稳定水平。
[0083] 图13是显示针对使用实例3中描述的方法用碱性蛋白酶处理后的组织基质连同未 处理对照的胶原酶消化测定结果的线形图。该数据显示对于更低浓度的碱性蛋白酶与对照 (非酶处理的基质)类似的消化曲线，而对于暴露于更高浓度碱性蛋白酶的基质，降解速率 递增。
[0084] 图14展示DSC结果，即根据实例3未处理组织和使用碱性蛋白酶处理的组织的变性 起始。类似于使用胶原酶易感性测试（图13)测量的胶原稳定性，随着递增的碱性蛋白浓度 而更低的变性起始指示随碱性蛋白酶处理浓度而变的递减的胶原稳定性。
[0085] 图15是针对使用实例3中描述的方法用碱性蛋白酶处理后的组织基质连同未处理 对照的最大负载/单位宽度的区间图。运个数据通过拉伸测试约Icm宽条的材料至损坏同时 测量力来产生。使用和英斯特朗（INSTRON)机械测试系统进行测试。数据显示针对所有处理 类似的强度。
[0086] 图16是针对使用实例3中描述的方法用碱性蛋白酶处理后的组织基质连同未处理 对照的弹性的区间图。弹性是材料在位移-力曲线的线性部分中在更高负载下的刚度的量 度。弹性与悬垂性测量相反，其反映在非常低的负载(重力在组织上的力)下的刚度。在处理 组之间看到弹性无显著变化。
[0087] 该测试显示碱性蛋白酶处理有效地增加了使用初始处理的pADM的柔软性，柔软性 伴随着继续处理随后增加。此外，低水平的碱性蛋白酶暴露不会不利地影响最大负载、胶原 酶生物易感性、和弹性。
【主权项】
1. 一种用于处理组织基质的方法，包括： 选择一种组织基质;并且 使该组织基质与碱性蛋白酶在包括一个孵育时间的条件下于具有碱性蛋白酶活性的 一种溶液中相接触，这些条件经选择以产生所希望的柔软性增加而不产生显著的胶原降 解，该柔软性是通过该组织基质的悬垂性试验来测量。2. 如权利要求1所述的方法，其中使该组织基质与该蛋白水解酶在不产生拉伸强度、撕 裂强度、缝合强度、抗蠕变性、爆裂强度、热转变温度、胶原酶易感性或其组合中至少一者的 不希望的变化的条件下相接触。3. 如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中这些条件经选择以提供组织柔软性的实 质最大增加。4. 如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中该组织基质是一种非灵长类组织基质。5. 如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中该组织基质是一种猪组织基质。6. 如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中使该组织基质与该蛋白水解酶在不产生 弹性的不希望的变化的条件下相接触。7. 如权利要求1-6中任一项所述的方法，进一步包括处理该组织基质以从该组织基质 中去除至少一些细胞和细胞组分。8. 如权利要求7所述的方法，包括从该组织基质中去除所有细胞和细胞组分。9. 如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中该组织基质是一种无细胞组织基质。10. 如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中该组织基质包括一种真皮组织基质。11. 如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶相接触包 括使该组织基质与一种具有活性为lxl(T6单位至〇. 015安森(Anson)单位/mL的碱性蛋白酶 的溶液相接触。12. 如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶相接触包 括使该组织基质与一种具有活性为lxl(T6单位至1.5xl(T3安森单位/mL的碱性蛋白酶的溶 液相接触。13. 如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶相接触包 括使该组织基质与一种具有活性为约2xl(T5单位至约4xl(T5安森单位/mL的碱性蛋白酶的 溶液相接触。14. 如权利要求1-13中任一项所述的方法，进一步包括包装该组织基质。15. 如权利要求1-14中任一项所述的方法，进一步包括将该组织基质灭菌。16. 如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶在以产生 悬垂值减少为30 %或至少30 %的条件下相接触。17. 如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶在以产生 悬垂值减少为40 %或至少40 %的条件下相接触。18. 如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶在以产生 悬垂值减少为50 %或至少50 %的条件下相接触。19. 如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶在以产生 悬垂值减少为60 %或至少60 %的条件下相接触。20. 如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶在以产生 悬垂值为0.2-0.4的条件下相接触。21. 如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中该悬垂性试验包括将一种具有已知圆 面积的组织基质放置在一个具有已知直径的圆形基座的顶部上，并且在它悬垂于该基座上 方之后，将该组织基质的投影面积除以该组织基质圆的原面积来确定悬垂值。22. -种无细胞组织基质，由权利要求1-21中任一项所述的方法制成。23. -种组织基质，包括： 一种具有小于〇. 4的悬垂值的猪无细胞组织基质。24. 如权利要求23所述的组织基质，其中该悬垂值小于0.35。25. 如权利要求23-24中任一项所述的组织基质，其中该悬垂性试验包括将一种具有已 知圆面积的组织基质放置在一个具有已知直径的圆形基座的顶部上，并且在它悬垂于该基 座上方之后，将该组织基质的投影面积除以该组织基质圆的原面积来确定悬垂值。26. -种用于处理组织基质的方法，包括： 选择一种真皮组织基质;并且 使该真皮组织基质与碱性蛋白酶相接触;并且 用辐射处理该组织基质，其中该碱性蛋白酶是在经选择以在用辐射处理后产生所希望 的组织基质柔软性的条件下提供的。27. 如权利要求26所述的方法，其中使该组织基质与该蛋白水解酶在不产生拉伸强度、 撕裂强度、缝合强度、抗蠕变性、爆裂强度、热转变温度、胶原酶易感性或其组合中至少一者 的不希望的变化的条件下相接触。28. 如权利要求26-27中任一项所述的方法，其中这些条件经选择以提供组织柔软性的 实质最大增加。29. 如权利要求26-28中任一项所述的方法，其中该组织基质是一种非灵长类基质。30. 如权利要求26-28中任一项所述的方法，其中该组织基质是一种猪组织基质。31. 如权利要求26-30中任一项所述的方法，进一步包括处理该组织基质以从该组织基 质中去除至少一些细胞和细胞组分。32. 如权利要求31所述的方法，包括从该组织基质中去除所有细胞和细胞组分。33. 如权利要求26-32中任一项所述的方法，其中该组织基质是一种无细胞组织基质。34. 如权利要求26-33中任一项所述的方法，其中使用一种悬垂性试验来测量该组织柔 软性，该悬垂性试验包括将一种具有已知圆面积的组织基质放置在一个具有已知直径的圆 形基座的顶部上，并且在它悬垂于该基座上方之后，将该组织基质的投影面积除以该组织 基质圆的原面积来确定悬垂值。35. 如权利要求34所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶在以产生悬垂值减少 为30 %或至少30 %的条件下相接触。36. 如权利要求34所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶在以产生悬垂值减少 为40 %或至少40 %的条件下相接触。37. 如权利要求34所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶在以产生悬垂值减少 为50 %或至少50 %的条件下相接触。38. 如权利要求34所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶在以产生悬垂值减少 为60 %或至少60 %的条件下相接触。39. 如权利要求34所述的方法，其中使该组织基质与碱性蛋白酶在以产生悬垂值为 0.2-0.4的条件下相接触。40. 如权利要求26-39中任一项所述的方法，其中该组织基质包括一种真皮组织基质。41. 如权利要求26-39中任一项所述的方法，其中该福射包括电子光束福射。42. 如权利要求26-39中任一项所述的方法，其中该辐射包括γ辐射。
【专利摘要】提供了用于处理组织基质的方法和根据这些方法所生产的组织基质。这些方法可以包括用一种蛋白水解酶处理一种组织基质以产生组织基质的所希望的柔软性和/或控制该组织基质的免疫原性。这些方法还可以包括进行一种测定来确定使至少一种含胶原的组织基质与一种蛋白水解酶相接触是否已经改变了该至少一种含胶原的组织基质，从而减少人对该组织基质的免疫应答。这些方法可以包括在经控制以产生所希望的柔软性而无胶原结构的不可接受的改变的条件下用碱性蛋白酶进行处理。
【IPC分类】A61L27/36
【公开号】CN105492034
【申请号】CN201480048332
【发明人】怡·陈, 尼美什·卡巴里亚, 凯-罗伊·王, 辉·许, 帕特里克·利米, 华·万, 黄励婷, 孙文全
【申请人】生命细胞公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年9月5日
【公告号】CA2919257A1, EP3030272A1, WO2015035115A1