水合氯化锰与1mL聚乙二醇二羧酸在通氮条件下磁力搅拌加热至90-100°C溶解为均一溶液；
随后继续加热到140 °C反应I小时，然后再加热到180 °C反应4小时；
停止加热，冷却至室温后透析除去未反应的聚乙二醇分子和锰离子，得到水溶性的聚乙二醇修饰的氧化猛纳米对比剂；
将氧化锰纳米粒子保存在4°C条件中。
[0008]进一步的，所述的聚乙二醇二羧酸的分子量为600。
[0009]本发明的有益效果是:一步制备法制备氧化锰纳米对比剂步骤简单，对制备条件要求相对宽松，另外，采用聚乙二醇二羧酸作为反应溶剂和表面活性剂，一步法制备的氧化锰纳米对比剂粒径小，在1.78nm左右，大小均一、分散性好、稳定，而且表面修饰的聚乙二醇减少纳米粒子的非特异性吸附，所携带的羧基可用于靶向分子的连接，制备的氧化锰纳米对比剂具有良好的生物相容性，在磁共振成像时有助于增强Tl信号。
【附图说明】
[0010]图1A为本发明所制备氧化锰纳米对比剂的透射电镜；
图1B为本发明所制备氧化锰纳米对比剂的高分辨电镜图；
图1C为本发明所制备氧化锰纳米对比剂粒径大小分布图；
图2A为本发明所制备氧化锰纳米对比剂MRI弛豫率测定曲线图；
图2B为不同浓度水溶性氧化锰纳米对比剂的MRI图像和Tl map图；
图3为本发明所制备氧化锰纳米对比剂的傅立叶变换红外吸收光谱；
图4A为本发明所制备氧化锰纳米对比剂的X射线光电子能谱分析(XPS)图谱(Cls);
图4B为本发明所制备氧化锰纳米对比剂的X射线光电子能谱分析(XPS)图谱(Ols);
图4C为本发明所制备氧化锰纳米对比剂的X射线光电子能谱分析(XPS)图谱(Mn2p);
图5为本发明所制备氧化锰纳米对比剂的细胞生物相容性评估图；
图6为组织病理分析本发明所制备氧化锰纳米对比剂在体生物相容性评估图；
图7为肾癌移植瘤裸鼠模型在尾静脉注射本发明所制备氧化锰纳米对比剂后不同时间下的磁共振成像图像。
【具体实施方式】
[0011 ]下面结合附图对本发明作进一步说明。
[0012]聚乙二醇修饰的氧化锰磁共振纳米对比剂的一步制备法，包括以下步骤:
4mmol的四水合氯化锰与1mL聚乙二醇二羧酸在通氮条件下磁力搅拌加热至90-100°C溶解为均一溶液;随后继续加热到140°C反应I小时，然后再加热到180 °C反应4小时;停止加热，冷却至室温后透析除去未反应的聚乙二醇分子和锰离子，得到水溶性的聚乙二醇修饰氧化锰纳米对比剂；将氧化锰纳米对比剂保存在4°C条件中，聚乙二醇二羧酸的分子量为600。
[0013]如图1A、图1B、图1C、图2A、图2B所示，本发明制备的氧化锰纳米对比剂粒径小，在1.78 nm左右、大小均一、分散性好、稳定，弛豫率为12.942 mM's—1;
如图3所示，2916 cm—1处有C-H收缩峰;在1587 cm—1处有C=O振动峰;在1118 cm—1处有C-O-C振动峰，说明氧化锰纳米对比剂表面成功修饰上聚乙二醇二羧酸分子；
如图4A所示，对于Cls，284.8eV是-C-C-，286.3eV是-C-O-，289.2eV是羧基中的-COO，287.5eV是-C=O-；如图4B所示，对于01 s ,531.5eV对应金属-氧结合，532.2eV是-C-O-和羧基中的氧；如图4C所示，对于Mn2p，653.8eV是Mn2pl/2，641.8eV是Mr^pS/^JPS图谱结果说明氧化锰纳米对比剂的形成及其表面成功修饰上聚乙二醇二羧酸分子。采用聚乙二醇二羧酸作为反应溶剂和表面活性剂，一步法制备的氧化锰纳米对比剂表面修饰的聚乙二醇减少纳米粒子的非特异性吸附，所携带的羧基可用于靶向分子的连接。
[0014]如图5所示，将不同浓度的聚乙二醇修饰的氧化锰纳米对比剂溶液与肾癌786-0细胞株共培养24小时后，与未加入纳米对比剂的对照组细胞相比较，发现聚乙二醇修饰的氧化锰纳米对比剂具有良好的生物相容性。
[0015]如图6所示，将制备的聚乙二醇修饰的氧化锰纳米对比剂通过尾静脉注射到小鼠体内，饲养24小时和7天后解剖分离小鼠心脏、肺、肝、脾、肾5个器官，进行HE染色，与未注射聚乙二醇修饰的氧化锰纳米对比剂的小鼠作为对照组，病理结果显示聚乙二醇修饰的氧化锰纳米对比剂对小鼠的各个器官无明显毒性，生物相容性好。
[0016]如图7所示，将制备的聚乙二醇修饰的氧化锰纳米对比剂通过尾静脉注射到肾癌移植瘤裸鼠体内，在不同时间点进行磁共振成像扫描，观察裸鼠的肝脏、肾脏、肿瘤等器官的Tl变化，发现各器官在不同时间有不同的Tl信号增强。
【主权项】
1.一种聚乙二醇修饰的氧化猛磁共振纳米对比剂的一步制备法，其特征在于，包括以下步骤: 4mmol的四水合氯化锰与1mL聚乙二醇二羧酸在通氮条件下磁力搅拌加热至90-100 °C溶解为均一溶液； 随后继续加热到140 °C反应I小时，然后再加热到180 °C反应4小时； 停止加热，冷却至室温后透析除去未反应的聚乙二醇分子和锰离子，得到水溶性的聚乙二醇修饰的氧化猛纳米对比剂； 将氧化锰纳米对比剂保存在4 °C条件中。2.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的氧化锰磁共振纳米对比剂的一步制备法，其特征在于，所述的聚乙二醇二羧酸的分子量为600。
【专利摘要】本发明公开一种聚乙二醇修饰的氧化锰磁共振纳米对比剂的一步制备法，4mmol的四水合氯化锰与10mL聚乙二醇二羧酸在通氮条件下磁力搅拌加热至90-100℃溶解为均一溶液；继续加热到140℃反应1小时，再加热到180℃反应4小时；停止加热，冷却至室温后透析除去未反应的聚乙二醇分子和锰离子，得到水溶性的聚乙二醇修饰的氧化锰纳米对比剂；将氧化锰纳米对比剂保存在4℃条件中。一步制备法制备氧化锰磁共振纳米对比剂步骤简单，对制备条件要求宽松，采用聚乙二醇二羧酸作为反应溶剂和表面活性剂制备的氧化锰纳米对比剂粒径小、大小均一、分散性好、稳定，表面修饰的聚乙二醇减少纳米粒子的非特异性吸附，所携带的羧基可用于靶向分子的连接，具有良好的生物相容性。
【IPC分类】A61K49/18, A61K49/12
【公开号】CN105664187
【申请号】CN201610030321
【发明人】李菁菁, 徐凯, 代岳, 王姗, 徐敏
【申请人】徐州医学院
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年1月18日