一种枇杷叶总倍半萜苷提取物的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药领域，具体设及一种从中药批把叶中得到的总倍半祗巧提取物在 治疗高血脂及2型糖尿病性非酒精性脂肪肝的药物或保健品上的应用。
【背景技术】
[0002] 糖尿病（Diabetes mellitus，DM)属多病因代谢性疾病，其特点是持续慢性高血 糖，伴随膜岛素（Insulin)分泌及/或作用缺陷所引起的糖、脂肪和蛋白质代谢素乱。目前， 糖尿病已经成为世界各国的主要卫生保健问题，预计2025年全世界糖尿病人将突破3.33 亿。糖尿病主要分为1型糖尿病和2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus，T2DM)，其中 T2DM占90%左右。T2DM的主要特征是外周组织的膜岛素抵抗（Insulin Resis化nt, IR)和膜 岛e细胞分泌膜岛素相对不足。随着T2DM患病人数增多，病程延长，各种并发症随之而来，影 响肝脏、肾脏、血管、神经系统等的功能。其中非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是T2DM的一种重要的并发症，NAFLD是指由酒精和其它明确的肝损 伤因素之外的原因导致的，W肝细胞脂肪变性和脂肪沉积为特征的临床病理综合征，NAFLD 与T2DM、肥胖及血脂素乱同时存在，被视为代谢综合征的肝脏表现。约50%的T2DM患者同时 存在NA化D，并且NAFLD是T2DM的一个危险因素，糖尿病患者发展为非酒精性脂肪肝病的风 险系数是非糖尿病患者的3倍。
[0003] 研究表明，膜岛素抵抗（Insul in resistance ,IR)是2型糖尿病和脂肪肝形成的共 同作用机制。在2型糖尿病的发病机制中IR起到了重要作用，I則寸不能有效地抑制肝脏葡萄 糖的输出和有效地促进葡萄糖进入肌肉组织，从而引起血糖升高导致2型糖尿病。在脂肪肝 的发病机制中IR亦发挥着重要作用，一方面IR促进了脂肪分解为游离脂肪酸，游离脂肪酸 随血液进入肝脏，在肝细胞内合成脂肪；另一方面，IR可抑制肝细胞内脂肪的分解代谢，引 起肝细胞内脂肪积聚，从而导致脂肪肝的形成。因此改善IR对糖尿病合并非酒精性脂肪肝 病有一定的治疗作用。
[0004] 批把叶是菩薇科批把属植物批把(Eriobot;rya japonica (llumb.) Lindl.)的干 燥叶，作为一味常用中药，收载于历版中国药典供中医临床使用，具有清肺止咳、降逆止呕 等作用，用于治疗肺热咳嗽、气逆喘气、胃热呕逆、烦热口渴等症状，符合中医治疗糖尿病 "消渴"的范畴。国内已公开的发明专利（2008 1001 8820 . 8，200810024412.3， 200410015695.7,201410802741.1)分别指出了批把叶总S祗酸、总黄酬和总倍半祗巧具有 抗糖尿病作用。本课题组前期研究发现，总倍半祗巧作为批把叶的重要活性成分之一，具有 改善IR,治疗2型糖尿病的作用。本发明通过建立高糖高脂诱导的2型糖尿病小鼠模型，全面 模拟2型糖尿病病理条件下机体对脂质的代谢和消耗，考察批把叶总倍半祗巧干预下2型糖 尿病小鼠脂质的代谢和消耗，W及对非酒精性脂肪肝的影响，评价批把叶总倍半祗巧的降 脂活性及对非酒精性脂肪肝的治疗作用，对防治高血脂及糖尿病合并非酒精性脂肪肝病的 药物研发具有积极意义。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是一种批把叶总倍半祗巧提取物在制药领域中的应用， 提供了一种批把叶总倍半祗巧提取物在制备治疗高血脂及糖尿病合并非酒精性脂肪肝药 物或保健品方面的应用。
[0006] 为了达到上述目的，本发明根据专利201410802741.1所述的制备方法，获得了一 种批把叶总倍半祗巧提取物。W上述方法制备得到的批把叶总倍半祗巧提取物，包含W澄 花叔醇-3-0-a-k化喃鼠李糖基（1^4)-aA-化喃鼠李糖基（1^2)-[aA-化喃鼠李糖基（1 一6)]-e-D-化喃葡萄糖巧和澄花叔醇-3-0-a-k化喃鼠李糖基（1 一4)-aA-化喃鼠李糖基 (1^2)-0-0-化喃葡萄糖巧两种倍半祗巧为代表的化学成分，该提取物中总倍半祗巧的质 量百分含量巧0%。
[0007] 上述批把叶总倍半祗巧提取物在一定浓度下可W显著降低小鼠血浆中甘油=醋 (TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白（HDL)、低密度脂蛋白化化)含量，减少脂质在肝脏中的 累积，减轻糖尿病小鼠肝脏细胞的变性坏死，提示其具有降血脂功能，且具有治疗非酒精性 脂肪肝的作用，可W应用于制备治疗高血脂及糖尿病合并非酒精性脂肪肝病药物或保健 品。
[0008] 所述治疗高血脂及糖尿病合并非酒精性脂肪肝病药物或保健品分别为含有治疗 有效剂量或功效成分的批把叶总倍半祗巧提取物在药学上可接受的载体和保健食品。
【附图说明】
[0009] 图1批把叶总倍半祗巧提取物治疗非酒精性脂肪肝。（A)正常组；（B)2型糖尿病性 脂肪肝小鼠；（C)50 mg/kg批把叶总倍半祗巧提取物；（D)150 mg/kg批把叶总倍半祗巧提取 物。
【具体实施方式】
[0010] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。 [00川实施例1: 根据专利201410802741.1所述的制备方法，取干燥批把叶1 kg，粉碎，用质量百分比浓 度为80%的乙醇溶液10 L在70°C下回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至 有沉淀析出，3000转/分钟离屯、15分钟，取上清液备用。
[0012] 称取Amberlite? XAD16大孔吸附树脂SOOg，加入适量蒸馈水，在室溫下放置过夜， 使树脂充分溶胀，湿法装柱，用95%乙醇流动清洗柱子，最后用蒸馈水充分淋洗柱子至流出 液无乙醇味，放置过夜。
[0013] 将上述上清液缓缓流过上述处理和平衡过的大孔树脂柱，先用去离子水冲洗，再 用不同浓度的乙醇梯度洗脱，收集乙醇浓度为60-80%之间的洗脱液，流出液经化C展开，喷 洒香草醒-硫酸试剂显淡紫色;减压浓缩收集液，备用。
[0014] 上述浓缩液进一步流过经处理过的聚酷胺UOOmesh, 200g)柱，先用去离子水洗 脱，再用水-甲醇梯度洗脱，收集甲醇浓度为0-20%之间的洗脱液，回收溶剂，干燥，得到总倍 半祗巧提取物。
[00巧]实施例2:批把叶总倍半祗前是取物体内降脂活性研究 2型糖尿病肥胖小鼠模型的建立:普通级昆明种小鼠，雄性，体重(20±2)g，购自南京市 江宁区青龙山动物繁殖场，随机取5只作为空白组饲喂正常饲料，其余小鼠适应环境3日后 喂食高脂饲料（配方：颗粒标准饲料66.7%，薦糖15%，猪油12%，鸡蛋5%，胆固醇1%，猪胆盐 0.3%)，禁食12h(不禁水），腹腔注射70mg/kgSTZ(链脈佐菌素溶于PH4.2-4.5的巧樣酸/ 巧樣酸钢缓冲液中，现配现用，冰浴保存），连续注射两天。1周后小鼠眼内赃取血测定小鼠 空腹血糖值，小鼠空腹血糖高于7.SmmoVL并出现多饮多尿症状的小鼠被选为糖尿病模型 小鼠。
[0016] 实验方法：造模成功后将小鼠随机分为模型组(M)、阳性药化格列酬组lOmg/kg (PIO)及批把叶倍半祗巧组，其中批把叶倍半祗巧组给予按照实施例1制备获得的批把叶倍 半祗巧50mg/kg(低剂量组，BL)、150mg/kg(高剂量组，BH)，并灌胃给药，每日一次，连续4周， 模型组和空白组给予等体积的0.5% CMC-化，。4周后小鼠摘眼球取血，测定血清中甘油S 醋、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇。
[0017] 实验结果： 表1批把叶总倍半祗巧对小鼠 TG、TC、皿L、LDL的影响
如表1所示，与模型组相比，给予批把叶总倍半祗巧提取物后，一定浓度下（50 mg/kg， 150 mg/kg)可显著降低糖尿病肥胖小鼠血浆中16、1'(：、皿^1化的含量，并呈现剂量相关性 (P<0.05)。该结果提示批把叶总倍半祗巧提取物具有降低糖尿病小鼠血脂的作用。
[0018] 实施例3:批把叶总倍半祗巧提取物治疗非酒精性脂肪肝 按照实施例2中所述造模及实验方法，给药4周后摘取肝脏。福尔马林固定肝脏组织样 本7化后，按照常规脱水透明、浸蜡、包埋，制成扣m厚石蜡切片，苏木精-伊红化E)染色后光 镜下观察肝组织的病理变化情况。
[0019] 实验结果：正常肝组织未见发生明显病理改变，高糖高脂饲养的糖尿病模型小鼠 的肝脏切片中，肝细胞出现典型的胞浆疏松变性、气球样变性和脂肪沉积等。批把叶总倍半 祗巧提取物治疗组小鼠肝细胞变性、坏死表现普遍减轻，仅见到少数肝细胞出现混浊肿胀， 且多为散在分布（图1)。该结果提示批把叶总倍半祗巧提取物具有治疗糖尿病引起的非酒 精性脂肪肝的作用。
【主权项】
1. 一种枇杷叶总倍半萜苷提取物的应用，其特征在于:采用植物化学方法，从枇杷叶中 分离得到总倍半萜苷提取物，该提取物具有治疗高血脂及2型糖尿病性非酒精性脂肪肝功 能，可以应用于制备降血脂及治疗非酒精性脂肪肝药物或保健品。2. 根据权利要求1所述的枇杷叶总倍半萜苷提取物的功能和应用在于:该提取物在一 定浓度下具有显著降低2型糖尿病模型小鼠血浆中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂 蛋白（HDL)、低密度脂蛋白（LDL)含量，减少脂质在肝脏中的累积，减少糖尿病小鼠肝脏细胞 的变性坏死，提示其具有降血脂功能，具有治疗非酒精性脂肪肝的作用，可以应用于制备治 疗高血脂及糖尿病合并非酒精性脂肪肝病药物或保健品。3. -种用于治疗高血脂及糖尿病合并非酒精性脂肪肝病药物或保健品，其中含有治疗 有效量的枇杷叶总倍半萜苷提取物，所述的枇杷叶总倍半萜苷提取物为枇杷叶醇提取物。4. 根据权利要求3中所述的药物或保健品，其特征在于:所述药物、保健品的剂型为片 剂、颗粒剂、散剂或胶囊剂。
【专利摘要】本发明公开了一种枇杷叶总倍半萜苷提取物的应用。更具体地，公开了一种枇杷叶总倍半萜苷提取物在制备治疗高血脂及非酒精性脂肪肝药物中的应用，其中，所述的一种枇杷叶总倍半萜苷提取物按照201410802741.1专利制备获得。申请人在科学实验的基础上发现，所述的一种枇杷叶总倍半萜苷提取物可显著改善2型糖尿病小鼠脂质代谢，减轻2型糖尿病小鼠肝脏细胞变性坏死，减少脂质沉积，防止非酒精性脂肪肝的形成，可作为治疗高血脂及2型糖尿病性非酒精性脂肪肝的药物或保健品进一步研究开发。
【IPC分类】A61P3/06, A61K36/73, A61P1/16, A61K31/7028, A61P3/10
【公开号】CN105535152
【申请号】CN201510872015
【发明人】简暾昱, 陈剑, 马丽, 吕寒, 童贝, 李维林
【申请人】江苏省中国科学院植物研究所
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2015年12月3日