透膜短肽-苦参碱及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种具有祀向作用（祀向作用于上皮来源恶性肿瘤）的抗肿瘤药 物一-透膜短肤-苦参碱，及其制备方法与应用，属于抗肿瘤药物技术领域。
【背景技术】
[0002] 苦参碱是一种从由豆科植物苦参提取的一种生物碱(Zhang,化eng et al.2014)， 分子式：Cl出24化0;分子量：248.3674;CAS号：519-02-8;其化学名为（41S，7aS，13bR)-10-氧 代十二氨-IH，甜，8H-二化晚并[2，1-f: 3 '，2 '，1'-i j] [ 1，6]糞晚;其结构如下：
[0004] 苦参碱注射液具有抑制乙型肝炎病毒复制，改善病理性肝炎症状与体征的作用， 毒副作用小，已经被应用于临床慢性肝炎、肝硬化的治疗(Zhang，Wang et al. 2011)。近几 年来，研究显示苦参碱具有抗癌效果，已经用于肝癌的治疗。苦参碱可W抑制多种癌症细胞 包括乳腺癌、结肠癌、肝癌、膜腺癌、前列腺癌、白血病等的增殖、诱导细胞调亡和抑制细胞 自隧，其分子作用机理为抑制MAPK和VEGF-AKT信号通路化1，化11 et al. 2010 ,Liu ,Xu et al.2014,Niu,Zhang et al.2014,Ren,Zhang et al.2014,Qian,Liu et al.2015,Wang, Jin et al. 2015)。更为重要的是对正常细胞没有毒性，而且可W降低癌症病人的恶病质， 改善病人的生活质量化iu，Xu et al.2014)。然而，苦参碱没有显著的细胞祀向性和特异 性，在给病人输注过程中，容易被血液细胞吞隧而失效，造成到达病灶的有效药物浓度大大 降低，制约了其抗癌药效的发挥。
[0005] 全球肝癌发病率近年呈逐年增长趋势，每年新发病例超过60万。我国肝癌新发病 例数占全球55%。肝癌患者预后差，缺乏有效药物(Torre, Bray et al. 2015)。研发有效的 药物祀向肝脏输送技术将会大大增强肝癌治疗中药的效果。
[0006] 祀向治疗药物的研究一直是新药研发的热点，除抗体药物和小分子激酶抑制剂等 的药物研究外，特异性药物祀向输送载体的研究是近年热点。目前国外研究较多的短肤药 物载体包括Tat肤(TATP)、Xentry、寡聚精氨酸、MPG肤、PEP和VP22,但只有Xent巧具有亲肝 特性。其结构如下：
[000引 Xentry是由乙肝病毒X蛋白氨基酸序列中提取出的7氨基酸短肤(Mon化ose，化ng et al. 2013)。由结构可知Xentry是由亮氨酸、半脫氨酸、亮氨酸、精氨酸、脯氨酸、鄉氨酸和 甘氨酸屯个氨基酸组成的屯肤，分子式:CssHsoNioOsS，分子量:757.0，化学名为：亮氨酷-半 脫氨酷-亮氨酷-精氨酷-脯氨酷-鄉氨酷-甘氨酸（即合成过程中用到的SM2)。其可携带多种 药物，包括天然化合物如中药单体;利用在上皮类细胞膜syndecan-4蛋白作为传输通道，避 免在药物输送过程中被非上皮类细胞如血液细胞摄取而丢失；具有快速穿透上皮类细胞 膜，进入细胞浆和细胞核的功能(Mon化ose,化ng et al. 2013) eXent巧已经由本发明的发 明人在2013年4月30日申报PCT国际专利（专利号W0/2013/165262)。作为源于乙肝病毒X蛋 白的短肤片段，Xen化y可携带多种药物包括中药单体进入肝癌细胞，达到药物祀向肝脏输 送的目的。除用于肝癌治疗外，可W携带抗病毒药物，祀向治疗肝炎、肝硬化。此外，还可W 携带其他抗肿瘤药物，用于其它源于上皮类细胞的恶性肿瘤包括我国最常见的肺癌、胃癌、 结直肠癌、膜腺癌、乳腺癌和前列腺癌等多种癌症的治疗。
【发明内容】
[0009] 针对上述现有技术，基于中药单体苦参碱和上皮依赖性透膜短肤，本发明合成了 一种新型祀向作用于上皮来源恶性肿瘤的透膜短肤-苦参碱抗肿瘤药物，运种药物可W特 异性祀向作用于上皮来源的恶性肿瘤，包括我国最常见恶性肿瘤(肺癌、肝癌、胃癌、结直肠 癌、膜腺癌、乳腺癌和结直肠癌等）。
[0010] 本发明是通过W下技术方案实现的：
[0011] 透膜短肤-苦参碱，其结构式如下：
[001引上述结构式中，L基团选卽基酷胺、R基醋、R基胺、R基酸或R基(优选R基醋）；R为Cl ~C9脂肪控基团或芳香基团；m为1~9中的正整数;n为1~6中的正整数(通过改变L基团的 结构，可改变化合物溶解性、稳定性和透膜短肤-苦参碱在进入细胞后放出苦参碱的难易， 从而达到最佳治疗效果;本发明具体实施例中制备的透膜短肤-苦参碱为治疗效果最佳的 化合物）。
[0016] 所述透膜短肤-苦参碱的制备方法，如下:将透膜屯氨基酸短肤（W下简称短肤)溶 于溶剂中，20°C下加入碱和苦参碱衍生物活性醋，加完后此溫度下揽拌反应90~150分钟； 减压浓缩除去溶剂，得到粗品，经液相分离纯化（W水/乙腊/=氣乙酸作为流动相，固定相 为Cl姉圭胶)得到白色固体，即为透膜短肤-苦参碱。
[0017] 所述溶剂选自N，N-二甲基甲酯胺、二甲基亚讽、乙腊中的任一种。
[0018] 所述碱选自碳酸钟、碳酸钢、N，N-二异丙基乙胺、S乙胺中的任一种。
[0019] 所述苦参碱衍生物活性醋与短肤的摩尔比为1.8~2.4:1。
[0020] 进一步地，所述透膜短肤-苦参碱的制备方法如下：
[0021] (1)与水加成：
[0022] (41S，7aS，13bR)-10-氧代十二氨細-二化晚并[2，l-f :3'，2'，r-ij][l, 6]糞晚-11-締(俗名：槐果碱，即SMl)在碱性条件下与水发生加成反应得到TMl，即：SMl在水 (溶剂原料比为25毫升/克）中加入过量的氨氧化钟10~15当量(优选12当量），反应溫度100 。(：，反应时间6~10小时（优选8小时），纯化得到（41S，7aS，13bR)-10-氧代十二氨 細-二化晚并[2，1寸：3'，2'，1'-。'][1，6]糞晚-12-醇巧11)。
[0023] 反应式如下：
[0025]本发明中所述"当量"数，是按照化学反应的当量关系，W每步中所用基本原料为 基准(1当量），所需要的其他原材料的当量用量(W下同）。
[00%] (2)接戊二酸：
[0027] TMl在碱性条件下与戊二酸酢发生醋化反应得到TM2,即：TMl在四氨巧喃（溶剂原 料比为10毫升/克）中加入戊二酸酢1~5当量(优选1.5当量)和过量的=乙胺1~5当量(优 选3当量），反应溫度20°C，反应时间20~28小时(优选24小时），纯化得到5-氧代-5-(((41S， 7曰5，1361〇-10-氧代十二氨-巧，甜，8护二化晚并[2，1寸：3'，2'，1'-。'][1，6]糞晚-12-基） 氧基)戊酸(TM2)。
[002引反应式如下：
[0030] (3)合成活性醋：
[0031] TM2在碱性条件下与下二酷亚胺碳酸醋醋化反应得到TM3,即：TM2在四氨巧喃（溶 剂原料比为10毫升/克）中加入下二酷亚胺碳酸醋1~5当量(优选2当量)和碳酸钟1~5当量 (优选3当量），反应溫度20°C，反应时间16~20小时（优选18小时），纯化得到5-氧代-5-(((41S，7aS，13bR)-10-氧代十二氨-1H，甜，8H-二化晚并[2，l-f:3'，2'，r-ij][l，6]糞晚-12-基)氧基)戊酸-N-径基下二酷亚胺醋(TM3)。
[0032] 反应式如下：
[0034] (4)接短肤：
[0035] 将TM3和短肤(SM2)溶解于溶剂中，加入碱后，在室溫下发生酷胺化反应得到S-巧-氧代-5-(((41S，7aS，13bR)-10