一种代替抗生素的紫花苜蓿提取物及在生物饲料中的应用
【专利摘要】本发明公开了一种代替抗生素的紫花苜蓿提取物及在生物饲料中的应用，由如下方法制备：(a)将干燥的紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用85～95％乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)乙醇提取浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集，先用10～20％乙醇冲洗7～11个柱体积除去大极性成分，再用75～85％乙醇洗脱12～16个柱体积，收集75～85％乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得；其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为7～9:1。本发明提供的紫花苜蓿提取物添加到生物饲料中可明显提高畜禽免疫力。
【专利说明】
一种代替抗生素的紫花苜蓿提取物及在生物饲料中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及功能性植物提取物在生物饲料中的应用，具体涉及一种代替抗生素的 紫花苜蓿提取物及在生物饲料中的应用。
【背景技术】
[0002] 紫花苜蓿，原名：紫苜蓿，又名苜蓿，蔷薇目、豆科、苜蓿属多年生草本，根粗壮，深 入土层，根颈发达。茎直立、丛生以至平卧，四棱形，无毛或微被柔毛，枝叶茂盛。种子卵形， 长1-2.5毫米，平滑，黄色或棕色。花期5-7月，果期6-8月。原产于小亚细亚、伊朗、外高加索 一带。世界各地都有栽培或呈半野生状态。生于田边、路旁、旷野、草原、河岸及沟谷等地。欧 亚大陆和世界各国广泛种植为饲料与牧草。紫花苜蓿具有营养、保健和生理调节三大功能， 在增加畜禽体重、增强畜禽免疫力、降低疾病发病率方面有特殊的效果，相关的研究报道非 常多。
[0003] 研究表明，苜蓿多糖作为猪瘟兔化弱毒疫苗的强化剂对60日龄体重18~20kg的仔 猪进行免疫试验研究，结果表明，苜蓿多糖可使猪外周血液的B淋巴细胞增多，血清抗体水 平提高，并对猪瘟疫苗免疫效果具有明显的强化作用。还有研究表明，紫花苜蓿水提物喂 鼠，可明显增加幼龄鼠、成年鼠的脾脏重量及胸腺重量;增强鼠的抗疲劳、耐饥饿能力；以及 提高小鼠的应激能力和适应能力。紫花苜蓿对提高动物免疫力有明显的促进作用，主要通 过提高T淋巴细胞转化率、巨噬细胞的吞噬指数和血清抗体水平来提高动物免疫力，同时能 够促进抗体组织细胞增生，抑制金色葡萄球菌、大肠杆菌及链球菌生长来提高动物的免疫 力和预防肠道疾病的发生。两种植物对提高动物免疫力，降低发病率方面的功能具有互补 作用。在进一步的检索中，至今还未见有关把紫花苜蓿和苣菜水提物按比例混合配制成免 疫功能更强、作用范围更广的饲料添加剂的报道。
[0004] 为了进一步提高紫花苜蓿提取物提高畜禽免疫功能的能力，有必要进一步研究， 以开发出免疫功能更强、作用范围更广的紫花苜蓿提取物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种代替抗生素的紫花苜蓿提取物，该紫花苜蓿提取物添加 到生物饲料中后可明显提高畜禽的免疫力，提高其抵抗细菌感染等疾病的能力;本发明紫 花苜蓿提取物的免疫功能更强。
[0006] 上述目的是通过如下技术方案得以实现的：
[0007] -种代替抗生素的紫花苜蓿提取物，通过如下方法制备：（a)将干燥的紫花苜蓿全 草和穿山龙混合，粉碎，用85~95%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到 乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正 丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇 萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先用10~20%乙醇冲洗7~11个 柱体积除去大极性成分，再用75~85%乙醇洗脱12~16个柱体积，收集75~85%乙醇洗脱 液，减压浓缩，喷雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为7~9:1。
[0008] 进一步地，所述紫花苜蓿提取物通过如下方法制备：（a)将干燥的紫花苜蓿全草和 穿山龙混合，粉碎，用90%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取 浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取， 减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用 水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先用15%乙醇冲洗9个柱体积除去大极性 成分，再用80%乙醇洗脱14个柱体积，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得；其 中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为8:1。
[0009] 进一步地，所述紫花苜蓿提取物通过如下方法制备：（a)将干燥的紫花苜蓿全草和 穿山龙混合，粉碎，用85%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取 浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取， 减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用 水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗11个柱体积除去大极性 成分，再用75%乙醇洗脱16个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得；其 中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为7:1。
[0010]进一步地，所述紫花苜蓿提取物通过如下方法制备：（a)将干燥的紫花苜蓿全草和 穿山龙混合，粉碎，用95%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取 浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取， 减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用 水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先用20%乙醇冲洗7个柱体积除去大极性 成分，再用85%乙醇洗脱12个柱体积，收集85%乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得；其 中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为9:1。
[0011]上述紫花苜蓿提取物在提高畜禽免疫力方面的应用。
[0012]本发明的优点：
[0013] 本发明提供的紫花苜蓿提取物具有类似抗生素的功能，添加到生物饲料中后可明 显提高畜禽的免疫力，提高其抵抗细菌感染等疾病的能力，与现有技术相比具有突出的实 质性特点和显著的进步。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0015] 实施例中，穿山龙为薯截科植物穿龙薯蓣的根茎，秋季采挖，去细根，刮去栓皮，晒 干。
[0016] 实施例1:紫花苜蓿提取物的制备
[0017] (a)将干燥的紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用90 %乙醇溶液热回流提取，合 并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先 用15 %乙醇冲洗9个柱体积除去大极性成分，再用80 %乙醇洗脱14个柱体积，收集80 %乙醇 洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为8:1。
[0018]实施例2:紫花苜蓿提取物的制备
[0019] (a)将干燥的紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用85%乙醇溶液热回流提取，合 并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先 用10 %乙醇冲洗11个柱体积除去大极性成分，再用75 %乙醇洗脱16个柱体积，收集75 %乙 醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为7:1。
[0020]实施例3:紫花苜蓿提取物的制备
[0021 ] (a)将干燥的紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用95 %乙醇溶液热回流提取，合 并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先 用20 %乙醇冲洗7个柱体积除去大极性成分，再用85 %乙醇洗脱12个柱体积，收集85 %乙醇 洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为9:1。
[0022]实施例4:紫花苜蓿提取物的制备
[0023] (a)将干燥的紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用90 %乙醇溶液热回流提取，合 并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先 用15 %乙醇冲洗9个柱体积除去大极性成分，再用80 %乙醇洗脱14个柱体积，收集80 %乙醇 洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为7:1。
[0024]实施例5:紫花苜蓿提取物的制备
[0025] (a)将干燥的紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用90 %乙醇溶液热回流提取，合 并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先 用15 %乙醇冲洗9个柱体积除去大极性成分，再用80 %乙醇洗脱14个柱体积，收集80 %乙醇 洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为9:1。
[0026]实施例6:实施例1的对比，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为6:1 [0027] (a)将干燥的紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用90 %乙醇溶液热回流提取，合 并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先 用15 %乙醇冲洗9个柱体积除去大极性成分，再用80 %乙醇洗脱14个柱体积，收集80 %乙醇 洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为6:1。
[0028]实施例7:实施例1的对比，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为10:1
[0029] (a)将干燥的紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用90 %乙醇溶液热回流提取，合 并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（C)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先 用15 %乙醇冲洗9个柱体积除去大极性成分，再用80 %乙醇洗脱14个柱体积，收集80 %乙醇 洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为10:1。
[0030] 实施例8:效果实施例，对鸡免疫功能的影响
[0031] 分别在5日龄鸡饲料中加入实施例1~7制备的紫花苜蓿提取物，每吨饲料中添加 400g紫花苜蓿提取物。对照组不添加紫花苜蓿提取物。
[0032]分别测定35日龄时鸡的巨噬细胞吞噬指数、活性E-玫瑰花环率和ND抗体效价，并 计算比对照组的增加率（％)。
[0033] 结果见下表1。
[0034]表1对鸡免疫功能的影响
[0036]实施例2和实施例3的效果与实施例4和实施例5的效果相似，无显著差异。
[0037]上述结果表明，本发明提供的紫花苜蓿提取物可以更强的提高畜禽免疫功能，提 高生长性能，这与紫花苜蓿与穿山龙的重量份比例有关，二者重量份之比为7~9:1时效果 最好。
[0038]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种代替抗生素的紫花苜蓿提取物，其特征在于，通过如下方法制备：（a)将干燥的 紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用85~95%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至 无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先用10~20%乙醇 冲洗7~11个柱体积除去大极性成分，再用75~85%乙醇洗脱12~16个柱体积，收集75~ 85%乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为7 ~9:1 〇2. 根据权利要求1所述紫花苜蓿提取物，其特征在于，通过如下方法制备：（a)将干燥的 紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用90%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇 味得到乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱 和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c) 正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先用15%乙醇冲洗9个柱 体积除去大极性成分，再用80 %乙醇洗脱14个柱体积，收集80 %乙醇洗脱液，减压浓缩，喷 雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为8:1。3. 根据权利要求1所述的紫花苜蓿提取物，其特征在于，通过如下方法制备：（a)将干燥 的紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用85%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无 醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗11 个柱体积除去大极性成分，再用75%乙醇洗脱16个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓 缩，喷雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为7:1。4. 根据权利要求1所述的紫花苜蓿提取物，其特征在于，通过如下方法制备：（a)将干燥 的紫花苜蓿全草和穿山龙混合，粉碎，用95%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无 醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用D101型大孔树脂富集活性成分，先用20%乙醇冲洗7个 柱体积除去大极性成分，再用85%乙醇洗脱12个柱体积，收集85%乙醇洗脱液，减压浓缩， 喷雾干燥即得;其中，紫花苜蓿全草与穿山龙的重量份之比为9:1。5. 权利要求1~4任一所述的紫花苜蓿提取物在提高畜禽免疫力方面的应用。
【文档编号】A61P37/04GK105853494SQ201610299060
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年5月6日
【发明人】孙中超, 方华, 季春源, 郭蓓蓓, 肖方方, 夏佳吉
【申请人】江苏盐城源耀生物科技有限公司