0r/min，粉碎时间为10-20min，粒径200-800 目。
[0039] 在本发明的一些具体实施例中，采用本发明上述组合物制备得到一种用于抑制黑 色素的面霜，如前所述，该组合物含有龙血竭提取物和竹叶黄酬提取物。本发明中对上述组 合物中各组成成分的加入方式没有特别的限制，各组成成分既可W预先配制成组合物用于 制备抑黑面霜，也可W W单剂的形式加入，而W单剂形式加入时，各组成成分的量应在各组 成成分所形成的组合物的量的范围内。
[0040] 例如，在本发明的一些实施例中，基于面霜总重量计，所述面霜中含有:0.25wt%-Iwt%，优选0.5wt%-lwt%，更为优选0.5wt%的龙血竭提取物、4wt%-6wt%，优选6wt%的 Ci2-Ci日的烧醇苯甲酸醋、4wt % -7wt %，优选4wt %的环戊硅氧烷、2.5wt % -4wt %，优选 2.5wt %的嫁蜡醇、%-3wt %，优选%的杏仁油、%-4wt %，优选%的硬脂酸醇 聚酸-2、%-4wt %，优选%的硬脂酸醇聚酸-21、2wt %-3wt %，优选%的下二醇、 0 . lwt%-〇 . 3wt%，优选0 . Iwt% 的抓TA-2化、2wt%-4wt%，优选3wt%-4wt%，更为优选 3wt % 的甘油、0.% -0 . Swt %，优选0.% 的黄原胶、0.35wt % -0.45wt %，优选 0.35wt%的卡波姆、lwt%-2wt%，优选lwt%的烟酷胺、lwt%-2wt%，优选lwt%的生育酪 栋桐醋、0.4wt % -0.8wt %，优选0.8wt %的防腐剂、水W及< Iwt %，优选0.01￥*%-0.1 Iwt%，进一步优选0.055wt%-0.1 Iwt%，更为优选0.055wt%的竹叶黄酬提取物。
[0041] 试验结果表明，上述用于抑制黑色素的面霜因具有龙血竭活性成分，可W抑制酪 氨酸活性，减少黑色素生成，有效预防面部皮肤黑色素沉积和色斑生成。竹叶黄酬提取物本 身对于酪氨酸酶不具有直接抑制作用，其在面霜中与龙血竭提取物复配通过对龙血竭的抗 氧化作用来减少黑色素生成并且有利于保持龙血竭提取物的稳定性，协同抑制黑色素的产 生。龙血竭提取物和竹叶黄酬提取物经过复配后，抑制黑色素产生的效果较单独使用更为 明显。
[0042] 在上述用于抑制黑色素的面霜中，还可W加入其它黑色素抑制成分，例如木瓜琉 基酶、越橘提取物和维生素 C憐酸醋钢中的一种或几种，并且基于面霜总重量计，木瓜琉基 酶的用量<1巧1%，优选为0.5?^%-1*1%，进一步优选为0.5?^%;越橘提取物的用量< Iwt%，优选为0.5wt%-lwt%，进一步优选为0.5wt% ;维生素 C憐酸醋钢的用量含4wt%，优 选为2wt%-4wt%，进一步优选为2wt%。
[0043] 本发明中，上述用于抑制黑色素的面霜中的水的含量余量，即基于面霜总重量计， 加入水的量至100 %。
[0044] 本发明中，或"< Iwt%"均可W理解为该成分为任选加入的成分。
[0045] 本发明中所述用语"任选"可W理解为某成分为可选择性加入成分，表明该成分可 加入，也可不加入。
[0046] 本发明中所述"水"一词，在没有特别限定或说明的情况下是指去离子水、蒸馈水 或超纯水。
[0047] 本发明对用于抑制黑色素的面霜的制备方法没有特别的限制，可W采用化妆品制 备领域的常规方法来制备，例如，在本发明的一些实施例中，用于抑制黑色素的面霜的制备 方法包括W下步骤：
[0048] (1)按照上述配方称量配料，将龙血竭和杏仁油充分混合均匀，再加入嫁蜡醇、环 氧戊硅烷、Cu-Cis烧醇苯甲酸醋、生育酪乙酸醋、硬脂酸醇聚酸-2、硬脂酸醇聚酸-21、防腐 剂加热至85°C充分溶解并混合均匀，制得混合物A。
[0049] (2)取下二醇、EDTA-2化、甘油、黄原胶、卡波姆加入去离子水混匀预热至85°C，与 混合物A合并充分均质乳化，制得混合物B。
[0050] (3)待混合物B冷却至50°C W下时，加入维生素 C憐酸醋钢、烟酷胺、任选的木瓜琉 基酶、任选的越橘提取物、去离子水和香精，均质混匀后，真空脱气然后罐装，即完成龙血竭 面霜的制备。
[0051] 本发明所提供的黑色素抑制剂一龙血竭提取物，其具有良好的酪氨酸酶作用和透 皮吸收性，能够作为酪氨酸酶抑制剂用于抑制黑色素生成;本发明所提供的用于抑制黑色 素的外用护肤组合物含有龙血竭提取物W及任选的竹叶黄酬提取物，竹叶黄酬提取物虽然 本身对于酪氨酸酶不具有直接抑制作用，但是竹叶黄酬提取物对龙血竭具有较好的抗氧化 作用，有利于龙血竭的稳定。将龙血竭提取物与竹叶黄酬提取物复配后可W产生较好的协 同作用，所制成的外用护肤组合物对黑色素生成的抑制效果明显大于龙血竭提取物单剂。 采用本发明的黑色素抑制剂或外用组合物制成的护肤制品，可W抑制酪氨酸活性，减少黑 色素生成，有效预防面部皮肤黑色素沉积和色斑生成。
[0052] 实施例
[0053] 实施例1:制备新鲜龙血竭提取物。
[0054] 取500g龙血竭原药材，粉碎后过80目筛，加8倍体积60 %的乙醇回流提取2次，每次 提取2小时，过滤合并滤液，于旋转蒸发仪上55°C回收乙醇，真空干燥箱中55°C的条件下干 燥，去除乙醇，得龙血竭提取物，收率为3.8%。使用低溫粉碎机，加液氮将龙血竭提取物粉 碎，粉碎机转数为180(K)r/min，粉碎时间为15min，粒径200-800目。
[0055] 实施例2:龙血竭提取物对于酪氨酸酶活性抑制率的测定
[0056] 实验原理：酪氨酸酶可W催化k多己，产物为多己色素，其在475nm波长处有最大 吸收，随着多己色素的生成吸光度逐渐增大，反应前后吸光度差值与时间的比即为酪氨酸 酶促反应的速率，可W体现出酪氨酸酶的活性强弱。
[0057] 实验方法:800iig/mL龙血竭提取物溶液ImL,使用抑6 .如溝酸盐缓冲溶液连续倍比 稀释，获得浓度为800、400、200、100、50、2扣g/mL提取物溶液各ImL，分别与0.2 % k多己溶 液1血混合均匀后，32°C解育5分钟;加入赖氨酸酶溶液ImL,继续解育IOmin后，于475nm波长 处测定吸光度值。空白对照W憐酸缓冲液代替龙血竭提取物。
[0058] 龙血竭提取物对于酪氨酸酶活力的抑制率见图1。
[0059] 从图1可W看出，浓度200yg/mL的龙血竭提取物对络氨酸酶的抑制率可W达到 80%，而浓度为80化g/mL的龙血竭提取物对络氨酸酶的抑制率可W达到95% W上。
[0060] 实施例3:龙血竭提取物与竹叶黄酬提取物抑制黑色素生成
[0061] 龙血竭提取物、竹叶黄酬提取物及两者组合物均加适量DMSO溶解，使用细胞培养 基稀释获得10化g/mL浓度的药液。在不同组合物中，龙血竭的含为90%、70%、50%、30%。
[0062] 细胞培养:细胞经复苏后，接种于含10%胎牛血清的1640培养基中，37°C，5 %C〇2 培养箱中培养，0.25膜酶消化传代。取对数生长期的B16细胞，经膜酶消化后成细胞悬液后， 加培养基稀释并接种于96孔板，每空1000个/IOOuL，培养24h。弃去细胞培养液，加入不同种 类的含药培养基，空白对照孔加入正常培养基，每种3个复孔。96孔板继续在培养箱中解育 72h，弃去上清液，使用PBS清洗细胞3次。在各个孔中加入Imol/L氨氧化钢溶液，80°C水浴 化，于MlOOO多功能连续波长酶标仪(瑞±Tecan公司）中490nm处测定各孔吸光度。相对黑色 素生成量=[(药物孔吸光度平均值-氨氧化钢溶液吸光度平均值)/(空白孔吸光度平均值-氨氧化钢溶液吸光度平均值)]。
[0063] 表1不同药物对黑色素生成的影响
[0065] 从表1可W看出，龙血竭提取物和竹叶黄酬提取物经过组合后，抑制黑色素产生的 效果较单独使用更为明显。竹叶黄酬提取物对于酪氨酸酶不具有直接抑制作用，在本发明 组合物中与竹叶黄酬提取物通过抗氧化作用减少黑色素生成并且有利于保持龙血竭提取 物的稳定性，协同抑制黑色素的产生。
[0066] 实施例4:龙血竭提取物透皮吸收
[0067] 龙血竭样品溶液的配制:龙血竭提取物0.1 g,溶于IOml 30%的乙醇溶液中，充分 溶解后备用。
[0068] 接收液的配制:吸取15ml无水乙醇置于50ml容量瓶中，加入0.9%的生理盐水进行 定容，配制含有30%乙醇的生理盐水溶液作为接收液备用。
[0069] 将小鼠脱颈处死，取少量脱毛膏涂于腹部进行脱毛处理，剪取脱毛后皮肤用生理 盐水洗净，去除筋膜，采用Franz装置(接受池5.Oml,接收池面积1.13cm 2)，固定装置，在接 受室中加入预溫的（32±0.5)°C的生理盐水，将洗净的小鼠皮肤用夹子固定于扩散池的两 个半池之间，角质层面向供给池，然后置于溫度（32±0.