专利名称：用作tpo模拟物的化合物和组合物的制作方法
用作TPO模拟物的化合物和组合物
相关申请的交叉参考
本申请请求2005年8月15日提交的在35U.S.CSll9(e)下的美国临 时申请号US60/708，438的优先权权益。本文引用该申请所有公开内容作为 参考并用于所有目的。
背景技术：
发明领域
本发明提供了一类新的化合物，包含这类化合物的药物组合物和使用 这类化合物治疗或预防与异常或失调的TPO活性相关的疾病或障碍，特别 是涉及血小板减少的疾病或障碍的方法。
背景技术：
巨核细胞为骨髓衍生的细胞，它们产生循环的血小板。造血细胞因子 血小板生成素(TPO)支持造血干细胞增殖和分化过程并且对巨核细胞调节 而言是必需的。
本发明的新化合物作为TPO模拟物用于治疗参与或导致血液或血小板 减少的疾病或病症，包括，但不限于放疗、化疗、免疫疗法、癌症、病毒 感染和移植，诸如骨髓和干细胞移植。
发明概述
本发明在一个方面中提供了式I的化合物及其N-氧化物衍生物，前体 药物衍生物，被保护的衍生物，各异构体及其异构体混合物和这类化合物的可药用盐和溶剂合物(例如7JC合物):I其中n选自0、 1、 2和3;Z选自N和CRs;其中Rs选自氢、卤素、C^烷基、卤素-取代的-d.6 烷基；其中Rs的任意烷基可任选地有被选自-S(0)o-2-、 -C(O)-、 ^119-和-0-的原子或基团替换的亚甲基；其中R9选自氢和C^烷基；R!、 R2、 R4和Rs独立地选自氢、卣素、羟基、^&、硝基、-XNR9R10-、 C"烷基、卤素-取代的-d—6烷基、Cw烷氧基和卣素-取代的-CL6烷氧基； 其中X选自键和d_6亚烷基；且R9和R1G独立地选自氢和d-6烷基；R3选自氢、Cw烷基、C3-8杂环烷基、<:5_1()杂芳基、-(^(OhRm -NRnS(0)2R12、 -NR C(0)R12、画NRnC(O)NRnRu、 -NR C(0)C(0)OR12、 NRuC(0)OR！2、 -OC(O) NR R12、画C(O)OR"、 -C(0)R13、 NRnR!2、 -NRnR13、 -S(0)2NR R12和-C(O)NRuRu;其中R 和R12独立地选自氢、 C"烷基、卤素-取代的-C,-6烷基、C"烷氧基、^J^-d-6烷基、羟基-C" 烷基和被-NR9Ru)取代的Cw烷基；R!3是任选被1至3个Cw烷基基团取 代的<:3-8杂环烷基；其中R3的任意杂环烷基或杂芳基可任选地进一步被l至3个独立地选自卤素、d,6烷基、Cf6烷氧基、絲-C^烷基、羟基-Cj.6烷基、卤素-取代的-d_6烷基和卤素-取代的-d—6烷氧基取代； Re选自卣素和d—6烷基；且R7选自卤素、M、 d-6烷基、(:2.6链烯基、Qj-6炔基、卤素-取代的-C"烷基、<:6_1()芳基、Cs-K)杂芳基、C3_8杂环烷基和C3_12环烷基；其中任意烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选地被1至5个独立地选自以下的基团取代卤素、C^烷基、Cw烷氧基、氰基-C"烷基、羟基-d-6烷基、卤素-取代的-d-6烷基、卣素-取代的-d-6烷氧基、-NR14R15、画XOR"、 -S(0)2R14、 Cm环烷基、<:3—8杂环烷基、C^o芳基和 0$.8杂芳基；其中X是键或d-6亚烷基且R"和Ri5独立地选自C"烷基、 ^J^-d-6烷基、羟基-C^烷基、卣素-取代的-C"烷基和卣素-取代的-d.6 烷氧基；其中Rj的任意芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基取代基可任选地 进一步被1至3个独立地选自卤素、CL6垸基、d-6烷IL&、絲-Cw烷基、羟基-d，6烷基、卣素-取代的-CL6烷基和面素-取代-d-6烷氧基取代。本发明在第二个方面中提供了药物组合物，它包含式I的化合物或其N-氧化物衍生物，各异构体及其异构体混合物，或其可药用盐，与一种或多种合适的赋形剂混合。本发明在第三个方面中提供了治疗动物疾病或病症的方法，其中血小 板水平升高可以抑制或改善所述疾病或病症的病理学和/或症状学情况，该方法包括对所述的动物施用治疗有效量的式I的化合物或其N-氧化物衍生物，各异构体及其异构体混合物，或其可药用盐。本发明在第四个方面中提供了式I的化合物在制备用于治疗动物疾病 或病症的的药物中的用途，其中血小板水平下降对所述疾病或病症的病理 学和/或症状学有作用。本发明的第五个方面中提供了制备式r的化合物及其N-氧化物衍生 物、前体药物衍生物、祐:保护的衍生物、各异构体及其异构体混合物及其可药用盐的方法。 发明详述定义"烷基"作为基团和其它基团的结构元件，例如卣素-取代的-烷基和烷氧基，其可以为直链或支链的。Ci-4-烷氧基包括曱氧基、乙氧基等。卤素-取代的烷基包括三氟甲基、五氟乙基等。"芳基"意指含6-10个环碳原子的单环或稠合双环芳族环组合。例如 芳基可以为苯基或萘基，优选苯基。"亚芳基"意指衍生自芳基的二价基团。 将"杂芳基"如上述对芳基所定义，其中环成员中的一个或多个为杂原子。例如，杂芳基包括吡咬基、吲咮基、吲唑基、喹楚啉基、#基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并硫代吡喃基、苯并[l，3j间二氧杂环戊烯、咪 唑基、苯并-咪唑基、嘧咬基、呋喃基、喁唑基、异鳴唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、^:吩基等。"环烷基，，意指包含所示环原子数的饱和或部分不饱和的单环、稠合双环或桥连多环组合。例如C3，H)环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。"杂环烷基，，意指如本申请中定义的环烷基，M是所示环碳中的一个或多个被选自-O-、 -N=、 -NR-、 -C(O)-、 -S-、 -8(0)-或-8(0)2-的部分所替 换，其中R为氢、C^烷基或氮保护基。例如，作为本申请中用于描述本 发明化合物的C3—8杂环烷基包括吗啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌溱 基、哌咬基、哌咬基酮、1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基等。"卣素(halogen)，，(或囟素(halo))优选表示氯或氟，但也可以为溴 或珙。"血小板生成素(TPO)"在本领域中也称作c-Mpl配体、mpl配体、巨 核细胞生成素和巨核细胞生长和发育因子。"治疗(Treat)"、"治疗(treating)"和"治疗(treatment)，，意指緩 解或减轻疾病和/或其伴随症状的方法。 优选实施方案的描述本发明提供了治疗血小板减少的化合物、组合物和方法。可以将血小 板减少广泛解释为认为血小板数量低于正常值或健康个体要求的任意下 降。在一个实施方案中，式I化合物是式Ia化合物其中:n选自0、 1、 2和3; m选自0、 1、 2、 3、 4和5;Z选自N和CRs;其中Rs选自氢、卤素、C,—6烷基、卤素-取代的-d.6 烷基；其中Rs的任意烷基可任选地有被选自-S(0)o-2-、 -C(O)-、- 119-和-0-的原子或基团替换的亚甲基；其中R9选自氢和C"烷基；Ri、 R2、 R4和Rs独立地选自氢、卣素、羟基、硝基、-XNR9R10-、 d_6 烷基、卣素-取代的-C^烷基；其中X选自键和Cw亚烷基；且R9和Rjo 独立地选自氢和d-6烷基；R3选自-XCOOR" -XCONR9R10、 -NR S(0)2R12 、 -S(0)2R函2 、 -NR C(0)R12 、 -NRnC(O)NRnRu 、 -NRuC(O)C(O)ORu 和 -NRuC(O)ORu;其中X选自键和Cw亚烷基；且R9和R1()独立地选自氢 和Cw烷基；R6选自卤素和C^烷基；且R加选自卤素和d-6烷基。在另一个实施方案中，R6为氟且R加选自氟、甲基和丁基。 在另一个实施方案中，R3选自氣基、M-羰基、M-磺酰基、曱基-磺酰基-氨基和氨基；且R4选自氢、羟基、硝基和氨基。本发明的优选化合物选自；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-p引哚-2-基]-苯 甲酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-苯甲酰胺；4-[7-氟-6-(4-氟-3-甲基-苯基)-lH-吲咮-2-基卜苯甲酸；4-[7-氟-6-(4-氟-3-甲基-笨基)-1H-p引哚 -2-基]-糾酰胺；4-[6-(4-丁基-苯基)-3-乙基-7-氟-lH-p引味-2-基l-2-幾基-苯 曱酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-异丙基-lH-吲哚-2-基-2-羟基-苯甲酸； 4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-羟基-苯甲酸；4-[6-(4-丁基-苯 基)-7-氟-3-甲基-lH-吲咮-2-基-2-羟基-苯甲酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并 咪唑-2-基卜苯甲酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并咪唑-2-基-2-羟基-苯甲酸； N-(4-6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲咪-2-基苯基)-甲磺酰胺；N-(4-〖6-(4-丁基 誦苯基)-7-氟-lH-p引哚-2-基l苯基〉-乙酰胺；N-(4-[6-(4-丁基画苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-氯-苯基}-乙酰胺;4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基]-2-氯-苯胺；和2-氨基画4-[6-(4-丁基-苯基)-7陽氟曙lH-吲咪-2國基-苯曱酸。 本发明更优选的化合物详述于下文的实施例与表中。药理学和应用可以将血小板减少广泛解释为认为低于正常值或对健康个体所需的血 小板数量的任意下降。已知血小板减少具有许多致病因素，包括，但不限 于放疗、化疗、免疫疗法、免疫性血小板减少性紫癜、骨髓异常增生综合 征(MDS)、再生障碍性贫血、AML、 CML、病毒感染(包括，但不限于HIV、 丙型肝炎病毒、细小病毒)、肝病、重度骨髓抑制、骨髓移植、干细胞移植、 外周血干细胞移植、祖细胞缺陷、干细胞和祖细胞多态现象、TPO缺乏、 中性白细胞减少、树突细胞活动化、增殖、活化或分化。TPO在治疗患有血小板计数减少的患者中具有显著的治疗价值。特别 地，具有许多类型癌症的患者存在血小板减少，这是因骨髓抑制性化疗或 放疗所致，这种化疗或放疗可以导致出血风险增加并且通常限制了为接受 加强化疗或骨髓移植给予的化疗剂的剂量。本发明的化合物用于治疗血小板减少，而与导致该病症的因素或多种 因素无关。本发明的化合物还用于治疗在致病因素或多种致病因素未知或 尚未得到鉴定时的血小板减少。本发明的化合物是有用的，无论是否涉及 血液或血小板减少，包括，但不限于移植术、手术、分娩前麻醉和肠保护。因为血小板(凝血细胞)是凝血所必需的并且在其数量极低时，患者因 突难性出血而处于死亡危险，本发明的TPO才莫拟物具有在治疗各种出血性 障碍中的有用应用，例如主要因血小板缺乏导致的疾病。按照上述所述，本发明进一步提供了有这类治疗需要的个体预防或治 疗上述疾病或障碍中的任意种的方法，该方法包括对所述患者施用治疗有效量(參ja T义时"滋^和秀炎，逸合參，的式I的化合物或其可药用盐。就上 述用途中的任意种而言，所需剂量根据施用方式、所治疗的特定病症和所 需作用的不同而改变。施用和药物纟且合物一般而言，通过本领域常用和可接受的已知方式中的任意种施用治疗 有效量的本发明化合物，可以将其单独施用或与 一种或多种治疗剂联合施 用。治疗有效量可以根据疾病的严重性、个体的年龄和相对健康情况、所用化合物的功效和其它因素的不同而广泛改变。 一般而言，显示以约0.03 -2.5mg/kg/体重的每日剂量获得令人满意的结果。在较大哺乳动物，例如 人中的所示每日剂量在约0.5mg -约100mg的范围，便利地例如以达每日 4次的分次剂量或以延迟剂型施用。用于口服施用的合适的单位剂型包含 约1 -50mg的活性组分。可以通过任意常规途经施用作为药物组合物的本发明化合物，特别是 经肠道，例如口服，例如以片剂或胶嚢形式；或通过非肠道，例如以可注 射溶液或混悬液的形式；通过局部，例如以洗剂、凝胶、软膏剂或霜剂或 鼻用剂型或栓剂形式。可以通过混合、制粒或包衣方法按照常规方式制备 包含游离形式或可药用盐形式与至少 一种可药用的载体或稀释剂的药物组 合物。例如，口服组合物可以为片剂或明^Mit，它们包含活性组分与 a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘 氨酸；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其镁或钙盐和/或聚 乙二醇；就片剂而言还包含c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、西 黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要， 还包含d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、藻酸或其钠盐，或泡腾混合物；和/ 或e)吸收剂、着色剂、矫p未剂和甜朱剂。可注射组合物可以为等渗水溶液 或混悬液，并且可以由脂肪乳剂或混悬液制备栓剂。可以将这些组合物灭 菌和/或其包含辅助剂，诸如防腐剂、稳定剂、湿润剂或乳化剂、溶解促进 剂、用于调节渗透压的盐和/或緩沖剂。此外，它们还可以包含其它治疗上 有价值的物质。用于透皮施用的合适的制剂包括有效量的本发明化合物与 载体。载体可以包括可吸收的药理学可接受的溶剂以便辅助通过宿主皮肤。 例如，透皮装置可以为包含裱背部件、包含化合物任选与栽体的储库、任 选的在延长时间期限内以受控和预定速率将化合物递送至宿主皮肤的速率控制屏障和将装置与皮肤固定的用具。还可以使用骨架透皮制剂。用于局 部施用，例如皮肤和眼的合适的制剂优选为本领域众所周知的水溶液、软 膏剂、霜剂或凝胶。这类制剂可以包含增溶剂、稳定剂、张力促进剂、緩 冲剂和防腐剂。可以将治疗有效量的本发明化合物与一种或多种治疗剂(药物组合)联合施用。本发明的TPO才莫拟物化合物还用于与已知对存活或增殖细胞起作 用的其它已知活性剂一起对存活或增殖细胞起作用。这类活性剂包括，但 不限于G-CSF、 GM-CSF、 TPO、 M画CSF、 EPO、 Gro-P 、 IL-ll、 SCF、 FLT3配体、LIF、 IL-3、 IL-6、 IL-1、 Progenipoietin、 NESP、 SD-01或 IL-5或上述活性剂中任意种的生物活性衍生物。已经证实人树突细胞表达TPO受体并且TPO为树突细胞的强效转移 物。本发明的TPO模拟物化合物还用作疫苗佐剂，即它们增加树突细胞的 活性和活动。本发明的药物活性化合物因增加树突细胞活性和活动而用作 免疫佐剂，与口服、透皮或皮下递送的疫苗和/或免疫调节剂一起施用。已知TPO对巨核细胞、血小板和干细胞具有各种作用，包括抗-细胞 凋亡/存活作用和对干细胞和巨核细胞的增殖作用。因此，本发明的TPO 和/或TPO模拟物有效增加干细胞和祖细胞的数量，以便在将TPO与诱导 分化的其它细胞因子联用时存在协同作用。如果将本发明的化合物与其它疗法联合施用，那么共同施用的化合物 剂量当然要才艮据所用的共同药物、^^用的具体药物、所治疗的病症等的不 同而改变。本发明还提供了药物组合产品，例如药盒，它包含a)为如本文披露 的游离或可药用盐形式的本发明化合物的第一种活性剂；和b)至少一种 共同的活性剂。该药盒可以包含用于其施用的说明书。如本文所用的术语"共同施用"或"联合施用"等意指包括对单一患者施 用选择的治疗剂并且指定包括治疗方案，其中不一定通过相同施用途径或 同时施用所述的活性剂。本文所用的术语"药物组合产品"意指因混合或合并一种以上活性组分产生并且包括活性组分的固定和不固定组合的产品。术语"固定组合"意指 以单一本体的形式或剂量同时对患者施用活性组分，例如式I的化合物和共同活性剂。术语"不固定组合"意指没有特定时间限制的同时，同时或依 次对患者施用活性组分，例如式I的化合物和共同活性剂，这类施用在患者体内提供了治疗有效水平的2种化合物。后者也适用于鸡尾酒疗法，例 如施用3种或3种以上活性组分。制备本发明化合物的方法本发明还包括制备本发明化合物的方法。在所述的反应中，有必要保 护反应官能团，例如羟基、氨基、亚氮基、硫代或g，其中这些基团为 终产物中所需的，以避免其参与不需要的反应。可以按照标准实践使用常 用的保护基，例如，参见T.W. Greene和P. G. M. Wuts在"Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley和Sons, 1991中所述。式I化合物，其中Z是N，可以如以下反应方案I进行制备反应方案Ii(2》其中n和至R7如本发明概述中的定义。式I化合物可通过式2化合物与 式3化合物在亚硫酸氢钠存在下在适当的溶剂中(例如，DMA等)反应而合 成。反应在约100'C至约180X:温度范围并可能需进行约24小时完成。 式I化合物，其中Z是CRg，可以如以下反应方案II进行制备<formula>formula see original document page 14</formula>其中n和R,至Rs如本发明概述中的定义。式I化合物可通过式2化合物与 式5化合物在适当的路易斯酸(例如，氯化锌等)或质子酸(例如，HC1 等)的存在下在适当的溶剂中(例如，醋酸、乙醇等)反应而合成。反应在 约80"C至约120匸温度范围进行并可能需进行约72小时完成。 式I化合物合成的详细实施例可见于如下的实施例中。制备本发明化合物的额外方法可以通过使游离碱形式的化合物与可药用的无机酸或有机^应将本 发明的化合物制备成可药用的酸加成盐。或者，可以通过游离酸形式的化 合物与可药用的无机喊或有fe^应制备本发明化合物的可药用的碱加成 盐。或者，可以使用原料或中间体的盐制备本发明化合物的盐形式。 可以分别由相应的碱加成盐或酸加成盐制备本发明化合物的游离酸或 游离碱。例如，可以通过用合适的碱(例如氢氧化铵溶液、氢氧化钠等)处 理将酸加成盐形式的本发明化合物转化成相应的游离碱。可以通过用合适 的酸(例如盐酸等)处理将碱加成盐形式的本发明化合物转化成相应的游离 酸。可以通过在0-80。C下用还原剂(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氢化 锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化物等)在合适的惰性有机溶剂(例如乙腈、 乙醇、含水二噁烷等)中处理由本发明化合物的N-氧化物制备未氧化形式 的本发明化合物。可以通过本领域技术人员公知的方法制备本发明化合物的前体药物衍 生物(进一步的详细内容例如参见Saulnier等，(1994)， Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters, Vol. 4， p. 1985)。例如，可以通过4吏本发明非 衍生的化合物与合适的氨基甲酰化试剂(例如l，l-acyloxyalkylcarbanochloridate、碳酸对-硝基苯酯等)反应制备合适的前 体药物。的衍生物。适合于产生保护基及其除去的技术的详细描述可以在T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry",第3版，John Wiley和 Sons, Inc., 1999中找到'本发明的化合物可以便利地制备或在本发明方法过程中形成，如溶剂合物(例如7K合物)。可以通过使用有机溶剂，诸如二 悉英、四氢呋喃或甲 醇从含7jC/有机溶剂混合物中重结晶便利地制备本发明化合物的水合物。对映异构体化合物对，分离非对映体并且回收光学纯的对映体将本发明的 化合物制备成其各个立体异构体。尽管可以使用本发明化合物的共价非对 映异构体衍生物对对映体进行拆分，但是优选易离解的复合物(例如结晶非对映异构体盐)。非对映体具有不同的物理特性(例如熔点、沸点、溶解度、 反应性等)并且易于通过利用这些不同性分离。可以通过色谱法或优选通过 基于溶解度差异的分离/拆分技术分离非对映体。然后通过不会产生外消旋 化的任何实施方式回收光学纯的对映体与拆分试剂。适合于从外消旋混合物中拆分化合物的立体异构体的技术的更详细描述可以在Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen， "Enantiomers， Racemates and Resolutions", John Wiley和Sons, Inc., 1981中找到。 总之，可以通过一种方法制备式I的化合物，包括(a) 反应方案I或II的方法；和(b) 任选将本发明的化合物转化成可药用盐；(c) 任选将本发明的化合物的盐形式转化成非盐形式；(d) 任选将本发明化合物的未氧化形式转化成可药用的N-氧化物；(e) 任选将本发明化合物的N-氧化物形式转化成其未氧化形式；(f) 任选从异构体的混合物中拆分本发明化合物的各异构体；(g) 任选将本发明的未衍生化合物转化成可药用的前体药物衍生物；和00任选将本发明化合物的前体药物衍生物转化成其非衍生形式。 就未特别描述原料的生产而言，化合物为已知的或可以按照与本领域公知或下文实施例中披露的方法类似的方式制备。本领域技术人员应理解上述转化仅为制备本发明化合物方法的代表，并且可以类似地^f吏用其它众所周知的方法。本发明进一步以如下实施例举例说明，这些实施例用于解释本发明式 i化合物的制备，但不起限定作用。将(3-氯-2-氟-苯基)-肼盐酸盐(Apollo Scientific, Ltd., 221 mg， 1.12 mmol)和4-乙酰基-苯曱酸甲酯(200 mg， 1.12 mmol)用无水ZnCl2和乙酸 (10mL)处理。将反应加热至105°C48小时。在冷却至室温后，反应用乙酸 乙酯稀释并用H20(5 x )、饱和NaCl水溶液依序洗涤。然后有才几层用Na2S04 千燥并过滤。浓缩后，粗品用制备型RPLC-MS纯化得到类白色固体状的 4-(6-氯-7-氟-lH-P引味-2-基)-苯曱酸甲酯ESMS m/z 304.0 (M+H+)。步骤2和3:向从上一步得到的4-(6-氯-7-氟-lH-吲哚-2-基)-苯甲酸甲 酯(37 mg, 0.122 mmol)、 4-正-丁基苯基-硼酸(43 mg， 0.244 mmol)和碳酸铯实施例实施例14-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基I-苯甲酸步骤1: 4-(6-氯-7-氟-lH-吲味-2-基)-苯甲酸甲酉旨:(159mg， 0.487 mmol)混合物的二巧恶烷(4 mL)溶液中，加入CombiPhos國Pd6 钇催化剂(Combiphos Catalysts Inc.， 3mg)。在密封管中，混合物充N2 5分 钟并120。C加热7小时。冷却至室温后，反应用乙酸乙酯稀释，并连续用 1N HC1、 H20和饱和NaCl水溶液洗涂。然后有机层用Na2S04干燥、过 滤并浓缩。得到的残留物用乙醇/1120(2 mL/1 mL)处理，再用LiOH (26 mg， 0.609 mmol)处理。该混合物在50。C加热1小时。在冷却至室温后，反应用 乙酸乙酯稀释，并用1N盐酸水溶液洗涤。有机层用Na2S04干燥并过滤。 浓缩后，粗品用制备型RP LC-MS纯化得到白色固体状的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-丐l咮-2-基-苯甲酸NMR (400 MHz，丙酮-^) 811.13 (bs， 1H)， 8.10-8.05 (m， 4H)， 7.59 (d， 2H)， 7.52 (d， 1H)， 7.32 (d， 2H)， 7.18-7.12 (m, 2H)， 2.71 (t， 2H)， 1.70-1.63 (m， 2H)， 1.49-1.40 (m， 2H)， 0.98 (t, 3H); ESMS m/z 388.2 (M+H+)。二巧恶烷(16 mL)和N-甲基吡咯烷酮(8 mL)的混合物通过将其通氮气流 15分钟除氧。3-氯-2-氟苯胺(3 g， 20,6 mmol)的样品加至带有能够通过3 通玻璃活塞密封的螺旋适配器的250 mL圆底烧瓶。该苯胺然后用4-丁基 苯基硼酸(5.5 g， 30.9 mmol)、氟化铯(7.82 g， 51.5 mmol)和二(三叔丁基膦) 把(527 mg， 1.03 mmol)处理。将烧瓶抽真空，再充入氮气，并封口。该烧 瓶置于预热至130。C的油浴中并搅拌4小时。冷却后，反应通过硅藻土垫实施例24- [6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲咮-2-基-苯甲酰胺步骤l: (4'-丁基-2-氟-联苯-3-基)-肼盐酸盐过滤，其接着用EtOAc洗涤。然后旋转蒸发除去有机溶剂。粗品反应用水 稀释，并用EtOAc萃取。相分离，并用MgS04干燥有树目、过滤、并浓 缩。得到的油用乙醚稀释，并用过量的4MHCl在二巧恶烷中的溶液处理。 收集得到的固体，用乙醚洗涤，并干燥得到白色固体状的4'-丁基-2-氟-联 苯-3-基胺盐酸盐LC/MS [M+H+C16H19FN理论值244.3，实测值244.2。 在0。C 4'-丁基-2-氟-联苯-3-基胺盐酸盐(5.4 g， 0.019 mol)在浓HCl水溶液 (50 ml)中的混合物用在10分钟内滴加亚硝酸钠(1.3 g， 0.019 mol) H20 (20 ml)溶液来处理。得到的溶液在0。C搅拌1小时，然后滴加0。C的二氯化锡 (II) (13.0 g， 0.058 mol)在浓HC1 (14 ml)水溶液中的溶液进行处理。将该混 合物搅拌15min并过滤。分离的固体用冷饱和NaCl水溶液洗涤，然后混 悬于50。/。NaOH中。得到的浆状物用1120稀释，并用Et20萃取。有斜目 用MgS04干燥、过滤、并浓缩。得到的残留物溶解于100mlEt2O中并冷 却至0。C。 4.0MHCl的二 恶烷(15ml)溶液滴加至该溶液中，收集得到的 沉淀得到4.58 g (81%)的所需的肼盐酸盐。LC/MS C16H20FN2理论值 259.3，实测值259.2。步骤2:上一步的(4'-丁基-2-氟-联苯-3-基)-肼盐酸盐(90 mg， 0.306 mmol)和4-乙酰基-苯曱酰胺(Sigman， M. E.等人j. Am. Chem. Soc. 1988， 110， 4297.) (50 mg, 0.306 mmol)用无水ZnCl2 (418 mg， 3.06 mmol)和乙酸 (4mL)处理。将反应加热至105。C 48小时。冷却至室温后，将反应用乙酸 乙酯稀释并用h20 (5x)、 IN HC1水溶液和饱和NaCl水溶液依序洗涤。然 后有机层用Na2S04干燥并过滤。浓缩后，粗品用制备型RPLC-MS纯化 得到褐色固体状的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-苯甲酰胺 NMR (400 MHz，丙酮-^) 311.11 (bs, 1H)， 8.08-8.01 (m， 4H)， 7.59-7.43 (m, 4H)， 7.38-7.29 (m， 2H)， 7.18-7.12 (m， 2H)， 6.65 (bs， 1H)， 2.74-2.63 (m， 2H), 1.76-1.64 (m， 2H), 1.50-1.38 (m, 2H)， 1.04-0.93 (m， 3H); ESMS m/z 387.2 (M+H+)。实施例34- [7-氟-6-(4-氟-3-曱基-苯基)-lH-吲咮-2-基-苯曱酸通过重复实施例2中所述的方法，使用适当的起始材料，得到白色固 体状的4-[7-氟-6-(4-氟-3-甲基-苯基)-lH-P引味-2-基-苯甲酸，H NMR (400 MHz, CD3OD) S 8.09 (d， 2H)， 7.98 (d， 2H)， 7.52- 7.42 (m， 3H)， 7.18-7.05 (m， 3H)， 2.32 (s， 3H); ESMS m/z 364.1 (M+H+)。实施例44-[7-氟-6-(4-氟-3-曱基-苯基)-lH-丐l咮-2-基]-糾酰胺通过重复实施例2中所述的方法，使用适当的起始材料，得到褐色固 体状的4-[7-氟-6-(4-氟-3-甲基-苯基)-lH-吲咪-2-基-苯磺酰胺！H NMR (400 MHz,丙酮-A) S 11.12 (bs， 1H)， 8.18-8.13 (m， 2H)， 8.06-7.98 (m， 2H)，7.59-7.48 (m， 3H)， 7.22-7.12 (m， 3H)， 6.68 (bs， 2H)， 2.33 (s, 3H); ESMS m/z 399.1 (M+H+)。实施例54-[6-(4-丁基-苯基)-3-乙基-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-羟基-苯甲酸步骤l: 2-羟基-4-碘-苯甲酸<formula>formula see original document page 20</formula>将4-#^-2-羟基水杨酸(10 g， 65.3 mmol)的样品加至装有大搅拌棒的 2升锥形瓶，在冰/水浴中冷却，并用浓石危酸(20mL)和足量的水处理，制成 自由流动的混悬液( 50mL)。搅拌20分钟后，反应用亚硝酸钠(4.55g，66.0 mmol)水(20 mL)溶液在10min内处理。再搅拌3分钟后，反应用碘化钾 (16.9 g， 101 mmol)的水(30mL)溶液用15分钟的时间处理。撤去冷浴，仔 细监控反应，并搅拌随着产生的显著量的氮气。反应减慢后，快速加热至 70'C，使其冷却至室温并过夜。通过过滤收集得到的固体，用水洗涤并干 燥得到粗品2-羟基-4-碘-苯甲酸，无需进一步纯化用于下一步反应ESMS m/z 265.0 (M+H+)。步骤2: 2-羟基-4-碘-苯曱酸甲酯<formula>formula see original document page 20</formula>2-羟基-4-碘-苯甲酸(4.0 g， 0.015 mol)的THF(25 ml)和MeOH (25ml)溶 液通过滴加(三甲基甲硅烷基)-重氮曱烷(2.0M在Et20中，15 ml)进行处理， 并室温搅拌2.5小时。真空除去挥发性物质，粗品残留物用EtOAc稀释。 有才M目用饱和NaHC03 7jC溶液(3x)、饱和NaCl 7JC溶液(1 x )、和H20(1 x)依序洗涤。有机相用MgS04干燥、过滤、并浓缩。粗品用珪胶柱色i普 (0-80%乙酸乙酯-正己烷梯度)纯化得到2-羟基-4-碘-苯甲酸甲酯ESMS m/z 279.0 (M+H+)。步骤3: 2-羟基-4-乙烯基-苯曱酸曱酯<formula>formula see original document page 20</formula>将2-羟基-4-凑苯甲酸甲酯(8.01 g， 0.0288 mol)的THF (184 ml)和 H20 (46 ml)的溶液用乙烯基-硼酸二丁基酯(9.53 ml, 0.0432 mol, 1.5 eq.)、Na2C03 (21.37 g， 0.201 mol， 7 eq.)、和二氯-二(三苯基膦)钯(l.Ol g, 1.44 mmol， 5 mol。/o)处理。将溶液通N2 (g) 5分钟，并加热回流2小时。将反应 真空浓缩，用EtOAc稀释，并连续用H20和饱和NaCl水溶液洗涤。有机 相用MgS04干燥、过滤并浓缩。粗品用珪胶柱色镨(5%乙酸乙酉旨-正己烷) 纯化得到2-羟基-4-乙烯基-苯甲酸甲酯ESMS m/z 179.1 (M+H+)。 步骤4: 4-甲酰基-2-羟基-苯甲酸曱酯稳定的02 (g)气流通入冷的(-78。C) 2-羟基-4-乙烯基-苯曱酸曱酯(3.28 g， 0.0184 mol)的CH2C12 (50 ml)溶液。5分钟后，03 (g)通入溶液中直至 溶液的颜色变蓝/灰。然后溶液通02 (g) 5分钟，用DMS (4.05 ml， 0.0552 mol)处理并温热至室温过夜。真空除去所有挥发性物质，粗品用珪胶柱色 镨(0-100%乙酸乙S旨-正己烷梯度)纯化得到4-甲酰基-2-羟基-苯甲酸甲酯 ESMS m/z 181.0 (M+H+)。步骤5: 2-羟基-4-(l-羟基-丁基)-苯甲酸甲酯将4-甲酰基-2-羟基-苯甲酸甲酯(360 mg， 2mmol)溶解于THF (无水, 10mL)中。溶液冷却至-78'C并在氮气下搅拌。向该溶液中通过针管滴加氯 代正丙基镁(2M在THF中，2 mL, 2 mmol)。反应混合物在-78。C搅拌1 小时，然后逐渐在1小时温热至室温，在此时间点之后加饱和氯化铵水溶 液终止反应。得到的混合物用EtOAc (3 x 15 mL)萃取。合并的有树目用饱 和NaCl水溶液洗涤，并用Na2S04干燥。浓缩后，粗品用硅胶闪式柱色 谱(10-20%乙酸乙酉旨-正己烷梯度)纯化得到无色油状的2-羟基-4-(l-羟基-丁 基)-苯甲酸甲基酯NMR (400 MHz， CDC13) S10.74 (s， 1H)， 7.79 (d， 1H， J= 8.4Hz)， 6.95 (d， 1H, J= 1.2 Hz)， 6.86 (dd， 1H， J= 1.6， 8 Hz)， 4.67 (t， 1H，J= 6.8 Hz)， 3.94 (s， 3H)， 1.82 (br， 1H)， 1.80-1.62 (m， 1H)， 1.46-1.28 (m， 2H) 0.93 (t， 3H， J= 7.2 Hz)。步骤6: 4-丁酰基-2-羟基-苯曱酸曱酯向2-羟基-4-(l-羟基-丁基)-苯甲酸甲酯(132 mg, 0.59 mmol)的DCM (6 mL)溶液中一次加入PDC (245 mg， 1.1 mmol)。将反应搅拌过夜。反应 混合物通过硅胶填料过滤，使用DCM作为洗脱剂。浓缩滤液得到白色固 体状的4-丁酰基-2-羟基-苯甲酸甲酯& NMR (400 MHz, CDC13) S10.77 (s， 1H)， 7.92 (d， 1H， J= 8.4 Hz)， 7.52 (d， 1H， J= 1.6 Hz)， 7.44 (dd, 1H， J= 1.6， 8 Hz)， 3.99 (s， 3H)， 2.93 (t， 2H， J= 7.2 Hz)， 1.76 (qt， 2H， J= 7.6 Hz)， 1.00 (t， 3H J=7.6Hz)。步骤7: 4-(6-氯-3-乙基-7-氟-lH-吲咪-2-基)-2-羟基-苯甲酸甲酯4-丁酰基-2-羟基-苯甲酸甲酯(60 mg， 0.27 mmol)、 (3-氯-2-氟-苯基)-肼(Apollo Scientific, Ltd., 54 mg， 0.27 mmol)、和氯化锌(110 mg， 0.8 mmol) 混合物在乙酸中(2 mL)通以氮气5分钟并在密封管中于120。C加热2小 时。将混合物冷却至室温并用乙酸乙酯稀释。得到的混合物连续用饱和 Na2C03水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤，并最终用硫酸钠干燥。浓缩后， 粗品用硅胶闪式柱色镨(10%乙酸乙酯-正己烷)纯化得到淡黄色固体状的 4-(6-氯曙3誦乙基-7-氟-lH-吲咮-2-基)-2-羟基画苯甲酸甲酯ESMS m/z 348.1 (M+H+)。步骤8和9:向4-(6-氯-3-乙基-7-氟-lH-吲咪-2-基)-2-羟基-苯甲酸曱 酉旨(50 mg， 0.14 mmol)、 4-正画丁基-苯基硼酸(50 mg， 0.28 mmol)、和氟化 铯(78 mg， 0.52 mmol)在二5悉烷(3 niL， anhydrous)的混合物中加入二(三叔丁基膦)钯(6 mg, 10 mol%)。该混合物通以N23分钟，然后在密封管中在 12(TC加热4小时。将该混合物冷却至室温，过滤，浓缩滤液。得到的残留 物溶于乙醇/1120 (1 mL / 0.1 mL)中并转移至微波管。加入LiOH(12mg， 0.54 mmol)并将混合物在微波辐射下在120。C加热6分钟。将粗品过滤。 滤液浓缩后，粗品用制备型RP LC-MS纯化得到黄色固体状的4-[6-(4-丁 基-苯基)曙3國乙基-7-氟-lH-P引咮-2-基-2-羟基-苯甲酸& NMR (400 MHz， CD3OD) 3 7.96 (d， 1H， J= 8.8 Hz)， 7.50 (d， 2H， J= 8 Hz)， 7.42(d， 1H， J= 8.4 Hz)， 7.24 (d， 2H， J= 8 Hz)， 7,21-7.20 (m， 2H)， 7.10 (dd， 1H， J= 8， 8 Hz)， 2.95 (q， 2H， J= 7.6 Hz), 2.66 (t， 2H， J= 8 Hz)， 1.65 (m， 2H)， 1.40 (m， 2H)， 1.34 (t， 3H， J= 7.6 Hz), 0.97 (t， 3H， J= 7.6 Hz); ESMS m/z 432.2 (M+H+)。实施例64-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-异丙基-lH-吲哚-2-基卜2-羟基-苯甲酸<formula>formula see original document page 23</formula>通过重复实施例5中所迷的方法，使用适当的起始材料，得到黄色固 体状的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-异丙基-lH-吲咮-2-基-2-羟基-苯甲酸 NMR (400 MHz，丙酮-"6) S10.64 (s， 1H)， 8.01 (d， 1H， J= 8.4 Hz)， 7.68 (d， 1H， J= 8 Hz), 7.55 (d， 2H， J= 7.6 Hz), 7.31 (d， 2H， J= 8 Hz)， 7.23-7.13 (m， 3H), 3,46 (m， 1H), 2.68 (t， 2H， J= 7.6 Hz)， 1.66 (m, 2H)， 1.51 (d， 6H， J = 7.2 Hz)， 1.40 (m， 2H)， 0.96 (t， 3H， J= 7.6 Hz); ESMS m/z 446.2 (M+H+)。实施例74-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-叼l咮-2-基-2-羟基-苯甲酸通过重复实施例5中所述的方法，使用适当的起始材料，得到黄色固 体状的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-羟基-苯甲酸^ NMR (400 MHz，丙酮-A) 3 11.12 (bs， 1H)， 7.99 (d， 1H)， 7.60-7.53 (m， 4H)， 7.48 (d， 1H)， 7.32 (d， 2H)， 7.18-7.10 (m， 2H)， 2.67 (t， 2H)， 1.72-1.61 (m， 2H)， 1.49-1.37 (m， 2H)， 0，98 (t， 3H); ESMS m/z 404.2 (M+H+)。实施例84-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-甲基-1H-吲味-2-基I-2-羟基-苯甲酸通过重复实施例5中所述的方法，使用适当的起始材料，得到淡黄色 固体状的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-甲基-lH-吲咮-2-基-2-羟基-苯甲酸& NMR (400 MHz，丙酮-^) S10.75 (bs， 1H)， 8.02 (d， 1H)， 7.57-7.15 (m， 8H)， 2.74-2.62 (m， 2H)， 2.58 (s， 3H)， 1.71-1.61 (m， 2H)， 1.43-1.35 (m， 2H)， 0.98 (t， 3H); ESMS m/z 418.2 (M+H+)。实施例94-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并咪唑-2-基-苯甲酸-气 /=\步骤l: 4'-丁基-3-硝基-联苯-4-基胺加入4-溴-2-硝基苯胺(205 mg, 0.945 mmol)、 4-丁基苯基硼酸(336 mg， 1.89 mmol)、氟化铯(430 mg， 2.83 mmol)、 二(三叔丁基膦)-4巴(24.1 mg， 0.0472 mmol)、和二 悉烷(2 ml)的史密斯反应瓶通以氩气(g) 5分钟，然后微^^口热至120。C 15分钟。粗品反应用硅藻土过滤，使用EtOAc作为洗 脱剂。将滤液真空浓缩，粗品用珪胶闪式柱色谱纯化(0-100%乙酸乙酉旨-正 己烷梯度)得到4'-丁基-3-硝基-联苯-4-基胺ESMSm/z 271.2 (M+H+)。 步骤2: 4'-丁基-联苯-3 ，4-二胺<formula>formula see original document page 25</formula>将4'-丁基-3-硝基-联苯-4-基胺(117 mg， 3.70 mmol)和10% Pd/C (10 mg)在2:1 v/v MeOH / EtOAc (4 ml)中稳定地通H2 (g)处理15分钟。将反 应在搅拌下保持在1 atm的H2下1小时。通过硅藻土过滤反应，滤液真空 浓缩得到4'-丁基-联苯-3.4-二胺ESMS m/z 241.2 (M+H+)。步骤3:4-甲酰基-苯甲酸甲酯(21.0 mg， 0.129 mmol)和NaHS03 (20.1 mg, 0.193 mmol， 1.5 eq.)的在DMA (250pL)中的热(140。C)混合物在10分 钟的时间里滴加4'-丁基-联苯画3，4-二胺(31 mg， 0.129 mmol)的DMA (100nL)溶液进行处理。得到的混合物在140。C搅拌1小时，然后用H20 (1 ml)处理并再搅拌1小时。反应用EtOAc稀释并相分离。有才M目用MgS04 干燥、过滤、并浓缩。粗品的苯并咪唑产物用95%乙醇(0.5 ml)和THF (1 ml)稀释并转移至包含LiOH (15.4 mg， 0.645 mmol， 5 eq.)的史密斯反应 瓶中。反应容器微波辐射加热至165。C5分钟。浓缩后，粗品用制备型RP LC-MS纯化得到4-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并咪唑-2-基卜苯甲酸力NMR (400 MHz, CD3OD) S9.00 (d， J= 8.2 Hz， 1H)， 8.91 (d， J= 8.1 Hz， 1H)， 8.63 (s, 1H)， 8.53 (s， 1H), 8,31 (d， J= 7.6 Hz， 2H)5， 8.23 (d， J= 8.3 Hz， 1H)， 8.02 (d， J= 7.7 Hz， 1H)， 7.94 (s， 1H), 7.84 (s， 1H)， 7.62 (d， J= 7.7 Hz， 1H)， 7.33 (d， J= 7.6 Hz, 1H)， 3.38 (dd， J= 7.8, 7.7 Hz， 1H)， 2.69 (dd, J= 7.8, 7.6 Hz， 1H)， 2.35 (m， 1H)， 2.09 (m, 1H)， 1.66 (dd， J= 7.4， 7.3 Hz， 3H)， 1.41 (m， 1H)， 0.97 (dd， J= 7.3， 6.9 Hz， 2H); ESMS m/z 371.2 (M+H"。实施例104-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并咪唑-2-基-2-羟基-苯曱酸通过重复实施例5和9中所述的方法，使用适当的起始材料，得到 4-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并咪唑-2-基]-2-羟基-苯甲酸ESMS m/z 387.1 (M+H+)。实施例11N-(4-6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲味-2-基-苯基)-甲磺酰胺通过重复实施例2中描述的方法，使用适当的起始材料，得到褐色固 体状的N-(4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基I-苯基卜甲磺酰胺& NMR (400 MHz，丙酮-</6) 311.00 (bs, 1H)， 8.79 (s， 1H)， 7.99 (d, 2H)， 7.55 (d 2H)， 7.52-7.44 (m， 3H)， 7.32 (d， 2H)， 7.15 (dd， 1H)， 7.01 (s， 1H)， 3.09 (s， 3H), 2.72 (t， 2H)， 1.75-1.64 (m， 2H)， 1.47-1.36 (m， 2H)， 0.99 (t, 3H); ESMS m/z 437.2 (M+H+)。实施例12N-(4-6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-丐l咮-2-基-苯基)-乙酰胺通过重复实施例2中所述的方法，使用适当的起始材料，得到褐色固 体状的N-H-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-P引味-2-基]-苯基)-乙酰胺，H NMR (400 MHz，丙酮O 8 10.95 (bs， 1H)， 9.32 (bs， 1H)， 7.92 (d， 2H)， 7.81 (d，2H)， 7.57 (d， 2H), 7.43 (d， 1H)， 7.32 (d， 2H)， 7.16 (dd， 1H)， 6.97 (s， 1H)， 2.70 (t， 2H)， 1.69-1.62 (m， 2H)， 1.42-1.33 (m， 2H)， 0.96 (t， 3H); ESMS m/z 401.1 (M+H+)。实施例13N-(4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-丐l咮-2-基-2-氯-苯基)-乙酰胺通过重复实施例2中所述的方法，使用适当的起始材料，得到固体状 的N-(4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-P引咪-2-基-2-氯-苯基)-乙酰胺NMR (400 MHz, DMSO-d6) 510.91 (s， 1H)， 8.62 (s， 1H)， 8.19 (d， J= 8.6 Hz， 1H)， 7.92 (d， J= 2.1Hz， 1H)， 7.77 (dd, J= 8.6， 2.1 Hz， 1H)， 7.42 (dd， J= 8.1， 1.6 Hz 2H)， 7.32 (d， J= 8.2 Hz， 1H)， 7.19 (d， J= 8.2 Hz， 1H)， 7.03 (dd， J= 8.1， 6.9 Hz, 1H)， 6.91 (dd， J= 3.3， 2.3 Hz， 1H)， 2.56 (t, J= 7.7 Hz， 2H)， 2.11 (s， 3H)， 1.54 (m， 2H)， 1.28 (m， 2H)， 0.83 (t， J= 7.3 Hz， 3H); ESMS m/z 435.2 (M+H+)。通过重复实施例2中所述的方法，使用适当的起始材料，得到固体状 的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲咮-2-基-2-氯-苯胺ESMS m/z 393.3 (M+H+)。实施例152-氨基-4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-苯甲酸实施例144-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-P引咮-2-基l-2-氯-苯胺步骤1: 1-(3-硝基-4-乙烯基-苯基)-乙酮向4，-溴-3'-硝基苯乙酮(600 mg， 2.46 mmol)、乙烯基硼酸二丁基酯(680 mg， 3.69 mmol)、和碳酸钠(1.83 g， 17.22 mmol)的THF/H20 (12 mL/4 mL) 溶液中加入二氯二(三苯基膦)钯(II) (86 mg， 5% mmol)。将反应管密封， 混合物通以N23分钟，并在7(TC加热1.5h。然后将混合物冷却至室温并倾 入饱和氯化铵水溶液中。混合物用乙酸乙酯(3x20 mL)萃取。合并有机萃 取物，用盐水洗涤并浓缩。粗品用珪胶柱色谱纯化(20%乙酸乙酯-正己烷) 得到黄色固体状的l-(3-硝基-4-乙烯基-苯基)-乙酮，87%收率ESMS m/z 192.0 (M+H+)。步骤2: 4-乙酰基-2-硝基-苯甲酸甲酯将上一步得到的l-(3-硝基-4-乙烯基-苯基)-乙酮(410mg， 2.14 mmol) 溶于DCM(20mL)中并冷却至-78。C。加入NaOH (429 mg， 10.7mmol)的 MeOH (5 mL)溶液。03 (g)通入溶液直至溶液颜色变蓝/灰。然后溶液通以 N2 (g)直至蓝色消失。溶液温热至室温并浓缩得到无色油状的4-乙酰基-2-硝基-苯甲酸甲酯、H醒R (400 MHz， CDC13)58.41 (d， 1H， J = 1.6 Hz)， 8.19 (dd， 1H， J = 7.6， 1.6 Hz)， 7.79 (d， 1H， J = 8 Hz)， 3.91 (s, 3H)， 2.66 (s， 3H)。步骤3-5:按照实施例2中所述的方法，4-乙酰基-2-硝基-苯甲酸甲酯 (从上一步得到)的样品和(4'-丁基-2-氟-联苯-3-基)-肼盐酸盐(实施例2， 步骤l)用于形成4-〖6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-硝基-苯甲酸甲酯。硝基基团氢化为相应的胺(1 atm H2， Pd/C)接着甲酯再用NaOH (EtOH/H20)皂化，并使用制备型RP LC-MS进行最后的纯化得到固体状 的2-氨基-4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-叼l哚-2-基]-苯甲酸& NMR (400 MHz,丙酮O 811.07 (s， 1H)， 7.92 (d, 1H)， 7.53 (dd， 2H)， 7.45 (d, 1H)， 7.36 (d， 1H)， 7.31 (d， 2H)， 7.19-7.13 (m， 2H)， 7.02-7.00 (m, 1H)， 2.67 (t， 2H)， 1.67-1.62 (m， 2H)， 1.42- 1.37 (m， 2H)， 0.94 (t， 3H); ESMS m/z 403.1 (M+H+)。测定检测本发明的化合物以便测定其作为TPO模拟物在体外使用人TPO 受体(TPO-R)转染的鼠BaF3细胞系的增殖测定中的功效 萤光素酶报道分子测定洗涤Ba/F3-TpoR细胞并且重新悬浮于以8 x 104个细胞/mL补充了 1。/o或20。/。FBS、 MS、 HS或(人血清清蛋白+ otl酸糖蛋白)、1% Pen-Strep-Glu和1 mM或25fiM ZnS04的RPMI-1640中并且以50 mL/ 孔配入384-孔平板过夜饥饿(18-20小时)。在第2天，在37。C、 5% C02 下用0.5 mL DMSO、化合物或rhTpo(30 ng/mL)将饥饿细胞处理7小时。 将在水中稀释至60%的Perkin Elmer Britelite(25 mL)加入到各孔中并且 在几分钟后，在CLIPR上读取平板以便记录发光信号。增殖测定洗涤Ba/F3-TPO-R细胞并且重新悬浮于以8x 104个细胞/mL补充了 1% FBS， 1% Pen-Strep画Glu和1 mM或25jiM ZnS04的RPMI-1640中并 且以50 mL/孔配入384-孔平板过夜饥饿(18-20小时)。在第2天，在37°C， 5% C02下用0.5 mL DMSO、化合物或rhTpo(30 ng/mL)将饥饿细胞处理 48小时。将Alamar Blue试剂(在 7。/。终浓度下的3.5pL)加入到各孔中， 将平板赙育4小时并且在Analyst GT上读取以便记录荧光信号。CFU-Meg测定将CD34+细胞和MegaCult-C试剂盒(StemCell Technologies, Inc" Vancouver, Canada)用于本测定。将CD34+细胞以104个细胞/载玻片与 MegaCult-C胶原蛋白溶液按照制造商的方案混合。在以不同浓度添加 TPO或本发明的化合物后，将载玻片在37。C、 5。/。C02下孵育12天，固 定，染色人CFU-Meg并且使用倒置显微镜对集落进行定量。游离形式或可药用盐形式的式I的化合物表现出有价值的药理学特 性，例如本申请中所述的体外试验中所示。本发明的化合物优选表现出 TPO才莫拟物活性，其中ICso在1 x l(T9 - 1 x 10-5M的范围，优选低于500nM， 更优选低于250nM。式I的化合物表现出相对于TPO 25% - 150%范围的 有效性。应理解本文所述的实施例和实施方案仅用于解释目的，并且可以提示和范围内以及待批权利要求范围内。为所有目的而将本文51述的全部公开 文献、专利和专利申请引入本文作为参考。
权利要求
1.式I的化合物及其可药用盐、水合物、溶剂合物和异构体id="icf0001" file="S2006800374588C00011.gif" wi="40" he="33" top= "53" left = "96" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中n选自0、1、2和3；Z选自N和CR8；其中R8选自氢、卤素、C1-6烷基、卤素-取代的-C1-6烷基；其中R8的任意烷基可任选地有被选自-S(O)0-2-、-C(O)-、-NR9-和-O-的原子或基团替换的亚甲基；其中R9选自氢和C1-6烷基；R1、R2、R4和R5独立地选自氢、卤素、羟基、氰基、硝基、-XNR9R10-、C1-6烷基、卤素-取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基和卤素-取代的-C1-6烷氧基；其中X选自键和C1-6亚烷基；且R9和R10独立地选自氢和C1-6烷基；R3选自氢、C1-6烷基、C3-8杂环烷基、C5-10杂芳基、-OS(O)2R11、-NR11S(O)2R12、-NR11C(O)R12、-NR11C(O)NR11R12、-NR11C(O)C(O)OR12、-NR11C(O)OR12、-OC(O)NR11R12、-C(O)OR11、-C(O)R13、-NR11R12、-NR11R13、-S(O)2NR11R12和-C(O)NR11R12；其中R11和R12独立地选自氢、C1-6烷基、卤素-取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基和被-NR9R10取代的C1-6烷基；R13是任选被1至3个C1-6烷基基团取代的C3-8杂环烷基；其中R3的任意杂环烷基或杂芳基可任选地进一步被1至3个独立地选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、卤素-取代的-C1-6烷基和卤素-取代的-C1-6烷氧基取代；R6选自卤素和C1-6烷基；且R7选自卤素、氰基、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、卤素-取代的-C1-6烷基、C6-10芳基、C5-10杂芳基、C3-8杂环烷基和C3-12环烷基；其中任意烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选地被1至5个独立地选自以下的基团取代卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、卤素-取代的-C1-6烷基、卤素-取代的-C1-6烷氧基、-NR14R15、-XOR14、-S(O)2R14、C3-12环烷基、C3-8杂环烷基、C6-10芳基和C3-8杂芳基；其中X是键或C1-6亚烷基且R14和R15独立地选自C1-6烷基、氰基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、卤素-取代的-C1-6烷基和卤素-取代的-C1-6烷氧基；其中R7的任意芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基取代基可任选地进一步被1至3个独立地选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、卤素-取代的-C1-6烷基和卤素-取代的-C1-6烷氧基取代。
2.权利要求1的式Ia化合物n选自0、 1、 2和3; m选自0、 1、 2、 3、 4和5;Z选自N和CRs;其中Rs选自氢、卤素、d-6烷基、卤素-取代的-d-6 烷基；其中R8的任意烷基可任选地有被选自國S(0)o-2-、 -C(O)-、 ^119國和-0画 的原子或基团替换的亚甲基；其中R9选自氢和C!—6烷基；R，、 R2、 R4和Rs独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、-XNR9R10-、 d_6 烷基、卣素-取代的-C,，6烷基；其中X选自键和d—6亚烷基；且R9和Rk) 独立地选自氢和d-6烷基；R3选自-XCOOR" -XCONR9R10、 NRnS(0)2Ru 、 S(0)2R函2 、 -NR C(0)R12 、 NR C(0)NRuR12 、 NR C(0)C(0)OR12 和 -NRuC(O)ORu;其中X选自键和Q_6亚烷基；且R9和R10独立地选自氢 和C,—6烷基；Re选自囟素和d,6烷基；且R加选自卤素和Cw烷基。其中:
3. 权利要求2的化合物，其中R6为氟且R2o选自氟、曱基和丁基。
4. 权利要求3的化合物，其中R3选自羧基、^J^M、 Jl^-磺酰基、甲基-磺酰基-氨基和氨基；且R4选自氢、羟基、硝基和氨基。
5. 权利要求4的化合物，其选自4-6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲 哚-2-基-苯曱酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-苯曱酰胺；4-[7-氣_6_(4_氟_3-甲基-苯基)-lH-吲咮-2-基-苯甲酸；4-[7-氟-6-(4-氟-3-甲基-苯 基)-lH-吲哚-2-基]-苯磺酰胺；4-[6-(4-丁基-苯基)-3-乙基-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-羟基-苯曱酸;4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-异丙基-lH-吲咮-2-基-2-羟基 -苯曱酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-羟基-苯曱酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-甲基-lH-吲哚-2-基-2-羟基-苯甲酸；4-[6-(4-丁基-苯 基)-lH-苯并咪唑-2-基]-苯甲酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-111-苯并咪唑-2-基-2-羟基-苯曱酸；N-H-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基苯基卜甲磺酰胺； N-(4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基]苯基卜乙酰胺；N-(4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-氯-苯基卜乙酰胺；4-6-(4-丁基-苯基)-7-氟-111-吲咮-2-基]-2-氯-苯胺；和2-絲國4-[6画(4-丁基画苯基)画7國氟-111画吲哚画2画基]國苯 甲酸。
6. 药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1的化合物与可药用赋 形剂。
7. 治疗动物疾病的方法，其中升高的血小板水平可以抑制或改善所述 疾病或病症的病理学和/或症状学情况，该方法包含对所述的动物施用治疗 有效量的权利要求1的化合物。
8. 权利要求1的化合物在制备用于治疗动物疾病的药物中的用途，其 中降低的血小板水平对所述疾病或病症的病理学和/或症状学起作用。
全文摘要
本发明提供了一类新的化合物、包含这类化合物的药物组合物和使用这类化合物治疗或预防与异常或失调的TPO活性相关的疾病或障碍特别是涉及血小板减少的疾病或障碍的方法。
文档编号C07D209/14GK101282929SQ200680037458
公开日2008年10月8日 申请日期2006年8月15日 优先权日2005年8月15日
发明者D·穆特尼克, P·阿尔佩尔, T·马尔希杰, 耘 贺, 陆文硕 申请人:Irm责任有限公司