹、痒疹苔藓、玫瑰糠疹、干燥病和干性皮肤、过敏反应、药物 过敏、食物过敏、化学品过敏、暴露于有毒植物和暴露于虫咬等。
[0071] 优选地,多汗或出汗的治疗和/或预防是治疗和/或预防腋窝、面部、生殖器、手掌 或足底的多汗或出汗。
[0072] 在另一个方面,本发明涉及抑制神经元胞吐作用的方法,该方法包含施用化妆品 和/或皮肤药学有效量的具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种菌株的外泌多糖。
[0073] 在另一个方面,本发明涉及刺激成纤维细胞增殖的方法,该方法包含施用化妆品 和/或皮肤药学有效量的具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种菌株的外泌多糖。
[0074]施用具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种菌株的外泌多糖通过局部或透皮进 行。在一个更具体的方面,局部或透皮施用通过电离子透入疗法、超声促渗、电穿孔、机械压 迫、渗透压梯度、封闭愈合、微注射、通过压力的无针头注射、微型电子贴(microelectric patches)、面膜或其任意的组合来进行。
[0075] 应用频率可以广泛改变,这取决于每位受试者的需求,从而启示从每个月1次到每 天10次、优选每周1次到每天4次、更优选每周3次到每天2次、甚至更优选每天1次的应用。
[0076] 借助于下列实施例更清楚地理解本发明,这些实施例不起限定作用,包括它们的 目的仅在于示例性地描述本发明外泌多糖和包含它的组合物的制备和表征。 实施例
[0077]实施例1:具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种的菌株分泌的外泌多糖的制备和 分离
[0078] a)具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种菌株的培养方法
[0079]在29°C并且在pH 7.5下在发酵罐中培养具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种菌 株,其肉汤包含富含葡萄糖(20g/l)的2216E培养基(ZoBell C.E.J.Mar.Res.,1941,4: 42.)。用10% (v/v)预培养物制备接种物,使发酵期限延长至72小时。通气和搅拌速度分别 为2vvm和250rpm。
[0080] b)表多肽的纯化
[0081 ] 通过以12, OOOg离心45mins从肉汤中分离细菌。通过用聚乙烯砜膜超滤超过 IOOKDa分子量的多糖类用蒸馏水纯化多糖。得到的多糖的平均分子量为180万Da。
[0082] 实施例2:具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种菌株产生的外泌多糖的物理-化 学表征
[0083] 通过根据Kamerling等人在Biochem. J.,1975151:491-495所述并且由Montreuil 等人在 1986 ,Glycoproteins · In Carbohydrate analysis :a practical approach.Eds Chaplin et Kennedy,I.R.L Press,Oxford,Washington D.C.,ppl43_204中改进的方法进 行水解和气相色谱测定根据实施例1得到的外泌多糖的中性和酸性单糖类的含量。得到的 糖类的百分率关系为47.7 %的N-乙酰氨基葡糖、11.4%的N-乙酰半乳糖胺和40.9%的葡糖 醛酸。
[0084] 实施例3:使用人角化细胞的体外愈合试验
[0085]从生长至汇合的人角化细胞培养物开始,进行用胰蛋白酶处理,在48-孔培养板中 以5xl04细胞/孔进行再接种。在37°C、5%C02加湿气氛下温育48小时后,通过用吸管端刮取 生成无细胞区。然后向细胞中加入包含〇.5mg/mL浓度的具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属 物种菌株产生的外泌多糖的培养基。将未处理的细胞、即未经任何产物处理的细胞用作阴 性对照,而将用DMEM(Dulbe CC〇改进的Eagle培养基)和胎牛血清处理的细胞用作阳性对照。 此时使用Zeiss Axiovert 40 CFL显微镜和AxioCam MRC5照相机给无细胞区域拍照。然后 将培养物温育(再次在37°C、5%C02与加湿气氛中)48小时,以使细胞迀移至无细胞区域。此 后,拍摄新的培养物照片,与〇时比较,根据相对于最初占据区域的细胞占据区域的增加计 算愈合百分比。
[0086] 表1显示相对于阴性对照观察到的愈合增加。
[0088] 表1
[0089] 实施例4:对人表皮成纤维细胞的体外增殖试验
[0090] 通过基于荧光测定的细胞存活方法评价细胞增殖。根据存在的胞内酯酶活性区分 活细胞,所述胞内酯酶活性通过钙黄绿素-AM的非荧光化合物进入细胞的酶转化率测定,所 述化合物透入细胞,在那里其被转化成强荧光钙黄绿素,它保留在细胞内部,并且赋予高度 绿色荧光强度。
[0091] 用胰蛋白酶处理人表皮成纤维细胞,以5x IO3细胞/孔的密度接种在96-孔培养板 中。在37°C、5%C02加湿气氛中温育24小时后,在每个孔中加入新鲜培养基,该培养基中包 含浓度为lmg/mL、0 · 5mg/mL和0 · 25mg/mL的具有保藏号CNCM 1-4239的弧菌属物种菌株产生 的外泌多糖。将未用本发明外泌多糖处理的细胞用作对照组。将细胞在37°C、5 % CO2加湿气 氛中再温育24小时。接下来用在PBS(磷酸缓冲盐水,Sigma)中IOOyL的钙黄绿素-AM(分子探 针),按照Lynch等人[Lynch C.N.,Wang Y.C.,Lund J.K.,Chen Y._W.,Leal J.A.,Wiley S. R. ?uTffEAK induce ang
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