甘草酸盐大规模精制生产技术工艺的制作方法

专利名称：甘草酸盐大规模精制生产技术工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于药学一一药品生产领域，主要涉及一种从甘草中提取，治疗 急慢性肝炎、消化道溃疡、肿瘤等疾病，符合法定药物制剂要求的原料药甘 草酸盐，如甘草酸三铵、甘草酸二铵、甘草酸单铵的大皿精制生产技术工艺，
要求其纯度超过99%。
二背景技术：
甘草酸(glyCyrrhizicacid， GA)又名甘草甜素、甘草皂甙、甘草酸苷、 甘草甜，学名(3 P ， 20 P )-20-氯基-11-氧代-30-正齐墩果-12-烯-3-基-2-0-P-D-吡喃葡糖基-ot-D-吡喃葡糖醛酸，是甘草中最重要的有效成分之一，具 有抗炎、抗病毒，和保肝解毒及增强免疫功能等作用。由于甘草酸有糠皮质 激素样药理作用而无严重不良反应，临床被广泛用于治疗各种急慢性肝炎。 支气管炎和艾滋病，还具有抗癌防癌、干扰素诱生剂及细胞免疫调节剂等功 能。随着研究的深入，甘草酸类的其他作用也正得到逐步开发。
1、抗炎作用抗炎是甘草酸类最主要的药理作用，对甘草酸抗炎机理的 研究一直被人们所关注，也取得了一些i^!L多数报道认为，抗炎机理与抑 制前列腺素(PGs)等介质的作用有关。 一般认为，甘草酸能通过抑制磷脂酶 的作用来抑制PGs的合成与释放。2、抗病毒作用抗病毒作用是甘草酸类的主要药理作用之一。近年来， 有关甘草酸、甘草甜素(GL)对肝炎病毒、艾滋病毒及其它病毒的作用研究 和应用，取得了较好的效果，甘草甜素具有高甜度、低热量、起泡性和溶血 作用很低、安全无毒和医疗保作用较强等优良特性，甘草甜素片已正式在临 床上用于治疗乙肝病人。对肝炎病毒的作用肝炎是危害人类健康的严重疾病之一，尤其是慢性肝炎 可引起肝硬化、肝癌等后果，目前仍缺乏治愈率高、疗效稳定的药物。近年 来国内外应用甘草酸制剂治疗慢性肝炎已取得良好的疗效。日本学者考察了 甘草酸在体外对乙肝表面抗原(HBsAg)向细胞外分泌的影响，其结果是乙肝 病毒(HBV)感染细胞HBSAg分泌受到抑制，可能抑制肝细胞的破坏，从而改善 了慢性乙肝患者肝功能障碍，最终改善了对HBV的免疫状况。可以认为，甘 草酸有直接的HBV作用及对肝功能障碍的改善作用。近年来，应用于临床的甘草酸类新品种甘草酸二铵，经随机配对治疗研 究显示，其降低慢性病毒性肝炎病人的谷氨酰转肽酶(ALT)效果显著。静脉 给药后，85%以上的病人ALT效果显著。静脉给药后，85y。以上的病人ALT 可恢复正常。甘草酸二铵药物活性更强，具有较强的抗炎、保护肝细胞膜和 改善肝功能作用，对多种肝毒剂致肝脏损伤有防治作用，并有剂量依赖性。 实践表明，甘草酸二铵能明显阻止半乳糖胺、四氯化碳等引起的血清ALT增 高，肝组织损害也相应改善。对复合致病因子引起的小鼠慢性肝损害，能明 显提高成活率及改善肝功能。宋星宏作了甘草甜素治疗慢性乙肝疗效观察，表明甘草甜素在降4氐ALT、乙肝病毒等指标有明显的疗效，据有关研究证实，甘草酸可明显减轻肝细胞脂肪变及坏死，减轻肝细胞 间质炎症反应，抑制肝细胞纤维增生以及促进肝细胞再生等，且该药副作用 少，是一种治疗乙型肝炎值得重视与推广的药物。对艾滋病(AIDS)病毒的 作用，80年代日本学者首次报道了甘草甜素抗艾滋病病毒HIV的作用，曾引 起轰动。艾滋病病毒HIV感染者的治疗原则是阻止病毒增殖和增强机体免疫 力。实*汪明GL可明显抑制HIV增殖，并具有免疫激活作用。1.23 pg/ml 的GL对HIV增殖抑制率达50。/。，但GL抑制HIV感染的有效浓度高，范围狭 窄，若要维持其在血液中的有效浓度，须持续大量给药。3、 抗癌作用甘草酸类药物除具有防治病毒性肝类、诱生干扰素等作用 外，还具有防癌、抗癌的功效。对S丽C防治慢性丙肝患者肝细胞癌变的长期 效果进行研究。453名患者共服用SNMC 2-16年，结果发生癌变者为7%;而 对照组109名患者仅短期使用S蘭C或改用干扰素治疗，发生癌变者占12%, 而未使用SNMC者为25%,表明S腿C可明显降低慢性丙肝患者长期治疗的癌 变率。甘草次酸能抑制巴豆油(其成分TDA为强促癌剂)诱发的小鼠耳肿胀 和马氨酸脱按酶活性，对强致癌剂苯丙芘诱发的DNA损伤有一定的保护作用。4、 免疫调节作用甘草酸类具有非特异性免疫调节作用，其主要是增强 细胞免疫作用，可增强Mcj)吞噬功能，消除抑制性McJ)的抑制活性，还可选择 性地增强辅助性T淋巴细胞的增殖能力和活性。甘草酸口服给药时在消化道 经细菌及消化酶作用，水解成葡萄糖醛酸和甘草次酸，然后吸收入门静脉。因此，口服甘草酸与注射给药不同，最终进入血液的是甘草次酸，提示可能
甘草次酸才是P-450诱导剂。
5、其它作用甘草酸具有降血脂与抗动脉粥样硬化作用，阻止动脉粥样 硬化的形成，近年药理实验发现，甘草次酸对家兔或大鼠实验性动脉粥样硬 化有极显著的降低血中胆固醇、p-月旨蛋白及甘油三酯的作用，且其强度超过 抗动JI^化药。通过动物模型证实，甘草酸灌胃对实验性小鼠、大鼠血脂增 高均有明显抑制作用，对高脂饮食诱发的家鴒血清胆固醇升高也有明显抑制 作用。
目前药用甘草酸都是以盐的形式来应用的，如甘草酸单铵、甘草酸二铵、 甘草酸单钾、甘草酸二钾、甘草酸二钠和甘草酸三钠(见国家食品药品监督 管理局网站)，因为以盐的形式存在的甘草酸较为稳定。
甘草酸是从甘草中提取的，传统的提取方法如下
将甘草的根茎干^粉碎至0. 833mm的粉末(保留纤维部分)，,末及 纤维200kg,加水1200kg，在85 100TC下浸提2h。过滤后滤渣再用1000kg 7m取2h,过滤后滤渣再重复浸提1次，合并3次滤液，在搪瓷蒸发器中浓 缩至]/5的体积。冷却后加入95%的乙醇，使乙醇浓度达65%，静置24h，过 滤除去植物蛋白、多糖等杂质。滤液中加入硫酸，调pH值至3，甘草酸沉淀 析出。过滤、洗涤后，加入3倍的丙酮，加热回流3h，倾出丙酮提取液，残 渣再反复回流提取2次。合并3次提取液，过滤后回收丙酮，即得湿甘草酸， 451C干燥lh,緩緩升温至85 ~ 95_C，快烘干时，升至100 1051C，烘5min,经粉碎后即得成品。为了更有效、更快速、更简便地从甘草中提取到甘草酸，人们有做了许多改进，如采用超声提取(从甘草中提取纯化甘草酸的方法，专利号 ZL02109474.8 )、微波辅助提取( 一种从甘草中提取甘草酸的方法，专利号 ZL03105372. 6 )、超临界0)2提取(超临界0)2从甘草中提取甘草酸的方法，专 利号ZL00105599.2 )，但是这些方法还是不能满足大,精制生产的要求， 有的是每批提取量太少。从现有提取工艺和其结构来看，甘草酸盐来源和组成较为复杂，提取纯 度不高，难以达到药用原料的要求。根据目前的研究结果，在甘草酸盐类药 品中除主要成分外，尚有大量的相关物质。有的申报国家食品药品监督管理 局的资料中，其原料药杂质甚至在20%、 30%以上，且其药理毒理作用不明确， 因此建立大,从甘草中精制生产高纯度的甘草酸盐是确保甘草酸盐类药品 质量的关键。三、发明内容本发明建立了 一种从甘草中大规模生产高纯度甘草酸盐的技术工艺，其 步骤包括粉碎一7jc提一超临界C02提取一分离一酸化一结晶一脱色一重结 晶。该发明除借鉴传统生产技术工艺的优点外，还克服了采用超声提取、微 波辅助提取等限制生产目的技术工艺，适应于大恥漠生产。另外，本发明 还采用了超临界C02提取结合传统的酸化萃取技术工艺，再利用 一次有机溶剂 结晶和一次酸化结晶，确保了获得的甘草酸盐纯度达到99%以上。本发明的具体工艺步骤如下
(1) 粉碎甘草充分清洗干净，75t;干燥，机械粉碎和过粗目筛。
(2) 水提粉碎的甘草在100lC高温下7jc提三次，每次2-6小时，合并提取 液，真空浓缩，得到甘草浓缩液。
(3) 超临界0)2提取甘草浓缩液，用超临界C02去除非极性油性杂质，萃 取压力控制在30土3Mpa，温度控制60土5X:。
(4) 分离加入乙醇改性剂，使乙醇与C02比控制在5-10: 100，萃取压力 控制在30土3Mpa，温度控制60土5X:，干燥后得到粗提的甘草酸。
(5) 酸化粗提的甘草酸用有机溶剂(pH值1. 0-5. 5，用盐酸等强酸调节)， 如丙酮、正乙醇和异戊醇进行萃取，离心得富集甘草酸的有机溶液。
(6) 结晶用碱性化合物，如氨水、氢氧化钾和氢氧化钠、氢氧化镁，调节 富集甘草酸的有机溶液至pH值5. 5-12. 5，反萃得富集甘草酸盐的水溶 液。
(7) 脱色甘草酸盐的水溶液中加入活性炭进行脱色处理。
(8) 重结晶甘草酸盐溶液用适量的水醋酸调节，析出后得到精制的高纯度 甘草酸盐，如甘草酸单铵、甘草酸二铵和甘草酸三铵。
最后，采用结构确证、有关物质研究、含量测定等多种方法对获得的甘 草酸盐的结构和纯度进行鉴定。 (1)结构确证方面
主要采用核磁共振、液质联用(LC-MS/MS)对产品所含的主要组分和其它 次要组分进行结构研究。(2) 有关物质研究方面采用分离效果较好、灵敏度高的制备型HPLC法，对所获得的甘草酸盐进 一步分离，再通过结构确证有关物质的种类、结构和含量。(3) 含量测定采用多种检测方法如UV、 HPLC和LC-MS法，对获得的甘草酸盐二进行含 量测定，确定其主要成分的纯度。四具体实施方式
我们应用本发明从200公斤甘草中提取甘草酸二铵，最后获得8. 2公斤的 甘草酸二铵，其纯度达到99. 8%。9
权利要求
1、一种从甘草中大规模生产高纯度甘草酸盐的技术工艺，其步骤包括粉碎-水提-超临界CO2提取-分离-酸化-结晶-脱色-重结晶。
2、 权利要求l所述的高纯度甘草酸盐，其纯度超过99%。
3、 权利要求l所述的具体工艺步骤如下(1) 粉碎甘草充分清洗干净，75X:干燥，机械粉碎和过粗目筛。(2) 水提粉碎的甘草在1001C高温下;1^二次，每次2-6小时，合并提取液，真空浓缩，得到甘草浓缩液。(3) 超临界0)2提取甘草浓缩液，用超临界C02去除非极性油性杂质，萃取压力控制在30土3Mpa，温度控制60土51C。(4) 分离加入乙醇改性剂，使乙醇与C02比控制在5-10: 100，萃取压力控制在30士3Mpa，温度控制60±5匸，干燥后得到粗提的甘草酸。(5) 酸化粗提的甘草酸用有机溶剂(pH值l. 0-5.5，用盐酸等强酸调节)，如丙酮、正乙醇和异戊醇进行萃取，离心得富集甘草酸的有机溶液，(6) 结晶用碱性化合物，如氨水、氢氧化钾和氢氧化钠、氢氧化镁，调节富集甘草酸的有机溶液至pH值5. 5-12. 5，反萃得富集甘草酸盐的水溶液。(7) 脱色甘草酸盐的水溶液中加入活性炭进行脱色处理。(8) 重结晶甘草酸盐溶液用适量的水醋酸调节，析出后得到精制的高纯度甘草酸盐，如甘草酸单铵、甘草酸二铵和甘草酸三铵。
4、 权利要求2所述的甘草酸盐中的盐包括铵、钾、钠、镁、锌、铋等金属离子。
5、 权利要求2所述的甘草酸盐中的甘草酸离子包括三价、二价和一价离子.
全文摘要
本发明涉及一种从甘草中大规模生产高纯度甘草酸盐的技术工艺，其步骤包括粉碎—水提—超临界CO₂提取—分离—酸化—结晶—脱色—重结晶。该工艺生产出的甘草酸盐中的甘草酸离子包三价、二价和一价离子，其盐包括铵、钾、钠、镁、锌、铋等金属离子，甘草酸盐纯度超过99％。本发明的优点在于技术先进，操作简便，便于大规模生产，精制理想，产品纯度高，原料符合的医药用途。
文档编号C07J63/00GK101654471SQ20091004433
公开日2010年2月24日 申请日期2009年9月14日 优先权日2009年9月14日
发明者静 张, 俊 杨, 肖炼红, 谷陟欣, 莲 贺 申请人:湖南康普制药有限公司