专利名称：作为蛋白激酶调节剂的3-氨基羰基取代的稠合的吡唑衍生物的制作方法
作为蛋白激酶调节剂的3-氨基羰基取代的稠合的吡唑衍生物本发明涉及吡唑并[l，5-a嘧啶-3-曱酸类化合物；其在治疗对蛋白激酶 调节有响应的疾病中的用途或在制备用于治疗所述疾病的药物制剂中的用途；包含所述化合物和可药用载体的药物制剂，尤其是用于所述疾病的药 物制剂；用于治疗动物或人体的、尤其是治疗所述疾病的所述化合物；治 疗动物或人体的方法，其包括给动物或人施用所述化合物；以及制备所述 化合物的方法，其中在提及化合物的各种情况中，所述的化合物可以以化 合物本身和/或盐(优选可药用盐)的形式存在。术语"蛋白激酶"定义了一类具有酶促活性的蛋白，其中可分为受体型 激酶和非受体型激酶，以及酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶。就其定位而言， 可分为核、细胞质和膜的相关激酶。许多与膜相关的酪氨酸激酶同时也是 生长因子的受体。就其催化活性而言，蛋白激酶(PK)是催化细胞内蛋白特定的丝氨酸、 苏氨酸或酪氨酸残基的磷酸化的酶。这种底物蛋白的翻译后修饰通常用作 分子开关，其代表了一种调节细胞增殖、活化和/或分化的步骤。已经在一 些疾病状态中观察到了异常或过度的或更通常是不适宜的PK活性，所述 疾病状态包括良性和恶性增殖病症。在许多情况下，能够利用PK抑制剂 对疾病进行体外和体内的治疗，例如增殖病症。过去数年来，已经了解了 Eph受体酪氨酸激酶及其配体Ephrins的基 本作用。已经根据其对受体的亲合力对一些不同的Eph受体进行了编目并 将其分成EphA或EphB亚类。已经鉴定了至少8种Ephrins,其为连有 甘油基磷脂酰肌醇(GPI)型(ephrinA)或跨膜型(ephrinB)的膜蛋白。Eph受 体及其配体之间的信号转导似乎局限于细胞-细胞直接接触的部位。接触的 结果是诱导了细胞间一些相互的双向事件。认为Ephrins及其受体在某些 部位的表达对组织模式以及空间非常有限的细胞定位的组构有影响。其中5的一些具体影响包括改变细胞迁移、粘附和体节形成。EphB4 (也被称为HTK)及其配体ephrinB2 (HTKL)在血管网络的建 立和确定中起着重要作用。EphB4在静脉上皮上特异性地表达，而在血管 发育早期，ephrinB2在动脉内皮细胞上特异性地和相应地表达。机能障碍 的基因导致了小鼠胚胎的致死性，在ephrinB2或EphB4有缺陷的情况中， 胚胎在形成毛细血管连接方面表现出相同的缺陷。在胚胎发生期间，二者 都在血细胞生成和血管发育的第一位点上表达。已经确定了其对于适当的 造血、内皮、成血管细胞和原始中胚层的发育有重要作用。EphB4的缺乏 导致胚胎干细胞的中胚层分化结果被改变。EphB4在乳房组织中的异位表 达使乳房的体系结构混乱、组织功能异常并有恶性化倾向(参见例如N. Munarini等人，丄Cell. Sci. 1^, 25-37(2002))。根据这些数据和其它数据， 认为不恰当的EphB4表达可能参与了恶性肿瘤的形成，因此，预期EphB4 的抑制将是对抗恶性肿瘤例如癌症等的 一种手段。在细胞中发现的酪氨酸激酶c-Src的组成型表达的病毒形式c-Src(得 自Rous肉瘤病毒， 一种逆转录病毒)是Src蛋白酪氨酸激酶的不恰当表达 怎样导致基于转化细胞的恶性肿瘤的一个实例。抑制Src蛋白酪氨酸激酶 可以抑制例如在结締组织肿瘤中的转化的肺瘤细胞的失控生长。因此，也 预期c-Src或其纟务饰或突变形式的抑制将对治疗增殖性疾病产生有益影响。已知VEGFR(血管内皮生长因子受体)参与了血管生成起始的控制。由 于实体瘤特别依赖于良好的血液供应，因此在该类肿瘤的治疗中，正在对抑制VEGFR并由此抑制血管生成进行临床研究，并且显示出一些有希望 的结果。VEGF在白血病和淋巴瘤中也是主要的参与者，其在许多恶性实 体瘤中高表达，与恶性疾病的进程联系紧密。表达VEGFR-2(KDR)的肿瘤 疾病的实例有肺癌、乳腺癌、非何杰金氏淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、恶性 胸膜间皮瘤和黑素瘤。除了其血管生成活性外，VEGFR的配体VEGF还 可通过对肿瘤细胞直接的促存活(pro-survival)作用促进肿瘤生长。还有许 多其他疾病与失控的血管生成有关，例如下文所述的疾病。在患有慢性髓性白血病(CML)的患者中观察到"6/原癌基因转化为癌6基因。染色体易位将22号染色体上的6"基因连接到9号染色体的W/基 因上，从而产生了费城染色体。所产生的融合蛋白具有与Abl酪氨酸蛋白 激酶的tt末端相连的Bcr蛋白的氨基末端。结果，Abl激酶结构域被不 适当的激活，驱使骨髓中造血细胞克隆的过度增殖。已经表明用该融合蛋 白的抑制剂，活性成分GleevecTM或Glivec⑧(诺华公司(Novartis)的商标) 来抑制这种酪氨酸激酶是非常有效的CML疗法。因此，可以证实Abl酪 氨酸激酶的不充分表达可治疗恶性肿瘤、尤其是白血病的一般观念。但是，迄今为止，用作蛋白激酶抑制剂的许多化合物有以下缺点缺 乏特异性、具有不希望的副作用(该副作用是由于不利的对一种以上类型的 蛋白激酶的抑制特性造成的)、由于特异性太高而缺乏效力、仅对某些疾病 有效、在给药期间产生耐受性和/或类似的不希望的特性。这引起了本发明所要解决的问题特别是由于有大量的蛋白激酶抑制 剂和多种增殖性疾病及其它与蛋白激酶相关的疾病，以及由于对某些疗法 形成耐受性，因此一直需要提供可用作蛋白激酶抑制剂并因此可用于治疗 这些与蛋白酪氨酸激酶如丝氨酸/苏氨酸和/或优选PTK(蛋白酪氨酸激酶) 相关的疾病的新类型化合物。所需的是药学上有利的抑制蛋白激酶、特别 是PTK的新类型化合物，尤其是具有以下有利性质的化合物例如对有限 组的或甚至单个的蛋白激酶具有高亲合力和/或选择性、对于已经对不同类 型化合物有耐受性的情况有活性、对特定组的激酶具有有用的亲合性等等。 换言之，需要能解决所述问题或其它问题的新的蛋白激酶抑制剂。已经描述了可用作治疗例如糖尿病和与TIE-2激酶相关疾病的GSK3 激酶抑制剂的某些4-取代的亚肼基吡唑并嗜咬类，见WO 04/009602、 WO 04/009596或WO 04/009597。另一方面，已经描述了作为p38-抑制剂的某 些酰基-或酰基氨基-取代的芳基氨基-吡唑并嘧啶类，参见WO 03/099280。现已令人吃惊地发现，本发明的3-(取代的氨基)-吡唑并3，4-dj嘧啶化 合物可以抑制许多可能参与由营养因子介导的信号传递和涉及蛋白激酶活 性的疾病表现(例如增殖性的(例如肿瘤)生长)的蛋白激酶，尤其是选自下述 蛋白酪氨酸激酶的代表性实例src激酶家族，尤其是c-src激酶；VEGF-7受体激酶(例如KDR和Flt-l); RET-受体激酶和/或Ephrin受体激酶，例 如EphB2激酶、EphB4激酶或相关激酶；还有abl激酶，尤其是v-abl或 c-abl激酶；b-raf (V599E); EGF受体激酶或EGF家族的其它激酶，例如 HER-1或c-erbB2激酶(HER-2)、 Flt-3、 Ick、 fyn、 c画erbB3激酶、c國erbB4 激酶；PDGF-受体酪氨酸蛋白激酶家族的成员，例如PDGF-受体激酶、 CSF-1受体激酶、Kit-受体激酶(c-Kit)、 FGF-受体激酶，例如FGF-R1、 FGF-R2、 FGF画R3、 FGF-R4、 c-Raf、酪蛋白激酶(CK-1、 CK-2、 G-CK)、 Pak、 ALK、 ZAP70、 Jakl、 Jak2、 Axl、 Cdkl、 cdk4、 cdk5、 Met、 FAK、 Pyk2、 Syk、 Tie-2、胰岛素受体激酶(Ins-R)、胰岛素样生长因子的受体激 酶(IGF-1激酶)和/或其他丝氨酸/苏氨酸激酶，例如蛋白激酶C(PK-C)、 PK-B、 EK-B或cdc激酶如CDKl，以及这些激酶中任:何一种或多种的突 变(例如组成型活化)形式(例如Bcr-Abl、 RET/MEN2A、 RET/MEN2B、 RET/PTC1-9或b-raf (V599E))。所有这些和其它蛋白激酶都在包括人细胞^ 在内的哺乳动物细胞的生长调节和转化中起作用。特别是可以发现对细胞 的Eph4B激酶非常有效。由于这些活性，本发明的化合物可用于治疗对蛋白激酶调节有响应的 疾病，例如特别是与该类激酶的活性异常(例如不可控的、失控的或组成型 等)或活性过度有关的疾病，特别是所提到的那些疾病，并且最特别的是所 提到的那些优选的疾病。一方面，本发明提供了吡唑并[l，5-aj嘧啶-3-曱酸衍生物和1，4-二氢吡 唑并l，5-al嘧啶-3-曱酸衍生物，例如式I的化合物其中
Rl不存在，或为H或Cw烷基；
R2为H、苯基，所述苯基被Cw烷氧基或含N的具有6个环原子的 杂环基单或二取代，所述杂环基任选地纟皮Cw烷基取代； R3为d—7烷基，或-NH-CO-苯基或-CO-NH-苯基， 其中所述苯基未被取代或被Cw烷基、卣代Cw烷基、C^烷氧基或
卣素取代；
n为0-2，
条件是
当R1不存在时，虚线表示所得嘧啶环中Nl和C2、 C3和C4之间的 两个双键，或者
当Rl为氢时，虛线表示所得1，4-二氢嘧啶环中C2和C3之间的双键。 在式I的化合物中，Rl优选为不存在或为氢。
在式I的化合物中，R2优选为氢、被d-4烷氧基单或二取代的苯基、 或被具有6个环原子和1或2个氮杂原子的饱和杂环基取代的苯基，所述 杂环基任选地被d—4烷基取代，例如被曱基取代的旅溱基。
在式I的化合物中，R2更优选为氢、甲基-哌嗪-l-基-苯基，例如4-曱基-哌溱-l-基-苯基，如3-(4-甲基-哌溱-l-基)-苯基，或二曱氧基苯基，例 如3,4-二甲氧基苯基。
在式I的化合物中，n优选为l或2，例如2。
在式I的化合物中，R3优选为Cw烷基或-NH-CO-苯基或-CO-NH-
苯基，
其中所述苯基未被取代或被Cw烷基、卣代Cw烷基、C^烷氧基或
卣素取代。
在式1的化合物中，R3更优选为曱基或-NH-CO-苯基或-CO-NH-苯基， 其中所述苯基未被取代或被曱基、CF3、甲氧基或卣素例如氟所取代。 另一方面本发明提供了式I的化合物，其中R2为H，其他基团如上 所定义。
9在式I的化合物中，所定义的取代基的每个单一基团可以是取代基的 优选基团，例如各自独立的取代基基团或所定义的单一取代基。在式I的 化合物中，所定义的每个单独的取代基可以是优选的取代基，例如各自独 立的取代基基团或所定义的单个取代基。
另一方面本发明提供了式I的化合物，其中任何基团R1、 R2、 R3和 n具有上文所定义的含义，或具有上文所定义的优选的含义，或具有上文 所定义的更优选的含义。
另一方面本发明提供了式I的化合物，其中R1、 R2、 R3和n均具有
上文所定义的优选或更优选的含义。
另一方面本发明提供了式I的化合物，其选自下述
吡唑并1 ，5-31嘧啶-6-曱酸[2-曱基-5-(3-三氟甲基-苯基氨曱酰基)-苯基卜
酰胺；
吡唑并1 ，5-al嘧啶-6-曱酸[2-曱基-5-(3-三氟甲基-苯曱酰氨基)-苯基卜酰
胺；
4,7-二氢-吡唑并[1 ，5-a嘧啶-6-曱酸[2-甲基-5-(3-三氟曱基-苯基氨甲酰 基)-苯基-酰胺；
3-3-(4-甲基-哌溱-l-基)-苯基I-吡唑并[1 ，5-aj嘧啶-6-曱酸(2，6-二曱基-苯基)-酰胺；
3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[l，5-a嘧啶-6-曱酸(2，6-二曱基-苯基)-酰
胺；
吡唑并[1 ，5-al嘧啶-6-甲酸[5-(4-氟-3-三氟曱基-苯曱酰氨基)-2-曱基-苯 基l-酰胺；和
吡唑并11，5-31嘧啶-6-甲酸5-(4-甲氧基-3-三氟曱基-苯曱酰氨基)-2-曱 基-苯基l-酰胺。
在本文中，除非另有说明，否则上下文中所用的一般术语或符号具有 下面的含义
术语"低级"或"Q.7-"定义了一种具有高至并包括最多7个，尤其是高 至并包括最多4个碳原子的部分，所述部分是支链(分支一次或多次)或直
10链的。低级或d.7-烷基例如是正-戊基、正-己基或正-庚基，或优选(:1-<:4-烷基，尤其是甲基、乙基、正-丙基、仲-丙基、正-丁基、异丁基、仲-丁基、
叔-丁基。在低级链烯基或低级炔基的情况中，低级优选地指"C2-7"-，更优 选地指"C2,"。
卣代或卣素优选地是氟、氯、溴或碘，最优选地是氟、氯或溴。
未被取代或被取代的杂环基优选地是具有6个环原子的N杂环基，其 为不饱和的、饱和的或部分饱和的，该杂环基团(杂环基)未被取代或被C,-7 烷基取代。优选的，该N杂环基是饱和的。优选该N杂环基是派噪基。
本发明提供的化合物在下文中称作"(根据)本发明的化合物"。本发 明的化合物包括以任何形式的化合物，例如游离形式或共晶体形式，例如 盐形式、溶剂化物形式以及盐和溶剂化物形式。
另一方面本发明提供了盐形式的本发明化合物。
所述盐类优选地包括可药用盐，但是也包括不可药用的盐，例如用于 制备/分离/纯化目的的盐。
所述盐类可在盐形成基团例如碱性或酸性基团存在下形成，其可以在 例如pH4-10的水性环境中至少部分的以解离形式存在或者可以以特别是 固体的形式分离，或者在带电基团(例如季铵)存在下形成盐，在后一种情 况下，与有机酸或无机酸(例如下一段中所定义)的阴离子形成酰化产物盐。
例如，所述盐类可以形成酸加成盐形式，优选由具有碱性氮原子的式 I化合物与有机酸或无机酸形成的盐，优选可药用的盐。适宜的无机酸例 如氢卣酸，如盐酸、硫酸或磷酸。适宜的有机酸例如羧酸、膦酸、磺酸或 氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、乳酸、富马酸、琥珀酸、柠檬酸、氨基酸如 谷氨酸或天冬氨酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、苯曱酸、曱磺酸 或乙磺酸、乙烷-l，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘-二磺酸、N-环己 基氨基磺酸、N-曱基-、N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸，或其它有机质子酸， 如抗坏血酸。
在存在带负电的基团如羧基或磺基的情况中，还可以与碱形成盐，例 如金属盐或铵盐，如碱金属或碱土金属盐，例如钠、钾、镁或钩盐，或者
ii是与氨或适宜的有机胺如一元叔胺、例如三乙胺或三(2-羟基乙基)胺，或杂 环的碱例如N-乙基-哌啶或N，N，-二曱基哌溱形成的铵盐。
当在同一分子中同时存在碱性基团和酸性基团时，式I的化合物还可 以形成内盐。
对于分离或纯化目的而言，还可以使用不可药用的盐，例如苦味酸盐 或高氯酸盐。对于治疗应用而言，仅使用可药用的盐或游离化合物(在适用 的情况下被包含在药物制剂中)，并且因此优选这些盐。
由于本发明化合物的游离形式和其盐形式(包括那些可用作中间体的
系，在上下文中，在任何时候涉及"化合物，，(也包括原料和"中间体")、尤 其是式I的化合物时，在适宜和方便的情况下并且如果没有另外的明确描 述，则其应当被理解为还涉及其一种或多种盐或者游离化合物与其一种或 多种盐的混合物，其各自还包括式I化合物的任何溶剂化物、代谢前体如 酯或酰胺，或者任何一种或多种这些物质的盐。可以获得不同的晶形和溶 剂化物，并且本发明也包括这些晶形和溶剂化物。
本发明游离形式的化合物可被转化为相应的盐形式的化合物；并且反 之亦然。本发明游离形式或盐形式和溶剂化物形式的化合物可被转化为相 应的游离形式或非溶剂化物的盐形式的化合物；并且反之亦然。
本发明的化合物可以以异构体及其混合物的形式存在；例如光学异构 体、非对映异构体、顺/反构象异构体。本发明的化合物可以例如包含不对 称碳原子，并因此以对映异构体或非对映异构体及其混合物，例如外消旋 物的形式存在。对于本发明化合物的每个不对称碳原子上的取代基而言， 本发明的化合物可以(R)-、 (S)-或(R，S)-构型，优选以(R)-或(S)-构型存在。 本发明的化合物可包含两种或更多种所述异构体，例如对映体的混合物、 尤其是外消旋物，以及优选纯化的异构体，尤其是纯化的对映体或对映体 富集的混合物。
异构体混合物可按照例如类似于常规的方法进行适当分离，以获得纯 的异构体。
12异构体混合物，例如非对映异构体的混合物，可通过本身已知的方式 利用合适的分离方法分离成其相应的异构体。非对映异构体混合物例如可 通过分步结晶、色谱、溶剂分配和类似的方法分离成其单个的非对映异构 体。该分离可在一种起始化合物或式I化合物本身的水平上进行。对映异 构体可通过形成非对映异构的盐，例如通过与对映异构体纯的手性酸形成
盐来分离；或借助色谱，例如使用带手性配体的色谱基质通过HPLC分离。
本发明包括任何异构体及任何异构体混合物形式的本发明化合物。 当可能存在互变异构体时，本发明还包括本发明化合物的互变异构体。 另一方面，本发明提供了一种制备本发明化合物(例如式I)的方法，其
包括以下步骤
a.将其中R2如上文所定义的式V的化合物
o
R2
或式V，的化合物
N O
H。N
其中R3如上文所定义；
b.从反应混合物中分离所得的式I化合物，
并且，如果需要的话，将式I的化合物转化成式I的不同化合物，将 获得的式I化合物的盐转化成游离化合物或不同的盐，将获得的式I的游
13离化合物转化成其盐，和/或将荻得的式I化合物的异构体混合物分离成单 个的异构体。
在式V、 V，或VI的中间体(原料)中，官能团如果存在的话，任选地可
为被保护形式，或者如果存在成盐基团的话为盐形式。任选存在的保护基 团可以在适当的阶段去除，例如根据例如类似于常规的方法去除。
上述反应为羧酸酰胺，可以例如类似于常规方法适当的进行。
式I的化合物可被转化成式I的不同化合物。
具有至少一个成盐基团的式I化合物的盐可以以本身已知的方式进行 制备。例如，可以通过用金属化合物如适宜的有机羧酸的碱金属盐，例如
2-乙基己酸的钠盐，用有机碱金属或碱土金属化合物，例如相应的氢氧化 物、碳酸盐或碳酸氢盐，如氢氧化钠或氢氧化钾、碳酸钠或碳酸钾或碳酸 氢钠或碳酸氢钾，用相应的4丐化合物或用氨或适宜的有机胺处理该化合物 来形成具有酸性基团的式I化合物的盐，优选地使用化学计量量或仅少量 过量的成盐试剂。可以用常规方式获得式I化合物的酸加成盐，例如可以 通过用酸或适宜的阴离子交换试剂处理式I的化合物来获得。可以形成包 含酸性和碱性成盐基团例如游离羧基和游离氨基的式I化合物的内盐，例 如通过用弱碱将盐例如酸加成盐中和至等电点或者用离子交换剂处理来形 成内盐。
可以用常规方式.将式I化合物的盐转化成游离化合物；例如可以通过 用适宜的酸处理来对金属盐或铵盐进行转化，和通过用适宜的碱性试剂进 行处理来对酸加成盐进行转化。在这两种情况中，都可以使用适宜的离子 交换剂。
可以根据标准方法对中间体和终产物进行后处理和/或纯化，例如可以 用色"^普法、分配法、(重)结晶法等来进行后处理和/或纯化。
中间体(原料)在现有技术中是已知的、商业上可获得的或者可以根据 现有技术中已知的方法或按本文所述进行制备。如果没有特别提及，则可 以在适宜的步骤中引入和除去保护基团，以避免官能团在相应反应步骤中 发生不希望的反应，在上下文中描述了使用保护基团、引入和除去保护基
14团的方法，例如参见"一般反应条件"下所述的参考文献。本领域技术人员 能容易地确定保护基团是否有用或是否需要以及需要何种保护基团。
在原料中使用Rl、 R2、 R3、 R4和n的情况下，如果在上下文中没有 特别说明，则这些符号优选地具有对式I化合物所给出的含义。 例如，原料可优选地制备如下 例如，其中R2如上文所定义的式II的原料
通过与二 C,-7-烷基乙氧基亚甲基丙二酸酯的反应，按照例如类似于
Yasuo Makisumi， Chem. Pharm. Bull. 1962，巻10， 620-26页中所述的方法 制备。
式II的材料可按照例如类似于Robert H. Springer等人，J. Med. Chem. 1982，巻25， 235-42页所描述的方法，例如用POC13卣化获得式III的原 料，
其中Hal为卣素，特别是氯、碘或溴但不是氟，且R2如上文所定义。 式IV或式IV，的原料
可以从其中R2如上文所定义的式II，化合物
15IV
IV'
可分别被皂化得到式V或式V，的原料' 以
已知的、商业上可获得的和/或可以根据标准方法进行制备，例如通过实施 例中所述的方法或与其类似的方法进行制备。
本文中所述的任何化合物，例如本发明的化合物和式ii、 n，、 ni、 iv、 iv，、 v和v，的中间体可以例如按照例如类似于常规的方法，例如本文中 所述的方法适当的制备。
以下应用通常适用于上文和下文中所有提及的方法，同时优选上下文 中特别提到的反应条件。
在上下文所提及的任何反应中，在适宜或需要的情况下即使没有特别 提及，也可以用保护基团对不需要参与给定反应的官能团进行保护，并且 它们可在适宜的或所需的阶段被引入和/或除去。因此，在本说明书中描述 的没有特别提及保护和/或去保护的反应也可能包括使用保护基团的反应。
在本文的范围中，除非特别说明，否则只有不是所需式i终产物的特 定组成部分的容易除去的基团被称为"保护基团"。在例如标准参考著作，
如丄F. W. McOmie，"有机化学中的保护基团(Protective Groups in Organic Chemistry)", Plenum Press,伦享文和纽约1973; T. W. Greene和 P. G. M. Wuts，"有机合成中的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)",第三版，Wiley,纽约1999;"肽类(The Peptides)",第3巻(主 编E. Gross和J. Meienhofer)， Academic Press，伦敦和纽约1981; "Methoden der organischen Chemie，，(有机化学方法)，Houben Weyl，第4
16版，第15/1巻，Georg Thieme Verlag， Stuttgart 1974; H.陽D. Jakubke和H.Jeschkeit， "Aminosauren， Peptide, Proteine，，(氨基酸、肽类、蛋白质)，Verlag Chemie， Weinheim， Deerfield Beach，和Basel 1982; 以及JochenLehmann, "Chemie der Kohlenhydrate:Monosaccharide und Derivate"(碳水化合物化学单糖和衍生物)，Georg Thieme Veiiag， Stuttgart 1974中对使用这类保护基团对官能团进行的保护、保护基团本身以及适合用于除去所述保护基团的反应进行了描述。保护基团的特性在于其可以容易地^^除去(即不会发生不希望的继发反应)，例如通过溶剂解、还原、光解被除去或者在生理条件下^L除去(例如通过酶裂解^f皮除去)。
所有上述方法步骤都可以在本身已知的反应条件下进行，优选地在上面具体提及的条件下，在不存在或通常存在溶剂或稀释剂、优选对所用试剂为惰性并且可溶解所用试剂的溶剂或稀释剂的情况下，在不存在或存在催化剂、缩合剂或中和剂例如离子交换剂、例如阳离子交换剂、例如H+型交换剂的情况下进行，这取决于反应和/或反应物的性质，并且在降低、正常或升高的温度，例如约-100。C至约1卯。C、优选约-80。C至约150°C、例如-80至-60。C、室温、-20至40。C或在回流温度下，在大气压下或在密封容器中、在适宜时为加压条件下和/或在惰性气氛例如氩气或氮气气氛中进行。
除非在方法的描述中特别说明，否则溶剂可以选自那些被选择适用于任何特定反应的溶剂，包括那些具体提及的溶剂，或者例如水；酯类，如低级烷基-低级链烷酸酯，例如乙酸乙酯；醚类，如脂肪族醚类，例如乙醚，或环醚类，例如四氢呋喃或二 恶烷；液态芳烃类，如苯或甲苯；醇类，如曱醇、乙醇或l-或2-丙醇；腈类，如乙腈；卣代烃类，例如二氯曱烷或氯仿；酰胺类，如二甲基曱酰胺或二曱基乙酰胺；碱类，如杂环氮碱，例如吡啶或N-曱基吡咯烷-2-酮；羧酸酐，如低级链烷酸酐，例如乙酸酐；环状、直链或支链的烃类，如环己烷、己烷或异戊烷，或这些溶剂的混合物，例如水溶液。这些溶剂混合物也可用于后处理中，例如通过色语法或分配进行的后处理。
17本发明还涉及所述方法的那些形式，其中在所述方'沬的任何阶段以中间体形式获得的化合物被用作原料并进行其余处理步骤，或者其中原料在所说反应条件下形成或者以其衍生物形式例如被保护形式或盐形式被使
原位对其进行进一步处理。在本发明的方法中，优选使用那些产生所迷的优选的式I化合物的原料。本发明还涉及新中间体和/或原料。特别优选与实施例中所述条件相同或相似的反应条件。
本发明的化合物例如包括式I的化合物，具有药理学活性，因此可用作药物。例如，发现本发明的化合物抑制蛋白激酶的活性。
本发明化合物在调节蛋白激酶中的用途、尤其是作为蛋白激酶抑制剂的用途，可以通过下述用于在上文中被描述为优选的蛋白激酶的试验体系
进行特别地和例证性地证明
在以下典型的示例性的测试系统描述中，下面的缩写具有如下含义DMSO = 二曱基亚砜；DTT = 二硫苏糖醇；EDTA =乙二胺四乙酸盐；MOI =感染复数；PMSF =对-曱苯磺酰氟；Tris =三(羟曱基)氨基曱烷。如果没有另外说明，则"抑制剂，，是指式I的待测化合物。
可以如下证明本发明化合物，例如式I化合物作为Ephrin B4受体(EphB4)激酶抑制剂的效力
Bac-to-BacTM (Invitrogen Life Technologies, Basel,瑞士) GST-融合表达载体的产生通过PCR，从得自人胎盘或脑的cDNA库分别扩增EphB-类的完整的细胞质编码区。产生表达人EphB4受体的笫566-987位氨基酸区域的重组杆状病毒(SwissProt Database,登记号P54760)。将GST序列克隆到pFastBacl⑧载体(Invitrogen Life Technologies, Basel,瑞士)中并将其PCR扩增。将编码EphB4-受体结构域的cDNA分别克隆到框中GST序列的3，-段从而插入到这种修饰的FastBacl载体中以产生pBac-to-BacTM供体载体。对得自该转化的单个菌落进行接种，获得过夜培养物，用于进行小规模质粒制备。质粒DNA的限制酶分析表明一些克隆包含了预期大小的插入片段。通过对插入片段自动测序，证实了在两臂中约50 bp的侧
18翼载体序列。
病毒的制备:如果没有特别说明，则根据GIBCO提供的方案制备用于各激酶的病毒。简单地说，将包含所述激酶结构域的转移载体转染到DH10Bac细胞系(GIBCO)中并将其涂到选择性琼脂平板上。不含有插入到病毒基因组(由该细菌携带)中的融合序列的菌落为蓝色。挑选出单个的白色菌落并用标准的质粒纯化操作从细菌中分离出病毒DNA(杆粒)。然后，根据该方案，用Cellfectin试剂在25 cm2的培养瓶中用病毒DNA转染Sf9细胞或Sf21细胞。
GST-标记的激酶的纯化:将已离心的细胞溶胞产物上样到2mL的谷胱甘肽-琼脂糖柱(Pharmacia)上，用10 mL 25 mM Tris-HCl， pH 7.5、 2mMEDTA、 1 mM DTT、 200 mM NaCl洗涤三次。然后，通过采用10次(每次1 mL) 25 mM Tris-HCl， pH 7.5、 10 mM还原型谷胱甘肽、100 mMNaCl、 lmMDTT、 10。/。甘油来洗脱GST-标记的蛋白并将其储存在-70。C下。
蛋白激酶试验:通过测量由[y"PATP掺入到作为底物的谷氨酸和酪氨酸聚合物(聚(Ghi，Tyr))中的33P来对存在或不存在抑制剂情况下的蛋白激酶活性进^f亍分析。^使用纯化GST-EphB (30ng)的激酶试-验在环境温度下以30fiL的终体积进行15-30分钟，在所述体积中包含20 mM Tris-HCl ,pH7.5、 10mMMgCl2、 3-50 mM MnCl2、 0.01 mM Na3V04、 l%DMSO、1 mM DTT、 3ng/mL聚(Glu，Tyr) 4:1 (Sigma; St. Louis, Mo" USA)和2.0-3.0 ATP (y-33P-ATP 0.1 pCi)。通过加入20 125 mM EDTA来终止该试验。随后，将40 pl反应混合物转移到预先用甲醇浸泡了 5分钟的Immobilon-PVDF膜(Millipore， Bedford, MA，USA)上，用水清洗，然后用0.5。/。H3P04浸泡5分钟，将其安放到具有断开的真空源的多头抽真空装置上。在安放好所有的样品后，连接真空并将各孔用200 fil 0.5%H3PO4进行洗涤。取下这些膜并将其在振荡器上用1.0。/。H3P04洗涤4次，用乙醇洗涤1次。在将其在环境温度下干燥、安放在Packard TopCount 96-孔框架上、加入10 nL/孔的MicroscintTM(Packard)后，对这些膜进4亍计数。通
19过对一式两份、4个浓度(通常为0.01、 0.1、 1和10 ^M)的各化合物的抑制百分比进行线性回归分析来计算ICso值。 一个蛋白激酶活性单位被定义为在37。C下，每分钟每毫克蛋白从h^PATP向底物蛋白转移1 nmol的33PATP。本发明化合物，例如式I的化合物在低至lnM下表现出对EphB4抑制作用，其ICso值优选地为0.001-10 pM。
或者，可以如下所述测量EphB4受体的自磷酸化作用通过体外试验在细胞例如转染的A375人黑素瘤细胞(ATCC号CRL-1619)中证实对EphB4受体自磷酸化作用的抑制，所述细胞永久表达人EphB4 (SwissProt编号P54760),将其接种到位于6-孔细胞培养板中的完全培养基(含10%胎牛血清=FCS)中，并将其在37°C 、 5%C02下培养，直到表现出约卯％的汇合。然后，将待测化合物用培养基(不含FCS，含有0.1%牛血清白蛋白)稀释并加入到所述细胞中。(对照含有不含待测化合物的培养基)。通过加入lpg/ml可溶的ephrinB2-Fc (s-ephrinB2-Fc: R&DBiosystems,目录号496-EB)和O.l^iM原钒酸盐来引发配体诱导的自磷酸化作用。将其在37。C下再培养20分钟后，细胞用水冷的PBS (磷酸盐緩冲盐水)洗涤两次并将其立即在每孔200 pl裂解緩沖液中裂解。然后，将溶胞产物离心以除去细胞核，用商品化的蛋白质测试盒(PIERCE)测定上清液中的蛋白浓度。然后立即使用该溶胞产物，或者如果需要的话，将其储存在-20。C下。
进行夹心酶联免疫分析以测量EphB4磷酸化作用为了捕获磷酸化的EphB4蛋白，以100ng/孔的数量将ephrinB2-Fc (s-ephrinB2-Fc: R&DBiosystems，目录号496國EB)固定在MaxiSorb (Nunc) ELISA板上。然后，将该板洗涤并将剩余游离的蛋白结合位点用3。/。的在具有吐温20⑧(聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单月桂酸酯，ICI/Uniquema)的磷酸盐緩冲盐水(PBST)中的TopBlock⑧(Juro，目录号TB232010)饱和。然后，将细胞溶胞产物(每孔100 pg蛋白)在这些板中在室温下培养1小时。在用PBS将这些孔洗涤3次后，加入偶联了碱性磷酸酶的抗磷酸化酪氨酸抗体(PY20，偶联了碱性磷酸酶ZYMED，目录号03-7722)并将其再培养1小时。再次对这些板进
20行洗涤，然后用10 mM D-硝基苯基磷酸酯作为底物并在0.5小时-1小时后在405nm下测量其OD来证明抗磷酸化酪氨酸抗体与被捕获磷酸化受体的结合并进行定量。
阳性对照(用钒酸盐和s-ephrinB2-Fc刺激)信号和阴性对照(未刺激)信号间的差异相当于最大的EphB4磷酸化作用(二 100 %)。以最大EphB4磷酸化的抑制百分比形式计算受试物质的活性，其中诱导一半最大抑制的物质浓度被定义为ICso(达到50。/。抑制的抑制剂量)。可以发现本发明化合物，例如式I化合物的ICso值为0.0005至20 pM，优选为0.0005至10 pM。
式I的化合物还可抑制其它酪氨酸蛋白激酶，尤其是例如c-Src激酶，其在动物的、尤其是包括人细胞在内的哺乳动物细胞的生长调节和转化中起作用。Andrejauskas-Buchdunger等人，Cancer Res. 52， 5353-8(1992)描述了一种适宜的测定法。使用这种试验系统，本发明化合物例如式I的化合物可以表现出抑制c-Src的ICso值为例如0.001至20 ^M,通常为0.005至10 nM。
可如下那样证明本发明化合物作为KDR蛋白-酪氨酸激酶活性抑制剂的活性在细胞如转染的CHO细胞中来证实对VEGF-诱导的受体自磷酸化作用的抑制，所述细胞永久表达人VEGF-R2受体(KDR)，将其接种到位于6-孔细胞培养板中的完全培养基(含10%胎牛血清=FCS)中并将其在37°C、 5。/。C02下培养，直到其表现出约80%的汇合。然后，将受试化合物用培养基(不含FCS，含有0.1 %牛血清白蛋白)稀释并加入到所述细胞中。对照含有不含测试化合物的培养基。在将其在37。C下培养2小时后，加入重组VEGF; VEGF的终浓度为20 ng/ml。在将其在37。C下再培养5分钟后，将细胞用冰冷的PBS(磷酸盐緩冲盐水)洗涤两次并将其立即在每孔IO(HU裂解緩沖液中裂解。然后，将该溶胞产物离心以除去细胞核，用商品化的蛋白质测定盒(BIORAD)测定上清液中的蛋白浓度。然后，立即使用该溶胞产物，或者如果需要的话，将其储存在-20。C下。使用这种方法，发现本发明的选择性化合物例如式I的化合物表现出对KDR抑制的IC50值优选地比对c-Abl酪氨酸激酶的ICso值高至少1.5倍，更优选地比对
21EphB4酪氨酸激酶的ICso值高2倍以上。 一般来说，发现本发明化合物例
如式I的化合物在这种试验系统中的ICso值通常为0.001至20 pM，更优
选为0.005至10 jiM。
本发明化合物例如式I的化合物也可以抑制其它蛋白激酶。可以如下那样证明本发明化合物作为c-Abl蛋白-酪氨酸激酶活性抑制
剂的效力
按Gdssler等人在Cancer Res. 1992; 52:4492-4498中所述的滤膜结合试验，在96-孔板中进行体外的酶试验，并对Geissler等人所述的试验进行了下面的修改。按Bhat等人在J.Biol.Chem. 1997; 272:16170-16175中所述，克隆His-标记的c-Abl的激酶结构域并将其在杆状病毒/Sf9系统中表达。通过一种两步骤的方法，在钴金属螯合柱上对37 kD的蛋白(c-Abl激酶)进行纯化，然后用阴离子交换柱纯化，收率为1-2 mg/L Sf9细胞(Bhat等人，引用的参考文献)。在考马斯蓝染色后，通过SDS-PAGE鉴定该c-Abl激酶的纯度>90%。该试验包含(30 pL的总体积)c-Abl激酶(50 ng)、20 mMTrisHCl， pH 7.5、 10 mM MgCl2、 10 Na3V04、 1 mM DTT和0.06 pCi/试验 3 P-ATP(5pM ATP)，在l%DMSO存在下使用30|ag/inL的聚Ala,Glu,Lys，Tyr-6:2:5:l (Poly-AEKY， Sigma P1152)。通过加入lO^iL的250 mM EDTA来终止反应并将30 jiL该反应混合物转移到预先用曱醇浸泡了 5分钟的Immobilon-PVDF膜(Millipore， Bedford, MA, USA)上，用水清洗，然后用0.5。/。H3P04浸泡5分钟，将其安放在具有断开的真空源的多头抽真空装置上。在安放好所有的样品后，连接真空并将各孔用200^10.5%H3PO4进行洗涤。取下这些膜并将其在振荡器上用0.5%H3PO4洗涤(4次)，用乙醇洗涤l次。在将其在环境温度下干燥、安放在Packard T叩Count96-孔框架上、加入10 nL/孔的MicroscintTM(Packard)后，对这些膜进行计数。使用这种系统，本发明的化合物例如式I化合物可以表现出对c-Abl抑制的ICso值为例如0.002至100 nM，其ICso值通常为0.002至5 |liM。
另外，还可以用本发明的化合物，例如式I的化合物抑制b-raf(V599E)。在存在或不存在抑制剂的情况下，通过测量由[Y"PIATP混入到
22(His)-lKB中的33P来检测B-Raf-V599E活性。将试验化合物溶解于DMSO(10 mM)中并将其储存在-20 。C下。在DMSO中新鲜制备系列稀释液并用纯水进一步对其进行稀释，从而获得在3%DMSO中的3倍浓缩的待测溶液。该试验的终体积(30 pl)包含10 jtl待测溶液(l。/。DMSO)、 10 jil试验混合物(20 mM Tris画HCl， pH 7.5、 3 mM MnCl2、 3 mM MgCl2、 1 nM DTT、3 pg/ml (His)-lKB、l。/oDMSO和3.5 ATPh^P卜ATP 0.1 ^Ci)和10 pl酶稀释液(600ng GST-B-Raf-V599E)。对移液步骤进行编程以在MultiPROBEIix、MultiPROBE IILx或HamiltonSTAR机器人上以96-孔模式进行操作。该试验是按文献中所述来进行(参见C. Garcia-Echeverria等人，CancerCel.. 5， 231-9(2004))，通过加入20pl的125mM EDTA来终止试验。按下述通过滤膜结合法进行磷酸化肽的捕获将40|iil反应混合物转移到预先用曱醇浸泡5分钟的Immobilon-PVDF膜上，用水清洗，然后用0.5% H3P04浸泡5分钟并将其安放在具有断开的真空源的多头抽真空装置上。在安放好所有的样品后，连接真空并将各孔用200pl0.5。/。H3PO4进行洗涤。取下游离膜并将其在振荡器上用1.(T/。H3P04洗涤4次，用乙醇洗涤l次。在将其在环境温度下干燥、安放在Packard TopCount 96-孔框架上、加入10 pL/孔的MicroscintTM后，对这些膜进行计数。最后，将这些板密封并在微量板闪烁计数器(TopCount NXT, TopCount NXT HTS)中对其进行计数。在闪板法的情况中，激酶反应首先在基于聚苯乙烯的塑料板上进行，然后在60分钟后通过加入20jtl 125mM EDTA终止反应。为了捕获(60分钟，RT),将已生物素化的底物转移到涂有镍的闪板上。将试验板用PBS洗涤三次并将其在室温下干燥。其后，将这些板密封并在微量板闪烁计数器(TopCountNXT， TopCount NXT HTS)中进行计数。通过对四个浓度(通常为0.01 、 0.1 、l和lOpM)、 一式两份的或者从10 pM开始然后1: 3稀释的8个单点的化合物的抑制百分比进行线性回归分析来计算ICso值。式I化合物可以表现出对b-raf抑制的ICso值为0.05至50 ^M。
这些结果表明本发明的化合物例如式I化合物具有有利的亲和特性。还有一些证明本发明的化合物例如式I化合物的体内抗肿瘤活性的体
23内试验。例如，为了检验式I的化合物是否抑制体内血管生成，在小鼠生
长因子植入物模型中检验其对血管生成因子如VEGF、 bFGF、 S-1P、 PDGF 或IGF-1所诱导的血管生成响应的影响向多孔的特氟隆盒(体积为0.5 mL) 中填充包含肝素(20个单位/ml)、包含或不包含生长因子(2 pg/ml人VEGF) 的0.8。/。w/v琼脂，将其皮下植入到C57/C6小鼠的背侧胁腹中。在植入所 述盒的当天开始，用测试化合物(例如5、 10、 25、 50或100mg/kg， 口服， 每天一次)或溶媒对小鼠进行处理，并且随后继续处理4天。在处理结束时， 将小鼠杀死并取出所述盒。小心取下在该盒周围生长的血管化组织并对其 进行称重，通过测量该组织的血红蛋白含量来评价血含量(Drabkins法； Sigma， Deisenhofen，德国)。用特异性ELISA测定作为内皮标志物量度的 Tie-2蛋白水平，以定量血管生成响应。以前已经表明这些生长因子以剂量 依赖性的方式诱导在所述盒周围生长的这种组织(组织学特征为包含成纤 维细胞和小血管)的重量、血含量和Tie-2蛋白水平的增加，并且通过中和 抗体(例如特异性地中和VEGF的抗体)可阻断这种响应(参见Wood JM等 人，Cancer Res. 60(8), 2178-2189， (2000);和Schla印pi等人，J. Cancer Res. Clin. Oncol. 125,336-342,(1999))。利用这种才莫型，本发明的化合物例如式 I化合物可以在上文给出的浓度下表现出抑制作用。
本发明的化合物在本文所述试验系统中显示活性，由此表明可用于治 疗对蛋白激酶调节有响应的病症。
本文所用的病症包4舌疾病。
在本发明优选的意义上，对蛋白激酶调节有响应的病症是对蛋白(优选 酪氨酸)激酶、尤其是上面优选的激酶活性的调节(尤其是抑制)以对受治疗 个体有益的方式发生响应的病症，其中可以使用式I的化合物，所述病症 是一种或多种增殖性疾病(是指依赖于蛋白激酶活性(尤其是不适当的活性) 的疾病)，包括过度增殖病症，例如一种或多种下述病症白血病、增生、 纤维化(尤其是肺纤维化，但是也可以是其它类型的纤维化，如肾纤维化)、 血管生成、银屑病、动脉粥样硬化和血管中平滑肌增生，例如血管成形术 后的狭窄或再狭窄。此外，本发明的化合物还可用于治疗血栓形成和/或硬
24皮病。
优选本发明的化合物在治疗(包括预防)增殖性病症(尤其是对蛋白(优 选酪氨酸)激酶、特别是本文所述优选的激酶活性的调节(特别是抑制)有响 应的疾病)中的应用，所述病症选自肺瘤或癌疾病，尤其是优选地为良性或 特别是恶性的肿瘤或癌疾病，更优选地为实体瘤，例如脑癌、肾癌、肝癌、 肾上腺癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌(尤其是胃的肿瘤)、卵巢癌、结肠癌、 直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌(例如小细胞或大细胞肺癌)、阴道癌、 曱状腺癌、肉瘤、胶质母细胞瘤、多发性骨髓瘤或胃肠癌，尤其是结肠癌 或结肠直肠腺瘤，或头和颈的肺瘤，例如头和颈的鳞状细胞癌，包括瘤形
成，尤其是上皮特征的瘤形成，例如在乳腺癌的情况中；表皮过度增生(不 是癌)，尤其是银屑病；前列腺增生；或白血病。
本发明的化合物或其应用可能导致肿瘤消退和/或预防肿瘤转移的形 成和转移灶(也包括^:小转移灶)的生长。
还可以用本发明的化合物治疗免疫系统病症，所述免疫系统病症涉及 一些或者尤其是单个的蛋白(优选酪氨酸)激酶，尤其是所述优选的蛋白激 酶；此外，式I的化合物还可用于治疗中枢或外周神经系统疾病，在所述 疾病中涉及通过至少一种蛋白(优选酪氨酸)激酶、尤其是所述优选的蛋白 酪氨酸激酶进行的信号传递。
在慢性髓性白血病(CML)中，造血干细胞(HSC)中交互平衡的染色体 易位产生了 BCR-ABL融合基因。后者编码致癌的Bcr-Abl融合蛋白。尽 管ABL编码严密受控的蛋白酪氨酸激酶(其在调节细胞增殖、粘附和凋亡 中起基本作用)，但是BCR-ABL融合基因编码的是组成型活化的激酶，该 激酶转化HSC从而产生一种具有失控的克隆样增生、对骨髓间质的粘附能 力降低和对诱变刺激的凋亡响应降低的表型，从而使得逐渐蓄积了更多恶 性转化。所得粒细胞不能发育成成熟的淋巴细胞并且被释放到循环中，导 致成熟细胞不足和感染的易感性增加。Bcr-Abl (或相当的突变形式)的ATP 竟争性抑制剂已被描述为阻止激酶产生活化的有丝分裂途径和抗-细胞凋 亡途径(例如P-3激酶和STAT5)，从而导致BCR-ABL表型的细胞死亡并
25因此提供了对CML的有效治疗。因此，本发明用作Bcr-AbI抑制剂的式I 的3-(取代的氨基)-吡唑并[3，4-dl嘧咬化合物特别适用于治疗与其过表达有 关的疾病、尤其是白血病，例如白血病，例如CML或ALL。
血管生成被看成是生长至最大直径超过约1-2 mm的肿瘤的绝对先决 条件；生长至这种限度时，必需通过扩散向胂瘤细胞提供氧和营养物。因 此，每一种肿瘤不管其起源以及病因如何，在达到一定的大小后其生长都 依赖于血管生成。在血管生成抑制剂的肺瘤治疗活性中起重要作用的机理 主要有三种l)抑制血管、尤其是毛细血管向无血管的静止肿瘤生长，结 果由于细胞凋亡和增殖间达到平衡，而没有肿瘤的净生长；2)由于缺少血 液流入和流出肿瘤，从而阻止肿瘤细^^的迁移；和3)抑制内皮细胞增殖， 从而避免通常位于血管内层的内皮细胞对周围组织发挥旁分泌的刺激生长 作用。
鉴于它们具有抑制KDR并且尤其是Ephrin受体激酶以及可能的其它 蛋白激酶的能力和由此具有调节血管生成的能力，因此本发明的化合物尤 其适用于与相应受体(优选酪氨酸)激酶的不适宜的活性、特别是与其过表 达有关的病症。在这些病症中，特别重要的是尤其是(例如局部缺血的) 视网膜病、(例如与年龄有关的)黄斑变性、4艮屑病、肥胖、血管母细胞瘤、 血管瘤、炎性疾病，如类风湿性或风湿性炎性疾病，尤其是关节炎如风湿 性关节炎、或其它慢性炎性病症如慢性哮喘，动脉或移植术后动脉粥样硬 化、子宫内膜异位，并且尤其是瘤形成疾病，例如所谓的实体瘤(尤其是胃 肠道、胰腺、乳房、胃、宫颈、膀胱、肾、前列腺、卵巢、子宫内膜、肺、 脑的癌症、黑素瘤、卡波西肉瘤、头和颈的鳞状细胞癌、恶性胸膜间皮瘤、 淋巴瘤或多发性骨髓瘤)以及液体肿瘤(例如白血病)。
本发明的化合物尤其是可用于预防或治疗由持续的血管生成所触发的 疾病，如再狭窄，例如支架诱导的再狭窄；克罗恩病；何杰金病；目艮部疾 病，如糖尿病性视网膜病和新生血管性青光眼；肾病，如肾小球性肾炎； 糖尿病性肾病；炎性肠病；恶性肾硬化；血栓性^jk管病综合征；(例如慢 性)移植排斥和肾小球病；纤维变性疾病，如肝硬化；肾小球膜细胞增殖性
26疾病；神经组织损伤；和用于抑制气囊导管治疗后血管的再闭合、用于血 管修复学或在插入用来保持血管开放的机械装置如支架后的应用、用作免 疫抑制剂、用于无疤痕伤口愈合的辅助和用于治疗老年斑和接触性皮炎。
优选地，本发明涉及本发明的化合物在治疗本文所述的实体瘤和/或本 文所述的液体肺瘤如白血病中的应用。
本发明涉及本发明的化合物在治疗对蛋白激酶调节有响应的病症中的 应用，所述病症尤其是动物或优选人的疾病，尤其是对在"本发明的一般描 述"下所述的一种或多种蛋白酪氨酸激酶(PTK)的抑制有响应的疾病，所述 激酶更尤其是一种或多种选自下述激酶的PTK: src激酶，尤其是c-src激 酶、VEGF-受体激酶(例如KDR和Flt-l)、 RET-受体激酶或Ephrin受体 激酶，例如EphB2激酶、EphB4激酶或相关激酶，或其突变(例如组成型 活化或者部分或完全失控的)形式。
本发明还涉及本发明的化合物在制备用于治疗所述疾病的药物制剂 中的应用；包含本发明化合物和至少一种可药用载体的药物制剂，尤其是 用于治疗所述疾病的药物制剂；本发明的化合物，其用于治疗动物或人体， 尤其是用于治疗前面段落中所述疾病；治疗动物或人体的方法，其包括向 动物或人、尤其是需要此类治疗的患者施用对治疗所述疾病有效量的本发 明化合物；以及制备本发明化合物的方法。
在化合物、盐、药物制剂、疾病、病症等使用复数的情况中，也意味 着包括单数的化合物、盐、药物制剂、疾病等，在使用"一种"的情况中， 其是指不定冠词或者优选指"一"。
本发明的化合物具有有价值的药理学性质并且可用于治疗对蛋白激 酶，尤其是蛋白酪氨酸激酶(特别是在上面"本发明的一般描述"下所述的一 种或多种蛋白激酶，最特别是c-src激酶、VEGF-受体激酶(例如KDR和 Flt-l)、 RET-受体激酶和/或Ephrin受体激酶，例如EphB2激酶、EphB4 激酶或相关激酶激酶)的调节有响应的疾病，其中调节优选地是指抑制，并 且响应是指疾病的进程和/或其症状被减緩、终止或甚至反转并且包括完全 或至少暂时的治愈。术语"治疗"尤其是包括预防(包括预防性治疗)，例如
27在观察到了表明其易于或可能易于形成疾病的突变或变化的患者中，或者 优选地指所述疾病的治疗性处理(非限制性地包括姑息治疗、治愈、緩解症 状、减少症状、抑制疾病或症状、延迟进程、激酶调节和/或激酶抑制)， 所述疾病尤其是任何一种或多种下面所述的疾病。
本文中所用的术语"治愈，，优选地是指在治疗涉及受体酪氨酸激酶(尤 其是失调的)活性的正在发生的事件中的效力。术语"预防"优选地是指预防 涉及受体酪氨酸激酶活性失调的疾病的发作或复发。
本文中所用的术语"延迟进程"尤其是指向处于所治疗疾病前期或早期 的患者施用活性化合物，其中所述患者例如被诊断为处于相应疾病的前期 形式或者所述患者处于一种状况中，例如处于进行医学治疗的过程中或者 处于由意外事故造成的可能将形成相应疾病的状况中，或者例如在不进行 治疗的情况下预期可能发生转移的状况中。
动物优选地是温血动物，更优选地是哺乳动物。人(其通常也涵盖于通 用术语"动物"中)尤其是指(例如由于一些突变或其它特性)具有易于罹患上 下文所定义的疾病风险的患者或人。
在上下文提及术语"应用"(作为动词或名词)(涉及本发明化合物的应用) 之处，在适宜和方便时，如果没有相反说明的的话，(如果在上下文中没有 给出不同的指示或教导)则其分别包括任何一种或多种下述的本发明实施
方案(如果没有说明的话)在治疗对蛋白(尤其是酪氨酸)激酶调节(尤其是 抑制)有响应的疾病中的应用、在制备用于治疗对蛋白激酶调节(尤其是抑 制)有响应的疾病的药物组合物中的应用、使用一种或多种本发明化合物来 治疗对蛋白激酶调节(尤其是抑制)有响应的和/或增殖性疾病的方法、用于 治疗所述对蛋白激酶调节(尤其是抑制)有响应的疾病的包含一种或多种本 发明化合物的药物制剂，以及治疗所述对蛋白激酶调节(尤其是抑制)有响 应的疾病的一种或多种本发明的化合物。具体而言，所治疗的并且因此优 选本发明化合物"应用"的疾病选自下面所述的对蛋白(尤其是酪氨酸)激 酶调节(尤其是抑制)有响应的(不仅是指"依赖的"，也指"支持的"，还包括 其中疾病对蛋白激酶的调节(尤其是抑制)有响应的情况，即蛋白激酶的活
28性支持了或者甚至造成了疾病的表现)疾病，尤其是下述的增殖性疾病。
在提及蛋白激酶的情况中，其是指任何类型的蛋白激酶，特别是上面 "本发明的一般描述，，下所定义的这些激酶之一，更特别是丝氨l苏氨酸和 /或优选蛋白酪氨酸激酶，最优选一种或多种酪氨酸蛋白激酶，尤其是选自
下述的激酶c-src激酶、VEGF-受体激酶(例如KDR和Flt-l)、 RET-受体 激酶和/或Ephrin受体激酶，例如EphB2激酶、EphB4激酶或相关激酶， 包括任何一种或多种这些激酶的一种或多种改变或突变形式或等位基因的 形式(例如使各原癌基因转化成癌基因的这些形式，例如组成型活化的突变 体，例如Bcr-Abl)。尤其是包括异常高表达的、组成型活化的或者虽正常 但在患者其它调节机理的给定背景中相对活动过度的和/或突变的形式。
在优选的实施方案以及在上文和下文的更一般范围的实施方案中以及 在权利要求书中，可以用上下文所提供的更具体的相应定义来代替任何一 种或多种或所有的一般性表述，从而获得本发明更加优选的实施方案。
本发明涉及对蛋白激酶调节、尤其是抑制有响应的疾病、尤其是一种 或多种上述疾病的治疗方法，该方法包括向需要该治疗的动物或人施用有 效量的式I化合物或其可药用盐。
另一方面本发明提供了
-用作药物的本发明的化合物；
-本发明化合物作为药物的用途，
例如用于治疗对蛋白激酶调节有响应的病症。
对于制药用途，可釆用一种或多种本发明的化合物，例如一种化合物， 或两种或多种本发明化合物的组合，优选使用本发明的一种化合物。 本发明的化合物可以以药物组合物的形式用作药物。 本发明还涉及包含本发明化学式的化合物(优选新化合物)的药物组合 物，涉及其在治疗性处理(在本发明的广义上还包括预防性处理)中的用途 或者治疗依赖于不适当的蛋白(尤其是酪氨酸)激酶活性的疾病或病症、尤 其是上述优选的病症或疾病的方法，涉及用于所述用途的化合物以及药物 制剂及其制备，特别是用于所述用途的药物制剂。在本发明化合物的情况
29中更通常使用药物制剂。
例如，本发明的药理学可接受的化合物可存在于药物组合物中或者可 用于制备药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的有效量的本发 明化合物以及一种或多种可药用的赋形剂，例如无才几或有机、固体或液体 的可药用载体(载体物质)。
本发明还涉及适合于向温血动物、尤其是人(或者得自温血动物、尤其 是人的细胞或细胞系，例如淋巴细胞)施用的药物组合物，其用来治疗(在 本发明的广义方面还包括预防)对蛋白(尤其是酪氨酸)激酶活性的抑制有响 应的疾病，该组合物包含一 定量的本发明化合物和至少一种可药用的赋形 剂，其中所述化合物的量优选对于所述抑制而言是有效的。
在另 一方面本发明提供了药物组合物，其包含本发明的化合物以及至 少一种可药用的赋形剂，例如合适的载体和/或稀释剂，例如包括填充剂、 粘合剂、崩解剂、流动性调节剂、润滑剂、糖类或甜味剂、芳香剂、防腐 剂、稳定剂、湿润剂和/或乳化剂、增溶剂、用于调节渗透压的盐类和/或緩 沖剂。
另一方面本发明提供了
-用于治疗对蛋白激酶调节有响应的病症的本发明药物组合物。 -本发明的药物组合物在治疗对蛋白激酶调节有响应的病症中的用途。 在另一方面，本发明提供了治疗对蛋白激酶调节有响应的病症(例如包
括上述特定的病症)的方法，所述治疗包括向需要该治疗的患者施用治疗有
效量的本发明化合物；例如以药物组合物的形式。 另一方面本发明提供了 -用于制备药物的本发明化合物， -本发明化合物在制备药物中的用途， -用于治疗对蛋白激酶调节有响应的病症的本发明化合物。 本发明的药物组合物是用于胃肠内如鼻内、直肠或口服、或胃肠外如
肌内或静脉内向温血动物(尤其是人)施用的药物组合物，其仅包含有效剂
量的所述药理学活性成分或者另外还包含显著量的可药用载体。活性成分
30的剂量取决于温血动物的种类、体重、年龄和个体情况、个体的药动学数 据、所治疗的疾病和给药方式。
本发明还涉及对抑制依赖于蛋白(尤其是酪氨酸)激酶不适当的活性的
疾病有响应的疾病的治疗方法；该方法包括向特别是由于所述的疾病之一 而需要此类治疗的温血动物、例如人施用预防有效量或特别是治疗有效量 的式I化合物或其可药用的盐。
本文中所用的病症(疾病)的治疗包括预防。
对于所述治疗，合适的剂量当然会根据例如所用的本发明化合物的化 学性质和药动学数据、需要该治疗的个体宿主例如体重、年龄和个体情况、 给药方式以及所治疗病症的性质和严重性而不同。但是， 一般来说，为了 在大型哺乳动物例如人类中达到满意的结果，推荐的日剂量包括以下范围
画从约0.0001 g至约5 g,例如0.001 g至1.5 g;
-从约0.001 mg/kg体重至约60 mg/kg体重，例如0.01 mg/kg体重至 20 mg/kg体重,
例如以每天最多4次的分份剂量给药。 通常，儿童可以接受成人剂量的一半。
药物组合物包含约1%至约95%,优选约20%至约卯％的活性成分。 本发明的药物组合物可以是例如单位剂量形式，例如以安瓿剂、小瓶、栓 剂、糖锭剂、片剂或胶嚢的形式。
本发明的化合物，例如以药物组合物的形式，可以例如以包衣或未包 衣的片剂、胶嚢、(可注射的)溶液、固体溶液、混悬液、分散体系、固体
分散体系的形式；例如以安瓿剂、小瓶的形式；以乳膏剂、凝胶、糊剂、 吸入粉末、泡沫剂、酊剂、唇膏、滴剂、喷雾剂的形式；或以栓剂的形式， 通过任何常规途径施用，例如胃肠内施用，例如包括经鼻、含服、直肠、 口月良施用；胃肠外施用，例如包括静脉内、动脉内、肌内、心内、皮下、 骨内输液、经皮(通过完整的皮肤扩散)、经粘膜(通过粘膜扩散)、吸入施用； 局部施用，例如包括表皮、鼻内、气管内施用；腹膜内(输注或注射到腹腔 内)施用；硬膜上(硬膜外)(注射或输注到硬膜外腔)；硬膜内(注射或输注到
31脑脊液中)施用；玻璃体内施用(通过眼部施用)；或通过医疗装置施用，例 如局部递送装置，例如支架。
对于局部用药(例如包括眼部施用)，采用0.5-10%、例如1-3%浓度的 活性物质每天给药数次(例如每天2-5次)可获得满意的结果。
本发明的化合物可以以可药用盐的形式或游离形式施用；任选以溶剂 化物的形式施用。盐形式和/或溶剂化物形式的本发明化合物具有与游离形 式的本发明化合物同样量级的活性。
本发明的药物组合物以本身已知的方法制备，例如通过常规的溶解、 冻干、混合、制粒或成型方法制备。
优选使用活性成分的溶液以及混悬液，并且尤其是等渗的水性溶液或 混悬液，在例如仅包含活性成分或者包含活性成分和载体如甘露醇的冻干 组合物的情况中，可以在使用前制备该类溶液或混悬液。所说的药物组合 物可以被灭菌和/或可以包含赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂和/或乳 化剂、增溶剂、用于调节渗透压的盐和/或緩沖剂，并且可以用本身已知的 方式来进行制备，例如通过常规的溶解或冷冻干燥方法进行制备。所说的 溶液或混悬液可以包含增加粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、羧曱基纤维 素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。
在油中的混悬液包含作为油性组分的常用于注射目的的植物油、合成 或半合成油类。可提及的尤其是包含具有8-22个、尤其是12-22个碳原子 的作为酸组分的长链脂肪酸，例如月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷 酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸、二十二烷酸或相应的不饱和酸， 例如油酸、反油酸、芥酸、顺芜酸或亚油酸的液体脂肪酸酯，如果需要的 话，还可加入抗氧化剂，例如维生素E、 P-胡萝卜素或3，5-二-叔-丁基-4國 羟基甲苯。这些脂肪酸酯的醇组分具有最多6个碳原子并且是单-或多-羟 基醇，例如单-、二-或三-羟基醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或 其异构体，但是尤其是乙二醇和甘油。因此，可提及的脂肪酸酯的实例如 下油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、"Labrafil M 2375"(聚氧 乙烯甘油三油酸酯，Gattefoss6,巴黎)、"Miglyol 812"(具有C8至C12的链
32长的饱和脂肪酸的甘油三酯，Hiils AG,德国)，但是尤其是植物油，如棉籽 油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、豆油和花生油。
所说的注射或输液组合物是以常规方式在无菌条件下进行制备的；其 也适用于将组合物？ I入到安瓿或小瓶中并将该容器密封。
用于口服给药的药物组合物可以通过将活性成分与固体载体混合到一 起，如果需要的话，将所得的混合物制粒并且如果需要或必需的话，在加 入适宜的赋形剂后将该混合物加工成片剂、糖锭剂核或胶嚢来获得。还可 以将其混入到塑料载体中，其可使活性成分以适度的量扩散或释方文。
适宜的载体特别是填充剂，如糖类，例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山 梨醇，纤维素制剂和/或磷酸钩类，例如磷酸三钙或磷酸氢钙；和粘合剂， 如淀粉糊，例如使用玉米、小麦、水稻或马铃薯淀粉的淀粉糊、明胶、黄 蓍胶、曱基纤维素、羟丙曱基纤维素、羧曱基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷 酮；和/或如果需要的话，崩解剂，例如上述淀粉类物质、和/或羧曱基淀粉、 交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐，如藻酸钠。赋形剂尤其是流 动调节剂和润滑剂，例如硅酸、滑石粉、硬脂酸或其盐，如硬脂酸镁或硬 脂酸钓、和/或聚乙二醇。糖锭剂核可提供适宜的、任选为肠溶的包衣，为 此特别采用浓的糖溶液，其可包含阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、 聚乙二醇和/或二氧化钛，或者采用在适宜有机溶剂中的包衣溶液，或者为 了制备肠溶包衣，采用适宜的纤维素制品溶液，如邻苯二曱酸乙基纤维素 或邻苯二曱酸羟丙曱基纤维素的溶液。胶嚢是由明胶制成的干填充胶嚢和
由明胶和增塑剂如甘油或山梨醇制成的密封软胶嚢。干填充的胶嚢可以包 含颗粒形式的活性成分，以及例如填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉类物质和/ 或助流剂如滑石粉或硬脂酸镁，并且如果需要的话还有稳定剂。在软胶嚢 中，优选将活性成分溶解或混悬于适宜的油性赋形剂如脂肪油、石蜡油或 液体聚乙二醇中，还可以向其中加入稳定剂和/或抗菌剂。可以向片剂或糖
锭剂包衣或胶嚢壳中加入染料或色素，例如用于识别的目的或表示活性成 分的不同剂量。
还可有利的将本发明的化合物与至少一种第二药物例如生物活性剂联
33合使用，优选与其他抗增殖剂联合使用。所述抗增殖剂非限制性地包括芳
香酶抑制剂；抗雌激素药；拓朴异构酶I抑制剂；拓朴异构酶ll抑制剂； 微管活性剂；烷化剂；组蛋白脱乙酰基酶抑制剂；诱导细胞分化过程的化 合物；环加氧酶抑制剂；MMP抑制剂；mTOR抑制剂；抗肿瘤抗代谢物； 铂化合物；靶向/降低蛋白或脂质激酶活性的化合物和其它抗血管生成化合 物；耙向、降低或抑制蛋白或脂质磷酸酶活性的化合物；戈那瑞林激动剂； 抗雄激素药；曱疏氨酸氨肽酶抑制剂；二膦酸盐；生物学响应调节剂；抗 增殖的抗体；类肝素酶抑制剂；Ras致癌亚型的抑制剂；端粒末端转移酶 抑制剂；蛋白酶体抑制剂；血液学恶性肿瘤治疗中所用的活性剂；靶向、
降低或抑制Flt-3活性的化合物；Hsp卯抑制剂；替莫唑胺(TEMODAL⑧)。 这里所用的术语"芳香酶抑制剂，，涉及一种抑制雌激素产生，即，分别 抑制底物雄甾烯二酮和睾酮向雌酮和雌二醇转化的化合物。该术语非限制 性地包括甾族化合物，尤其是阿他美坦、依西美坦和福美坦，并且特别是 非甾族化合物，尤其是氨基格鲁米特、罗谷亚胺、吡鲁米特、曲洛司坦、 睾内酯、酮康唑、伏氯唑、法倔唑、阿那曲唑和来曲唑。依西美坦例如可 以以其市售形式，例如以商标AROMASIN进行市售的形式进行给药。福 美坦例如可以以其市售形式，例如以商标LENTARON进行市售的形式进 行给药。法倔唑例如可以以其市售形式，例如以商标AFEMA进行市售的 形式进行给药。阿那曲峻例如可以以其市售形式，例如以商标ARIMIDEX 进4亍市售的形式进行给药。来曲唑例如可以以其市售形式，例如以商标 FEMARA或FEMAR进行市售的形式进行给药。氨基格鲁米特例如可以 以其市售形式，例如以商标ORIMETEN进行市售的形式进行给药。包含 芳香酶抑制剂类化疗剂的本发明的组合特别是用于治疗激素受体阳性的肿 瘤，例如乳房胂瘤。
这里所用的术语"抗雌激素药"涉及在雌激素受体水平上拮抗雌激素作 用的化合物。该术语非限制性地包括他莫昔芬、氟维司群、雷洛昔芬和盐 酸雷洛昔芬。他莫昔芬例如可以以其市售形式，例如以商标NOLVADEX 进行市售的形式进行给药。盐酸雷洛昔芬例如可以以其市售形式，例如以
34商标EVISTA进行市售的形式进行给药。氟维司群可以如US 4,659,516中 所7〉开的那样来进行配制或者其例如可以以其市售形式，例如以商标 FASLODEX进行市售的形式进行给药。包含作为抗雌激素药的化疗剂的 本发明的组合特别是用于治疗雌激素受体阳性的肿瘤，例如乳房肿瘤。
这里所用的术语"抗雄激素药"涉及能抑制雄激素的生物学作用的任何 物质并且非限制性地包括比卡鲁胺(CASODEX),其可以例如按照US 4,636,505中所公开的那样进行配制。
这里所用的术语"戈那瑞林激动剂"非限制性地包括阿巴瑞克、戈舍瑞 林和乙酸戈舍瑞林。戈舍瑞林在US 4,100,274中进行了公开并且例如可以 以其市售形式，例如以商标ZOLADEX进行市售的形式进行给药。阿巴瑞 克例如可以按US 5,843,901中所公开的那样来进行配制。
这里所用的术语"拓朴异构酶I抑制剂"非限制性地包括托泊替康、吉 马替康、依立替康、喜树碱以及其类似物，9-硝基喜树碱和大分子喜树碱 偶联物PNU-166148 (WO99/17804中的化合物Al)。依立替康例如可以以 其市售形式，例如以商标CAMPTOSAR进行市售的形式进行给药。托泊 替康例如可以以其市售形式，例如以商标HYCAMTIN进行市售的形式进 行给药。
这里所用的术语"拓朴异构酶II抑制剂"非限制性地包括蒽环类，如阿 霉素(包括脂质体制剂，例如CAELYX)、柔红霉素、表柔比星、伊达比星 和奈莫柔比星、蒽醌类物质米托蒽醌和洛索蒽醌、以及鬼臼毒素类依托泊 苷和替尼泊苷。依托泊苷例如可以以其市售形式，例如以商标 ETOPOPHOS进行市售的形式进行给药。替尼泊苷例如可以以其市售形 式，例如以商标VM26-BRISTOL进行市售的形式进行给药。阿霉素例如 可以以其市售形式，例如以商标ADRIBLASTIN或ADRIAMYCIN进行 市售的形式进行给药。表柔比星例如可以以其市售形式，例如以商标 FARMORUBICIN进行市售的形式进行给药。伊达比星例如可以以其市售 形式，例如以商标ZAVEDOS进行市售的形式进行给药。米托蒽醌例如可 以以其市售形式，例如以商标NOVANTRON进行市售的形式进行给药。
35术语"微管活性剂"涉及微管稳定剂、微管去稳定剂和微管蛋白聚合抑 制剂，其非限制性地包括紫杉烷类，例如紫杉醇和多西紫杉醇、长春花属 生物碱，例如长春碱，尤其是硫酸长春碱、长春新碱，尤其是硫酸长春新
碱，和长春瑞滨、海绵内酯(discodermolides)、秋水仙碱和埃坡霉素及其衍 生物，例如埃坡霉素B或其衍生物。紫杉醇例如可以以其市售形式，例如 TAXOL进行市售的形式进行给药。多西紫杉醇例如可以以其市售形式， 例如以商标TAXOTERE进行市售的形式进行给药。硫酸长春碱例如可以 以其市售形式，例如以商标VINBLASTIN R.P.进4亍市售的形式进行给药。 硫酸长春新碱例如可以以其市售形式，例如以商标FARMISTIN进行市售 的形式进行给药。海绵内酯例如可以如US 5,010,099中所公开的那样来获 得。还包括在WO 98/10121、 US 6,194,181、 WO 98/25929、 WO 98/08849、 WO 99/43653、 WO 98/22461和WO 00/31247中所^>开的埃坡霉素衍生物。 特别优选埃坡霉素A和/或B。
这里所用的术语"烷化剂，，非限制性地包括环磷酰胺、异环磷酰胺、美 法仑或亚硝基脲(BCNU或GIiadel)。环磷酰胺例如可以以其市售形式，例 如以商标CYCLOSTIN进行市售的形式进行给药。异环磷酰胺例如可以以 其市售形式，例如以商标HOLOXAN进行市售的形式进行给药。
术语"组蛋白脱乙酰基酶抑制剂"或"HD AC抑制剂"涉及抑制组蛋白脱 乙酰基酶并具有抗增殖活性的化合物。其包括在WO 02/22577中所7>开的 化合物，尤其是N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(lH-吲哚-3-基)乙基-氨基I 甲基j苯基卜2E-2-丙烯酰胺、N-羟基-3-[4-[[2-(2-甲基-l好-吲哚-3-基)-乙基卜 氨基j曱基l苯基-2￡-2-丙烯酰胺以及其可药用的盐。其还特别地包括辛二 酰基苯胺异羟肟酸(SAHA)。
术语"抗肿瘤抗代谢物"非限制性地包括5-氟尿嘧啶(5-FU);卡培他滨； 吉西他滨；DNA脱曱基化剂，如5-氮杂胞苷和地西他滨；曱氨蝶呤；依达 曲沙；和叶酸拮抗剂如培美曲塞。卡培他滨例如可以以其市售形式，例如 以商标XELODA进行市售的形式进行给药。吉西他滨例如可以以其市售 形式，例如以商标GEMZAR进行市售的形式进行给药。还包括单克隆抗
36体曲妥珠单抗，其例如可以以其市售形式，例如以商标HERCEPTIN进行
市售的形式进行给药。
这里所用的术语"铂化合物"非限制性地包括卡铂、顺铂(cis-platin)、 顺铂(cisplatinum)和奥沙利铂。卡铂例如可以以其市售形式，例如以商标 CARBOPLAT进行市售的形式进行给药。奥沙利铂例如可以以其市售形 式，例如以商标ELOXATIN进行市售的形式进行给药。
这里所用的术语"耙向/降低蛋白或脂质激酶活性的化合物和其它抗血 管生成化合物"非限制性地包括蛋白酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸 激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，例如
a) 靼向、降低或抑制血小板衍生生长因子-受体(PDGFR)活性的化合 物，如革巴向、降低或抑制PDGFR活性的化合物，尤其是抑制PDGF受体 的化合物，例如N-苯基-2-嘧咬-胺衍生物，例如伊马替尼、SU101、 SU6668 和GFB-111;
b) 靶向、降低或抑制成纤维细胞生长因子-受体(FGFR)活性的化合物；
c) 靶向、降低或抑制胰岛素样生长因子受体1 (IGF-1R)活性的化合物， 尤其是抑制IGF-1R活性的化合物，如WO 02/092599中所公开的化合物；
d) 革巴向、降低或抑制Trk受体酪氨酸激酶家族活性的化合物；
e) 靶向、降低或抑制Axl受体酪氨酸激酶家族活性的化合物； i)耙向、降低或抑制c-Met受体活性的化合物；
g) 靶向、降低或抑制c-Kit受体酪氨酸激酶(PDGFR家族的一部分)活 性的化合物，如靼向、降低或抑制c-Kit受体酪氨酸激酶家族活性的化合 物，尤其是抑制c-Kit受体的化合物，例如伊马替尼；
h) 靶向、降低或抑制c-Abl家族成员及其基因融合产物(例如BCR-Abl 激酶)活性的化合物，如耙向、降低或抑制c-Abl家族成员及其基因融合产 物活性的化合物，例如N-苯基-2-嘧咬-胺衍生物，例如伊马替尼；PD180970; AG957; NSC 680410;或得自ParkeDavis的PD173955;
i) 靶向、降低或抑制蛋白激酶C (PKC)成员和丝氨^/苏氨酸激酶的Raf 家族、MEK、 SRC、 JAK、 FAK、 PDK的成员和Ras/MAPK家族成员、
37或PI(3)激酶家族、或与PI(3)-激酶相关的激酶家族、和/或细胞周期蛋白依 赖性激酶家族(CDK)成员的活性的化合物，尤其是在US 5,093,330中所公 开的星状孢子素衍生物，例如米哚妥林；其它化合物的实例包括例如 UCN-Ol、沙芬戈、BAY 43-9006、莒藓抑素1、嗛立福辛；伊莫福新；RO 318220和RO 320432; GO 6976; Isis 3521; LY333531/LY379196;异喹 啉化合物例如在WO 00/09495中所公开的那些化合物；FTIs; PD184352 或QAN697 (—种P13K抑制剂)；
j)靼向、降低或抑制蛋白-酪氨酸激酶活性的化合物，如甲磺酸伊马替 尼(GLIVEC/GLEEVEC)或酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostin)。酪氨酸辨酸 化抑制剂优选地是一种低分子量(Mr < 1500)化合物或其可药用的盐，尤其 是选自亚节基丙二腈类或S-芳基苯丙二腈或双底物喹啉类化合物，更尤其 是任何选自Tyrphostin A23/RG-50810; AG 99; Tyrphostin AG 213; Tyrphostin AG 1748; Tyrphostin AG 4卯；Tyrphostin B44; Tyrphostin B44(+)对映异构体；Tyrphostin AG 555; AG 494; Tyrphostin AG 556、 AG957和Adaphostin (4-{(2，5-二羟基苯基)曱基氨基}-苯甲酸金刚烷基 酯；NSC 680410， Adaphostin)的化合物；和
k)革巴向、降低或抑制受体酪氨酸激酶的表皮生长因子家族(以同-或杂二 聚体形式的EGFR、 ErbB2、 ErbB3、 ErbB4 )活性的化合物，如耙向、降 低或抑制表皮生长因子受体家族活性的化合物，尤其是抑制EGF受体酪氨 酸激酶家族成员例如EGF受体、ErbB2、 ErbB3和ErbB4或者结合EGF 或EGF相关配体的化合物、蛋白质或抗体，并且特别是在WO 97/02266 中一般和具体公开的化合物、蛋白质或单克隆抗体，例如实施例39的化合 物，或者是在EP 0 564 409、 WO 99/03854、 EP 0520722、 EP 0 566 226、 EP 0 787 722、 EP 0 837 063、 US 5,747,498、 WO 98/10767、 WO 97/30034、 WO 97/49688、 WO 97/38983并且尤其是WO 96/30347(例如被称为CP 358774的化合物)、WO 96/33980 (例如化合物ZD 1839)和WO 95/03283 (例 如化合物ZM105180)中所公开的化合物、蛋白质或单克隆抗体；例如曲妥 珠单抗(HerpetinR)、西妥昔单抗、易瑞沙、埃罗替尼(TarcevaTM)、 CI-1033、
38EKB-569、 GW國2016、 El，l、 E2.4、 E2.5、 E6.2、 E6.4、 E2.ll、 E6.3或 E7.6.3,和在WO 03/013541中公开的7H-吡咯并2，3-dl嘧咬衍生物。
其他抗血管生成的化合物包括其活性具有其他机理例如与蛋白或脂质 激酶的抑制无关的化合物，例如沙利度胺(THALOMID)和TNP-470。
耙向、降低或抑制蛋白或脂质磷酸酶活性的化合物有例如磷酸酶1、 磷酸酶2A、 PTEN或CDC25的抑制剂，例如冈田酸或其矛汴生物。
诱导细胞分化过程的化合物有例如视黄酸、a-Y-或5-生育酚或a-"或8-生育三烯酸。
这里所用的术语"环加氧酶抑制剂"非限制性地包括例如Cox-2抑制 剂、5-烷基取代的2-芳基氨基苯基乙酸和衍生物，如塞来昔布 (CELEBREX)、罗非昔布(VIOXX)、依托考昔、伐地考昔或5-烷基-2-芳基 氨基苯基乙酸，例如5-曱基-2-(2，-氯-6'-氟苯氨基)苯基乙酸、芦米考昔。
术语"mTOR抑制剂"涉及抑制哺乳动物雷帕霉素(mTOR)靶点并具有 抗增殖活性的化合物，如西罗莫司(Rapamune⑧)、依维莫司(CerticanTM)、 CCI 779和ABT578。
这里所用的术语"二膦酸盐"非限制性地包括依替膦酸、氯膦酸、替鲁 膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑来膦酸。"依替膦酸" 例如可以以其市售形式，例如以商标DIDRONEL进行市售的形式进4亍给 药。"氯膦酸，，例如可以以其市售形式，例如以商标BONEFOS进行市售的 形式进行给药。"替鲁膦酸，，例如可以以其市售形式，例如以商标SKELID 进行市售的形式进行给药。"帕米膦酸"例如可以以其市售形式，例如以商 标AREDIATM进行市售的形式进行给药。"阿仑膦酸，，例如可以以其市售形 式，例如以商标FOSAMAX进行市售的形式进行给药。'呵尹班膦酸"例如可 以以其市售形式，例如以商标BONDRANAT进行市售的形式进行给药。 "利塞膦酸，，例如可以以其市售形式，例如以商标ACTONEL进行市售的形 式进行给药。"唑来膦酸"例如可以以其市售形式，例如以商标ZOMETA 进行市售的形式进行给药。
这里所用的术语"类肝素酶抑制剂"是指靶向、降低或抑制硫酸肝素降
39解的化合物。该术语非限制性地包括PI-88。
这里所用的术语"生物学响应调节剂"是指淋巴因子或干扰素类，例如 干扰素y。
这里所用的术^吾"Ras致癌亚型的抑制剂"，例如H-Ras、 K-Ras、或 N-Ras，是指靶向、降低或抑制Ras的致癌活性的化合物，例如"法尼基转 移酶抑制剂"例如L-744832、 DK8G557或R115777 (Zarnestra)。
这里所用的术语"端粒末端转移酶抑制剂"是指耙向、降低或抑制端粒 末端转移酶活性的化合物。耙向、降低或抑制端粒末端转移酶活性的化合
物尤其是抑制端粒末端转移酶受体的化合物，例如端粒抑素。
这里所用的术语"甲硫氨酸氨肽酶抑制剂"是指耙向、降低或抑制曱硫
氨酸氨肽酶活性的化合物。靶向、降低或抑制曱硫氨酸氨肽酶活性的化合
物例如是bengamide或其衍生物。
这里所用的术语"蛋白酶体抑制剂"是指靶向、降低或抑制蛋白酶体活
性的化合物。靶向、降低或抑制蛋白酶体活性的化合物包括例如PS-341
和MLN 341。
这里所用的术语"基质金属蛋白酶抑制剂"或("MMP抑制剂")非限制 性地包括胶原拟肽和非拟肽的抑制剂、四环素衍生物，例如异羟肟酸盐拟 肽抑制剂巴马司他以及其可口服利用的类似物马立马司他(BB-2516)、普啉 司他(AG3340)、美他司他(metastat) (NSC 683551) BMS-279251 、 BAY 12-9566、 TAA211、 MMI270B或AAJ996。
这里所用的术语"血液学恶性肿瘤的治疗中所用的活性剂"非限制性地 包括FMS-样酪氨酸激酶抑制剂，例如靶向、降低或抑制Flt-3活性的化合 物；干扰素、l-b-D-阿糖呋喃基胞嘧啶(ara-c)和bisulfan;以及ALK抑制 剂例如耙向、降低或抑制间变性淋巴瘤激酶的化合物。
术语"耙向、降低或抑制Flt-3活性的化合物"尤其是抑制Flt-3的化合 物、蛋白或抗体，例如PKC412、米咮妥林、星状孢子素^f生物、SU11248 和MLN518。
这里所用的术语"HSP90抑制剂"非限制性地包括靶向、降低或抑制
40HSP卯的固有ATP酶活性的化合物；通过泛素蛋白酶体途径降解、靶向、 降低或抑制HSP卯客户蛋白的化合物。靶向、降低或抑制HSP90的固有 ATP酶活性的化合物尤其是抑制HSP90的ATP酶活性的化合物、蛋白或 抗体，例如17-烯丙基氨基，17-脱曱氧基格尔德霉素(17AAG)、格尔德霉素 衍生物；其他与格尔德霉素有关的化合物；根赤壳菌素和HDAC抑制剂。
这里所用的术语"抗增殖的抗体"非限制性地包括曲妥珠单抗 (HerceptinTM)、曲妥珠单抗-DMl、贝伐珠单抗(AvastinTM)、利妥昔单抗 (Rituxanr⑧)、PRO64553(抗-CD40)和2C4抗体。抗体指的是例如完整的单 克隆抗体、多克隆抗体、由至少2个完整的抗体形成的多特异性抗体，和 抗体片段，只要其表现出所需的生物学活性即可。
对于急性髓性白血病(AML)的治疗而言，可以将式I的化合物与标准 的白血病疗法联合使用，尤其是与用于治疗AML的治疗联用。式I的化 合物特别是可以与例如法尼基转移酶抑制剂和/或用于治疗AML的其它药 物如柔红霉素、阿霉素、Ara-C、 VP-16、替尼泊香、米托蒽醌、伊达比星、 卡4白和PKC412联合给药。
用代码、通用名或商品名来确定的活性剂的结构可以得自标准纲要"默 克索引(The Merck Index)"的现行版本或数据库，例如Patents International (例如IMS World Publications)。
可以与本发明的化合物联用的上述化合物可以按现有技术例如上面所 列举的文献中所述进行制备和给药。
还可以有利地将本发明的化合物与已知的治疗方法联用，例如与施用 激素或者尤其是辐射联用。
本发明的化合物特别是可被用作放射增敏剂，尤其是用于治疗对放疗 的敏感性差的肿瘤。
本发明的化合物可用于如本文中所述的任何方法和用途，其单独使用 或与一种或多种、至少一种的其他第二药物联合使用。
另一方面本发明提供了
-本发明的化合物与至少一种第二药物的组合；
41-包含本发明化合物和至少 一 种第二药物的药物组合； -包含本发明化合物和至少一种第二药物以及一种或多种可药用的载 体的药物组合物；
-与至少一种第二药物组合的本发明化合物，例如以药物组合或组合物 的形式，用于任何本文所定义的方法，例如
-包含本发明化合物和至少一种第二药物的组合、药物组合或药物组 合物，其用作药物；
-本发明化合物和至少一种笫二药物作为药物的用途，例如以药物组 合或药物组合物的形式；
-本发明化合物在制备用于与第二药物组合的药物中的用途；
-治疗病症的方法，其用于在需要其的个体中治疗对蛋白激酶调节有响 应的病症，该方法包括相伴或先后地共同施用治疗有效量的本发明化合物 和至少一种第二药物，例如以药物组合或组合物的形式；
-与至少一种第二药物组合的本发明化合物，例如以药物组合或药物组 合物的形式，用于制备治疗对蛋白激酶调节有响应的病症的药物。
组合包括固定组合，其中本发明的化合物和至少一种第二药物处于同 一制剂内；药盒，其中本发明的化合物和至少一种第二药物在分开的制剂 中，所述制剂在同一包装内提供，例如附有用于共同给药的说明书；以及 自由组合，其中本发明的化合物和至少一种第二药物被分开包装，但给出 了用于相伴或先后给药的说明书。
另一方面，本发明提供了
-药物包装，其包含第一药物(本发明化合物)和至少一种第二药物，以 及用于联合给药的说明书；
-药物包装，其包含本发明化合物，以及用于与至少一种笫二药物联合 给药的说明书；
-药物包装，其包含至少一种第二药物，以及用于与本发明化合物联合 给药的说明书。
与单一治疗相比，釆用本发明的组合进行治疗可提供改善的效果。
42另一方面，本发明提供了
-包含一定量的本发明化合物和一定量的第二药物的药物组合，其中所 述的量适合于产生协同的疗效；
-一种改善本发明化合物的治疗效果的方法，其包括例如相伴或先后地 共同施用治疗有效量的本发明化合物和第二药物；
-一种改善第二药物的治疗效果的方法，其包括例如相伴或先后地共同 施用治疗有效量的本发明化合物和第二药物。
本发明的组合和作为组合成员的第二药物可以通过任何常身见途径施 用，例如上文对本发明化合物所列出的那些途径。笫二药物可以以合适的 剂量施用，例如以类似于单一治疗的剂量范围，或者例如在有协同作用的 情况下，甚至低于常规剂量范围。
下面的实施例用来对本发明进行说明，而不是限制本发明。 温度是以摄氏度为单位进行测量。除非特别说明，否则反应是在室温 下进行。
TLC中的Rf值表示各物质的移动距离与展开剂前沿的移动距离之间 的比例。TLC的Rf值是在5 x 10 cm TLC板(硅胶F254， Merck, Darmstadt, 德国)上测量的。
分析型HPLC条件
系统1
线性梯度2-100。/。CH3CN(0.1。/。TFA)和H2O(0.1%TFA) ， 7分钟+ 100%CH3CN(0.1%TFA)， 2分钟；在215 nm检测，在30。C下流速1 mL/ 分钟。柱Nucleosill00-3C18HD(125x4mm)。
缩写
DMF N，N-二甲基曱酰胺 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH 乙醇 h 小时
43高效液相色语
min分钟
MS國ES电喷雾质镨
RfTLC中的前沿比例
RT室温
TBME叔丁基曱基醚
TFA三氟乙酸
THF四氢吹喃
TLC薄层色谱
tR保留时间
UV紫外线
合成苯胺结构单元的一般方法用N-(3-氨基-4-甲基-苯基)-3-三氟曱基 -苯曱酰胺举例说明
N-(3-氨基-4-曱基-苯基)-3-
三氟甲基-苯甲酰胺 (A) (已) (C)
化合物N-(3-氨基-4-曱基-苯基)-3-三氟曱基-苯曱酰胺是通过用阮内镍 在甲醇中在室温下对相应的硝基化合物(N-(4-曱基-3-硝基-苯基)-3-三氟曱 基-苯曱酰胺)进行氢化而获得的。以高产率获得产物。中间体硝基化合物 (A),即N-(3-硝基-4-曱基-苯基)-3-三氟曱基-苯曱酰胺是通过将4-甲基-3-硝基-苯胺(B)和3-三氟甲基-苯甲酰氯(C)在二氯曱烷中、在三乙胺存在下于 室温下进行反应来获得的。以良好的产率获得了中间体(A)。之前在文献和 专利文件中已经描述了类似的不同苯胺(例如CAS号30069-31-9)。对于偶
44联而言，使用相应的酰氯。
根据类似于一般方法的方法，用适当的原料合成反向的3-氨基-苯曱酰 胺衍生物，即3-氨基-4-曱基-N-(3-三氟曱基-苯基)-苯曱酰胺。
实施例1
吡唑并[1 ，5-a嘧啶-6-曱酸[2-曱基-5-(3-三氟曱基-苯基氨甲酰基)-苯基卜 酰胺，下式的化合物
CF3
将135 mg的吡唑并[l,5-al嘧啶-6-曱酰氯溶于5 ml无水THF中，获得 的混合物用189 mg的N-(3-氨基-4-甲基-苯基)-3-三氟曱基-苯曱酰胺在室温 下处理。完成后(lh)，过滤所得的浅黄色混悬液，用5mlTHF洗涤。从所 得混合物中蒸发除去溶剂，蒸发的残余物用色语分离(35g RS70-SiOH Chromabond, ISCO Sg-100;用TBME洗脱)。获得吡唑并[1，5-31嘧啶-6-甲酸2-甲基-5-(3-三氟曱基-苯基氨甲酰基)-苯基卜酰胺，其在MeOH中进 行结晶。
mp. 222画224。C; MS(ESI+):m/z= 439.8 (M+H)+; HPLC: tRet = 5.67分 钟(系统1)。 步骤1.1
7-羟基-吡唑并〖1,5-31嘧啶-6-曱酸乙酯
参考文献Yasuo Makisumi; 0^附.尸^^附.5"〃. 1962;巻10， 620-626页。
将5.10 g的2H-吡唑-3-基胺溶解于120 ml EtOH中，获得的混合物用
4513.4 g的2-乙氧基亚曱基-丙二酸二乙酯在120ml EtOH中的溶液在室温下 处理。将所得的浅黄色溶液回流搅拌19 h。向获得的混合物中加入60 ml 乙酸，继续回流搅拌57h。获得白色的混悬液，将其冷却至室温。结晶得 到固体，滤出结晶产物并干燥。获得7-羟基-吡唑并[l，5-a嘧啶-6-曱酸乙酉旨。 mp. 81-81。C; MS(ESI+):m/z= 254.1 (M+H)+; HPLC: tRet = 4.71分钟(系统1)。
步骤1.2
7-氯-吡唑并[1,5-31嘧啶-6-曱酸乙酯
参考文献Robert H. Springer; M. B. Scholten; Darrell E. O'Brien; Thomas Novi謂n; Jon P. Miller和Roland K. Robins;丄AMC7i纖1982; 巻25; 235-242页。
将8.98 g的7-羟基-吡唑并[l,5-a嘧啶-6-曱酸乙酯混悬于100 ml POCl3 中，在室温下加入11.76 ml N，N-二乙基苯胺。将获得的微黄色混悬液緩慢 加热至回流，持续搅拌2h。获得的混合物冷却至室温，减压除去POCb， 将获得的油状残余物倒入冰水中。所得混合物用TBME萃取，获得的有机 相用饱和的NaHCO;j水溶液和水洗涤，干燥并减压浓缩。所得残余物从正 庚烷中结晶，获得7-氯-吡唑并[1 ，5-aj嘧啶-6-曱酸乙酯。
mp. 93誦95。C; HPLC: tRet = 4.73分钟(系统1)。
步骤1.3:
吡唑并l,5-al嘧啶-6-甲酸乙酯
将2.05 g的7-氯-吡唑并[l，5-aj嘧咬-6-曱酸乙酯溶于100 ml EtOH中， 向所得混合物中加入0.2 g的5%Pd/C和734 mg无水醋酸钠。所得混合物 在室温下在常压下氢化2.5h。从所得混合物中除去催化剂，蒸发溶剂，将 蒸发的残余物用色谱分离(120g Redisep， ISCO Sg-100;用EtOAc:己烷1:1 洗脱)，从EtOH中结晶得到吡唑并l，5-a]嘧啶-6-曱酸乙酯。
mp. 78-79。C; MS(ESI+):m/z= 191.9 (M+H)+; HPLC: tRet = 4.38分钟(系 统1)。
除了吡唑并[1，5-3嘧啶-6-曱酸乙酯外，另 一种中间体4,7-二氢-吡唑并
46[l，5-a嘧啶-6-曱酸乙酯也以结晶形式从反应混合物中分离出来(mp. 198-200oC; MS(ESI+):m/z= 194 (M+H)+; HPLC: tRet = 3.91分钟(系统1)， 其用于合成实施例3。 步骤1.4
吡唑并l,5-al嘧啶-6-曱酸
将350 mg的吡唑并[l，5-aj嘧啶-6-曱酸乙酯混悬于8 ml的2N NaOH 中，所得混合物在室温下搅拌lh，加入10ml乙酸。从所得混合物中减压 除去溶剂(高真空，3t)。C)。所得残余物用50 ml水处理，EtOAc萃取。所 得有机相用水洗涤，干燥并减压浓缩至小体积。结晶并滤出吡唑并[l,5-aj 嘧啶-6-曱酸。
mp. 228-233。C; MS(ESI+):m/z= 63.9 (M+H)+; HPLC: tRet = 3.39分钟 (系统1)。
步骤1.5
吡唑并l，5-al嘧啶-6-曱酰氯
将105 mg的吡唑并[l,5-a嘧啶-6-甲酸混悬于2 ml亚硫酰氯中，所得 混合物回流搅拌45分钟(水浴=90°(:)。将所得混合物冷却至室温，减压除 去溶剂。所得残余物用5 ml的CH2Ch处理并再次蒸发，重复两次。获得 吡唑并[l，5-al嘧啶-6-甲酰氯，其可以不经进一步纯化而使用。
实施例2
吡唑并[l,5-a嘧啶-6-曱酸[2-曱基-5-(3-三氟甲基-苯曱酰氨基)-苯基j-酰 胺，见下式
47使用适当的原料，按照实施例1中所述类似的方法制备。
mp. 239誦241。C; MS(ESI+):m/z= 439.9 (M+H)+; HPLC: tRet = 5.55分钟 (系统1)。
实施例3
4,7-二氢-吡唑并[l,5-aj嘧啶-6-曱酸[2-曱基-5-(3-三氟甲基-苯基氨甲酰 基)-苯基I-酰胺，见下式
H
在室温下将75 mg的4，7-二氢-吡唑并l，5-a嘧啶-6-甲酸乙酯溶于3 ml DMF中，所得混合物用134 mg的N-(3-氨基-4-曱基-苯基)-3-三氟甲基-苯 曱酰胺处理。混合物冷却至0。C,加入丙基膦酸酐(1.09g/ml)、 0.318 ml三 乙胺和22.7 mg的4-二曱氨基吡啶。将所得混合物从水浴中取出，在室温 下继续搅拌lh。将所得混合物倒入盐水中，用EtOAc萃取所得的混合物。 获得的有机相用饱和的NaHC03水溶液和盐水洗涤并干燥。减压浓缩所得 混合物，残余物用5mlEtOAc处理。结晶得到4，7-二氢-吡唑并l，5-aj嘧啶 -6-曱酸2-曱基-5-(3-三氟曱基-苯基氨曱酰基)-苯基I-酰胺，结晶产物进一步 用色谱纯化(12 g Redisep， ISCO Sg-100;用CH2Cl2:CH3OH 95:5洗脱)。
mp. 259-263。C; MS(ESI+):m/z= 442 (M+H)+; HPLC: tRet = 5.35分钟 (系统1)。
实施例4
3-[3-(4-甲基-哌溱-l-基)-苯基卜吡唑并[1，5-aj嘧啶-6-曱酸(2，6-二甲基-苯基)-酰胺，见下式
48使用适当的原料，按照实施例1中所述类似的方法制备。
mp. 227-229。C; MS(ESI+):m/z= 441.1 (M+H)+; HPLC: tRet = 5.05分钟 (系统l)。
3-[3-(4-曱基-哌溱-l-基)-苯基-吡唑并[l，5-al嘧啶-6-曱酸按照实施例1 的步骤1.1所述类似的方法制备，但是使用适当的原料。mp. 274-281°C; MS(ESI+):m/z= 338.1 (M+H)+; HPLC: tRet = 4.28分钟(系统1)。 4画[3画(4画曱基 -哌嗪-1-基)-苯基1-1好-吡唑-3-基胺的合成描述于WO2005/070431中。
实施例5
3-(3,4-二曱氧基-苯基)-吡唑并1，5-3嘧啶-6-曱酸(2,6-二曱基-苯基)-酰
胺
使用适当的原料，按照实施例1中所述类似的方法制备。 mp. 230-232。C; MS(ESI+):m/z= 403 (M+H)+; HPLC: tRet = 5.63分钟 (系统1)。3- (3，4-二曱氧基-苯基)-吡唑升[1，5-3嘧啶-6-曱酸 使用适当的原料，按照实施例1的步骤1.1所述类似的方法制备。 mp. 229画231。C; MS(ESI+):m/z= 300.0 (M+H)+; HPLC: tRet = 4.85分钟
(系统l)。
4- (3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺的合成描述于WO2005/070431中。
实施例6
吡唑并[1，5-aj嘧啶-6-曱酸[5-(4-氟-3-三氟曱基-苯曱酰氨基)-2-甲基-苯 基l-酰胺，见下式
使用适当的原料，按照实施例1的步骤1.1所述类似的方法制备。 mp. 267-269。C; MS(ESI+):m/z= 457.9 (M+H)+; HPLC: tRet = 5.54分钟 (系统1)。
实施例7
吡唑并[l，5-a嘧啶-6-曱酸[5-(4-甲氧基-3-三氟曱基-苯甲酰氨基)-2-曱 基-苯基j-酰胺，见下式
使用适当的原料，按照实施例1中所述类似的方法制备。 mp. 256誦258。C; MS(ESI+):m/z= 469.9 (M+H)+; HPLC: tRet = 5.54分钟 (系统1)。
NH
NH
50实施例8
EDhB4激酶活性的抑制
使用在上面一般性描述中所述的试验系统，对实施例1和2的化合物 抑制EphB4激酶的能力进行检验。发现其特别是具有在一般性描述中所给 出的范围内的IC50值(nmo1/1)。
才艮据之前描述的方法(EphB4 ELISA),对实施例1-3的化合物的生物 活性进行检验，所有3个化合物表现出0.1-1.5 的ICso值。
实施例9
包含式I化合物的软胶嚢
按下述制备5000粒软明胶胶嚢，其各自包含0.05g如实施例1-7中任 意 一个实施例所述的任意 一种式I化合物作为活性成分 组成
活性成分 250 g
Lauroglycol 2升
制备方法将粉碎的活性成分混悬于Lauroglykol* (丙二醇月桂酸酉旨, Gattefoss6 S.A.， Saint Priest,法国)中，并将其在湿粉碎器中进行研磨以产 生约1-3 pm的粒度。然后，用胶嚢填充机将每份0.419g的混合物引入到 软明胶胶嚢中。
实施例10
包含式I化合物的片剂
按照标准操作，制备具有以下组成的片剂，其包含100mg如实施例1-7 中任意一个实施例所述的任意一种式I化合物作为活性成分
51组成
活性成分100 mg
结晶乳糖240 mg
Avicel80 mg
PVPPXL20 mg
Aerosil2 mg
硬脂酸镁5 mg
447 mg
制备将活性成分与载体材料混合，并用压片机(KorschEKO,压模直 径10 mm)进4亍压制。
Avicel⑧是微晶纤维素(FMC，费城，美国)。PVPPXL是交联聚乙烯吡 咯烷酮(巴斯夫公司(BASF),德国)。Aerosi隨是二氧化硅(德固赛公司 (Degussa)，德国)。
5权利要求
1. 式I的化合物其中R1不存在，或为H或C1-7烷基；R2为H、苯基，所述苯基被C1-7烷氧基或含N的具有6个环原子的杂环基单或二取代，所述杂环基任选地被C1-7烷基取代；R3为C1-7烷基，或-NH-CO-苯基或-CO-NH-苯基，其中所述苯基未被取代或被C1-7烷基、卤代C1-7烷基、C1-7烷氧基或卤素取代；n为0-2，条件是当R1不存在时，虚线表示所得嘧啶环中N1和C2、C3和C4之间的两个双键，或者当R1为氢时，虚线表示所得1，4-二氢嘧啶环中C2和C3之间的双键。
2.如权利要求1所述的化合物，其中， Rl不存在或为氢，R2为氢、被d—4烷氧基单或二取代的苯基、或被具有6个环原子和1 或2个氮杂原子的饱和杂环基取代的苯基，所述杂环基任选地被Cw烷基 取代，例如被甲基取代的哌溱基，n为1或2，且R3为Cw烷基，或-NH-CO-苯基或-CO-NH-苯基，其中所述苯基未被取代或被Cw烷基、卣代C,-4烷基、Cw烷氧基或 卤素取代。
3. 如权利要求1或2中任意一项所述的化合物，其选自下述 吡唑并[1，5-3嘧啶-6-曱酸[2-曱基-5-(3-三氟甲基-苯基氨曱酰基)-苯基卜酰胺；吡唑并1，5-3]嘧啶-6-曱酸2-曱基-5-(3-三氟曱基-苯甲酰氨基)-苯基-酰胺；，7-二氢-吡唑并[l，5-a]嘧啶-6-曱酸[2-甲基-5-(3-三氟曱基-苯基氨曱酰 基)-苯基l-酰胺；3-[3-(4-曱基-哌溱-l-基)-苯基j-吡唑并|1 ，5-a嘧啶-6-曱酸(2,6-二甲基-苯基)-酰胺；3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5^1嘧啶-6-甲酸(2，6-二曱基-苯基)-酰胺；吡唑并[1 ，5-aj嘧啶-6-曱酸15-(4-氟-3-三氟甲基-苯曱酰氨基)-2-甲基-苯 基j-酰胺；和吡唑并ll，5-al嘧啶-6-甲酸[5-(4-甲氧基-3-三氟甲基-苯甲酰氨基)-2-甲基-苯基-酰胺。
4. 如权利要求l-3中任意一项所述的化合物，其为盐形式。
5. 如权利要求l-4中任意一项所述的化合物，其用作药物。
6. 药物组合物，其包含如权利要求1-4中任意一项所述的化合物以及 至少一种可药用的赋形剂。
7. 治疗对蛋白激酶调节有响应的病症的方法，所述治疗包括向需要该 治疗的个体施用治疗有效量的如权利要求1-4中任意一项所述的化合物。
8. 如权利要求l-4中任意一项所述的化合物，其用于制备治疗对蛋白 激酶调节有响应的病症的药物。
9. 如权利要求1-4中任意一项所述的化合物，其用于治疗对蛋白激酶调节有响应的病症。
10. 如权利要求7所述的治疗方法或者如权利要求8或9中任意一项 所述的化合物，其中所述对蛋白激酶调节有响应的疾病是一种或多种疾病， 其选自对一种或多种蛋白酪氨酸激酶的抑制有响应的疾病，所述蛋白酪氨 酸激酶选自c-src激酶、VEGF-受体激酶(例如KDR和Flt-l)、 RET-受体 激酶和/或Ephrin受体激酶，例如EphB2激酶、EphB4激酶或相关激酶。
11. 如权利要求1-4中任意一项所述的化合物与至少一种第二药物的 组合。
12. 如权利要求11所述的组合作为药物的用途。
13. 如权利要求11所述的组合在如权利要求7或10中任意一项所述 的方法中的用途。
全文摘要
式(I)的化合物，其中各基团具有不同的含义；其制药用途、包含所述化合物的药物组合物、制备方法以及在治疗对蛋白激酶调节有响应的病症中的用途。
文档编号C07D487/04GK101535313SQ200780040740
公开日2009年9月16日 申请日期2007年10月29日 优先权日2006年10月30日
发明者P·因巴赫, P·菲雷 申请人:诺瓦提斯公司