用于多发性硬化症的树突细胞asgpr靶向免疫治疗剂的制作方法
【专利说明】用于多发性硬化症的树突细胞ASGPR靶向免疫治疗剂
[0001] 鍾
[0002] 本申请要求于2013年6月28日提交的申请号为61/841,094的美国临时专利申请的 优先权权益，通过引用将其全部内容在此并入本文。
[0003] 发明背景 [0004] 1.发明领域
[0005] 总的来说，本发明涉及医药领域。更具体地，其涉及使用融合到髓鞘碱性蛋白或髓 鞘少突胶质细胞糖蛋白的树突细胞抗-ASGPR抗体治疗多发性硬化的方法和组合物。
[0006] 2.相关领域的描述
[0007] 认为身体针对通常存在于体内的物质和组织的不适当的免疫应答引起自身免疫 疾病（自身免疫性）。自身免疫可以限于某些器官或涉及不同位置的特定组织。虽然自身免 疫疾病的治疗通常使用免疫抑制剂_降低免疫应答的药物，但是所有这些药物可能是有限 的并且在一些情况下不足以治疗根本的病症。随着许多自身免疫疾病被确认，对这些疾病 的治疗体现出重大的人类健康问题。多发性硬化症(MS)，也被称为播散性硬化症或播散性 脑脊髓炎(encephalomyel it is disseminata)，是其中围绕脑和脊髓的轴突的髓鞘被损坏 的炎性疾病，导致髓鞘的损失和瘢痕。在一些情况下，根本机理被认为是免疫系统造成的破 坏。这些变化影响神经细胞通讯的能力，导致许多病征和症状。
[0008] 发明概述
[0009] 本发明提供了可以用于在自身免疫疾病或病症中诱导免疫耐受的方法和组合物。 具体考虑的是免疫治疗组合物和将这些组合物给予患者的方法。实施方案关注通过用特异 性抗体靶向特异性DC受体，经受体介导的胞吞将髓鞘蛋白或组分靶向至树突细胞(DC)的组 合物。
[0010] 在一些实施方案中，提供了在患者中诱导对至少一种髓鞘蛋白的免疫耐受的方 法。在某些实施方案中，所述方法包括给予患者有效量的包含树突细胞祀向复合物的组合 物，所述树突细胞靶向复合物包含连接到至少一种髓鞘蛋白或其抗原片段的树突细胞抗体 或其靶向片段。在其他实施方案中，所述髓鞘蛋白为髓鞘碱性蛋白（MBP)、髓鞘少突胶质细 胞糖蛋白（MOG)、蛋白脂质蛋白（PLP)或髓鞘相关糖蛋白（MAG)。在某些方面，认为所述包含 树突细胞革巴向复合物的组合物是免疫治疗剂，所述树突细胞革巴向复合物包含连接到至少一 种髓鞘蛋白或其抗原片段的树突细胞抗体或其靶向片段。
[0011] 在一些实施方案中，所述免疫治疗剂包括多种髓鞘蛋白或髓鞘组分。在某些实施 方案中，免疫治疗剂的至少一种髓鞘蛋白是MBP。在其他实施方案中，免疫治疗剂的至少一 种髓鞘蛋白为MOG。
[0012] 在某些实施方案中，树突细胞靶向复合物的树突细胞抗体或其片段特异性结合脱 唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)。在进一步的其他实施方案中，树突细胞靶向复合物组合物包含 多种树突细胞靶向复合物。在其他方面，所述多种树突细胞靶向复合物包含不同的髓鞘蛋 白或一种或多种髓鞘蛋白的不同的抗原片段。在进一步的其他方面，髓鞘蛋白或抗原片段 分别连接到树突细胞抗体或其靶向片段。在某些方面，树突细胞抗体使用连接肽连接到髓 鞘蛋白。存在将抗体或抗原片段连接到髓鞘蛋白的不同方式。在一些实施方案中，它们被直 接连接。在某些实施方案中，抗体或抗原片段通过一个或多个共价键连接到髓鞘蛋白。具体 考虑的是，可以存在包括抗体或抗原片段和一种或多种髓鞘蛋白（或其片段）的单条多肽。 如果两部分通过肽键共价连接(在具有或没有连接肽的情况下），则这样的多肽可以被描述 为融合蛋白。这样的具有ASGPR抗体(或抗体片段)和髓鞘蛋白（或其片段)的融合蛋白不是 天然存在的。
[0013] 某些实施方案包括免疫原性组合物，其包含分离的多肽，所述多肽包含SEQ ID N0:42-53的至少或至多3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、 24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、 49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、 74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、 118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、 137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150 个或更多个氨基酸，包括 其间的所有值和范围。在另一个方面，所述分离的多肽为融合蛋白。所述组合物可以包含佐 剂。在某些方面，所述分离的多肽为融合蛋白和/或脂肽。
[0014] 实施方案包括这样的组合物，其包括是SEQ ID N0:42-53中任一条的多肽、肽或蛋 白或与SEQ ID N0:42-53中任一条至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或99%相同或相似的多肽、肽或蛋白。在一些实施方案中，相似的多肽、肽和蛋白限于仅使 用保守氨基酸替换的那些蛋白质化合物。在其他实施方案中，仅考虑保守替换，而在其他实 施方案中，考虑在不涉及化合物的功能的区域中非必需氨基酸的缺失或其他氨基酸的添 加。在另外的实施方案中，组合物可以包括是ASGPR结合多肽的多肽、肽或蛋白或与ASGPR结 合多肽至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同或相似的多肽、 肽或蛋白，所述ASGPR结合多肽如m抗-ASGPR_49C11_7H(重链）SEQ ID N0:42、m抗-ASGPR_ 49C11_7K(轻链）SEQ ID N0:43、m抗-hASGPR_6.3H9.1DllH(重链）SEQ ID N0:44、m抗-hASGPR_6.3H9.1DllK(轻链）SEQ ID N0:45、m抗-hASGPR_5H8.1D4H(重链）SEQ ID N0:46、m 抗-hASGPR_5H8.1D4K(轻链）SEQ ID N0:47、m抗-ASGPR_4G2.2_(重链）SEQ ID N0:48、m抗-ASGPR_4G2.2_(轻链）SEQ ID N0:49、m抗-ASGPR-5F10H(重链）SEQ ID N0:50、m抗-ASGPR-5F10H(轻链）SEQ ID N0:51、m抗-ASGPR1H11(重链）SEQ ID N0:52或m抗-ASGPR1H11(轻链） SEQ ID NO:53〇
[0015] 本文描述的ASGPR结合多肽可以包括在SEQ ID NO:42-53中任一条的至少或至多 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、 56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、 81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、 105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、 124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、 143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、 162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、 181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、 200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、 219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、 238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、300、400、500、550、1000个或 更多个连续氨基酸或其中可推导出的任何范围内的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、 40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、 65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、 90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100个或更多个变体氨基酸。
[0016]在具体的实施方案中，免疫治疗剂、DC靶向复合物或ASGPR结合多肽是纯化的，这 可以在具有或没有最小变性的情况下实现。在一些方面，免疫治疗剂、DC靶向复合物或 ASGPR结合多肽是有活性的，意味着免疫治疗剂、DC靶向复合物或ASGPR结合多肽保留一些 可检测水平的功能或活性，如描述的那些，包括结合能力。考虑的是免疫治疗剂、DC靶向复 合物或ASGPR结合多肽可以纯化至约、至少约或至多约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、 96、97、98、99、100%的纯度或同质性(相对于其他蛋白质分子和/或细胞大分子)或其中可 推导的任意范围。在另外的实施方案中，重组的免疫治疗剂、DC靶向复合物或ASGPR结合多 肽可以是分离的。术语"分离的"可以指这样的核酸或多肽，其基本上不含其原始来源的细 胞物质、细菌物质、病毒物质或培养基（当通过重组DNA技术制备时），或化学前体或其他化 学品（当化学合成时）。此外，分离的化合物是指可以作为分离的化合物给予个体的化合物； 换言之，如果化合物附着在柱上或包埋在琼脂糖凝胶中时，化合物不能被简单地认为是"分 离的"。此外，"分离的核酸片段"或"分离的肽"是不作为片段天然存在的和/或通常不在功 能状态下的核酸或蛋白片段。
[0017]此外，在本方法的某些实施方案中，所述方法可以涉及这样的组合物，其含有约、 至少约或至多约0·1、0·2、0·3、0·4、0·5、1·0、1·5、2·0、2·5、3·0、3·5、4·0、4·5、5·0、5·5、 6·0、6·5、7·0、7·5、8·0、8·5、9·0、9·5、10·0、10·5、11·0、11·5、12·0、12·5、13·0、13·5、14·0、 14·5、15·0、15·5、16·0、16·5、17·0、17·5、18·0、18·5、19·0、19·5、20·0、21、21、22、23、24、 25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、 50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、 75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、 100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、 290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、441、450、460、 470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、 660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、 850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990或100(^8或11^的蛋白 (或可从其中推导的任意范围）。蛋白可以是约、至少约或至多约〇. 1、〇.2、0.3、0.4、0.5、 0·6、0·7、0·8、0·9、1·0、1·1、1·2、1·3、1·4、1·5、1·6、1·7、1·8、1·9、2·0、2·1、2·2、2·3、2·4、 2·5、2·6、2·7、2·8、2·9、3·0、3·1、3·2、3·3、3·4、3·5、3·6、3·7、3·8、3·9、4·0、4·1、4·2、4·3、 4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、 6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、 8·2、8·3、8·4、8·5、8·6、8·7、8·8、8·9、9·0、10、11、12、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、 47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、 72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、 97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、 270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、441、 450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、 640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、 830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990或100(^1或 ml(或可从其中推导的任意范围）。在某些方面，免疫治疗剂、DC靶向复合物或ASGPR结合多 肽中的一种或多种可以以以下剂量给予:0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、 3.5、 4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、 12.5、 13·0、13·5、14·0、14·5、15·0、15·5、16·0、16·5、17·0、17·5、18·0、18.5、19·0·19.5、 20.0、21、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、 44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、 69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、 94、95、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、 240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、 430、440、441、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、 610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、 800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、 990或1000 mg每千克体重。
[0018] 在具体的实施方案中，由免疫治疗剂或树突细胞靶向复合物引发的免疫耐受应答 可以被补充、增补、升高或增强。在某些方面，由免疫治疗剂或树突细胞靶向复合物引发的 免疫耐受应答可以通过佐剂补充、增补、升高或增强。在某些方面，所述佐剂为致耐受性佐 剂。在某些实施方案中，所述免疫治疗剂或树突细胞靶向复合物组合物还包括至少一种致 耐受性佐剂。在某些方面，所述致耐受性佐剂连接到树突细胞靶向复合物。在其他方面，所 述致耐受性佐剂缀合到树突细胞靶向复合物。在进一步的其他方面中，所述致耐受性佐剂 融合到树突细胞抗体或其靶向片段，和/或融合到至少一种髓鞘蛋白。在具体的实施方案 中，所述致耐受性佐剂选自IL-10、地塞米松、FK506(他克莫司）、霍乱毒素 B亚单位、大肠杆 菌不耐热肠毒素 B亚单位、IFN-β、糖皮质激素、维生素 D3和维生素 D3类似物。
[0019] 在具体的实施方案中，考虑使用结合多肽将免疫治疗剂或树突细胞靶向复合物的 分开的多肽、部分或模块融合、缀合或组合在一起。在某些方面，所述树突细胞抗体或其片 段通过结合多肽连接到至少一种髓鞘蛋白。在具体的实施方案中，所述结合多肽为锚定蛋 白（dockerin)和粘连蛋白（cohesin)。
[0020] 在某些方面，给予患者有效量的包含树突细胞靶向复合物的组合物包括多于一次 给予组合物。在某些方面，所述组合物经口、静脉内、皮下、皮内、肌内、经鼻、通过注射、通过 吸入和/或使用雾化器给予。
[0021] 在具体的方面，描述的方法和组合物的目的在于治疗、预防、减轻、抑制、消除、改 善或以另外的方式处理患有自身免疫紊乱、疾病或病症的受试者或患者的症状。在某些方 面，所述受试者显示脱髓鞘疾病的一种或多种症状。在其他实施方案中，受试者已被诊断患 有脱髓鞘疾病。在进一步的其他实施方案中，受试者具有患脱髓鞘疾病的风险。在具体的实 施方案中，脱髓鞘疾病影响中枢神经系统。在其他具体的实施方案中，脱髓鞘疾病为特发性 炎性脱髓鞘疾病。在某些方面，脱髓鞘疾病为多发性硬化症、神经病、脑桥中央髓鞘溶解、脊 髓痨、横贯性脊髓炎、德维克病、进行性多灶性白质脑病、视神经炎或脑白质营养不良。在一 些实施方案中，脱髓鞘疾病是多发性硬化症的边界形式之一。在一些方面，多发性硬化症的 边界形式是标准多发性硬化症、间歇性-复发性（Remitent-Recidivant)多发性硬化症 (RRMS )、继发进展型多发性硬化症(SPMS )、原发进展型多发性硬化症(PPMS )、KIR4.1多发性 硬化症、视神经脊髓型(Optic-spinal)多发性硬化症、视神经脊髓型（Opticospinal)多发 性硬化症、德维克病、急性播散性脑脊髓炎(ADEM