促进胰高血糖素样肽?1分泌的中药复合物及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及医药技术领域，公开了一种促进胰高血糖素样肽?1分泌的中药复合物及其制备方法。该中药复合物包括主药和辅料，主药包含按重量份计的以下组分：黄芩1～3份；葛根2～5份；黄连2～5份，本发明中的中药复合物通过激活肠道L细胞的苦味受体及其下游通路，促进肠道L细胞的合成、进而促进GLP?1的分泌，且该中药复合物由纯中药制成，各组分符合药典法相关规定，利用各味中药的配伍作用，不含化工成分、不含激素，且无毒副作用，对糖尿病有较佳的治疗效果。
【专利说明】
促进胰高血糖素样肽-1分泌的中药复合物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种促进胰高血糖素样肽-1分泌的中药复合 物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 糖尿病(diabetes)是一种常见的内分泌代谢性疾病。糖尿病患者的症状如:多饮、 多尿、多食、消瘦等症状，严重者发生酮症酸中毒及昏迷，且糖尿病因长期高血糖等而导致 动脉硬化和微血管病变，发生早而严重的心、脑、肾、眼、神经、皮肤等器官受损，出现相应脏 器的症状及体征。糖尿病常因机体免疫力和防御机能下降，易合并皮肤粘膜及软组织感染 性疾病(疖、痈、蜂窝组织炎、坏疽）、呼吸道感染(肺炎、肺结核），真菌等感染而出现相应的 症状及体征。临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现， 即"三多一少"症状，临床观察胰岛素抵抗普遍存在于II型糖尿病中，高达90%左右。II型糖 尿病的早期，通常可以通过单纯饮食控制、增加体育锻炼或应用磺脲类药物使血糖得到控 制。但不幸的是，辟田胞功能紊乱导致胰岛素分泌受损呈进行性恶化。
[0003] 经研究发现，胰高血糖素样肽-I(Glucagon-like peptide-1 ,GLP-I)可通过促进β 细胞增殖与分化、抑制细胞凋亡、抑制胰高血糖素分泌等方式实现其改善胰岛功能的效 应，同时也可以通过影响大脑摄食摄食中枢、抑制胃肠蠕动，从而发挥减少进食量的作用。 GLP-I是肠道L细胞以营养依赖性方式分泌的一种具有葡萄糖依赖性促胰岛素分泌功能的 肠促胰岛素。肠 L细胞在大鼠及人类的全段肠黏膜上皮、远端回肠和结肠中分布密度相对较 高。肠 L细胞是一类开放型上皮内分泌细胞，其顶端暴露于肠腔，底端与肠壁内神经丛及微 循环系统相临近。GLP-I的分泌可受到食物营养成分、肠壁内神经信号和激素信号的共同调 控。市场上以GLP-I为基础的西药比如:GLP-I受体激动剂、GLP-I灭活物抑制剂、GLP-I类似 物已在糖尿病、肥胖患者的临床治疗中取得一定疗效。但是，这类药物会引起胰腺病变、关 节痛等毒副作用，这始终是临床医师和病人的主要顾虑。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种促进胰高血糖素样肽-1分泌的中药复合物及其制备 方法，使得胰岛功能得以改善，毒副作用低且制备方法简单、成本低廉。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明的实施方式提供了一种促进胰高血糖素样肽-1分泌 的中药复合物，包括主药和辅料，主药包含按重量份计的以下组分:黄芩1~3份;葛根2~5 份;黄连2~5份。
[0006] 本发明的实施方式还提供了一种制备促进GLP-I分泌的中药复合物的方法，包括： (1)按以下比例取黄芩、葛根、黄连混合均匀，黄芩1~3份;葛根2~5份;黄连2~5份;将混合 后的黄芩、葛根、黄连平均分成两份，备用；（2)取其中一份混合物放置于容器内，加2~9倍 量的水至容器内，浸泡0.5~Ih后，煎煮30~45min，再加3~8倍量的水，煎煮10~30min，过 滤、合并煎煮液，并减压浓缩，减压干燥后粉碎；（3)另一份经粉碎、辐射灭菌后，与步骤(2) 中粉碎后的药物混和，再加入颗粒剂药物辅料，混合加入粘合剂即得颗粒。
[0007] 本发明实施方式相对于现有技术而言，该中药复合物通过激活肠道L细胞的苦味 受体及其下游通路，促进肠道L细胞的合成、进而促进GLP-I的分泌，且该中药复合物由纯中 药制成，各组分符合药典法相关规定，利用各味中药的配伍作用，不含化工成分，不含激素， 无毒副作用，标本兼治，对糖尿病有较佳的治疗效果。
[0008] 进一步地，主药包含按重量份计的以下组分:黄芩1份;葛根2份;黄连2份。
[0009] 进一步地，辅料为颗粒剂药物添加剂或片剂药物添加剂。
[0010] 更进一步地，颗粒剂药物添加剂为甘露醇、乳糖、蔗糖粉、硬脂酸镁、阿斯巴甜、薄 荷脑和甜橙油香精中的一种或几种。
[0011] 进一步地，中药复合物包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸口服剂型。
[0012] 进一步地，步骤(2)和步骤(3)中的中药混合物粉碎成细粉后过60~100目筛备用。
[0013] 进一步地，步骤(3)中使用钴-60或铯-137进行辐射灭菌。
[0014] 进一步地，步骤(3)中的辐射灭菌的辐照剂量为6000~10000千拉德。
[0015] 进一步地，步骤⑶中的粘合剂为40~90 %乙醇。
【附图说明】
[0016] 图1是根据本发明的第三实施方式中的中药复合物对糖尿病小鼠血清和回肠组织 GLP-I浓度的调节作用示意图；
[0017] 图2是根据本发明的第四实施方式中的中药复合物对糖尿病小鼠肠道苦味受体的 影响示意图；
[0018] 图3是根据本发明的第四实施方式中的中药复合物对糖尿病小鼠肠道苦味受体中 的信号通路关键因子蛋白的变化示意图；
[0019] 图4是根据本发明的第四实施方式中的中药复合物对小鼠肠道苦味受体的变化示 意图；
[0020] 图5是根据本发明的第四实施方式中小鼠食用不同剂量的中药复合物后体内各组 苦味信号通路关键因子免疫组化变化示意图；
[0021] 图6是根据本发明的第五实施方式中小鼠食用不同剂量的中药复合物后体内胰岛 细胞形态的变化示意图。
【具体实施方式】
[0022]为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的各实 施方式进行详细的阐述。然而，本领域的普通技术人员可以理解，在本发明各实施方式中， 为了使读者更好地理解本申请而提出了许多技术细节。但是，即使没有这些技术细节和基 于以下各实施方式的种种变化和修改，也可以实现本申请各权利要求所要求保护的技术方 案。
[0023]本发明的第一实施方式涉及一种促进胰高血糖素样肽-1分泌的中药复合物，包括 主药和辅料，主药包含按重量份计的以下组分:主药包含按重量份计的以下组分:黄芩1~3 份;葛根2~5份;黄连2~5份。
[0024]其中，在本实施方式中，取下述重量份数(配比单位：克）的主药制备颗粒，黄芩1 份;葛根2份;黄连2份。
[0025] 另外，本实施方式中的促进胰高血糖素样肽-1分泌的中药复合物的制备方法如 下：
[0026] (1)取下述重量份数(配比单位:克）的黄芩、葛根、黄连制备颗粒，黄芩1份;葛根2 份;黄连2份并混合均匀，将混合后的黄芩、葛根、黄连平均分成两份，备用；
[0027] (2)取其中一份混合物放置于容器内，加3~8倍量的水至容器内，浸泡0.5h后，煎 煮45min后，再加3~8倍量的水，煎煮30min，过滤、合并煎煮液，并将合并后的煎煮液减压浓 缩、干燥后得干浸膏，将干浸膏用粉碎机粉碎后过80目的筛备用；
[0028] (3)另一份经粉碎机粉碎后，将细粉过80目的筛，并将通过80目筛的细粉用辐照剂 量为8000千拉德的钴-60进行辐射灭菌，将上述经过辐射灭菌的细粉与步骤(2)中备用的药 物混合，混合的过程中加入甘露醇，乳糖，蔗糖粉，阿斯巴甜，薄荷脑等颗粒剂药物添加剂， 待混合均匀后用60~70%乙醇作为粘合剂制成颗粒，低温保存即可。
[0029]值得注意的是，本实施方式通过对传统中药的研究，并结合辩证论证，多方收集众 家之长，寻求最佳治疗方案，按中医理论组方，采用纯天然中药原料，经系统研究、科学配 伍，结合传统中医技术精心配制成本发明的降血糖的中药复合物。
[0030] 另外，值得一提的是，本实施方式中的中药复合物由8种主要中药成分组成:大豆 苷，黄芩苷，盐酸小檗碱，葛根素，尿囊素，黄连素，黄芩素，表小檗碱，具体含量见表1。
[0031] 表1:
LTO33」与现W扠木相比，本买施万式中，该中约复合物通迓微沽肠道L细胞的舌味受体及 其下游通路，促进肠道L细胞的合成、进而促进GLP-I的分泌，且该中药复合物由纯中药制 成，各组分符合药典法相关规定，利用各味中药的配伍作用，不含化工成分，不含激素，无毒 副作用，标本兼治，对糖尿病有较佳的治疗效果。
[0034]本发明的第二实施方式通过实验来研究上述中药复合物对糖尿病人胰岛功能的 作用，具体实验步骤如下：
[0035] 1.研究方法：
[0036]采用随机、双盲、安慰剂对照的方法进行研究。
[0037] 1.1随机方法：
[0038]对符合纳入标准的研究对象采用随机数字表法，按1:1比例随机分组。首先编制病 例随机分配表，根据病例随机分配表，取得临床研究随机号，分别纳入A、B组。
[0039] 1.2样本含量：
[0040] 本研究拟进行小样本临床研究，治疗组和对照组各30例患者。考虑可脱落因素，再 增加20 %样本量。最终设计入选36对，共72例临床病例。
[0041] 1.3盲法设计：
[0042] 本研究采用双盲对照方法，中药复合物及其对照药物由曙光医院制剂科负责制作 及包装。按照双盲临床试验规范化操作步骤，对试验药和对照药进行重新包装和分配，包括 应急信件等。
[0043] 2.病例选择方法
[0044] 2.1纳入标准：
[0045] 1)2型糖尿病的患者；
[0046] 2)糖化血红蛋白〈10%;
[0047] 3)签署知情同意书者即可纳入实验病例。
[0048] 2.2排除标准：
[0049] 1)年龄在18岁以下或70岁以上；
[0050] 2)妊娠或哺乳期妇女；
[0051] 3)有严重心、肝、肾等并发症，或合并有其他严重原发性疾病，精神病患者；
[0052] 4)已有大血管并发症，如发生过心肌梗死、脑血管意外、下肢血管病变；
[0053] 5)近一月内出现糖尿病重危急症，如酮症酸中毒、糖尿病高渗状态；
[0054] 6)对治疗方案中相关药物过敏，不适合接受本治疗方案者。
[0055] 2.3病例的剔除和脱落：
[0056] 凡不符合纳入标准而被误纳入的病例；虽符合纳入标准但纳入后未曾用药的病 例;实验期间对本观察相关药物过敏者。受试者依从性差、发生严重不良事件、发生严重并 发症或特殊生理变化不宜继续接受试验，未按规定用药的病例等，均为脱落病例。统计分析 时应结合实际情况处理，如发生不良反应者，应按不良反应统计。疗程已完成1/2者，应统计 疗效。
[0057] 3.治疗方案
[0058] 3.1基础治疗：
[0059]①维持原有的降糖方案；
[0060] ②降压和降脂方案根据患者病情，参照《中国糖尿病防治指南》制定；
[0061] ③生活方式干预。
[0062] 3.2合并用药：
[0063] 除上述基础治疗用药外，观察期间禁止使用与治疗糖尿病相关的其它中药或者 GLP-I受体激动剂、DPP-IV抑制剂。
[0064] 3.3分组治疗：
[0065]治疗组给予中药复合物颗粒，每日两次，每日一袋，每袋大约6g左右。对照组给予 外观包装均一致的安慰剂，每日两次，每日一袋。
[0066] 3 · 4疗程和随访：
[0067] 疗程定为12周。每一个月随访一次，每次测定空腹血糖、餐后2小时血糖、血压、体 重指数、腰臀比。
[0068] 4.伦理学要求和受试者知情同意：
[0069] 5.本临床试验必须遵循赫尔辛基宣言(2000年版)和中国有关临床试验研究规范、 法规进行。
[0070] 在试验开始之前，由本单位伦理委员会同意该试验方案后方可实施本试验方案。 每一位受试者入选本研究前，研究医师有责任以书面文字形式，向其或其指定代表完整、全 面地介绍本研究的目的、程序和可能的风险。应让患者知道他们有权随时退出本研究。入选 前必须给每位受试者一份书面患者知情同意书。
[0071] 6.观察结果：
[0072] 6.1胰岛功能(H0MA2指数)变化
[0073] 表2 ·两组 H0MA2指数变化（I ± s，11=30 )
[0075]采用方差分析进行组间比较，Λ代表与对照组相比，P〈0.05
[0076] 实验表明：治疗组H0MA2%B指数上升，对照组H0MA2%B变化不明显，由此我们得出 该中药复合物具有改善胰岛辟田胞功能的作用。
[0077] 6.2血糖(HbAlc)变化
[0078] 表3.糖代谢变化（F±S，n=30)
[0080] * 方差分析，Ρ〈0·05
[0081] 实验表明：治疗组HbAlc下降，安慰剂组HbAlc变化不明显，说明中药复合物具有降 低血糖的作用。
[0082]本发明的第三实施方式通过实验来研究上述中药复合物对糖尿病小鼠胰岛细胞 的调节作用，具体实验步骤如下：
[0083] 1.材料与方法：
[0084] 1.1实验药物：
[0085] 本发明第一实施方式中的中药复合物。
[0086] 1.2实验动物：
[0087] db/db小鼠 （diabetes mouse)由C57BL/KsJ近亲交配株常染色体隐性遗传衍化而 来，属2型糖尿病模型。动物在一个月时开始贪食及发胖，继而产生高血糖、高血胰岛素，胰 高血糖素也升高。本课题采用db/db型小鼠（7周龄，清洁级）作为实验动物模型和db/m型小 鼠作为空白对照动物模型，均购自南京模式动物研究所。
[0088] 1.3实验步骤：
[0089] ① db/db型小鼠（7周龄，清洁级)作为实验动物模型，喂养标准小鼠颗粒饲料(上海 实验动物中心提供），自由饮水，不限制活动，光照时间12h，环境温度控制在18°C~28°C之 间。
[0090] ②采用随机数字表法，将36只小鼠分为6组，（模型对照组（即:Model)/中药低剂量 组（即：QHG-L)/中药中剂量组（即：QHG-M)/中药高剂量组（即：QHG-H)/空白对照组（即： Normal)/模型对照组（即：Mode 1)/阳性对照组（即：Agonist )，每组6只，灌胃，每日一次，每 次的剂量分别为:低剂量组(3.77g/kg)，中剂量组(7.54g/kg)，高剂量组（15.08g/kg)(生药 量/体重）。模型对照组（即:Model)给予0.9%生理盐水，阳性对照组（即:Agonist)给予苦味 受体的激动剂，空白对照组（即：Normal)不做其他处理。
[0091 ]③每周记录小鼠生长情况一次。
[0092]④干预时间为4周。
[0093] ⑤用3%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉采血后，采血样本离心分 离血清;于小鼠腹腔回盲部上端分离回肠，取Icm组织2-3块，-80°C分别冷冻保存。
[0094] 1.4观察指标：
[0095] db/db型小鼠血清和回肠组织中GLP-I浓度(Elisa法）。
[0096] 2.实验结果：
[0097]与模型对照组相比，低剂量组db/db小鼠血清和组织中GLP-I的浓度明显升高至少 41.3 % (P〈0.01)。干预后明显上调db/db小鼠血清和回肠组织中GLP-1的浓度，并明显具有 剂量依赖效应。再次肯定了本发明对GLP-I分泌的促进作用，具体见附图1:
[0098] 其中，值得注意的是:在附图1中，X代表与模型对照组相比，p〈0.01 ;#代表与空白 对照组相比，P〈〇.〇l。
[0099] 本发明的第四实施方式通过实验来研究上述中药复合物对糖尿病小鼠 GLP-I的调 控作用，具体实验的方法和干预措施等内容同第三实施方式：
[0100]观察结果如下：与模型对照组相比，高剂量组上调db/db糖尿病小鼠肠道苦味受体 (TAS2R5)基因和蛋白水平，具体上调了 51.5%，增加苦味信号通路关键因子(6<^1^、？1^邙2、 TRPM5)的基因和蛋白水平，具体上调了 71.8%。中药复合物干预后明显上调肠道苦味信号 通路关键因子，并具有剂量依赖效应。具体如图2~5所示：
[0101]值得注意的是:在附图2中，X代表与模型对照组相比，p〈0.01;#代表与空白对照 组相比，p〈〇. Ol。在附图3中，X代表与模型对照组相比，p〈0.0 l ;#代表与空白对照组相比，p 〈0.01。
[0102] 其中，图4是以上六组小鼠食用中药复合物后，肠道苦味受体的蛋白的变化。该图 是通过免疫印迹试验得到的附图，主要是用来观察蛋白表达量的变化，其基本原理是通过 特异性抗体对凝胶电泳处理过的生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度 获得特定蛋白质在所分析的组织中表达情况的信息。附图4就是分析的各组中苦味受体信 号通路中三个重要因子（即：Gagust、PLCi32、TRPM5)的蛋白变化，条带越深越粗的，蛋白的表 达量就越高。另外，GAPDH是内参蛋白，用作免疫印迹试验中蛋白质标准化的内部参考，具体 地，将每组样品测得的目的蛋白含量与本样品的GATOH含量相除，即得到每个样品目的蛋白 的相对含量，进而进行样品与样品之间的蛋白含量的比较。
[0103] 值得一提的是，图5是小鼠食用中药复合物后体内苦味信号通路关键因子免疫组 化变化示意图，其基本原理是抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的 显色剂显色来确定组织细胞内蛋白质，进而对组织细胞内蛋白质进行定位、定性及相对定 量。由于上述六组小鼠食用中药复合物的剂量不同，蛋白的表达也是不同的，具体地，随着 剂量的升高，蛋白表达量越来越多，蛋白的颜色越多。
[0104] 本发明的第五实施方式是通过实验来研究上述中药复合物对糖尿病小鼠苦味受 体的调控作用，具体实验的方法和干预措施等内容同本发明的第三实施方式：
[0105] 在本实施方式中，在电镜下观察小鼠的胰岛细胞，如图6所示，对照组(正常小鼠） 胰岛细胞及其结构形态完好。与对照组相比，模型对照组胰岛变小，结构明显不规则。与模 型对照组相比，中药复合物低剂量组胰岛明显变大，中药复合物中、高剂量组胰岛结构形态 明显完好。中药复合物干预后明显改善db/db小鼠胰腺组织形态结构。
[0106] 本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本发明的具体实施例， 而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。
【主权项】
1. 一种促进胰高血糖素样肽-1分泌的中药复合物，包括主药和辅料，其特征在于，所述 主药包含按重量份计的以下组分： 黄芩1~3份;葛根2~5份;黄连2~5份。2. 根据权利要求1所述的促进胰高血糖素样肽-1分泌的中药复合物，其特征在于，所述 主药包含按重量份计的以下组分： 黄芩1份;葛根2份;黄连2份。3. 根据权利要求1所述的促进胰高血糖素样肽-1分泌的中药复合物，其特征在于，所述 辅料为颗粒剂药物添加剂或片剂药物添加剂。4. 根据权利要求3所述的促进胰高血糖素样肽-1分泌的中药复合物，其特征在于，所述 颗粒剂药物添加剂为以下之一或其任意组合:甘露醇、乳糖、蔗糖粉、硬脂酸镁、阿斯巴甜、 薄荷脑、甜橙油香精。5. 根据权利要求1所述的促进胰高血糖素样肽-1分泌的中药复合物，其特征在于，所述 中药复合物包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸口服剂型。6. 根据权利要求1至5任一项所述的促进GLP-1分泌的中药复合物的制备方法，其特征 在于，包括： (1) 按以下比例取黄芩、葛根、黄连混合均匀，黄芩1~3份;葛根2~5份;黄连2~5份;将 混合后的黄芩、葛根、黄连平均分成两份，备用； (2) 取其中一份混合物放置于容器内，加2~9倍量的水至容器内，浸泡0.5~lh后，煎煮 30~45min，再加3~8倍量的水，煎煮10~30min，过滤、合并煎煮液，并减压浓缩，减压干燥 后粉碎； (3) 另一份经粉碎、辐射灭菌后，与所述步骤(2)中粉碎后的药物混和，再加入颗粒剂药 物辅料，混合加入粘合剂即得颗粒。7. 根据权利要求6所述的促进GLP-1分泌的中药复合物的制备方法，其特征在于，所述 步骤(2)和步骤(3)中的中药混合物粉碎成细粉后过60~100目筛备用。8. 根据权利要求6所述的促进GLP-1分泌的中药复合物的制备方法，其特征在于，所述 步骤(3)中使用钴-60进行辐射灭菌。9. 根据权利要求6所述的促进GLP-1分泌的中药复合物的制备方法，其特征在于，所述 步骤(3)中的辐射灭菌的辐照剂量为6000~10000千拉德。10. 根据权利要求6所述的促进GLP-1分泌的中药复合物的制备方法，其特征在于，所述 步骤(3)中的粘合剂为40~90 %乙醇。
【文档编号】A61P3/10GK106074753SQ201610430442
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月16日
【发明人】陶枫, 李俊燕, 陆灏, 徐杰, 金昕, 侯瑞芳, 陈清光, 王静懿
【申请人】上海中医药大学附属曙光医院