包含肿瘤排斥抗原ny-eso-1和lage-1的融合蛋白的制作方法

专利名称：包含肿瘤排斥抗原ny-eso-1和lage-1的融合蛋白的制作方法
技术领域：
总的来说，本发明涉及包含衍生自肿瘤排斥抗原NY-ESO-1和LAGE-1中的一种或两种的抗原的多肽和构建体。

背景技术：
癌睾丸(CT)抗原是其表达正常限于睾丸、卵巢或滋养层细胞中的生殖细胞的一类肿瘤相关抗原。这些抗原通常在成年体细胞组织中不表达。参见，Simpson等人，Nat.Rev.Cancer，5(8)615-625(2005)；Scanlan，等人，Immunol.Reviews，18822-32(2002)；Scanlan，等人，Canc.Immun.，41-15(2004)。
CT抗原的基因调节在癌症患者中被破坏，从而导致这些抗原在广泛多样的肿瘤中异常表达。待鉴定的第一种CT抗原MAGE-1在20世纪90年代早期通过T细胞表位克隆得到鉴定(van der Bruggen等人，1991 Science 13；254(5038)1643-7；van der Bruggen等人，1999 Science2541643-1647；Traversari，等人，1992 Immunogenetics，35(3)145-152；和美国专利号5,342,774，引入作为参考)。自那以后，血清学表达克隆技术(SEREX)(Sahin，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92(25)11810-11813(1995)和美国专利号5,698,396)、在酵母表面上的重组抗原表达(RAYS)(Mischo，等人，Canc.Immun.，35-16(2003))和差异mRNA表达分析(Gure，等人，Int.J.Canc.，85(5)726-732(2000))已导致约90种CT抗原的鉴定，并且它们的数目预期在未来年份中增长。癌症患者中的一些CT抗原的免疫原性使得它们成为用于开发肿瘤疫苗的理想靶。
NY-ESO-1。用于在癌症免疫治疗中使用的目前感兴趣的癌睾丸抗原是NY-ESO-1。这种抗原首先通过SEREX在90年代晚期在New YorkBranch of the Ludwig Institute for Cancer Research在食管鳞状细胞癌中得到鉴定(Chen，等人，PNAS USA，94(5)1914-1918(1997)；和美国专利号5,804,381，引入作为参考)。
蛋白质NY-ESO-1长180个氨基酸，并且可以描述为由3个区域组成 ■N末端区域约或大约氨基酸1-70， ■中央区域 约或大约氨基酸71-134，和 ■C末端区域约或大约氨基酸135-180。
胶原样区域包含N末端区域的约或大约或约氨基酸15-73(参见图1)。
蛋白质NY-ESO-1已在广泛多样的肿瘤中发现，包括但不限于卵巢癌、肺癌、乳腺癌、前列腺(prostrate)、食管癌、膀胱癌和黑素瘤中。(Nicholaou T，等人，Immunol Cell Biol.2006 Jun；84(3)303-17和Jungbluth，等人2001，Int.J.Canc.，92(6)856-860)。针对这种抗原的自发性体液和细胞免疫应答已在具有NY-ESO-1阳性肿瘤的患者中描述，并且许多HLA(人白细胞抗原)I和II类限制的肽已得到鉴定(Jager，等人，1998J.Exp.Med.，187(2)265-270；Yamaguchi，等人，2004 Clin.Canc.Res.，10(3)890-961；和Davis，等人，2004Proc.Natl.Acad.Sci.USA，101(29)10697-10702)。示例性专利文献是美国专利号6,140,050；6,251,603；6,242,052；6,274,145；6,338,947；6,417,165；6,525,177；6,605,711；6,689,742；6,723,832；6,756,044；和6,800,730，全部引入作为参考。
在临床试验中，具有对于HLA-A2的结合基序的3种部分重叠的NY-ESO-1衍生肽(157-167、157-165和155-163)已在疫苗中使用以用于治疗具有转移性NY-ESO-1表达肿瘤的12个患者。这个研究证实合成NY-ESO-1肽可以安全地施用，并且能够产生潜在有利的T细胞应答(Jager，等人，2000 PNAS USA，97(22)12198-12203)。
蛋白质中的许多MHC(主要组织相容性复合物)I和II类表位已由不同团体得到鉴定，参见例如图1。这些表位仅是对于蛋白质报道的表位的代表，并且图1中的列表不是详尽的。此外，图1中报告和/或列出的至少一种或多种表位尚未通过实验加以证实。N末端中的胶原样区域包含在本文中称为A31的至少一种MHC I类表位。中央区域包含在本文中称为DR1、DR2、DR4、DR7和DP4的几种MHC 2类表位。这个区域还包含在本文中称为B35、B51、Cw3和Cw6的几种MHC I类表位。C末端被认为包含至少2种II类表位(DR4和DP4)和1种I类表位(A2)。
LAGE-1。进一步的癌睾丸抗原LAGE-1也已得到鉴定。2种LAGE-1转录物LAGE-1a和LAGE1b已得到描述。LAGE1b是不完全剪接的，并且编码大约210个氨基酸残基的推定蛋白质，而LAGE-1a基因产物包含180个氨基酸残基(Sun等人Cancer Immunol Immunother 200655644-652)。
LAGE-1和NY-ESO-1蛋白质的N末端区域是高度保守的，并且被认为具有超过97％同一性。然而，LAGE-1在中央区域中不同于NY-ESO-1，所述中央区域仅62％等同。NY-ESO-1和LAGE-1a的C末端是高度保守的(超过97％同一性)。然而，LAGE-1b的C末端更长且不是保守的，并且被认为与LAGE-1a/NY-ESO-1中的相同区域具有小于50％同一性。
与这些蛋白质相关的一般信息可从LICR网站(参见www.cancerimmunity.org/CTdatabase)获得。


发明内容
本发明提供了包含下述的免疫原性融合蛋白 (i)NY-ESO-1或其片段，其连接到 (ii)LAGE-1或其片段， 其中NY-ESO-1和/或LAGE-1中的至少一种是截短的或部分截短的，或是包括NY-ESO-1或LAGE-1的一个或多个表位的片段。本发明还提供了包含下述的免疫原性融合蛋白 (i)LAGE-1或其片段，其连接到 (ii)NY-ESO-1或其片段， 其中NY-ESO-1和/或LAGE-1中的至少一种是截短的或部分截短的，或是包括NY-ESO-1或LAGE-1的一个或多个表位的片段。因此，还提供了包含截短的或部分截短的NY-ESO-1或包括NY-ESO-1的一个或多个表位的其片段的多肽和融合蛋白。还提供了包含截短的或部分截短的LAGE-1或包括LAGE-1的一个或多个表位的其片段的多肽和融合蛋白。还提供了涉及此种融合蛋白和多肽的组合物和方法。



图1显示在NY-ESO-1蛋白质上已由不同团体鉴定的许多MHC(主要组织相容性复合物)I和II类表位。这些表位仅是对于蛋白质报道的表位的代表，因此图1中的列表不是详尽的。此外，图1中报告和/或列出的至少一种或多种表位尚未通过实验加以证实。关于NY-ESO-1报道的氨基酸序列在本文中SEQ ID NO49中发现。
图2显示构建体A，包含全长NY-ESO-1和截短的LAGE-1例如LAGE-1a的融合蛋白。在这个实施方案中，NY-ESO-1的C末端与截短的LAGE-1的N末端连同组氨酸亲和标记物融合，以提供长度为288个氨基酸的融合蛋白。构建体A的更多细节在表1中给出(SEQ ID NO1、SEQ ID NO3)。
图3显示构建体B，包含不含其分泌信号的蛋白质D的前三分之一(例如氨基酸20-127)、全长NY-ESO-1和截短的LAGE-1例如LAGE-1a的融合蛋白。在这个实施方案中，蛋白质D的氨基酸127与NY-ESO-1的N末端融合，所述NY-ESO-1的C末端与截短的LAGE-1的N末端融合，以提供长度为398个氨基酸的融合蛋白。构建体B的更多细节在表1中在部分1.6中给出(SEQ ID NO2、SEQ ID NO4)。
图4显示构建体C，包含部分截短的NY-ESO-1和截短的LAGE-1例如LAGE-1a的融合蛋白。在这个实施方案中，部分截短的NY-ESO-1的C末端与截短的LAGE-1的N末端融合，以提供长度为242个氨基酸的融合蛋白。构建体C的更多细节在表1中给出(SEQ ID NO5、SEQID NO7)。
图5显示构建体D，包含不含其分泌信号的蛋白质D的前三分之一(例如氨基酸20-约或大约127)、部分截短的NY-ESO-1和截短的LAGE-1例如LAGE-1a的融合蛋白。在这个实施方案中，蛋白质D的氨基酸127与部分截短的NY-ESO-1的N末端融合，所述部分截短的NY-ESO-1的C末端与截短的LAGE-1的N末端融合，以提供长度为352个氨基酸的融合蛋白。这个实施方案的更多细节在表1中给出(SEQ IDNO6、SEQ ID NO8)。
图6显示构建体E，包含截短的NY-ESO-1和截短的LAGE-1例如LAGE-1a的融合蛋白。在这个实施方案中，截短的NY-ESO-1的C末端与截短的LAGE-1的N末端融合，以提供长度为211个氨基酸的融合蛋白。构建体E的更多细节在表1中给出(SEQ ID NO9、SEQ ID NO11)。
图7显示构建体F，包含不含其分泌信号的蛋白质D的前三分之一(例如氨基酸20-约或大约127)、截短的NY-ESO-1和截短的LAGE-1例如LAGE-1a的融合蛋白。在这个实施方案中，蛋白质D的氨基酸127与截短的NY-ESO-1的N末端融合，所述截短的NY-ESO-1的C末端与截短的LAGE-1的N末端融合，以提供长度为321个氨基酸的融合蛋白。构建体F的更多细节在表1中给出(SEQ ID NO10；SEQ ID NO12)。
图8显示构建体E的可替代实施方案，即E′，其中截短的LAGE-1的C末端与截短的NY-ESO-1的N末端融合，以提供长度为212个氨基酸的融合蛋白。这个实施方案构建体E′的更多细节在表1中给出(SEQ IDNO21；SEQ ID NO23)。
图9显示构建体G，包含截短的NY-ESO-1、截短的LAGE-1例如LAGE-1a、和胶原样区域例如来自NY-ESO-1的胶原区域的融合蛋白。在这个实施方案中，胶原样区域的C末端例如与截短的LAGE-1的N末端融合。依次截短的LAGE-1的C末端与截短的NY-ESO-1的N末端融合，以提供长度为289个氨基酸的融合蛋白。构建体G的更多细节在表1中给出(SEQ ID NO13；SEQ ID NO15)。
图10显示包含具有部分截短的胶原样结构域的NY-ESO-1的示例性重组多肽的示意图。图10-13中显示的表位仅是对于该蛋白质报告的表位的代表，并且尚未通过实验加以证实。
图11显示包含不含其分泌信号的蛋白质D的前三分之一(例如氨基酸20-约或大约127)和具有部分截短的胶原样结构域的NY-ESO-1的示例性融合蛋白的示意图。
图12显示包含具有部分截短的胶原样结构域的NY-ESO-1的示例性重组多肽的示意图。
图13显示包含不含其分泌信号的蛋白质D的前三分之一(例如氨基酸20-约或大约127)和具有截短的胶原样结构域的NY-ESO-1的示例性融合蛋白的示意图。
图14是显示在截短的LAGE-1a蛋白质内鉴定的许多表位的示意图。这些表位仅是对于该蛋白质报告的表位的代表，因此列表不是详尽的。为了避免疑问，该图中报告和/或列出的表位可能已通过实验加以证实或可能尚未通过实验加以证实(即，它们可能已被预测等)，除非本文另有说明。完全的LAGE-1a氨基酸序列在序列表中作为SEQ ID NO58列出。完全的LAGE-1b氨基酸序列(LAGE-1b在这个图中未描述)在序列表中作为SEQ ID NO71列出。
图15显示NY-ESO-1和LAGE-1，以及许多MHC(主要组织相容性复合物)I和II类表位的示意图。这些表位仅是对于该蛋白质报告的表位的代表，因此列表不是详尽的；所报告和/或列出的一种或多种表位尚未通过实验加以证实。
图16显示NY-ESO-1/LAGE-1融合设计的示意图。
图17以示意性方式概括了15种构建体及其生产水平。P＝蛋白质D；C(灰色框)＝NY-ESO-1胶原样结构域；C(白色框)＝截短的胶原样结构域；L＝不含胶原样结构域的Lage 1；N＝不含胶原样结构域的NY-ESO-1；黑箭标＝聚组氨酸标签；(-)＝低生产；(+)＝一些生产；(++)＝高生产；(+++)＝最佳生产。关于8种构建体的氨基酸序列和编码其的核苷酸序列概括于表4和序列表中。
图18概括筛选#1，使用CB6F1小鼠评估LVL076、LVL079、LVL78、LVL68、LVL020、LVL26、LVL024、LVL30中的每一种的76天试验，以测定用融合蛋白加佐剂的肌内免疫接种是否赋予针对用移植肿瘤(B16/NYESO1)的皮下攻击的保护。
图19概括在76天试验中使用的对照小鼠中的B-16-NY-ESO-1肿瘤生长。
图20显示用全长NY-ESO-1、LVL030、LVL068、LVL079或LVL026免疫接种的小鼠的存活。
图21概括如通过ELISA、FACS和蛋白质印迹评估的NY-ESO-1特异性免疫应答，以及如通过ELISA和FACS评估的LAGE-1a(不含胶原样结构域)特异性免疫应答。
图22概括筛选#2，105天试验的实验设计，以测定用所选择的融合蛋白加佐剂的肌内免疫接种是否赋予针对B16/NY-ESO-1攻击和B16/LAGE-1a攻击的保护。显示了B16/NY-ESO-1攻击。
图23概括了筛选#2，并且显示了B16/LAGE-1a攻击。
图24显示B16/NY-ESO-1攻击后用LVL078、LVL068、全长NY-ESO-1、LVL024和LVL076免疫接种的小鼠的存活。参见图24。
图25显示B16/LAGE-1a攻击后用LVL076、不含胶原样区域的LAGE-1a、LVL024、全长NY-ESO-1、LVL078或LVL068免疫接种的小鼠的存活。
图26。从左往右的柱1-8显示所执行的ELISAs的结果，以检测在用下述之一免疫接种的小鼠中可能的人胶原特异性免疫应答(1)缓冲液(对照)；(2)全长NY-ESO-1；(3)不含胶原样结构域的LAGE-1a；(4)LVL068；(5)LVL078；(6)LVL024；(7)LVL076。阳性对照(柱8)包含抗人胶原1单克隆抗体(mAb抗人胶原I)。

具体实施例方式 融合蛋白。本发明的融合蛋白用于治疗癌症，且更具体而言用于治疗黑素瘤；乳腺癌；前列腺癌；膀胱癌包括移行细胞癌；肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)；头与颈癌包括食管癌；鳞状细胞癌；胃肠道癌；肝癌；脑肿瘤；白血病；和各种肉瘤。
基于LAGE-1和NY-ESO-1的表达概况，根据本发明的融合蛋白具有在估计37％的乳腺癌中有效的潜力。根据本发明的处理也可能特别适合于治疗对于Her2/neu靶向治疗不合格的患者。本发明的融合蛋白也预期在约35％的前列腺癌患者、35％膀胱癌患者、40％黑素瘤患者和35％具有NSCLC(非小细胞肺癌)的患者中有效。在一个实施方案中，本发明的融合蛋白可以使得能够治疗更广泛的患者群体，因为具有表达NY-ESO-1和/或LAGE-1(包括LAGE-1a和LAGE-1b)的肿瘤的患者可以给予本发明的融合蛋白。
根据本发明的融合蛋白也可以比其个别组分蛋白质更有免疫原性，这是由于下述原因 ■一个或多个胶原样结构域的去除可以减少由其与天然内源胶原结构的同源性引起的化合物的潜在免疫耐受性，或 ■异源融合配偶体的任选添加可以进一步刺激CD4T细胞应答。因此，融合蛋白用于诱导对于癌症抗原例如NY-ESO-1或LAGE-1或两者的免疫原性应答。
在本发明中使用的NY-ESO-1可以是全长、部分截短的或截短的NY-ESO-1或其任何片段，所述片段包括能够引起对于NY-ESO-1的免疫应答的一个或多个表位。在本说明书的背景中的全长NY-ESO-1蛋白质意指约或大约1-180个氨基酸，且与天然存在的蛋白质(SEQ ID NO49)至少95、96、97、98、99％或100％等同的蛋白质。如本文所使用的，术语“LAGE-1”指一个或多个LAGE-1家族成员，例如LAGE-1a和LAGE 1b，如下文所述。“全长LAGE-1a”蛋白质意指与SEQ ID NO58为95、96、97、98、99％或100％等同的蛋白质。类似地，“全长LAGE-1b”蛋白质意指与天然存在的蛋白质(SEQ ID NO71)95、96、97、98、99％或100％等同的蛋白质。
在一个实施方案中，同一性在序列的全长上。因此，本发明还延伸至具有保守置换的所述融合蛋白。保守置换是众所周知的，并且一般根据序列比对计算机程序中的缺省评分矩阵建立。这些程序包括PAM250(Dayhoft M.O.等人，(1978)，″A model of evolutionary changes inproteins″，″Atlas of Protein sequence and structure″5(3)M.O.Dayhoft(ed.)，345-352)，National Biomedical Research Foundation，Washington，和Blosum 62(Steven Henikoft和Jorja G.Henikoft(1992)，和″Amino acidsubstitution matricies from protein blocks″)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89(Biochemistry)10915-10919。
一般而言，在下述组内的置换是保守置换，但组间置换被视为非保守的。组是 i)天冬氨酸/天冬酰胺/谷氨酸/谷氨酰胺， ii)丝氨酸/苏氨酸， iii)赖氨酸/精氨酸， iv)苯丙氨酸/酪氨酸/色氨酸， v)亮氨酸/异亮氨酸/缬氨酸/甲硫氨酸， vi)甘氨酸/丙氨酸。
在本说明书背景中的“部分截短的”意指NY-ESO-1或LAGE-1蛋白质(适当时)，其中大部分胶原样区域已被去除，但仍包含这个区域中发现的表位A31或由这个区域中发现的表位A31组成。
在一个实施方案中，部分截短的NY-ESO-1和/或LAGE-1包含下述氨基酸范围或由下述氨基酸范围组成氨基酸44、45、46、47、48、49、50、51或52至氨基酸175、176、177、178、179或180，或这些氨基酸的任何组合，例如氨基酸48-氨基酸180或氨基酸46-氨基酸178。在一个实施方案中，部分截短的NY-ESO-1或LAGE-1包含约或精确地氨基酸48-180(或在LAGE-1b的情况下，约或精确地氨基酸48-210)，或由约或精确地氨基酸48-180(或在LAGE-1b的情况下，约或精确地氨基酸48-210)组成。在一个实施方案中，在这个背景中的术语“约”可以用于指最高达序列氨基酸总数目+/-10％的氨基酸任选从序列中添加或缺失。在一个实施方案中，部分截短的NY-ESO-1包含NY-ESO-1的氨基酸48-180，或由NY-ESO-1的氨基酸48-180组成。
在一个实施方案中，部分截短的LAGE-1b包含下述氨基酸范围或由下述氨基酸范围组成氨基酸44、45、46、47、48、49、50、51或52至氨基酸205、206、207、208、209或210，或这些氨基酸的任何组合，例如氨基酸48-氨基酸210或氨基酸46-氨基酸208。在一个实施方案中，部分截短的LAGE-1b包含约或精确地氨基酸48-210，或由约或精确地氨基酸48-210组成。在一个实施方案中，在这个背景中的术语“约”可以用于指最高达序列氨基酸总数目+/-10％的氨基酸任选从序列中添加或缺失。在一个实施方案中，部分截短的LAGE-1b包含LAGE-1b的氨基酸48-210，或由LAGE-1b的氨基酸48-210组成。
在本说明书背景中的“截短的”意指NY-ESO-1或LAGE-1蛋白质(适当时)，其中胶原样区域已被去除(包括A31表位的去除)。在一个实施方案中，截短的NY-ESO-1和/或LAGE 1包含约或精确地氨基酸71-180(或在LAGE-1b的情况下，约或精确地氨基酸71-210)，或由约或精确地氨基酸71-180(或在LAGE-1b的情况下，约或精确地氨基酸71-210)组成。
在一个实施方案中，截短的NY-ESO-1或LAGE-1包含下述氨基酸范围或由下述氨基酸范围组成氨基酸67、68、69、70、71、72、73、74或75至氨基酸175、176、177、178、179或180，或这些氨基酸的任何组合，例如氨基酸71-氨基酸180或氨基酸69-氨基酸178。在一个实施方案中，截短的NY-ESO-1或LAGE-1包含约或精确地氨基酸71-180(或在LAGE-1b的情况下，约或精确地氨基酸71-210)，或由约或精确地氨基酸71-180(或在LAGE-1b的情况下，约或精确地氨基酸71-210)组成。
在一个实施方案中，在这个背景中的术语“约”可以用于指最高达序列氨基酸总数目+/-10％的氨基酸任选从序列中添加或缺失。在一个实施方案中，截短的NY-ESO-1或LAGE-1包含NY-ESO-1或LAGE-1的氨基酸71-180，或由NY-ESO-1或LAGE-1的氨基酸71-180组成。
在一个实施方案中，截短的LAGE-1b包含下述氨基酸范围或由下述氨基酸范围组成氨基酸67、68、69、70、71、72、73、74或75至氨基酸205、206、207、208、209或210，或这些氨基酸的任何组合，例如氨基酸71-氨基酸210或氨基酸69-氨基酸208。在一个实施方案中，截短的LAGE-1b包含约或精确地氨基酸71-210，或由约或精确地氨基酸71-210组成。在一个实施方案中，在这个背景中的术语“约”可以用于指最高达序列氨基酸总数目+/-10％的氨基酸任选从序列中添加或缺失。在一个实施方案中，截短的LAGE-1b包含LAGE-1b的氨基酸71-210，或由LAGE-1b的氨基酸71-210组成。
“其他片段”意指这样的片段，当掺入本发明的融合蛋白内时，其导致具有本发明的融合蛋白的所需性质和优点的最终蛋白质。
NY-ESO-1。依照前文提供了包含衍生自肿瘤排斥抗原NY-ESO-1的抗原的修饰抗原，其中胶原区域是部分截短或完全截短的。在一些实施方案中，去除超过胶原区域。在一些实施方案中，修饰抗原是基因修饰的。在一些实施方案中，修饰抗原是重组体。在一些实施方案中，提供了包含如前述句子中描述的抗原的多肽。在一些实施方案中，示例性多肽包含异源蛋白质，例如来自流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)B型的蛋白质D或其片段。在一些实施方案中，提供了包含编码前述多肽的核苷酸序列的构建体。
在一些实施方案中，提供了包含NY-ESO-1或其片段的免疫原性多肽，其中NY-ESO-1不包括胶原样区域。在其他实施方案中，NY-ESO-1是部分截短的或截短的或包含其任何片段，所述片段包括一个或多个表位。在一些实施方案中，此种多肽具有保守置换。在一些实施方案中，此种多肽和构建体用作预防药用于预防或基本上改善癌症复发。
因此，在一些实施方案中，一个或多个氨基酸从胶原区域中去除。更具体而言，在一些实施方案中，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72或73个氨基酸从包括胶原区域的部分中去除，即大致SEQ ID NO49的氨基酸1-73。氨基酸可以从胶原区域中的邻近位置或从非邻近位置中去除。换言之，在一些实施方案中，氨基酸从SEQ ID NO49的那个部分内的下述任何位置或其任何组合中去除1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72或73。本领域技术人员理解，在一些实施方案中，氨基酸序列的部分被这样保存，从而使得其中的特定表位保留在所得到的多肽内。
在一些实施方案中，利用NY-ESO-1中央区域或C末端区域的片段。因此，在一些实施方案中，多肽可以包含SEQ ID NO49中所示氨基酸序列的一个或多个片段，即包含氨基酸位置74-75、76-80、81-85、86-90、91-95、96-100、101-105、106-110、111-115、116-120、121-125、126-130、131-135、136-140、141-145、146-150、151-155、156-160、161-165、166-170、171-175、176-180中的一个或多个或其任何组合的片段。本领域技术人员理解，在一些实施方案中，氨基酸序列被这样保存，从而使得特定表位保留在所得到的多肽内。
LAGE-1。在一些实施方案中，提供了包含衍生自肿瘤排斥抗原LAGE-1的抗原的修饰抗原，其中胶原区域是部分截短或完全截短的。在一些实施方案中，去除超过胶原区域。在一些实施方案中，修饰抗原是基因修饰的。在一些实施方案中，修饰抗原是重组体。在一些实施方案中，提供了包含如前述句子中描述的抗原的多肽。在一些实施方案中，抗原衍生自肿瘤排斥抗原LAGE-1a。在一些实施方案中，抗原衍生自肿瘤排斥抗原LAGE-1b。在其他实施方案中，示例性融合蛋白包含异源蛋白质，例如来自流感嗜血菌B型的蛋白质D或其片段。在一些实施方案中，提供了包含编码前述多肽的核苷酸序列的构建体。
在一些实施方案中，提供了包含LAGE-1或其片段的免疫原性多肽，其中LAGE-1不包括胶原样区域。在其他实施方案中，LAGE-1是部分截短的或截短的或包含其任何片段，所述片段包括一个或多个表位。在一些实施方案中，多肽包含LAGE-1多肽和NY-ESO-1的胶原样区域的杂化物。在一些实施方案中，多肽包含与部分截短的或截短的LAGE-1连接的部分或全部NY-ESO-1胶原区域。在一些实施方案中，此种多肽具有保守置换。在一些实施方案中，此种多肽和构建体用作预防药用于预防或基本上改善癌症复发。
因此，在一些实施方案中，一个或多个氨基酸从胶原区域中或甚至从N末端氨基酸中去除。更具体而言，在一些实施方案中，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72或73个氨基酸从胶原区域或甚至N末端氨基酸中去除，即大致SEQ ID NO58(LAGE-1a)或SEQ ID NO71(LAGE-1b)的氨基酸1-73。氨基酸可以从这个区域中的邻近位置或从非邻近位置中去除。换言之，在一些实施方案中，一个或多个氨基酸从SEQ ID NO58(LAGE-1a)或SEQ ID NO71(LAGE-1b)内的下述任何位置或其任何组合中去除1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72或73。本领域技术人员理解，在一些实施方案中，氨基酸序列的部分被这样保存，从而使得其中的特定表位保留在所得到的多肽内。
在一些实施方案中，利用LAGE-1中央区域或C末端区域的片段。因此，在一些实施方案中，多肽可以包含SEQ ID NO58(LAGE-1a)或SEQ ID NO71(LAGE-1b)中所示氨基酸序列的一个或多个片段，即包含氨基酸位置74、75、76、77、78、79、80、81-85、86-90、91-95、96-100、101-105、106-110、111-115、116-120、121-125、126-130、131-135、136-140、141-145、146-150、151-155、156-160、161-165、166-170、171-175、176-180中的一个或多个或其任何组合的片段。本领域技术人员理解，在一些实施方案中，氨基酸序列被这样保存，从而使得特定表位保留在所得到的多肽内。
在一个方面，本发明提供了包含全长NY-ESO-1的融合蛋白。
在一个方面，本发明提供了包含部分截短的NY-ESO-1的融合蛋白。
在一个方面，本发明提供了包含截短的NY-ESO-1的融合蛋白。
在一个方面，本发明提供了包含全长LAGE-1的融合蛋白。
在一个方面，本发明提供了包含部分截短的LAGE-1的融合蛋白。
在一个方面，本发明提供了包含截短的LAGE-1的融合蛋白。
在一个方面，在本发明中使用的LAGE-1是LAGE-1a。
在一个方面，在本发明中使用的LAGE-1是LAGE-1b。
在本发明的一个方面，NY-ESO-1的N末端与LAGE-1的C末端融合。
在本发明的一个方面，NY-ESO-1的C末端与LAGE-1的N末端融合。
通过掺入来自进一步的异源抗原的片段，例如蛋白质D，革兰氏阴性细菌流感嗜血菌B的表面蛋白质，本发明的融合蛋白的免疫原性可以进一步增加和/或蛋白质的生产性质可以进一步改善。关于衍生自蛋白质D的免疫学融合配偶体的更多信息可以得自WO 91/18926。
用于包括在本发明的融合配偶体中的蛋白质可以进行化学缀合，或可以作为重组融合蛋白进行表达。在一个实施方案中，融合蛋白作为重组融合蛋白进行表达。
进一步的异源融合配偶体可以帮助提供T辅助表位(免疫学融合配偶体)，或可以帮助以更高产量表达蛋白质(表达增强子)。在一个实施方案中，进一步的异源融合配偶体可以既是免疫学融合配偶体又是表达增强配偶体。
在一个实施方案中，蛋白质D或其衍生物包含约或精确地蛋白质的前1/3，例如，约或精确地蛋白质D的氨基酸1-109。在这个实施方案中，天然蛋白质D序列的氨基酸2-Lys和/或3-Thr可以由氨基酸2-Asp和/或3-Pro置换。在进一步的实施方案中，蛋白质D或其衍生物包含约或精确地蛋白质D的氨基酸20-127，或由约或精确地蛋白质D的氨基酸20-127组成。在一个实施方案中，用于在本发明中使用的蛋白质D不包括蛋白质的分泌序列。一般地，在本发明的融合蛋白中，蛋白质D衍生物不是脂质化的。
在一个实施方案中，蛋白质D进一步包含例如与蛋白质D片段的N末端融合的氨基酸Met、Asp和Pro(即构建体可以包含“MDP-20-127蛋白质D”，或由“MDP-20-127蛋白质D”组成)。认为这3种另外的氨基酸可以帮助稳定蛋白质和/或增加其蛋白质表达水平。
在一个方面，本发明提供了融合蛋白，其中蛋白质D(如上所述)的N末端片段(即前三分之一)与本发明的融合蛋白或其免疫原性片段的N末端融合。更具体而言，蛋白质D和本发明的融合蛋白的N末端的融合物可以这样实现，从而使得后者替代已被切除的蛋白质D的C末端片段。因此，蛋白质D的N末端变成融合蛋白的N末端。
其他异源融合配偶体或其片段可以包括在本发明的融合蛋白中，代替蛋白质D或加上蛋白质D，例如 ■来自流感病毒的非结构蛋白，NS1(血细胞凝集素)。一般地，可以使用N末端81个氨基酸，尽管还可以使用不同片段，前提是它们包括T辅助表位； ■衍生自肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)的LytA，其合成由LytA基因(Gene，43(1986)第265-272页)编码的N-乙酰-L-丙氨酸酰胺酶LytA，例如在C末端中发现的LytA分子的重复部分，例如起于残基178例如残基188-305。在一个实施方案中，异源融合配偶体是CLytA。在进一步的实施方案中，异源融合配偶体是CPC，包含CLytA-P2-CLytA的融合蛋白，如WO03/104272中所述。在其氨基末端处包含C-LytA片段的杂化蛋白质的纯化已在Biotechnology10，(1992)第795-798页中得到描述。
本发明的融合蛋白可以进一步包括亲和标记物，例如包含1-10个例如6或10个组氨酸残基的组氨酸尾(也称为his-标签)。这些残基可以例如在末端部分上，例如蛋白质的N末端和/或C末端部分。可以掺入亲和标记物，以进一步改善蛋白质的纯化。
本发明的一些具体融合蛋白可以例如如附图中所述进行构建。附图中所示的每个实施方案代表本发明的独立方面。根据本发明的融合蛋白的构建体的更多例子在表1-4中以及序列表中给出。
核酸。本发明还延伸至编码本发明的融合蛋白的核酸和多聚核酸(polynucleic acid)，例如DNA。本发明的方法可以通过常规重组技术来进行，例如Maniatis等人，Molecular Cloning-A Laboratory Manual；Cold Spring Harbor，1982-1989中描述的。特别地，方法可以包括下述步骤 i)制备能够在宿主细胞中表达包含核苷酸序列的DNA聚合物的可复制或整合表达载体，所述核苷酸序列编码融合蛋白或其免疫原性衍生物； ii)用所述载体转化宿主细胞； iii)在允许表达所述DNA聚合物以产生所述蛋白质的条件下，培养所述转化的宿主细胞；和 iv)回收所述蛋白质。
术语‘转化’在本文中用于指外来DNA引入宿主细胞内。这可以例如通过用合适的质粒或病毒载体转化、转染或感染而达到，其中使用例如如Genetic Engineering；编辑S.M.Kingsman和A.J.Kingsman；BlackwellScientific Publications；Oxford，England，1988中描述的常规技术。术语‘转化的’或‘转化体’在下文中将应用于包含且表达目的外来基因的所得到的宿主细胞。包含编码本发明的融合蛋白的核苷酸序列的表达载体是新的，并且构成本发明的部分。
可复制表达载体可以依照本发明进行制备，这通过切割与宿主细胞相容的载体以提供具有完整复制子的线性DNA区段，并且在连接条件下使所述线性区段与一种或多种DNA分子组合来实现，所述DNA分子连同所述线性片段编码所需产物，例如编码本发明的蛋白质或其衍生物的DNA聚合物。因此，需要时，DNA聚合物可以在载体的构建过程中预先形成或形成。
载体的选择将部分由宿主细胞决定，所述宿主细胞可以是原核的或真核的，但一般是大肠杆菌或CHO细胞。合适的载体包括质粒例如TMCP14或pET21或pET26、pcDNA3、噬菌体、粘粒和重组病毒。在一个实施方案中，其中表达在杆状病毒、酵母或CHO宿主细胞中，可以使用下述载体之一pEE14、pPICZA、pPICZB、pPICZC、pDMT-DEST48和pAcSG2。可复制表达载体的制备可以用关于DNA限制、聚合和连接的合适酶常规地进行，通过例如上文引用的Maniatis等人中描述的程序。
通过在转化条件下用本发明的可复制表达载体转化宿主细胞，依照本发明制备重组宿主细胞。合适的转化条件是常规的，并且在例如上文引用的Maniatis等人，或″DNA Cloning″第II卷，D.M.Glover编辑，IRLPress Ltd，1985中描述。转化条件的选择由宿主细胞确定。因此，细菌宿主例如大肠杆菌(E.coli)可以用CaCl2溶液(Cohen等人，Proc.Nat.Acad.Sci.，1973，69，2110)，或包含RbCl、MnCl2、乙酸钾和甘油的混合物的溶液进行处理，且然后用3-[N-吗啉代]-丙磺酸、RbCl和甘油进行处理。培养中的哺乳动物细胞可以通过将载体DNA钙共沉淀到细胞上进行转化。本发明还延伸至用本发明的可复制表达载体转化的宿主细胞。
DNA可以通过标准技术进行密码子最优化，以进一步促进相关宿主的表达。
在允许DNA聚合物表达的条件下培养转化的宿主细胞常规地进行，如例如上文引用的Maniatis等人和″DNA Cloning″中所述。因此，优选地给细胞提供营养素，并且在低于50℃的温度进行培养。本发明的蛋白质可以在原核生物或真核生物例如酵母中进行表达，但通常在大肠杆菌中进行表达。可以使用大肠杆菌的特定菌株，例如 ■AR58衍生自N99的隐藏λ溶素原，其为gal E::Tn 10，Δ-8(chlD-pgl)，Δ-H1(cro-chlA)，N+和cI857(参考Proc.Natl.Acad.Sci.USA第82卷，第88-92页，January 1985 Biochemistry) ■BLR(DE3)Novagen，WI，USA(目录号69053-4)BLR是BL21的recA-衍生物。一般地，掺入例如卡那霉素抗性或氨苄青霉素抗性的选择标记，以促进成功掺入表达系统内的重组基因/构建体的鉴定。
产物通过常规方法根据宿主细胞且根据表达产物的定位(细胞内或分泌到培养基内或细胞周质内)进行回收。因此，当宿主细胞是细菌例如大肠杆菌时，它可以例如物理、化学或酶促裂解，并且从所得到的裂解物中分离蛋白质产物。当宿主细胞是哺乳动物时，一般可以从营养培养基中或从无细胞提取物中分离产物。常规蛋白质分离技术包括选择性沉淀、吸附层析和包括单克隆抗体亲和柱的亲和层析。
本发明的蛋白质以液体形式可溶的或冻干形式提供。本发明还提供了包含本发明的融合蛋白和药学上可接受的赋形剂的药物组合物，例如疫苗。
当施用时，本发明的治疗组合物可以以药学上可接受的制剂进行施用。此种制剂可以常规地包含药学上可接受的浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、相容载体、补充性免疫增强剂例如佐剂和细胞因子和任选地其他治疗剂。
量当然将依赖于待治疗的具体状况，状况的严重程度，个别患者参数包括年龄、身体状况、大小和重量，治疗持续时间，同时发生的治疗(如果存在任何治疗的话)的性质，特定施用途径和在健康从业者的知识和专家经验内的类似因素。这些因素是本领域普通技术人员众所周知的，并且可以通过不超过常规试验而解决。一般优选使用个别组分或其组合的最大剂量，即根据合理医学判断的最高安全剂量。然而，本领域普通技术人员将理解，由于医学原因、心理学原因或由于基本上任何其他原因，患者可以坚持较低剂量或耐受剂量。一般预期每一个人剂量将包含1-1000μg蛋白质，且优选30-300μg。
在一个方面，用于施用本发明的融合蛋白的药物组合物将是疫苗。疫苗可以任选包含一种或多种其他肿瘤相关抗原、多肽和/或肽。例如，属于MAGE、LAGE和GAGE家族的成员。
NY-ESO-1/LAGE-1和MAGE的组合。在本发明的一个实施方案中，提供了包含下述的组合物(a)包含如本文所述的NY-ESO-1或LAGE-1抗原或融合蛋白的抗原组分，和(b)包含MAGE抗原或融合蛋白的抗原组分。在一个实施方案中，组合物可以进一步包含如本文所描述的佐剂。
用于在组合中使用的MAGE抗原可以包含全长MAGE抗原。可替代地，MAGE抗原可以包含MAGE的免疫原性部分，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多氨基酸可以从氨基酸序列缺失或在氨基酸序列中置换。在本发明的一个实施方案中，2个氨基酸可以从MAGE序列的N末端缺失。在本发明的一个实施方案中，其中抗原是MAGE-A3或其免疫原性部分，MAGE-A3的序列可以来自MAGE-A3的氨基酸3-314。
在本发明的一个实施方案中，提供了包含如本文所述的NY-ESO-1/LAGE-1抗原和/或融合蛋白和包含MAGE-A3抗原的融合蛋白的组合物。在可替代实施方案中，包含MAGE-A3抗原的融合蛋白包含MAGE-A3抗原和包含约或大约或约蛋白质D的前109个氨基酸的融合配偶体蛋白质，或由MAGE-A3抗原和包含约或大约或约蛋白质D的前109个氨基酸的融合配偶体蛋白质组成，其中来自蛋白质D的一个或两个或更多个氨基酸是任选置换的，并且其中除蛋白质D的前109氨基酸外，任选存在蛋白质D的信号序列。
本发明的融合蛋白可以另外任选包含一个或多个氨基酸，作为抗原和融合配偶体或融合配偶体蛋白质序列之间或抗原和His尾(如果存在的话)之间的“接头”。氨基酸可以与抗原和/或融合配偶体的序列无关。
如本文所描述的，本发明的融合蛋白可以另外包含在融合蛋白序列的N末端处的氨基酸Met-Asp-Pro。Met氨基酸可以来自原始蛋白质D序列或可以来自无关序列。
在一个实施方案中，用于在本发明的组合中使用的包含MAGE-A3和蛋白质D的融合蛋白序列显示于SEQ ID NO98中。SEQ ID NO98从N末端起包含下述要素 氨基酸1-18 包含1-Met以及对蛋白质D的天然氨基酸2-Lys和3-Thr的置换2-Asp和3-Pro的蛋白质D的信号序列 氨基酸19-127包括蛋白质D的氨基酸20-127 氨基酸128-129 在氨基酸128-129处的无关氨基酸Met-Asp以产生克隆位点 氨基酸130-441 MAGE3的片段(MAGE3的氨基酸3-314) 氨基酸442-443 无关氨基酸Gly-Gly 氨基酸444-451 7his尾 本发明还延伸至制备所述疫苗/组合物的方法，以及通过所述方法获得或可通过所述方法获得的融合蛋白和疫苗/组合物。
疫苗制备一般在Vaccine Design(″The subunit and adjuvantapproach″(编辑Powell M.F.& Newman M.J).(1995)Plenum Press NewYork)中描述。在脂质体内的包囊作用由Fullerton美国专利4,235,877描述。
本发明的融合蛋白可以在本发明的疫苗制剂中佐剂化。合适的佐剂包括铝盐例如氢氧化铝凝胶(明矾(alum))或磷酸铝，但也可以是钙、铁或锌盐，或可以是酰化酪氨酸、或酰化糖、阳离子或阴离子衍生的多糖或聚磷腈的不溶性悬浮液。其他已知佐剂包括含CpG的寡核苷酸。寡核苷酸的特征在于CpG二核苷酸是未甲基化的。此种寡核苷酸是众所周知的，并且在例如WO 96/02555中描述。
在本发明的制剂中，可能希望佐剂组合物优先诱导TH1型的免疫应答。在一个实施方案中，提供了包括例如单磷酰脂质A优选3-脱-O-酰化单磷酰脂质A(3D-MPL)连同铝盐的组合的佐剂系统。CpG寡核苷酸也可以诱导TH1应答，并且也可以被包括。
在一个实施方案中，提供了组合物，所述组合物包含如本文所述的融合蛋白，和包含单磷酰脂质A和皂苷衍生物的组合，特别是如WO94/00153中公开的QS21和3D-MPL的组合的佐剂组合物，或如WO96/33739中公开的QS21由胆固醇猝灭的低反应原性组合物。可以使用的一种制剂包含，在例如WO 95/17210中描述的水包油乳剂中的QS21、3D-MPL和生育酚。用于在本发明中使用的另一种佐剂制剂可以包含例如在水包油乳剂中的或作为脂质体制剂的QS21、3D-MPL和CpG或其等价物。因此，在本发明的一个实施方案中，提供了包含本发明的融合蛋白和佐剂的疫苗，例如如上所述。本发明还延伸至制备包含如本文所述的融合蛋白的疫苗和组合物的方法。
本发明还预期如本文所述的核酸、多肽或肽用于接种疫苗的递送。多肽和肽的递送可以根据本领域众所周知的标准接种疫苗规程来完成。在另一个实施方案中，核酸的递送可以通过先体外后体内方法来完成，即通过从受试者中取出细胞，使细胞基因工程改造以包括癌症相关抗原，并且将工程改造的细胞重新引入受试者内。一般而言，这可以涉及基因的功能拷贝体外引入受试者的细胞内，并且将基因工程改造的细胞送回受试者内。基因的功能拷贝在调节元件的可操作控制下，这允许基因在基因工程改造的细胞中表达。众多转染和转导技术以及合适的表达载体是本领域普通技术人员众所周知的，其中一些在PCT申请WO95/00654中描述。根据本发明也预期使用载体例如病毒和靶向的脂质体的体内核酸递送。
缩写 CO 胶原样区域 W/Ocoll 不含胶原样区域(胶原样结构域) PD1/3蛋白质D前三分之一 融合蛋白和编码其的核苷酸序列的示例性实施方案在表1-3中提供。
表1。提供了融合蛋白和编码其的核苷酸序列的示例性实施方案。每种核苷酸序列通过主题描述，通过独特的核苷酸序列标识符(SEQ IDNO)鉴定，并且在序列表中阐述。每种融合蛋白通过主题描述，通过独特的氨基酸序列标识符(SEQ ID NO)鉴定，并且在序列表中阐述。
















表2。提供了融合蛋白和编码其的核苷酸序列的另外示例性实施方案。每种核苷酸序列通过主题描述，通过独特的核苷酸序列标识符(SEQID NO)鉴定，并且在序列表中阐述。每种融合蛋白通过主题描述，通过独特的氨基酸序列标识符(SEQ ID NO)鉴定，并且在序列表中阐述。


表3。提供了融合蛋白和编码其的核苷酸序列的另外示例性实施方案。每种核苷酸序列通过主题描述，通过独特的核苷酸序列标识符(SEQID NO)鉴定，并且在序列表中阐述。每种融合蛋白通过主题描述，通过独特的氨基酸序列标识符(SEQ ID NO)鉴定，并且在序列表中阐述。




表4。提供了实施例中讨论的融合蛋白和编码其的核苷酸序列。每种核苷酸序列通过主题描述，通过独特的核苷酸序列标识符(SEQ IDNO)鉴定，并且在序列表中阐述。每种融合蛋白通过主题描述，通过独特的氨基酸序列标识符(SEQ ID NO)鉴定，并且在序列表中阐述。

如将由序列表显而易见的，表4的许多构建体具有与前述表格中所示的一个或多个实施方案相似的设计。例如，LVL068共享与表1中作为SEQ ID NO45所示的实施方案相同的设计。LVL076共享与表1中作为SEQ ID NO25所示的实施方案相同的设计。LVL078共享与表1中作为SEQ ID NO33所示的实施方案相同的设计。LVL079共享与表1中作为SEQ ID NO37所示的实施方案相同的设计。
此外，表4中所示的几种融合蛋白构建体，即LVL155、LVL106、LVL156、LVL157、LVL151，通过表4中所示的其他融合蛋白序列，即分别为LVL068、LVL030、LVL076、LVL078、LVL024的常规修饰而产生。此种修饰包括在蛋白质D和嵌合体(即衍生自NY-ESO-1和LAGE-1中任一的部分)开始之间的氨基酸残基的去除，以及在his-标签和嵌合体开始之间的氨基酸的去除。因此，表4的某些融合蛋白紧密对应于表4中的其他融合蛋白。这些融合蛋白之间的对应在表5中阐述，并且在实施例4中更详细地描述。
表5。LVL068、LVL030、LVL076、LVL078、LVL024和修饰的LVL155、LVL106、LVL156、LVL157、LVL151之间的对应。

实施例 实施例1.NY-LA1嵌合蛋白质设计和生产 如图17中概述的，设计含和不含胶原样结构域、以及含和不含蛋白质D的末端的几种NY-ESO-1/LAGE-1融合蛋白。设计的构建体就在大肠杆菌(Escherichia coli)中的表达进行密码子最优化。合成基因由寡核苷酸和/或PCR产物进行装配。使用分别在最优化基因的5′末端和3′末端中的KpnI和SacI限制位点外加NdeI和XhoI位点，将片段克隆到pGA4主链(AmpR)内。
从转化的细菌中纯化质粒DNA，并且通过UV光谱测定法测定浓度。最终构建体通过测序进行验证。使用NdeI和XhoI限制位点，将关于不同NY/LAGE嵌合构建体的最优化编码序列直接亚克隆到pET19(AmpR)多克隆位点内，以获得NY/LAGE嵌合表达质粒。对于克隆到pET26内，设计PCR引物以添加N末端组氨酸尾。这种扩增导致与不同构建体的编码区同相的6组氨酸尾的添加。这种扩增片段用NdeI/XhoI限制酶进行酶促消化，并且将不同的NY/LAGE嵌合构建体顺次克隆到pET26(KanR)多克隆位点内，以获得表达质粒。最终构建体通过测序进行验证。
摇瓶生产。细菌宿主菌株的生长和诱导 培养 细菌在2.5L摇瓶中在800ml Luria-Bertani(LB)液体培养基(BD)+1％(w/v)葡萄糖(Laboratoire MAT，目录号GR-0101)+抗生素(羧苄青霉素100μg/ml用于pET19，卡那霉素40μg/ml用于pET26)上生长。对于细胞BLR(DE3)，培养物于37℃温育直至O.D.600nm约0.8。
诱导 在OD.600nm约0.8时，培养物BLR(DE3)用1mM异丙基β-D-1硫代吡喃型半乳糖苷(IPTG；EMD Chemicals Inc.，目录号5815)进行诱导，并且于16℃温育16-18小时。用构建体LVL106、151、155和157已获得5-15mg特定蛋白质/800ml。关于每种构建体的蛋白质生产概括于图17中。
实施例2.初步纯化和稳定性的概括 蛋白质的提取和纯化 细胞通过离心进行收获，然后通过物理和化学方法进行破裂，并且保留所得到的粗提取物，以分离目的多肽。
纯化 所表达的重组蛋白质用盐酸胍溶液进行溶解，并且装载到固定金属亲和层析(Immobilized Metal Affinity Chromatography)(IMAC)树脂上。随后在通过渐增的咪唑浓度洗脱前，用8M和4M尿素溶液洗涤柱上的蛋白质。蛋白质随后在最后的4M尿素缓冲液，pH7.0中进行脱盐以用于进一步使用。纯化通过SDS PAGE和蛋白质印迹进行评估，以验证蛋白质的纯度和同一性。
纯化的融合蛋白的稳定性测试 稳定性测定于37℃进行，并且蛋白质通过SDS-PAGE进行评估。初步稳定性测定未揭示大问题。
初步溶解测定 蛋白质的溶解度如下表中概括的进行评估。

图表1。融合蛋白溶解度。关键词P沉淀；S无沉淀；NT未测试。
实施例3用融合蛋白IM免疫接种 如下所述，融合蛋白在小鼠模型中进行临床前评估，涉及一系列肌内免疫接种筛选实验。所选择的小鼠模型是CB6F1，由C57BL6小鼠与Balb/c小鼠杂交产生的第一代。此种小鼠从Charles River Laboratories，Inc.，251 Ballardvale Street，Wilmington，MA 01887-1000商购可得。所选择的肿瘤细胞系是B16(小鼠黑素瘤细胞系)，用于研究癌症治疗的商购可得的可移植鼠类黑素瘤。
筛选#1 实验设计。在76天试验中，CB6F1小鼠用于评估LVL076、LVL079、LVL078、LVL068、LVL020、LVL026、LVL024、LVL030中的每一种，以测定用融合蛋白加佐剂的肌内免疫接种是否赋予针对用移植的肿瘤细胞(B16/NYESO1)的皮下攻击的保护。具体地，小鼠用包含15μg蛋白质和佐剂的50μL注射剂进行肌内免疫接种。所选择的佐剂是AS15。AS15是包含QS21、3D-MPL和CpG的脂质体佐剂制剂。
用下文1A和1B中所示的融合蛋白进行试验。将小鼠分成15只小鼠/组的组。小鼠如下在第0天时且再次在第14天时进行免疫接种 试验1A ■LVL079 ■LVL026 ■LVL068 ■LVL030 试验1B ■LVL076 ■LVL020 ■LVL078 ■LVL024 对照 ■抗原缓冲液/AS15缓冲液 ■全长NY-ESO-1 ■不含胶原样结构域(CLD)的LAGE-1a ■MAGE A3 6只小鼠/组在第28天时用皮下移植的B16/NY-ESO-1肿瘤进行攻击。在第0、14、28和76天时，通过ELISA(IgG1和IgG2a)评估对于NY-ESO-1全长、不含胶原样结构域的LAGE-1a和人胶原的抗体应答。在第28天时使用收获的脾细胞通过FACS评估细胞介导的应答(用NY-ESO-1和LAGE-1a肽库再刺激-3个库，每库3个(3 pools of 3))。筛选#1的实验设计概括于图18中。
结果。在4个对照中，与缓冲液相比较，仅全长NY-ESO-1赋予一些保护。参见图19。在接受全长NY-ESO-1或LVL030的小鼠组中，来自每个组的2只在试验结束时无肿瘤。在接受LVL068的组中，4只在研究结束时无肿瘤。与接受缓冲液的小鼠相比较，LVL068和LVL078赋予更长的存活。参见图20。通过ELISA、FACS和蛋白质印迹评估NY-ESO-1特异性免疫应答。通过ELISA和FACS评估LAGE-1a(不含胶原样结构域)特异性免疫应答。参见图21。这些结果概括于下表中。
图表2。特异性免疫概括。关键词(-)-最低应答；(+)-中等应答；(++)-最高应答。
筛选#2 实验设计。在105天试验中，CB6F1小鼠用于评估LVL076、LVL078、LVL068和LVL024中的每一种，以测定用融合蛋白加佐剂的肌内免疫接种是否赋予针对用B16/NYESO1移植的肿瘤细胞(在2次免疫接种后)或用B16/LAGE-1a肿瘤细胞(在4次免疫接种后)的皮下攻击的保护。具体地，小鼠用包含15μg蛋白质和25μL AS15佐剂的50μL注射剂进行肌内免疫接种。
将小鼠分成29只小鼠/组的组。小鼠如下在第0、14、28和42天时进行免疫接种。
试验 ■LVL076 ■LVL068 ■LVL078 ■LVL024 对照 ■抗原缓冲液/AS15缓冲液 ■全长NY-ESO-1 ■不含胶原样结构域(CLD)的LAGE-1a ■MAGE A3 10只小鼠/组在第28天时用皮下移植的B16/NY-ESO-1肿瘤细胞进行攻击。9只小鼠/组在第56天时用皮下移植的B16/LAGE-1A肿瘤细胞进行攻击。在0、14、28、42 56、84和105天时，获取血清，并且通过ELISA(IgG1和IgG2a)评估对于(i)NY-ESO-1全长、(ii)不含胶原样结构域的LAGE-1a和(iii)人胶原的抗体应答。筛选#2的实验设计概括于图22和23中。
结果 B16-NYESO1肿瘤攻击。
在接受LVL078的小鼠中，2只在B16-NY-ESO-1攻击后超过50天无肿瘤。在接受全长NY-ESO-1或LVL024的小鼠中，来自每个组的2只超过50天无肿瘤，3只是活的。在接受LVL068的小鼠中，3只无肿瘤并且4只是活的。在接受LVL076的小鼠中，3只无肿瘤并且5只是活的。参见图24。
B16-LAGE1a肿瘤攻击。
接受LVL076或不含胶原样区域的LAGE-1a的所有小鼠早于攻击后40天时死亡。在接受单独的缓冲液的小鼠中，1只无肿瘤存活至研究结束。在接受LVL024的小鼠中，1只在研究结束时无肿瘤。在接受全长NY-ESO-1的小鼠中，无一无肿瘤，但1只在研究结束时仍是活的。在接受LVL078的小鼠中，1只无肿瘤。在接受LVL068的小鼠中，3只无肿瘤。在接受LVL076的小鼠中，3只在研究结束时无肿瘤。参见图25。这些结果概括于下图表中。

图表3对B16-LAGE1a肿瘤攻击的保护。关键词(-)-最低应答；(±)-次最低应答；(+)-中等应答；(++)-最高应答。
人胶原特异性免疫应答 为了研究NY-ESO-1的胶原样结构域是否刺激人胶原特异性免疫应答，接种后14天从用下述之一免疫接种的小鼠收集血清且合并(1)缓冲液(对照)；(2)全长NY-ESO-1；(3)不含胶原样结构域的LAGE-1a；(4)LVL068；(5)LVL078；(6)LVL024；(7)LVL076。对于这7个血清库中的每一个，以及对于包含mAb抗人胶原I的阳性对照进行ELISAs。胶原样结构域不刺激小鼠抗人胶原I抗体产生。参见图26。对于胶原III和胶原VI进行类似研究(结果未显示)；未检测出小鼠抗人胶原III和小鼠抗人胶原VI抗体产生。
实施例4精制的构建体 使用常规克隆技术对表4中列出的一些构建体进行修饰。具体地，对LVL068、LVL030、LVL076、LVL078、LVL024进行修饰，以产生LVL155、LVL106、LVL156、LVL157、LVL151。存在2类修饰，第一类是在蛋白质D和嵌合体开始之间的5个氨基酸残基的去除。例如，对于LVL024(SEQ ID NO74；SEQ ID NO75)进行这种修饰，以产生LVL151(SEQ ID NO90；SEQ ID NO91)。因此，LVL024对应于LVL 151。第二种类型的修饰是在his-标签和嵌合体开始之间的氨基酸的去除。对于LVL068(SEQ ID NO80；SEQ ID NO81)进行这种修饰，以产生LVL 155(SEQ ID NO92；SEQ ID NO93)。因此，LVL068对应于LVL 151。进行修饰的每种融合蛋白构建体及其与之对应的融合蛋白构建体在说明书的表5中显示。
应当理解，上文描述的修饰不预期导致融合蛋白及其相应修饰的融合蛋白之间的功能差异。因此，预期人们可以利用可与该图表的左手侧上列出的其相应融合蛋白互换的，表5的右侧上列出的每种修饰的融合蛋白。
实施例5。
实验设计。在105天试验中，CB6F1小鼠用于评估LVL068、LVL030、LVL076、LVL078、LVL024和修饰的LVL155、LVL106、LVL156、LVL157、LVL151中的每一种，以研究针对用B16/NYESO1移植的肿瘤细胞(在2次免疫接种后)或用B16/LAGE-1a肿瘤细胞(在4次免疫接种后)的皮下攻击用融合蛋白加佐剂的肌内免疫接种。具体地，小鼠用包含15μg蛋白质和25μL AS15佐剂的50μL注射剂进行肌内免疫接种。
将小鼠分成29只小鼠/组的组。小鼠如下在第0、14、28和42天时进行免疫接种。
试验 ■LVL068 ■LVL030 ■LVL076 ■LVL078 ■LVL024 ■LVL155 ■LVL106 ■LVL156 ■LVL157 ■LVL151 对照 ■抗原缓冲液/AS15缓冲液 ■全长NY-ESO-1 ■不含胶原结构域的LAGE-1a ■MAGE A3 10只小鼠/组在第28天时用皮下移植的B16/NY-ESO-1肿瘤细胞进行攻击。9只小鼠/组在第56天时用皮下移植的B16/LAGE-1A肿瘤细胞进行攻击。为了监控特异性免疫应答，可以在0、14、28、4256、84和105天时，获取血清，并且通过ELISA(IgG1和IgG2a)评估对于(i)NY-ESO-1全长、(ii)不含胶原样结构域的LAGE-1a和(iii)人胶原的抗体应答。
前述实施例为了举例说明而不是为了限制而提供。
在本申请内，冠词“一个(a)”和“一种(an)”在本文中用于指一个或超过一个(即至少一个)冠词的语法对象。例如，“一个元件”意指一个或多个元件。如本文所使用的，在每种情况下术语“大约”和“约”在本文中意欲任选可删除或与术语“精确地”可替换，如果由申请人要求的话。
单位、前缀和符号可以以其SI公认形式表示。除非另有说明，分别地，核酸以5′至3′方向从左到右书写；氨基酸序列以氨基至羧基方向从左到右书写。数字范围包括限定范围的数字在内。氨基酸在本文中可以通过其通常已知的3字母符号或通过由IUPAC-IUB生物化学命名委员会(Biochemical Nomenclature Commission)推荐的单字母符号提及。同样地，核苷酸可以通过其通常公认的单字母代码提及。上文定义的术语整体而言参考说明书更全面地定义。
序列表
<110>Denis Martin
Remi Palmantier
<120>包含肿瘤排斥抗原NY-ESO-1和LAGE-1的融合蛋白
<130>VB62288
<160>98
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>867
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>1
atgcaggcgg aaggccgtgg caccggtggt agcaccggcg atgcggatgg tccgggcggt 60
ccgggtattc cggacgggcc tggtggtaat gcgggtgggc caggtgaagc gggtgcgacc120
ggtggtcgtg gtccgcgggg ggcaggcgca gcacgtgcat ctggtccggg tggtggtgca180
ccgcgcggtc cgcatggtgg tgcggcgagc ggcctgaatg gttgctgccg ttgcggtgcg240
cgtggtccgg aaagccgtct gctggaattt tatctggcca tgccgtttgc gaccccgatg300
gaagcggaac tggcccgtcg tagcctggct caagatgcac cgccgctgcc ggttccgggc360
gtgctgctga aagaatttac cgtgagcggc aacattctga ccattcgtct gacggcggca420
gaccatcgtc agctgcaact gagcattagc agctgcctgc aacagctgtc tctgctgatg480
tggattaccc agtgctttct gccggtgttt ctggcccagc cgccgtctgg tcaacgtggt540
ggcgcgcgtc gtccggattc tcgcctgctg gaactgcata ttaccatgcc gttcagctct600
ccaatggagg ccgaattagt gcgtcgcatt ctgagccgtg atgcggcacc gctgccgcgt660
ccaggtgcgg ttctgaaaga cttcaccgta tctggcaacc tgctgtttat ccgtctgacc720
gcagcggacc accgccaatt acaattatct atcagctctt gtttacaaca actgtcgctg780
ttaatgtgga tcactcaatg tttcctgcca gtattcctgg ctcaggcccc gagcggtcag840
cgtcgtcacc accaccacca ccactaa867
<210>2
<211>1197
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>2
atggatccaa gcagccattc atcaaatatg gcgaataccc aaatgaaatc agacaaaatc 60
attattgctc accgtggtgc tagcggttat ttaccagagc atacgttaga atctaaagca 120
cttgcgtttg cacaacaggc tgattattta gagcaagatt tagcaatgac taaggatggt 180
cgtttagtgg ttattcacga tcacttttta gatggcttga ctgatgttgc gaaaaaattc 240
ccacatcgtc atcgtaaaga tggccgttac tatgtcatcg actttacctt aaaagaaatt 300
caaagtttag aaatgacaga aaactttgaa acccaggcgg aaggccgtgg caccggtggt 360
agcaccggcg atgcggatgg tccgggcggt ccgggtattc cggacgggcc tggtggtaat 420
gcgggtgggc caggtgaagc gggtgcgacc ggtggtcgtg gtccgcgggg ggcaggcgca 480
gcacgtgcat ctggtccggg tggtggtgca ccgcgcggtc cgcatggtgg tgcggcgagc 540
ggcctgaatg gttgctgccg ttgcggtgcg cgtggtccgg aaagccgtct gctggaattt 600
tatctggcca tgccgtttgc gaccccgatg gaagcggaac tggcccgtcg tagcctggct 660
caagatgcac cgccgctgcc ggttccgggc gtgctgctga aagaatttac cgtgagcggc 720
aacattctga ccattcgtct gacggcggca gaccatcgtc agctgcaact gagcattagc 780
agctgcctgc aacagctgtc tctgctgatg tggattaccc agtgctttct gccggtgttt 840
ctggcccagc cgccgtctgg tcaacgtggt ggcgcgcgtc gtccggattc tcgcctgctg 900
gaactgcata ttaccatgcc gttcagctct ccaatggagg ccgaattagt gcgtcgcatt 960
ctgagccgtg atgcggcacc gctgccgcgt ccaggtgcgg ttctgaaaga cttcaccgta1020
tctggcaacc tgctgtttat ccgtctgacc gcagcggacc accgccaatt acaattatct1080
atcagctctt gtttacaaca actgtcgctg ttaatgtgga tcactcaatg tttcctgcca1140
gtattcctgg ctcaggcccc gagcggtcag cgtcgtcacc accaccacca ccactaa 1197
<210>3
<211>288
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>3
Met Gln Ala Glu Gly Arg Gly Thr Gly Gly Ser Thr Gly Asp Ala Asp
1 5 10 15
Gly Pro Gly Gly Pro Gly Ile Pro Asp Gly Pro Gly Gly Asn Ala Gly
20 25 30
Gly Pro Gly Glu Ala Gly Ala Thr Gly Gly Arg Gly Pro Arg Gly Ala
35 40 45
Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro
50 55 60
His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu Asn Gly Cys Cys Arg Cys Gly Ala
65 70 75 80
Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe
85 90 95
Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp
100 105 110
Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val
115 120 125
Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln
130 135 140
Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met
145 150 155 160
Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser
165 170 175
Gly Gln Arg Gly Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu
180 185 190
His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg
195 200 205
Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val
210 215 220
Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr
225 230 235 240
Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln
245 250 255
Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe
260 265 270
Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His His His His His
275 280 285
<210>4
<211>398
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>4
Met Asp Pro Ser Ser His Ser Ser Asn Met Ala Asn Thr Gln Met Lys
1 5 10 15
Ser Asp Lys Ile Ile Ile Ala His Arg Gly Ala Ser Gly Tyr Leu Pro
20 25 30
Glu His Thr Leu Glu Ser Lys Ala Leu Ala Phe Ala Gln Gln Ala Asp
35 40 45
Tyr Leu Glu Gln Asp Leu Ala Met Thr Lys Asp Gly Arg Leu Val Val
50 55 60
Ile His Asp His Phe Leu Asp Gly Leu Thr Asp Val Ala Lys Lys Phe
65 70 75 80
Pro His Arg His Arg Lys Asp Gly Arg Tyr Tyr Val Ile Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Glu Ile Gln Ser Leu Glu Met Thr Glu Asn Phe Glu Thr Gln
100 105 110
Ala Glu Gly Arg Gly Thr Gly Gly Ser Thr Gly Asp Ala Asp Gly Pro
115 120 125
Gly Gly Pro Gly Ile Pro Asp Gly Pro Gly Gly Asn Ala Gly Gly Pro
130 135 140
Gly Glu Ala Gly Ala Thr Gly Gly Arg Gly Pro Arg Gly Ala Gly Ala
145 150 155 160
Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro His Gly
165 170 175
Gly Ala Ala Ser Gly Leu Asn Gly Cys Cys Arg Cys Gly Ala Arg Gly
180 185 190
Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr
195 200 205
Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro
210 215 220
Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly
225 230 235 240
Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln
245 250 255
Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile
260 265 270
Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln
275 280 285
Arg Gly Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile
290 295 300
Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile
305 310 315 320
Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys
325 330 335
Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala
340 345 350
Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu
355 360 365
Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala
370 375 380
Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His His His His His
385 390 395
<210>5
<211>729
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>5
atggcaggcg cagcacgtgc atctggtccg ggtggtggtg caccgcgcgg tccgcatggt 60
ggtgcggcga gcggcctgaa tggttgctgc cgttgcggtg cgcgtggtcc ggaaagccgt120
ctgctggaat tttatctggc catgccgttt gcgaccccga tggaagcgga actggcccgt180
cgtagcctgg ctcaagatgc accgccgctg ccggttccgg gcgtgctgct gaaagaattt240
accgtgagcg gcaacattct gaccattcgt ctgacggcgg cagaccatcg tcagctgcaa300
ctgagcatta gcagctgcct gcaacagctg tctctgctga tgtggattac ccagtgcttt360
ctgccggtgt ttctggccca gccgccgtct ggtcaacgtg gtggcgcgcg tcgtccggat420
tctcgcctgc tggaactgca tattaccatg ccgttcagct ctccaatgga ggccgaatta480
gtgcgtcgca ttctgagccg tgatgcggca ccgctgccgc gtccaggtgc ggttctgaaa540
gacttcaccg tatctggcaa cctgctgttt atccgtctga ccgcagcgga ccaccgccaa600
ttacaattat ctatcagctc ttgtttacaa caactgtcgc tgttaatgtg gatcactcaa660
tgtttcctgc cagtattcct ggctcaggcc ccgagcggtc agcgtcgtca ccaccaccac720
caccactaa729
<210>6
<211>1059
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>6
atggatccaa gcagccattc atcaaatatg gcgaataccc aaatgaaatc agacaaaatc 60
attattgctc accgtggtgc tagcggttat ttaccagagc atacgttaga atctaaagca120
cttgcgtttg cacaacaggc tgattattta gagcaagatt tagcaatgac taaggatggt180
cgtttagtgg ttattcacga tcacttttta gatggcttga ctgatgttgc gaaaaaattc240
ccacatcgtc atcgtaaaga tggccgttac tatgtcatcg actttacctt aaaagaaatt300
caaagtttag aaatgacaga aaactttgaa accgcaggcg cagcacgtgc atctggtccg360
ggtggtggtg caccgcgcgg tccgcatggt ggtgcggcga gcggcctgaa tggttgctgc420
cgttgcggtg cgcgtggtcc ggaaagccgt ctgctggaat tttatctggc catgccgttt480
gcgaccccga tggaagcgga actggcccgt cgtagcctgg ctcaagatgc accgccgctg540
ccggttccgg gcgtgctgct gaaagaattt accgtgagcg gcaacattct gaccattcgt600
ctgacggcgg cagaccatcg tcagctgcaa ctgagcatta gcagctgcct gcaacagctg660
tctctgctga tgtggattac ccagtgcttt ctgccggtgt ttctggccca gccgccgtct 720
ggtcaacgtg gtggcgcgcg tcgtccggat tctcgcctgc tggaactgca tattaccatg 780
ccgttcagct ctccaatgga ggccgaatta gtgcgtcgca ttctgagccg tgatgcggca 840
ccgctgccgc gtccaggtgc ggttctgaaa gacttcaccg tatctggcaa cctgctgttt 900
atccgtctga ccgcagcgga ccaccgccaa ttacaattat ctatcagctc ttgtttacaa 960
caactgtcgc tgttaatgtg gatcactcaa tgtttcctgc cagtattcct ggctcaggcc1020
ccgagcggtc agcgtcgtca ccaccaccac caccactaa 1059
<210>7
<211>242
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>7
Met Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg
1 5 10 15
Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu Asn Gly Cys Cys Arg Cys
20 25 30
Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met
35 40 45
Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala
50 55 60
Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe
65 70 75 80
Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His
85 90 95
Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu
100 105 110
Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro
115 120 125
Pro Ser Gly Gln Arg Gly Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu
130 135 140
Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu
145 150 155 160
Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly
165 170 175
Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg
180 185 190
Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys
195 200 205
Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro
210 215 220
Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His His His
225 230 235 240
His His
<210>8
<211>352
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>8
Met Asp Pro Ser Ser His Ser Ser Asn Met Ala Asn Thr Gln Met Lys
1 5 10 15
Ser Asp Lys Ile Ile Ile Ala His Arg Gly Ala Ser Gly Tyr Leu Pro
20 25 30
Glu His Thr Leu Glu Ser Lys Ala Leu Ala Phe Ala Gln Gln Ala Asp
35 40 45
Tyr Leu Glu Gln Asp Leu Ala Met Thr Lys Asp Gly Arg Leu Val Val
50 55 60
Ile His Asp His Phe Leu Asp Gly Leu Thr Asp Val Ala Lys Lys Phe
65 70 75 80
Pro His Arg His Arg Lys Asp Gly Arg Tyr Tyr Val Ile Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Glu Ile Gln Ser Leu Glu Met Thr Glu Asn Phe Glu Thr Ala
100 105 110
Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro
115 120 125
His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu Asn Gly Cys Cys Arg Cys Gly Ala
130 135 140
Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe
145 150 155 160
Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp
165 170 175
Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val
180 185 190
Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln
195 200 205
Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met
210 215 220
Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser
225 230 235 240
Gly Gln Arg Gly Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu
245 250 255
His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg
260 265 270
Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val
275 280 285
Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr
290 295 300
Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln
305 310 315 320
Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe
325 330 335
Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His His His His His
340 345 350
<210>9
<211>636
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Ny-ESO-1/LAGE构建体
<400>9
atgggtgcgc gtggtccgga aagccgtctg ctggaatttt atctggccat gccgtttgcg 60
accccgatgg aagcggaact ggcccgtcgt agcctggctc aagatgcacc gccgctgccg120
gttccgggcg tgctgctgaa agaatttacc gtgagcggca acattctgac cattcgtctg180
acggcggcag accatcgtca gctgcaactg agcattagca gctgcctgca acagctgtct240
ctgctgatgt ggattaccca gtgctttctg ccggtgtttc tggcccagcc gccgtctggt300
caacgtggtg gcgcgcgtcg tccggattct cgcctgctgg aactgcatat taccatgccg360
ttcagctctc caatggaggc cgaattagtg cgtcgcattc tgagccgtga tgcggcaccg420
ctgccgcgtc caggtgcggt tctgaaagac ttcaccgtat ctggcaacct gctgtttatc480
cgtctgaccg cagcggacca ccgccaatta caattatcta tcagctcttg tttacaacaa540
ctgtcgctgt taatgtggat cactcaatgt ttcctgccag tattcctggc tcaggccccg600
agcggtcagc gtcgtcacca ccaccaccac cactaa 636
<210>10
<211>966
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>10
atggatccaa gcagccattc atcaaatatg gcgaataccc aaatgaaatc agacaaaatc 60
attattgctc accgtggtgc tagcggttat ttaccagagc atacgttaga atctaaagca120
cttgcgtttg cacaacaggc tgattattta gagcaagatt tagcaatgac taaggatggt180
cgtttagtgg ttattcacga tcacttttta gatggcttga ctgatgttgc gaaaaaattc240
ccacatcgtc atcgtaaaga tggccgttac tatgtcatcg actttacctt aaaagaaatt300
caaagtttag aaatgacaga aaactttgaa accggtgcgc gtggtccgga aagccgtctg360
ctggaatttt atctggccat gccgtttgcg accccgatgg aagcggaact ggcccgtcgt420
agcctggctc aagatgcacc gccgctgccg gttccgggcg tgctgctgaa agaatttacc480
gtgagcggca acattctgac cattcgtctg acggcggcag accatcgtca gctgcaactg540
agcattagca gctgcctgca acagctgtct ctgctgatgt ggattaccca gtgctttctg600
ccggtgtttc tggcccagcc gccgtctggt caacgtggtg gcgcgcgtcg tccggattct660
cgcctgctgg aactgcatat taccatgccg ttcagctctc caatggaggc cgaattagtg720
cgtcgcattc tgagccgtga tgcggcaccg ctgccgcgtc caggtgcggt tctgaaagac780
ttcaccgtat ctggcaacct gctgtttatc cgtctgaccg cagcggacca ccgccaatta840
caattatcta tcagctcttg tttacaacaa ctgtcgctgt taatgtggat cactcaatgt900
ttcctgccag tattcctggc tcaggccccg agcggtcagc gtcgtcacca ccaccaccac960
cactaa 966
<210>11
<211>211
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>11
Met Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala
1 5 10 15
Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu
20 25 30
Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu
35 40 45
Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp
50 55 60
His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser
65 70 75 80
Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln
85 90 95
Pro Pro Ser Gly Gln Arg Gly Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu
100 105 110
Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu
115 120 125
Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro
130 135 140
Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile
145 150 155 160
Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser
165 170 175
Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu
180 185 190
Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His His
195 200 205
His His His
210
<210>12
<211>321
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>12
Met Asp Pro Ser Ser His Ser Ser Asn Met Ala Asn Thr Gln Met Lys
1 5 10 15
Ser Asp Lys Ile Ile Ile Ala His Arg Gly Ala Ser Gly Tyr Leu Pro
20 25 30
Glu His Thr Leu Glu Ser Lys Ala Leu Ala Phe Ala Gln Gln Ala Asp
35 40 45
Tyr Leu Glu Gln Asp Leu Ala Met Thr Lys Asp Gly Arg Leu Val Val
50 55 60
Ile His Asp His Phe Leu Asp Gly Leu Thr Asp Val Ala Lys Lys Phe
65 70 75 80
Pro His Arg His Arg Lys Asp Gly Arg Tyr Tyr Val Ile Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Glu Ile Gln Ser Leu Glu Met Thr Glu Asn Phe Glu Thr Gly
100 105 110
Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro
115 120 125
Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln
130 135 140
Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr
145 150 155 160
Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg
165 170 175
Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu
180 185 190
Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro
195 200 205
Ser Gly Gln Arg Gly Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu
210 215 220
Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val
225 230 235 240
Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala
245 250 255
Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu
260 265 270
Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu
275 280 285
Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val
290 295 300
Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His His His His
305 310 315 320
His
<210>13
<211>870
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>13
atgcaggcgg aaggccgtgg tactggcggt agcaccggcg atgcagatgg tccgggcggt 60
ccgggtattc cggatggtcc gggtggtaat gcaggtggtc caggtgaagc aggtgcgact120
ggcggtcgtg gtccacgcgg tgcaggtgca gcgcgtgcat ctggtccagg tggcggtgcg180
ccgcgtggcc cgcatggtgg tgcagctagt gcgcaagatg gtcgttgccc gtgtggtgcg240
cgtcgtccgg atagccgtct gctggagctg catattacca tgccgtttag cagcccaatg300
gaagctgagc tggtgcgtcg tattctgtct cgtgacgcag caccgctgcc acgtccgggt360
gcggttctga aagattttac cgtgagcggc aacctgctgt ttattcgtct gaccgcggca420
gatcatcgtc agctgcaact gagcattagc agctgcctgc aacagctgtc tctgctgatg480
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ggtggtgccc gtggcccgga atctcgtctg ctggaatttt atctggccat gccgttcgcg600
acgccgatgg aagcagagct ggcccgtcgc agcctggctc aggatgcacc gccgctgccg660
gttccgggcg tgctgctgaa agaatttacg gttagcggta acattctgac catccgtctg720
accgcagcgg accaccgcca actgcaactg tctatcagct cttgcctgca acaactgtcg780
ttattaatgt ggatcactca atgtttttta ccagtattcc tggcccaacc gccgagcggc840
caacgtcgtc accaccacca ccaccactaa 870
<210>14
<211>1200
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>14
atggatccaa gcagccattc atcaaatatg gcgaataccc aaatgaaatc agacaaaatc 60
attartgctc accgtggtgc tagcggttat ttaccagagc atacgttaga atctaaagca120
cttgcgtttg cacaacaggc tgattattta gagcaagatt tagcaatgac taaggatggt180
cgtttagtgg ttattcacga tcacttttta gatggcttga ctgatgttgc gaaaaaattc240
ccacatcgtc atcgtaaaga tggccgttac tatgtcatcg actttacctt aaaagaaatt300
caaagtttag aaatgacaga aaactttgaa acccaggcgg aaggccgtgg tactggcggt360
agcaccggcg atgcagatgg tccgggcggt ccgggtattc cggatggtcc gggtggtaat420
gcaggtggtc caggtgaagc aggtgcgact ggcggtcgtg gtccacgcgg tgcaggtgca480
gcgcgtgcat ctggtccagg tggcggtgcg ccgcgtggcc cgcatggtgg tgcagctagt540
gcgcaagatg gtcgttgccc gtgtggtgcg cgtcgtccgg atagccgtct gctggagctg600
catattacca tgccgtttag cagcccaatg gaagctgagc tggtgcgtcg tattctgtct660
cgtgacgcag caccgctgcc acgtccgggt gcggttctga aagattttac cgtgagcggc720
aacctgctgt ttattcgtct gaccgcggca gatcatcgtc agctgcaact gagcattagc780
agctgcctgc aacagctgtc tctgctgatg tggattaccc agtgctttct gccggtgttt840
ctggctcagg cgccgtctgg tcagcgtcgt ggtggtgccc gtggcccgga atctcgtctg900
ctggaatttt atctggccat gccgttcgcg acgccgatgg aagcagagct ggcccgtcgc960
agcctggctc aggatgcacc gccgctgccg gttccgggcg tgctgctgaa agaatttacg 1020
gttagcggta acattctgac catccgtctg accgcagcgg accaccgcca actgcaactg 1080
tctatcagct cttgcctgca acaactgtcg ttattaatgt ggatcactca atgtttttta 1140
ccagtattcc tggcccaacc gccgagcggc caacgtcgtc accaccacca ccaccactaa 1200
<210>15
<211>289
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>15
Met Gln Ala Glu Gly Arg Gly Thr Gly Gly Ser Thr Gly Asp Ala Asp
1 5 10 15
Gly Pro Gly Gly Pro Gly Ile Pro Asp Gly Pro Gly Gly Asn Ala Gly
20 25 30
Gly Pro Gly Glu Ala Gly Ala Thr Gly Gly Arg Gly Pro Arg Gly Ala
35 40 45
Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro
50 55 60
His Gly Gly Ala Ala Ser Ala Gln Asp Gly Arg Cys Pro Cys Gly Ala
65 70 75 80
Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe
85 90 95
Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp
100 105 110
Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val
115 120 125
Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln
130 135 140
Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met
145 150 155 160
Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser
165 170 175
Gly Gln Arg Arg Gly Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu
180 185 190
Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala
195 200 205
Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val
210 215 220
Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu
225 230 235 240
Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu
245 250 255
Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val
260 265 270
Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His His His His
275 280 285
His
<210>16
<211>399
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>16
Met Asp Pro Ser Ser His Ser Ser Asn Met Ala Asn Thr Gln Met Lys
1 5 10 15
Ser Asp Lys Ile Ile Ile Ala His Arg Gly Ala Ser Gly Tyr Leu Pro
20 25 30
Glu His Thr Leu Glu Ser Lys Ala Leu Ala Phe Ala Gln Gln Ala Asp
35 40 45
Tyr Leu Glu Gln Asp Leu Ala Met Thr Lys Asp Gly Arg Leu Val Val
50 55 60
Ile His Asp His Phe Leu Asp Gly Leu Thr Asp Val Ala Lys Lys Phe
65 70 75 80
Pro His Arg His Arg Lys Asp Gly Arg Tyr Tyr Val Ile Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Glu Ile Gln Ser Leu Glu Met Thr Glu Asn Phe Glu Thr Gln
100 105 110
Ala Glu Gly Arg Gly Thr Gly Gly Ser Thr Gly Asp Ala Asp Gly Pro
115 120 125
Gly Gly Pro Gly Ile Pro Asp Gly Pro Gly Gly Asn Ala Gly Gly Pro
130 135 140
Gly Glu Ala Gly Ala Thr Gly Gly Arg Gly Pro Arg Gly Ala Gly Ala
145 150 155 160
Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro His Gly
165 170 175
Gly Ala Ala Ser Ala Gln Asp Gly Arg Cys Pro Cys Gly Ala Arg Arg
180 185 190
Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser
195 200 205
Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala
210 215 220
Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly
225 230 235 240
Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr AIa Ala Asp His Arg Gln Leu Gln
245 250 255
Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile
260 265 270
Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln
275 280 285
Arg Arg Gly Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr
290 295 300
Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg
305 310 315 320
Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu
325 330 335
Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala
340 345 350
Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln
355 360 365
Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu
370 375 380
Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His His His His His
385 390 395
<210>17
<211>732
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>17
atggcaggtg cagcgcgtgc atctggtcca ggtggcggtg cgccgcgtgg cccgcatggt 60
ggtgcagcta gtgcgcaaga tggtcgttgc ccgtgtggtg cgcgtcgtcc ggatagccgt120
ctgctggagc tgcatattac catgccgttt agcagcccaa tggaagctga gctggtgcgt180
cgtattctgt ctcgtgacgc agcaccgctg ccacgtccgg gtgcggttct gaaagatttt240
accgtgagcg gcaacctgct gtttattcgt ctgaccgcgg cagatcatcg tcagctgcaa300
ctgagcatta gcagctgcct gcaacagctg tctctgctga tgtggattac ccagtgcttt360
ctgccggtgt ttctggctca ggcgccgtct ggtcagcgtc gtggtggtgc ccgtggcccg420
gaatctcgtc tgctggaatt ttatctggcc atgccgttcg cgacgccgat ggaagcagag480
ctggcccgtc gcagcctggc tcaggatgca ccgccgctgc cggttccggg cgtgctgctg540
aaagaattta cggttagcgg taacattctg accatccgtc tgaccgcagc ggaccaccgc600
caactgcaac tgtctatcag ctcttgcctg caacaactgt cgttattaat gtggatcact660
caatgttttt taccagtatt cctggcccaa ccgccgagcg gccaacgtcg tcaccaccac720
caccaccact aa732
<210>18
<211>1062
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>18
atggatccaa gcagccattc atcaaatatg gcgaataccc aaatgaaatc agacaaaatc 60
attattgctc accgtggtgc tagcggttat ttaccagagc atacgttaga atctaaagca120
cttgcgtttg cacaacaggc tgattattta gagcaagatt tagcaatgac taaggatggt180
cgtttagtgg ttattcacga tcacttttta gatggcttga ctgatgttgc gaaaaaattc240
ccacatcgtc atcgtaaaga tggccgttac tatgtcatcg actttacctt aaaagaaatt300
caaagtttag aaatgacaga aaactttgaa accgcaggtg cagcgcgtgc atctggtcca360
ggtggcggtg cgccgcgtgg cccgcatggt ggtgcagcta gtgcgcaaga tggtcgttgc420
ccgtgtggtg cgcgtcgtcc ggatagccgt ctgctggagc tgcatattac catgccgttt480
agcagcccaa tggaagctga gctggtgcgt cgtattctgt ctcgtgacgc agcaccgctg540
ccacgtccgg gtgcggttct gaaagatttt accgtgagcg gcaacctgct gtttattcgt600
ctgaccgcgg cagatcatcg tcagctgcaa ctgagcatta gcagctgcct gcaacagctg660
tctctgctga tgtggattac ccagtgcttt ctgccggtgt ttctggctca ggcgccgtct720
ggtcagcgtc gtggtggtgc ccgtggcccg gaatctcgtc tgctggaatt ttatctggcc780
atgccgttcg cgacgccgat ggaagcagag ctggcccgtc gcagcctggc tcaggatgca840
ccgccgctgc cggttccggg cgtgctgctg aaagaattta cggttagcgg taacattctg900
accatccgtc tgaccgcagc ggaccaccgc caactgcaac tgtctatcag ctcttgcctg960
caacaactgt cgttattaat gtggatcact caatgttttt taccagtatt cctggcccaa 1020
ccgccgagcg gccaacgtcg tcaccaccac caccaccact aa 1062
<210>19
<211>243
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>19
Met Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg
1 5 10 15
Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Ala Gln Asp Gly Arg Cys Pro Cys
20 25 30
Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met
35 40 45
Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser
50 55 60
Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe
65 70 75 80
Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His
85 90 95
Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu
100 105 110
Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala
115 120 125
Pro Ser Gly Gln Arg Arg Gly Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu
130 135 140
Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu
145 150 155 160
Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro
165 170 175
Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile
180 185 190
Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser
195 200 205
Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu
210 215 220
Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His His
225 230 235 240
His His His
<210>20
<211>353
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>20
Met Asp Pro Ser Ser His Ser Ser Asn Met Ala Asn Thr Gln Met Lys
1 5 10 15
Ser Asp Lys Ile Ile Ile Ala His Arg Gly Ala Ser Gly Tyr Leu Pro
20 25 30
Glu His Thr Leu Glu Ser Lys Ala Leu Ala Phe Ala Gln Gln Ala Asp
35 40 45
Tyr Leu Glu Gln Asp Leu Ala Met Thr Lys Asp Gly Arg Leu Val Val
50 55 60
Ile His Asp His Phe Leu Asp Gly Leu Thr Asp Val Ala Lys Lys Phe
65 70 75 80
Pro His Arg His Arg Lys Asp Gly Arg Tyr Tyr Val Ile Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Glu Ile Gln Ser Leu Glu Met Thr Glu Asn Phe Glu Thr Ala
100 105 110
Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro
115 120 125
His Gly Gly Ala Ala Ser Ala Gln Asp Gly Arg Cys Pro Cys Gly Ala
130 135 140
Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe
145 150 155 160
Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp
165 170 175
Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val
180 185 190
Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln
195 200 205
Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met
210 215 220
Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser
225 230 235 240
Gly Gln Arg Arg Gly Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu
245 250 255
Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala
260 265 270
Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val
275 280 285
Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu
290 295 300
Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu
305 310 315 320
Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val
325 330 335
Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His His His His
340 345 350
His
<210>21
<211>639
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>21
atgggtgcgc gtcgtccgga tagccgtctg ctggagctgc atattaccat gccgtttagc 60
agcccaatgg aagctgagct ggtgcgtcgt attctgtctc gtgacgcagc accgctgcca120
cgtccgggtg cggttctgaa agattttacc gtgagcggca acctgctgtt tattcgtctg180
accgcggcag atcatcgtca gctgcaactg agcattagca gctgcctgca acagctgtct240
ctgctgatgt ggattaccca gtgctttctg ccggtgtttc tggctcaggc gccgtctggt300
cagcgtcgtg gtggtgcccg tggcccggaa tctcgtctgc tggaatttta tctggccatg360
ccgttcgcga cgccgatgga agcagagctg gcccgtcgca gcctggctca ggatgcaccg420
ccgctgccgg ttccgggcgt gctgctgaaa gaatttacgg ttagcggtaa cattctgacc480
atccgtctga ccgcagcgga ccaccgccaa ctgcaactgt ctatcagctc ttgcctgcaa540
caactgtcgt tattaatgtg gatcactcaa tgttttttac cagtattcct ggcccaaccg600
ccgagcggcc aacgtcgtca ccaccaccac caccactaa 639
<210>22
<211>969
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>22
atggatccaa gcagccattc atcaaatatg gcgaataccc aaatgaaatc agacaaaatc 60
attattgctc accgtggtgc tagcggttat ttaccagagc atacgttaga atctaaagca120
cttgcgtttg cacaacaggc tgattattta gagcaagatt tagcaatgac taaggatggt180
cgtttagtgg ttattcacga tcacttttta gatggcttga ctgatgttgc gaaaaaattc240
ccacatcgtc atcgtaaaga tggccgttac tatgtcatcg actttacctt aaaagaaatt300
caaagtttag aaatgacaga aaactttgaa accggtgcgc gtcgtccgga tagccgtctg360
ctggagctgc atattaccat gccgtttagc agcccaatgg aagctgagct ggtgcgtcgt420
attctgtctc gtgacgcagc accgctgcca cgtccgggtg cggttctgaa agattttacc480
gtgagcggca acctgctgtt tattcgtctg accgcggcag atcatcgtca gctgcaactg540
agcattagca gctgcctgca acagctgtct ctgctgatgt ggattaccca gtgctttctg600
ccggtgtttc tggctcaggc gccgtctggt cagcgtcgtg gtggtgcccg tggcccggaa660
tctcgtctgc tggaatttta tctggccatg ccgttcgcga cgccgatgga agcagagctg720
gcccgtcgca gcctggctca ggatgcaccg ccgctgccgg ttccgggcgt gctgctgaaa780
gaatttacgg ttagcggtaa cattctgacc atccgtctga ccgcagcgga ccaccgccaa840
ctgcaactgt ctatcagctc ttgcctgcaa caactgtcgt tattaatgtg gatcactcaa900
tgttttttac cagtattcct ggcccaaccg ccgagcggcc aacgtcgtca ccaccaccac960
caccactaa969
<210>23
<211>212
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>23
Met Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr
1 5 10 15
Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu
20 25 30
Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp
35 40 45
Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp
50 55 60
His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser
65 70 75 80
Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln
85 90 95
Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg Gly Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg
100 105 110
Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala
115 120 125
Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val
130 135 140
Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr
145 150 155 160
Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser
165 170 175
Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe
180 185 190
Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His
195 200 205
His His His His
210
<210>24
<211>322
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>24
Met Asp Pro Ser Ser His Ser Ser Asn Met Ala Asn Thr Gln Met Lys
1 5 10 15
Ser Asp Lys Ile Ile Ile Ala His Arg Gly Ala Ser Gly Tyr Leu Pro
20 25 30
Glu His Thr Leu Glu Ser Lys Ala Leu Ala Phe Ala Gln Gln Ala Asp
35 40 45
Tyr Leu Glu Gln Asp Leu Ala Met Thr Lys Asp Gly Arg Leu Val Val
50 55 60
Ile His Asp His Phe Leu Asp Gly Leu Thr Asp Val Ala Lys Lys Phe
65 70 75 80
Pro His Arg His Arg Lys Asp Gly Arg Tyr Tyr Val Ile Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Glu Ile Gln Ser Leu Glu Met Thr Glu Asn Phe Glu Thr Gly
100 105 110
Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro
115 120 125
Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg
130 135 140
Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr
145 150 155 160
Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg
165 170 175
Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu
180 185 190
Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro
195 200 205
Ser Gly Gln Arg Arg Gly Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu
210 215 220
Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu
225 230 235 240
Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly
245 250 255
Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg
260 265 270
Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys
275 280 285
Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro
290 295 300
Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Arg His His His His
305 310 315 320
His His
<210>25
<211>687
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>25
atgggccatc atcatcatca tcatcatcat catcacagca gcggccatat cgacgacgac 60
gacaagcata tgggtgcgcg tggtccggaa agccgtctgc tggaatttta tctggccatg120
ccgtttgcga ccccgatgga agcggaactg gcccgtcgta gcctggctca agatgcaccg180
ccgctgccgg ttccgggcgt gctgctgaaa gaatttaccg tgagcggcaa cattctgacc240
attcgtctga cggcggcaga ccatcgtcag ctgcaactga gcattagcag ctgcctgcaa300
cagctgtctc tgctgatgtg gattacccag tgctttctgc cggtgtttct ggcccagccg360
ccgtctggtc aacgtggtgg cgcgcgtcgt ccggattctc gcctgctgga actgcatatt420
accatgccgt tcagctctcc aatggaggcc gaattagtgc gtcgcattct gagccgtgat480
gcggcaccgc tgccgcgtcc aggtgcggtt ctgaaagact tcaccgtatc tggcaacctg540
ctgtttatcc gtctgaccgc agcggaccac cgccaattac aattatctat cagctcttgt600
ttacaacaac tgtcgctgtt aatgtggatc actcaatgtt tcctgccagt attcctggct660
caggccccga gcggtcagcg tcgttaa687
<210>26
<211>228
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>26
Met Gly His His His His His His His His His His Ser Ser Gly His
1 5 10 15
Ile Asp Asp Asp Asp Lys His Met Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg
20 25 30
Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala
35 40 45
Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val
50 55 60
Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr
65 70 75 80
Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser
85 90 95
Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe
100 105 110
Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Gly Gly Ala
115 120 125
Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe
130 135 140
Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp
145 150 155 160
Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val
165 170 175
Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln
180 185 190
Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met
195 200 205
Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser
210 215 220
Gly Gln Arg Arg
225
<210>27
<211>636
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>27
atgcatcatc atcatcatca cggtgcgcgt ggtccggaaa gccgtctgct ggaattttat 60
ctggccatgc cgtttgcgac cccgatggaa gcggaactgg cccgtcgtag cctggctcaa120
gatgcaccgc cgctgccggt tccgggcgtg ctgctgaaag aatttaccgt gagcggcaac180
attctgacca ttcgtctgac ggcggcagac catcgtcagc tgcaactgag cattagcagc240
tgcctgcaac agctgtctct gctgatgtgg attacccagt gctttctgcc ggtgtttctg300
gcccagccgc cgtctggtca acgtggtggc gcgcgtcgtc cggattctcg cctgctggaa360
ctgcatatta ccatgccgtt cagctctcca atggaggccg aattagtgcg tcgcattctg420
agccgtgatg cggcaccgct gccgcgtcca ggtgcggttc tgaaagactt caccgtatct480
ggcaacctgc tgtttatccg tctgaccgca gcggaccacc gccaattaca attatctatc540
agctcttgtt tacaacaact gtcgctgtta atgtggatca ctcaatgttt cctgccagta600
ttcctggctc aggccccgag cggtcagcgt cgttaa 636
<210>28
<211>211
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ES01/LAGE构建体
<400>28
Met His His His His His His Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu
1 5 10 15
Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu
20 25 30
Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro
35 40 45
Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile
50 55 60
Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser
65 70 75 80
Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu
85 90 95
Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Gly Gly Ala Arg
100 105 110
Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser
115 120 125
Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala
130 135 140
Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser
145 150 155 160
Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu
165 170 175
Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp
180 185 190
Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly
195 200 205
Gln Arg Arg
210
<210>29
<211>780
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>29
atgggccatc atcatcatca tcatcatcat catcacagca gcggccatat cgacgacgac 60
gacaagcata tggcaggcgc agcacgtgca tctggtccgg gtggtggtgc accgcgcggt120
ccgcatggtg gtgcggcgag cggcctgaat ggttgctgcc gttgcggtgc gcgtggtccg180
gaaagccgtc tgctggaatt ttatctggcc atgccgtttg cgaccccgat ggaagcggaa240
ctggcccgtc gtagcctggc tcaagatgca ccgccgctgc cggttccggg cgtgctgctg300
aaagaattta ccgtgagcgg caacattctg accattcgtc tgacggcggc agaccatcgt360
cagctgcaac tgagcattag cagctgcctg caacagctgt ctctgctgat gtggattacc420
cagtgctttc tgccggtgtt tctggcccag ccgccgtctg gtcaacgtgg tggcgcgcgt480
cgtccggatt ctcgcctgct ggaactgcat attaccatgc cgttcagctc tccaatggag540
gccgaattag tgcgtcgcat tctgagccgt gatgcggcac cgctgccgcg tccaggtgcg600
gttctgaaag acttcaccgt atctggcaac ctgctgttta tccgtctgac cgcagcggac660
caccgccaat tacaattatc tatcagctct tgtttacaac aactgtcgct gttaatgtgg720
atcactcaat gtttcctgcc agtattcctg gctcaggccc cgagcggtca gcgtcgttaa780
<210>30
<211>259
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>30
Met Gly His His His His His His His His His His Ser Ser Gly His
1 5 10 15
Ile Asp Asp Asp Asp Lys His Met Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly
20 25 30
Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Gly
35 40 45
Leu Asn Gly Cys Cys Arg Cys Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu
50 55 60
Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro
85 90 95
Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile
100 105 110
Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser
115 120 125
Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu
130 135 140
Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Gly Gly Ala Arg
145 150 155 160
Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser
165 170 175
Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala
180 185 190
Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser
195 200 205
Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu
210 215 220
Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp
225 230 235 240
Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly
245 250 255
Gln Arg Arg
<210>31
<211>729
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>31
atgcatcatc atcatcatca cgcaggcgca gcacgtgcat ctggtccggg tggtggtgca 60
ccgcgcggtc cgcatggtgg tgcggcgagc ggcctgaatg gttgctgccg ttgcggtgcg120
cgtggtccgg aaagccgtct gctggaattt tatctggcca tgccgtttgc gaccccgatg180
gaagcggaac tggcccgtcg tagcctggct caagatgcac cgccgctgcc ggttccgggc240
gtgctgctga aagaatttac cgtgagcggc aacattctga ccattcgtct gacggcggca300
gaccatcgtc agctgcaact gagcattagc agctgcctgc aacagctgtc tctgctgatg360
tggattaccc agtgctttct gccggtgttt ctggcccagc cgccgtctgg tcaacgtggt420
ggcgcgcgtc gtccggattc tcgcctgctg gaactgcata ttaccatgcc gttcagctct480
ccaatggagg ccgaattagt gcgtcgcatt ctgagccgtg atgcggcacc gctgccgcgt540
ccaggtgcgg ttctgaaaga cttcaccgta tctggcaacc tgctgtttat ccgtctgacc600
gcagcggacc accgccaatt acaattatct atcagctctt gtttacaaca actgtcgctg660
ttaatgtgga tcactcaatg tttcctgcca gtattcctgg ctcaggcccc gagcggtcag720
cgtcgttaa729
<210>32
<211>242
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>32
Met His His His His His His Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu
20 25 30
Asn Gly Cys Cys Arg Cys Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu
35 40 45
Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu
50 55 60
Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly
65 70 75 80
Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg
85 90 95
Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys
100 105 110
Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro
115 120 125
Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Gly Gly Ala Arg Arg
130 135 140
Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser
145 150 155 160
Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala
165 170 175
Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly
180 185 190
Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln
195 200 205
Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile
210 215 220
Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln
225 230 235 240
Arg Arg
<210>33
<211>918
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>33
atgggccatc atcatcatca tcatcatcat catcacagca gcggccatat cgacgacgac 60
gacaagcata tgcaggcgga aggccgtggc accggtggta gcaccggcga tgcggatggt120
ccgggcggtc cgggtattcc ggacgggcct ggtggtaatg cgggtgggcc aggtgaagcg180
ggtgcgaccg gtggtcgtgg tccgcggggg gcaggcgcag cacgtgcatc tggtccgggt240
ggtggtgcac cgcgcggtcc gcatggtggt gcggcgagcg gcctgaatgg ttgctgccgt300
tgcggtgcgc gtggtccgga aagccgtctg ctggaatttt atctggccat gccgtttgcg360
accccgatgg aagcggaact ggcccgtcgt agcctggctc aagatgcacc gccgctgccg420
gttccgggcg tgctgctgaa agaatttacc gtgagcggca acattctgac cattcgtctg480
acggcggcag accatcgtca gctgcaactg agcattagca gctgcctgca acagctgtct540
ctgctgatgt ggattaccca gtgctttctg ccggtgtttc tggcccagcc gccgtctggt600
caacgtggtg gcgcgcgtcg tccggattct cgcctgctgg aactgcatat taccatgccg660
ttcagctctc caatggaggc cgaattagtg cgtcgcattc tgagccgtga tgcggcaccg720
ctgccgcgtc caggtgcggt tctgaaagac ttcaccgtat ctggcaacct gctgtttatc780
cgtctgaccg cagcggacca ccgccaatta caattatcta tcagctcttg tttacaacaa840
ctgtcgctgt taatgtggat cactcaatgt ttcctgccag tattcctggc tcaggccccg900
agcggtcagc gtcgttaa 918
<210>34
<211>305
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>34
Met Gly His His His His His His His His His His Ser Ser Gly His
1 5 10 15
Ile Asp Asp Asp Asp Lys His Met Gln Ala Glu Gly Arg Gly Thr Gly
20 25 30
Gly Ser Thr Gly Asp Ala Asp Gly Pro Gly Gly Pro Gly Ile Pro Asp
35 40 45
Gly Pro Gly Gly Asn Ala Gly Gly Pro Gly Glu Ala Gly Ala Thr Gly
50 55 60
Gly Arg Gly Pro Arg Gly Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly
65 70 75 80
Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu Asn
85 90 95
Gly Cys Cys Arg Cys Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu
100 105 110
Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala
115 120 125
Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val
130 135 140
Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu
145 150 155160
Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu
165 170 175
Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val
180 185 190
Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Gly Gly Ala Arg Arg Pro
195 200 205
Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro
210 215 220
Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro
225 230 235 240
Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn
245 250 255
Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu
260 265 270
Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Set Leu Leu Met Trp Ile Thr
275 280 285
Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg
290 295 300
Arg
305
<210>35
<211>867
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>35
atgcatcatc atcatcatca ccaggcggaa ggccgtggca ccggtggtag caccggcgat 60
gcggatggtc cgggcggtcc gggtattccg gacgggcctg gtggtaatgc gggtgggcca120
ggtgaagcgg gtgcgaccgg tggtcgtggt ccgcgggggg caggcgcagc acgtgcatct180
ggtccgggtg gtggtgcacc gcgcggtccg catggtggtg cggcgagcgg cctgaatggt240
tgctgccgtt gcggtgcgcg tggtccggaa agccgtctgc tggaatttta tctggccatg300
ccgtttgcga ccccgatgga agcggaactg gcccgtcgta gcctggctca agatgcaccg360
ccgctgccgg ttccgggcgt gctgctgaaa gaatttaccg tgagcggcaa cattctgacc420
attcgtctga cggcggcaga ccatcgtcag ctgcaactga gcattagcag ctgcctgcaa480
cagctgtctc tgctgatgtg gattacccag tgctttctgc cggtgtttct ggcccagccg540
ccgtctggtc aacgtggtgg cgcgcgtcgt ccggattctc gcctgctgga actgcatatt600
accatgccgt tcagctctcc aatggaggcc gaattagtgc gtcgcattct gagccgtgat660
gcggcaccgc tgccgcgtcc aggtgcggtt ctgaaagact tcaccgtatc tggcaacctg720
ctgtttatcc gtctgaccgc agcggaccac cgccaattac aattatctat cagctcttgt780
ttacaacaac tgtcgctgtt aatgtggatc actcaatgtt tcctgccagt attcctggct840
caggccccga gcggtcagcg tcgttaa867
<210>36
<211>288
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY-ESO-1/LAGE构建体
<400>36
Met His His His His His His Gln Ala Glu Gly Arg Gly Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Thr Gly Asp Ala Asp Gly Pro Gly Gly Pro Gly Ile Pro Asp Gly
20 25 30
Pro Gly Gly Asn Ala Gly Gly Pro Gly Glu Ala Gly Ala Thr Gly Gly
35 40 45
Arg Gly Pro Arg Gly Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly
50 55 60
Gly Ala Pro Arg Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu Asn Gly
65 70 75 80
Cys Cys Arg Cys Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe
85 90 95
Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg
100 105 110
Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu
115 120 125
Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr
130 135 140
Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln
145 150 155 160
Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe
165 170 175
Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Gly Gly Ala Arg Arg Pro Asp
180 185 190
Ser Arg Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met
195 200 205
Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu
210 215 220
Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu
225 230 235 240
Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser
245 250 255
Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln
260 265 270
Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg
275 280 285
<210>37
<211>690
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>37
atgggccatc atcatcatca tcatcatcat catcacagca gcggccatat cgacgacgac 60
gacaagcata tgggtgcgcg tcgtccggat agccgtctgc tggagctgca tattaccatg120
ccgtttagca gcccaatgga agctgagctg gtgcgtcgta ttctgtctcg tgacgcagca180
ccgctgccac gtccgggtgc ggttctgaaa gattttaccg tgagcggcaa cctgctgttt240
attcgtctga ccgcggcaga tcatcgtcag ctgcaactga gcattagcag ctgcctgcaa300
cagctgtctc tgctgatgtg gattacccag tgctttctgc cggtgtttct ggctcaggcg360
ccgtctggtc agcgtcgtgg tggtgcccgt ggcccggaat ctcgtctgct ggaattttat420
ctggccatgc cgttcgcgac gccgatggaa gcagagctgg cccgtcgcag cctggctcag480
gatgcaccgc cgctgccggt tccgggcgtg ctgctgaaag aatttacggt tagcggtaac540
attctgacca tccgtctgac cgcagcggac caccgccaac tgcaactgtc tatcagctct600
tgcctgcaac aactgtcgtt attaatgtgg atcactcaat gttttttacc agtattcctg660
gcccaaccgc cgagcggcca acgtcgttaa 690
<210>38
<211>229
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>38
Met Gly His His His His His His His His His His Ser Ser Gly His
1 5 10 15
Ile Asp Asp Asp Asp Lys His Met Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg
20 25 30
Leu Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala
35 40 45
Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg
50 55 60
Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe
65 70 75 80
Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser
85 90 95
Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe
100 105 110
Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg Gly Gly
115 120 125
Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro
130 135 140
Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln
145 150 155 160
Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr
165 170 175
Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg
180 185 190
Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu
195 200 205
Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro
210 215 220
Ser Gly Gln Arg Arg
225
<210>39
<211>639
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>39
atgcatcatc atcatcatca cggtgcgcgt cgtccggata gccgtctgct ggagctgcat 60
attaccatgc cgtttagcag cccaatggaa gctgagctgg tgcgtcgtat tctgtctcgt120
gacgcagcac cgctgccacg tccgggtgcg gttctgaaag attttaccgt gagcggcaac180
ctgctgttta ttcgtctgac cgcggcagat catcgtcagc tgcaactgag cattagcagc240
tgcctgcaac agctgtctct gctgatgtgg attacccagt gctttctgcc ggtgtttctg300
gctcaggcgc cgtctggtca gcgtcgtggt ggtgcccgtg gcccggaatc tcgtctgctg360
gaattttatc tggccatgcc gttcgcgacg ccgatggaag cagagctggc ccgtcgcagc420
ctggctcagg atgcaccgcc gctgccggtt ccgggcgtgc tgctgaaaga atttacggtt480
agcggtaaca ttctgaccat ccgtctgacc gcagcggacc accgccaact gcaactgtct540
atcagctctt gcctgcaaca actgtcgtta ttaatgtgga tcactcaatg ttttttacca600
gtattcctgg cccaaccgcc gagcggccaa cgtcgttaa 639
<210>40
<211>212
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>40
Met His His His His His His Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu
1 5 10 15
Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu
20 25 30
Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro
35 40 45
Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile
50 55 60
Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser
65 70 75 80
Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu
85 90 95
Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg Gly Gly Ala
100 105 110
Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe
115 120 125
Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp
130 135 140
Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln
165 170 175
Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met
180 185 190
Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser
195 200 205
Gly Gln Arg Arg
210
<210>41
<211>783
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>41
atgggccatc atcatcatca tcatcatcat catcacagca gcggccatat cgacgacgac 60
gacaagcata tggcaggtgc agcgcgtgca tctggtccag gtggcggtgc gccgcgtggc120
ccgcatggtg gtgcagctag tgcgcaagat ggtcgttgcc cgtgtggtgc gcgtcgtccg180
gatagccgtc tgctggagct gcatattacc atgccgttta gcagcccaat ggaagctgag240
ctggtgcgtc gtattctgtc tcgtgacgca gcaccgctgc cacgtccggg tgcggttctg300
aaagatttta ccgtgagcgg caacctgctg tttattcgtc tgaccgcggc agatcatcgt360
cagctgcaac tgagcattag cagctgcctg caacagctgt ctctgctgat gtggattacc420
cagtgctttc tgccggtgtt tctggctcag gcgccgtctg gtcagcgtcg tggtggtgcc480
cgtggcccgg aatctcgtct gctggaattt tatctggcca tgccgttcgc gacgccgatg540
gaagcagagc tggcccgtcg cagcctggct caggatgcac cgccgctgcc ggttccgggc600
gtgctgctga aagaatttac ggttagcggt aacattctga ccatccgtct gaccgcagcg660
gaccaccgcc aactgcaact gtctatcagc tcttgcctgc aacaactgtc gttattaatg720
tggatcactc aatgtttttt accagtattc ctggcccaac cgccgagcgg ccaacgtcgt780
taa 783
<210>42
<211>260
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>42
Met Gly His His His His His His His His His His Ser Ser Gly His
1 5 10 15
Ile Asp Asp Asp Asp Lys His Met Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly
20 25 30
Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Ala
35 40 45
Gln Asp Gly Arg Cys Pro Cys Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu
50 55 60
Leu Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro
85 90 95
Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile
100 105 110
Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser
115 120 125
Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu
130 135 140
Pro Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg Gly Gly Ala
145 150 155 160
Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe
165 170 175
Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp
180 185 190
Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val
195 200 205
Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln
210 215 220
Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met
225 230 235 240
Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser
245 250 255
Gly Gln Arg Arg
260
<210>43
<211>732
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>43
atgcatcatc atcatcatca cgcaggtgca gcgcgtgcat ctggtccagg tggcggtgcg 60
ccgcgtggcc cgcatggtgg tgcagctagt gcgcaagatg gtcgttgccc gtgtggtgcg120
cgtcgtccgg atagccgtct gctggagctg catattacca tgccgtttag cagcccaatg180
gaagctgagc tggtgcgtcg tattctgtct cgtgacgcag caccgctgcc acgtccgggt240
gcggttctga aagattttac cgtgagcggc aacctgctgt ttattcgtct gaccgcggca300
gatcatcgtc agctgcaact gagcattagc agctgcctgc aacagctgtc tctgctgatg360
tggattaccc agtgctttct gccggtgttt ctggctcagg cgccgtctgg tcagcgtcgt420
ggtggtgccc gtggcccgga atctcgtctg ctggaatttt atctggccat gccgttcgcg480
acgccgatgg aagcagagct ggcccgtcgc agcctggctc aggatgcacc gccgctgccg540
gttccgggcg tgctgctgaa agaatttacg gttagcggta acattctgac catccgtctg600
accgcagcgg accaccgcca actgcaactg tctatcagct cttgcctgca acaactgtcg660
ttattaatgt ggatcactca atgtttttta ccagtattcc tggcccaacc gccgagcggc720
caacgtcgtt aa732
<210>44
<211>243
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>44
Met His His His His His His Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Ala Gln
20 25 30
Asp Gly Arg Cys Pro Cys Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu
35 40 45
Glu Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu
50 55 60
Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly
65 70 75 80
Ala Val Leu Lys Asp Phc Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg
85 90 95
Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys
100 105 110
Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro
115 120 125
Val Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg Gly Gly Ala Arg
130 135 140
Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala
145 150 155 160
Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala
165 170 175
Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser
180 185 190
Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu
195 200 205
Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp
210 215 220
Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly
225 230 235 240
Gln Arg Arg
<210>45
<211>921
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>45
atgggccatc atcatcatca tcatcatcat catcacagca gcggccatat cgacgacgac 60
gacaagcata tgcaggcgga aggccgtggt actggcggta gcaccggcga tgcagatggt120
ccgggcggtc cgggtattcc ggatggtccg ggtggtaatg caggtggtcc aggtgaagca180
ggtgcgactg gcggtcgtgg tccacgcggt gcaggtgcag cgcgtgcatc tggtccaggt240
ggcggtgcgc cgcgtggccc gcatggtggt gcagctagtg cgcaagatgg tcgttgcccg300
tgtggtgcgc gtcgtccgga tagccgtctg ctggagctgc atattaccat gccgtttagc360
agcccaatgg aagctgagct ggtgcgtcgt attctgtctc gtgacgcagc accgctgcca420
cgtccgggtg cggttctgaa agattttacc gtgagcggca acctgctgtt tattcgtctg480
accgcggcag atcatcgtca gctgcaactg agcattagca gctgcctgca acagctgtct540
ctgctgatgt ggattaccca gtgctttctg ccggtgtttc tggctcaggc gccgtctggt600
cagcgtcgtg gtggtgcccg tggcccggaa tctcgtctgc tggaatttta tctggccatg660
ccgttcgcga cgccgatgga agcagagctg gcccgtcgca gcctggctca ggatgcaccg720
ccgctgccgg ttccgggcgt gctgctgaaa gaatttacgg ttagcggtaa cattctgacc780
atccgtctga ccgcagcgga ccaccgccaa ctgcaactgt ctatcagctc ttgcctgcaa840
caactgtcgt tattaatgtg gatcactcaa tgttttttac cagtattcct ggcccaaccg900
ccgagcggcc aacgtcgtta a 921
<210>46
<211>306
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>46
Met Gly His His His His His His His His His His Ser Ser Gly His
1 5 10 15
Ile Asp Asp Asp Asp Lys His Met Gln Ala Glu Gly Arg Gly Thr Gly
20 25 30
Gly Ser Thr Gly Asp Ala Asp Gly Pro Gly Gly Pro Gly Ile Pro Asp
35 40 45
Gly Pro Gly Gly Asn Ala Gly Gly Pro Gly Glu Ala Gly Ala Thr Gly
50 55 60
Gly Arg Gly Pro Arg Gly Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly
65 70 75 80
Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Ala Gln Asp
85 90 95
Gly Arg Cys Pro Cys Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu
100 105 110
Leu His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val
115 120 125
Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala
130 135 140
Val Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu
145 150 155 160
Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu
165 170 175
Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val
180 185 190
Phe Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg Gly Gly Ala Arg Gly
195 200 205
Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr
210 215 220
Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro
225 230 235 240
Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly
245 250 255
Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln
260 265 270
Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile
275 280 285
Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln
290 295 300
Arg Arg
305
<210>47
<211>870
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>47
atgcatcatc atcatcatca ccaggcggaa ggccgtggta ctggcggtag caccggcgat 60
gcagatggtc cgggcggtcc gggtattccg gatggtccgg gtggtaatgc aggtggtcca120
ggtgaagcag gtgcgactgg cggtcgtggt ccacgcggtg caggtgcagc gcgtgcatct180
ggtccaggtg gcggtgcgcc gcgtggcccg catggtggtg cagctagtgc gcaagatggt240
cgttgcccgt gtggtgcgcg tcgtccggat agccgtctgc tggagctgca tattaccatg300
ccgtttagca gcccaatgga agctgagctg gtgcgtcgta ttctgtctcg tgacgcagca360
ccgctgccac gtccgggtgc ggttctgaaa gattttaccg tgagcggcaa cctgctgttt420
attcgtctga ccgcggcaga tcatcgtcag ctgcaactga gcattagcag ctgcctgcaa480
cagctgtctc tgctgatgtg gattacccag tgctttctgc cggtgtttct ggctcaggcg540
ccgtctggtc agcgtcgtgg tggtgcccgt ggcccggaat ctcgtctgct ggaattttat600
ctggccatgc cgttcgcgac gccgatggaa gcagagctgg cccgtcgcag cctggctcag660
gatgcaccgc cgctgccggt tccgggcgtg ctgctgaaag aatttacggt tagcggtaac720
attctgacca tccgtctgac cgcagcggac caccgccaac tgcaactgtc tatcagctct780
tgcctgcaac aactgtcgtt attaatgtgg atcactcaat gttttttacc agtattcctg840
gcccaaccgc cgagcggcca acgtcgttaa 870
<210>48
<211>289
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LAGE/NY-ESO-1构建体
<400>48
Met His His His His His His Gln Ala Glu Gly Arg Gly Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Thr Gly Asp Ala Asp Gly Pro Gly Gly Pro Gly Ile Pro Asp Gly
20 25 30
Pro Gly Gly Asn Ala Gly Gly Pro Gly Glu Ala Gly Ala Thr Gly Gly
35 40 45
Arg Gly Pro Arg Gly Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly
50 55 60
Gly Ala Pro Arg Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Ala Gln Asp Gly
65 70 75 80
Arg Cys Pro Cys Gly Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Glu Leu
85 90 95
His Ile Thr Met Pro Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg
100 105 110
Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val
115 120 125
Leu Lys Asp Phe Thr Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr
130 135 140
Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln
145 150 155 160
Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe
165 170 175
Leu Ala Gln Ala Pro Ser Gly Gln Arg Arg Gly Gly Ala Arg Gly Pro
180 185 190
Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro
195 200 205
Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp Ala Pro Pro
210 215 220
Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn
225 230 235 240
Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu
245 250 255
Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr
260 265 270
Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg
275 280 285
Arg
<210>49
<211>180
<212>PRT
<213>智人(Homo Sapien)
<400>49
Met Gln Ala Glu Gly Arg Gly Thr Gly Gly Ser Thr Gly Asp Ala Asp
1 5 10 15
Gly Pro Gly Gly Pro Gly Ile Pro Asp Gly Pro Gly Gly Asn Ala Gly
20 25 30
Gly Pro Gly Glu Ala Gly Ala Thr Gly Gly Arg Gly Pro Arg Gly Ala
35 40 45
Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro
50 55 60
His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu Asn Gly Cys Cys Arg Cys Gly Ala
65 70 75 80
Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe
85 90 95
Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp
100 105 110
Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val
115 120 125
Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln
130 135 140
Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met
145 150 155 160
Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser
165 170 175
Gly Gln Arg Arg
180
<210>50
<211>420
<212>DNA
<213>智人(Homo Sapien)
<400>50
atggcaggcg cagcacgtgc atctggtccg ggtggtggtg caccgcgcgg tccgcatggt 60
ggtgcggcga gcggcctgaa tggttgctgc cgttgcggtg cgcgtggtcc ggaaagccgt120
ctgctggaat tttatctggc catgccgttt gcgaccccga tggaagcgga actggcccgt180
cgtagcctgg ctcaagatgc accgccgctg ccggttccgg gcgtgctgct gaaagaattt240
accgtgagcg gcaacattct gaccattcgt ctgacggcgg cagaccatcg tcagctgcaa300
ctgagcatta gcagctgcct gcaacagctg tctctgctga tgtggattac ccagtgcttt360
ctgccggtgt ttctggccca gccgccgtct ggtcaacgtc accaccacca ccaccactaa420
<210>51
<211>139
<212>PRT
<213>智人(Homo Sapien)
<400>51
Met Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg
1 5 10 15
Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu Asn Gly Cys Cys Arg Cys
20 25 30
Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met
35 40 45
Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala
50 55 60
Gln Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe
65 70 75 80
Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His
85 90 95
Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu
100 105 110
Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro
115 120 125
Pro Ser Gly Gln Arg His His His His His His
130 135
<210>52
<211>750
<212>DNA
<213>智人(Homo Sapien)
<400>52
atggatccaa gcagccattc atcaaatatg gcgaataccc aaatgaaatc agacaaaatc 60
attattgctc accgtggtgc tagcggttat ttaccagagc atacgttaga atctaaagca120
cttgcgtttg cacaacaggc tgattattta gagcaagatt tagcaatgac taaggatggt180
cgtttagtgg ttattcacga tcacttttta gatggcttga ctgatgttgc gaaaaaattc240
ccacatcgtc atcgtaaaga tggccgttac tatgtcatcg actttacctt aaaagaaatt300
caaagtttag aaatgacaga aaactttgaa accgcaggcg cagcacgtgc atctggtccg360
ggtggtggtg caccgcgcgg tccgcatggt ggtgcggcga gcggcctgaa tggttgctgc420
cgttgcggtg cgcgtggtcc ggaaagccgt ctgctggaat tttatctggc catgccgttt480
gcgaccccga tggaagcgga actggcccgt cgtagcctgg ctcaagatgc accgccgctg540
ccggttccgg gcgtgctgct gaaagaattt accgtgagcg gcaacattct gaccattcgt600
ctgacggcgg cagaccatcg tcagctgcaa ctgagcatta gcagctgcct gcaacagctg660
tctctgctga tgtggattac ccagtgcttt ctgccggtgt ttctggccca gccgccgtct720
ggtcaacgtc accaccacca ccaccactaa 750
<210>53
<211>249
<212>PRT
<213>智人(Homo Sapien)
<400>53
Met Asp Pro Ser Ser His Ser Ser Asn Met Ala Asn Thr Gln Met Lys
1 5 10 15
Ser Asp Lys Ile Ile Ile Ala His Arg Gly Ala Ser Gly Tyr Leu Pro
20 25 30
Glu His Thr Leu Glu Ser Lys Ala Leu Ala Phe Ala Gln Gln Ala Asp
35 40 45
Tyr Leu Glu Gln Asp Leu Ala Met Thr Lys Asp Gly Arg Leu Val Val
50 55 60
Ile His Asp His Phe Leu Asp Gly Leu Thr Asp Val Ala Lys Lys Phe
65 70 75 80
Pro His Arg His Arg Lys Asp Gly Arg Tyr Tyr Val Ile Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Glu Ile Gln Ser Leu Glu Met Thr Glu Asn Phe Glu Thr Ala
100 105 110
Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro
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His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu Asn Gly Cys Cys Arg Cys Gly Ala
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Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe
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Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln Asp
165 170 175
Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val
180 185 190
Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln
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Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met
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20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
Pro His Arg His Arg Lys Asp Gly Arg Tyr Tyr Val Ile Asp Phe Thr
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Ala Ala His Met Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe
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Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg Asp Ala Ala Pro Leu
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Gly Arg Gly Pro Arg Gly Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Gly
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Gly Gly Ala Pro Arg Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu Asn
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Gly Cys Cys Arg Cys Gly Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu
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Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu
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Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu
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Gln Gln Leu Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val
180 185 190
Phe Leu Ala Gln Pro Pro Ser Gly Gln Arg Gly Gly Ala Arg Arg Pro
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Leu Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu
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Arg
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<213>智人(Homo Sapien)
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225 230 235 240
Leu Phe Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser
245 250 255
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<213>人工序列
<223>蛋白质D-MAGE-A3-His
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145 150 155 160
Glu Glu Gln Glu Ala Ala Ser Ser Ser Ser Thr Leu Val Glu Val Thr
165 170 175
Leu Gly Glu Val Pro Ala Ala Glu Ser Pro Asp Pro Pro Gln Ser Pro
180 185 190
Gln Gly Ala Ser Ser Leu Pro Thr Thr Met Asn Tyr Pro Leu Trp Ser
195 200 205
Gln Ser Tyr Glu Asp Ser Ser Asn Gln Glu Glu Glu Gly Pro Ser Thr
210 215 220
Phe Pro Asp Leu Glu Ser Glu Phe Gln Ala Ala Leu Ser Arg Lys Val
225 230 235 240
Ala Glu Leu Val His Phe Leu Leu Leu Lys Tyr Arg Ala Arg Glu Pro
245 250 255
Val Thr Lys Ala Glu Met Leu Gly Ser Val Val Gly Asn Trp Gln Tyr
260 265 270
Phe Phe Pro Val Ile Phe Ser Lys Ala Ser Ser Ser Leu Gln Leu Val
275 280 285
Phe Gly Ile Glu Leu Met Glu Val Asp Pro Ile Gly His Leu Tyr Ile
290 295 300
Phe Ala Thr Cys Leu Gly Leu Ser Tyr Asp Gly Leu Leu Gly Asp Asn
305 310 315 320
Gln Ile Met Pro Lys Ala Gly Leu Leu Ile Ile Val Leu Ala Ile Ile
325 330 335
Ala Arg Glu Gly Asp Cys Ala Pro Glu Glu Lys Ile Trp Glu Glu Leu
340 345 350
Ser Val Leu Glu Val Phe Glu Gly Arg Glu Asp Ser Ile Leu Gly Asp
355 360 365
Pro Lys Lys Leu Leu Thr Gln His Phe Val Gln Glu Asn Tyr Leu Glu
370 375 380
Tyr Arg Gln Val Pro Gly Ser Asp Pro Ala Cys Tyr Glu Phe Leu Trp
385 390 395 400
Gly Pro Arg Ala Leu Val Glu Thr Ser Tyr Val Lys Val Leu His His
405 410 415
Met Val Lys Ile Ser Gly Gly Pro His Ile Ser Tyr Pro Pro Leu His
420 425 430
Glu Trp Val Leu Arg Glu Gly Glu Glu Gly Gly His His His His His
435 440 445
His His
450
权利要求
1.一种融合蛋白，其包含
(a)NY-ESO-1或其片段，其连接到
(b)LAGE-1或其片段，
其中NY-ESO-1和/或LAGE-1中的至少一种是截短的或部分截短的，或是包括NY-ESO-1或LAGE-1的一个或多个表位的片段。
2.根据权利要求1的融合蛋白，其中所述NY-ESO-1选自全长NY-ESO-1、部分截短的NY-ESO-1或截短的NY-ESO-1或其任何片段，所述片段包括NY-ESO-1的一个或多个表位。
3.根据任何前述权利要求的融合蛋白，其中所述LAGE-1选自全长LAGE-1、部分截短的LAGE-1或截短的LAGE-1或其任何片段，所述片段包括LAGE-1的一个或多个表位。
4.根据任何前述权利要求的融合蛋白，其中所述NY-ESO-1或LAGE-1与天然存在的NY-ESO-1或LAGE-1至少95、96、97、98、99％或100％等同。
5.根据任何前述权利要求的融合蛋白，其中所述LAGE-1是LAGE-1a。
6.根据任何前述权利要求的融合蛋白，其中所述NY-ESO-1的N末端与所述LAGE-1的C末端融合。
7.根据权利要求1-5中任一项的融合蛋白，其中所述NY-ESO-1的C末端与所述LAGE-1的N末端融合。
8.根据任何前述权利要求的融合蛋白，其中所述融合蛋白进一步包含异源融合配偶体。
9.根据权利要求8的融合蛋白，其中所述异源融合配偶体是蛋白质D或其衍生物或片段。
10.根据权利要求9的融合蛋白，其中所述蛋白质D衍生物包含蛋白质D的约前1/3，例如蛋白质D的氨基酸20-127。
11.根据权利要求9或10的融合蛋白，其中所述蛋白质D衍生物不是脂质化的。
12.根据任何前述权利要求的融合蛋白，其进一步包含氨基酸Met、Asp和Pro。
13.根据权利要求12的融合蛋白，其中所述氨基酸Met、Asp和Pro与根据权利要求9-11中任一项的蛋白质D异源融合配偶体的N末端融合。
14.根据任何前述权利要求的融合蛋白，其中所述融合蛋白是重组融合蛋白。
15.根据任何前述权利要求的融合蛋白，其中所述融合蛋白进一步包含亲和标记物。
16.根据权利要求15的融合蛋白，其中所述亲和标记物是包含1-10个组氨酸残基的组氨酸尾。
17.根据权利要求1-5中任一项的融合蛋白，其包含选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO3、SEQ ID NO4、SEQ ID NO7、SEQ IDNO8、SEQ ID NO11、SEQ ID NO12、SEQ ID NO15、SEQ IDNO16、SEQ ID NO19、SEQ ID NO20、SEQ ID NO23、SEQID NO24、SEQ ID NO26、SEQ ID NO28、SEQ ID NO30、SEQ ID NO32、SEQ ID NO34、SEQ ID NO36、SEQ ID NO38、SEQ ID NO40、SEQ ID NO42、SEQ ID NO44、SEQ IDNO46、SEQ ID NO48、SEQ ID NO51、SEQ ID NO53、SEQID NO55、SEQ ID NO57、SEQ ID NO60、SEQ ID NO62、SEQ ID NO64、SEQ ID NO66、SEQ ID NO68、SEQ ID NO70SEQ ID NO73、SEQ ID NO75、SEQ ID NO77、SEQ ID NO79、SEQ ID NO81、SEQ ID NO83、SEQ ID NO85、SEQ IDNO87、SEQ ID NO89、SEQ ID NO91、SEQ ID NO93、SEQID NO95和SEQ ID NO97。
18.根据权利要求1-5中任一项的融合蛋白，其包含选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO81、SEQ ID NO85、SEQ ID NO93和SEQID NO97。
19.一种核酸分子，其编码权利要求1-18中任一项的融合蛋白。
20.一种载体，其包含权利要求19的核酸分子。
21.一种宿主细胞，其用权利要求20的载体转化。
22.一种免疫原性组合物或疫苗，其包含根据权利要求1-18中任一项的融合蛋白、如权利要求19中要求的核酸分子或如权利要求20中要求的载体。
23.如权利要求22中要求的免疫原性组合物，其另外包含佐剂、和/或免疫刺激细胞因子或趋化因子。
24.如权利要求22或23中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述融合蛋白存在于水包油或油包水乳剂媒介物中。
25.如权利要求23或24中要求的免疫原性组合物或疫苗，其包含一种或多种下述佐剂3D-MPL、QS21或CpG寡核苷酸。
26.如权利要求22-26中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其另外包含一种或多种其他抗原。
27.如权利要求22-26中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其用于在医学中使用。
28.权利要求1-18的融合蛋白、或权利要求19的核酸分子、或权利要求20的载体、或权利要求22-26的组合物或疫苗在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述癌症例如乳腺黑素瘤；乳腺癌；前列腺癌；膀胱癌包括移行细胞癌；肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)；头与颈癌包括食管癌；鳞状细胞癌；胃肠道癌；肝癌；脑肿瘤；白血病；和各种肉瘤。
29.权利要求28的用途，用于治疗对于Her2/neu靶向治疗不合格的患者。
全文摘要
提供了包含与衍生自LAGE-1的抗原连接的衍生自NY-ESO-1的抗原的融合蛋白，其可以进一步包含载体、融合配偶体等。还提供了用于制备、配制和使用此种融合蛋白的方法。此种蛋白质是用于诱导针对一系列具有癌症抗原的细胞的免疫应答的有用的疫苗组分。
文档编号C07K14/47GK101583623SQ200880002223
公开日2009年11月18日 申请日期2008年1月11日 优先权日2007年1月15日
发明者N·布莱斯, M·博伊尔, V·布里查, J·卢亚赫, D·马丁, R·M·帕尔曼捷, C·里乌 申请人:葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司