专利名称：：一种复方甘草酸苷类粉针注射剂及其制备方法
技术领域：
：.本发明涉及医药领域，具体而言，是一种复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂及其制备方法。
背景技术：
：复方甘草酸苷类注射剂由甘草酸苷(或甘草酸单铵盐)、甘氨酸、盐酸半胱氨酸三种主要成分组成，甘草酸苷(C42H62016)难溶于水，所以一般将其制成盐的形式以增加其水溶性，如制成甘草酸铵盐，国内有药品标准的原料如甘草酸单铵S(C42H65N016，2H20)，甘草酸苷及其医学上可接受的盐具有显著的抗炎症作用、免疫调节作用、对实验性肝细胞损伤的抑制作用、抑制病毒增殖和对病毒的灭活作用等药理作用。甘草酸苷及其医学上可接受的盐具有抑制兔的局部过敏坏死反应(ArthusPhenomenon)及抑制施瓦茨曼现象(ShwartzmanPhenomenon)等过敏作用。对皮脂激素、有增强激素的抑制应激反应作用，拮抗激素的抗肉肉芽形成和胸腺萎縮作用。对激素的渗出作用无影响。甘草酸苷及其医学上可接受的盐可以直接与花生四烯酸代谢途径的启动酶一磷脂酶a2(p.hosphohpaseA2)结合以及与作用于花生四烯酸使其产生炎性介质的脂氧合酶(lipoxygenase)结合，选择性地阻碍这些酶的磷酸化而抑制其活化。甘草酸苷在体外试验(invitro)具有以下免疫调节作用(1)对T细胞活化的调节作用；(2)对Y干扰素的诱导作用；(3)活化NK细胞作用；(4)促进胸腺外T淋巴细胞分化作用。在invitro初代培养的大白鼠肝细胞系，甘草酸苷及其医学上可接受的盐有抑制由四氯化碳所致的肝细胞损伤作用。在小白鼠MHV(小白鼠肝炎病毒)感染实验中，给予甘草酸苷及其医学上可接受的盐可延长其生存日数。在兔的牛痘病毒(Vacciniavirus)发痘阻止实验中，有阻止发痘作用；在体外试验系，也观察到了抑制疱疹病毒等的增殖作用，以及对病毒的灭活作用。甘氨酸及盐酸半胱氨酸可以抑制或减轻由于大量长期使用甘草酸苷及其医学上可接受的盐可能出现的电解质代谢异常所致的假性醛固酮症状。复方甘草酸苷类注射制剂临床上用于治疗急慢性肝病，改善肝功能异常。对中毒性肝炎、外伤性肝炎以及癌症有一定的辅助治疗作用。也可用于治疗湿疹、皮肤炎、荨麻疹、食物中毒、'药物中毒、药物过敏等。复方甘草酸苷注射液最早由日本米诺发源制药公司生产(复方甘草甜素注射液，CompoundGlycyrrhizinInjection),已有进口中国，商品名为"美能"，国内有复方甘草酸单铵注射液上市，主药组成与其相同，但比例不同，复方甘草酸苷类注射液有复方甘草酸苷注射液、复方甘草酸单铵注射液、复方甘草酸铵注射液等，其中复方甘草酸苷注射液又名复方甘草甜素注射液。复方甘草酸苷类注射用粉针制剂为水针剂的改进，尤其是相对于甘氨酸来讲，盐酸半胱氨酸结构中因含有巯基，稳定性尤其是抗氧化性差，故制成粉针制剂以提高制剂的稳定性，如注射用复方甘草酸苷(注射用复方甘草甜素)、注射用复方甘草酸单铵S等。4CN200510074470.3公开了一种几乎等同于水针剂组成的粉针制剂，由甘草酸单铵、甘氨酸、盐酸半胱氨酸和抗氧剂无水亚硫酸钠、氯化钠及pH调节剂氢氧化钠制成，冻干产品水分(干燥失重)较高，高达46%;CN200510039247.5公开了一种含种含依地酸二钠、亚硫酸钠、甘露醇为载体的注射用复方甘草酸单铵S注射剂；CN200610045889.0公开了一种含依地酸钠转、亚硫酸钠并以氢氧化钠为pH调节剂的注射用复方甘草甜素粉针剂。目前上市的复方甘草酸苷类注射用粉针制剂有注射用复方甘草酸苷如国药准字H20060537、国药准字H20060572等，及注射用复方甘草酸单铵S如国药准字H20060430、国药准字H20050702等。'现有技术的注射用复方甘草酸苷类粉针剂缺点为贮藏条件要求严格，仓贮条件成本高，如国家食品药品监督管理局药品标准YBH09612006关于注射用复方甘草酸苷贮藏条件描述为"密闭，在凉暗处(避光并不超过20'C)保存"，注射用复方甘草酸单铵S说明书(国药准字H20050700,核准日期2006年12月27日，哈尔滨三联药业有限公司)贮藏条件描述为"密闭，在凉暗处(避光并不超过20°C)保存"，现有的上市产品在贮藏、运输、使用过程中，常会出现不能完全满足其贮藏在凉暗处(避光并不超过20'C)保存的条件，尤其是在夏季及中国南方地区，由于气温较高而出现因贮运不慎而造成的不同程度的产品质量问题，如药品复溶后出现沉淀，复溶后出现不同程度乳光，严重威胁临床用药的安全性。本发明的目的在于克服上述缺陷，提供了一种可以在常温保存的质量稳定的复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂，本发明同时提供了该可常温保存的质量稳定的复方甘草酸苷类冻干粉针法射剂的制备方法。
发明内容本发明涉及的是一种复方甘草酸苷类粉针注射剂及其制备方法，尤其涉及注射用复方甘草酸苷和注射用复方甘草酸单铵S粉针注射剂及其制备方法，特征在于处方中含有作为活性成分的甘草酸苷(或甘草酸单铵盐)、甘氨酸、盐酸半胱氨酸和医学上可接受的载体组成的粉针注射剂及其制备方法，其中医学上可接受的载体含右旋糖酐，本发明的复方甘草酸苷类粉针注射剂可常温保存，显著提高了药品的稳定性，更好保证了药物安全有效性，并有效降低了诸如药品生产贮存、运输过程中的仓贮成本。对现有上市产品的缺陷进行了系统研究，意外发现复方甘草酸苷类粉针注射剂其医学上可接受的载体含右旋糖酐的时候可显著提高稳定性，而其他如仅含有甘露醇、氯化钠等作为载体的稳定性则出现质量问题，尤其是对温度的稳定性，如在实施例1的一系列处方工艺样品的影响因素试验中，本发明的复方甘草酸苷类粉针注射剂在60'C30天能很好保持质量稳定，而对照产品无论是含甘露醇、氯化钠为载体还是不含其他支持载体等在60°C5天试验中全部出现复溶严重沉淀，进一步的加速和长期稳定性试验证明了稳定的复方甘草酸苷类粉针注射剂产品的质量稳定性和用药安全性。经检索，本发明的复方甘草酸苷类粉针注射剂及其制备方法目前国内外没有报道。本发明可以这样实现一种复方甘草酸苷类粉针注射剂，为由处方中含有的作为活性成分的甘草酸苷(或甘草酸单铵盐)、甘氨酸、盐酸半胱氨酸和医学上可接受的载体制成的冻干粉针注射剂、无菌分装粉针剂，其特征在于其医学上可接受的载体含右旋糖酐。按制成1000支制剂产品计，其处方活性成分组成重量比例为甘草酸苷(甘草酸单铵盐折算成甘草酸苷计)9200g盐酸半胱氨酸5135g甘氨酸1002000g其医学上可接受的载体右旋糖酐含量可以为0.16%(m/v);右旋糖酐可以为右旋糖酐70、右旋糖酐40、右旋糖酐20，优选右旋糖酐40;其医学上可接受的载体右旋糖酐40含量可以为16%，优选14%;其处方中可含抗氧剂，抗氧剂可以为亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、氨基酸类、维生素类等，优选无水亚硫酸钠。其处方中可含金属络合剂，金属络合剂可以为依地酸钠钙、依地酸钠，优选为依地酸钠钙。其处方中含pH调节剂，pH调节剂可以为氢氧化钠、氨水及其水溶液等。其处方活性成分组成重量比例可以为甘草酸苷(甘草酸单铵盐折算成甘草酸苷计)40mg盐酸半胱氨酸20mg甘氨酸0.4g其处方活性成分组成重量比例也可以为-甘草酸单铵S40mg盐酸半胱氨酸30mg甘氨酸0.4g其处方中的盐酸半胱氨酸可指无水物或含结晶水物，如在注射用复方甘草酸单铵S处方中盐酸半胱氨酸指以C3H7N02S"HC1"H20计，而在注射用复方甘草酸苷(注射用复方甘草甜素)处方中盐酸半胱氨酸指以C3H7N02SHC1计。复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂的制备方法主要可以分为配液、脱炭、冻干三过程(无菌分装为无菌生产工艺)，配液过程可以为混合所有原辅料一起加注射用水溶解，也可以根据物料性质分步骤溶解，更优选的方法为分步骤溶解，如先溶解右旋糖酐等支持剂，再依次溶解配入甘氨酸、抗氧剂(必要时金属络合剂)、甘草酸单铵盐、盐酸半胱氨酸等；在整个配液过程中，根据配液时间、制药设备及设计的具体情况，必要时可全程充(通)氮气或二氧化碳气以保护药液的稳定，或部分关键工艺过程充(通)氮气或二氧化碳气保护，如在盐酸半胱氨酸配液过程及药液放置过程中；对于溶解速度较慢的物料，配液过程中必要时可加热使溶解过程加快，温度一般控制在8(TC以下，对于盐酸半胱氨酸配液中，温度优选控制60'C以下，药液配制后温度一般保持在55'C以下。配制的溶液用pH调节剂调节pH值为5.57.5，pH调节剂可以为氢氧化钠、氨水，优选氢氧化钠，如520%的氢氧化钠溶液。配液过程中优选工艺过程为盐酸半胱氨酸在最后物料配液工序中加入。为确保热原达到规定要求，本品配制好的溶液在精滤除菌前需加入活性炭吸附除热原，活性炭量可以为0.050.3%(m/v);由于右旋糖酐可能带入热原，优选的方法为将配制好的含右旋糖酐的溶液先加入活性炭吸附除热原处理，活性炭加入量可以为0.0503%(m/v)，然后和其他物料溶液混合配制；脱炭时间可以为1540分钟，一般搅拌20-30分钟，过滤除炭，精滤工艺滤器孔径不大于0.22um。冻干工艺为普通冻干工艺，冻干参数可根据不同的设备进行调整，如可以为板温设置-50。C，制品入箱，待品温拉至-40'C以下，保温2小时，冷凝器制冷至-5(TC以下，开启真空泵，干燥箱抽真空达10pa以下，加热板层，升温至-30'C干燥至样品的冷冻部分消失，以1(TC/小时升温至O'C，保温2小时，再以1(TC/小时升温至4(TC，保温4小时，，箱内真空压塞，进气出箱，铝塑组合盖轧口，包装即得。冻干工艺也可以为制品温度降至-4(TC以下，保持25小时，冷凝器降温到-45'C以下，开始抽真空，设定板温-2510t:，升华开始，当制品冰层完全消失，冷凝器温度明显降低，制品温度与板温接近时，提高板层温度，产品进入二次干燥；制品温度达到3545'C，保持13小时，用冻干机板层将丁基胶塞压入瓶中，冻干机泄压后，药品出箱。如复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂的制备方法，可以为(1)取右旋糖酐、甘氨酸加入到配制液总体积60%的注射用水中，约60'C搅拌使溶解，冷却；加入盐酸半胱氨酸、亚硫酸钠和甘草酸单铵盐搅拌溶解，加入适量氢氧化钠溶液调节pH值至6.07.5;加入配制量0.1%(g/ml)的注射用活性炭，常温搅拌20分钟，用1.2um的混合纤维素酯微孔滤膜粗滤除炭，用少量注射用水洗涤活性炭层，合并滤液，加注射用水至全量，用0.22^111的混合纤维素酯微孔滤膜精滤；取精滤液，检测溶液的澄清度与颜色、pH值、澄明度、含量；检测合格后，测定溶液主药浓度，确定准确装量，灌装，进箱，板温设置-40-50'C，制品入箱，待品温拉至-40'C以下，保温2小时，冷凝器制冷至-50'C以下，开启真空泵，干燥箱抽真空达10pa以下，加热板层，升温至-30'C干燥至样品的冷冻部分消失，以1(TC/小时升温至0。C，保温2小时，再以1(TC/小时升温至4(TC，保温4小时(确认干燥完全)，箱内真空压塞，进气出箱，铝塑组合盖轧口，包装即得。(2)取右旋糖酐(必要时和其他支持剂，如乳糖、葡萄糖、氯化钠等)加入适量注射用水，加热搅拌使溶解；加入0.10.3%(g/ml)的药用活性炭，搅拌2030分钟，脱炭，得溶液，取适量注射用水与上述溶液，加入配液罐(桶)中搅拌均匀；将甘氨酸加入配液罐(桶)，搅拌溶解；将抗氧剂(必要时金属络合剂)等用适量注射用水溶解，加入配液罐(桶)中，搅拌；将甘草酸单铵盐加入配液罐(桶)中，搅拌至溶解；将盐酸半胱氨酸用适量注射用水溶解，边搅拌边加入配液罐(桶)中，搅拌；用10。/。氢氧化钠溶液调节药液pH值至5.57.5范围内。加入0.050.3%(g/ml)针用活性炭，搅拌20-30分钟，过滤除炭，并用适量水冲洗，加入注射用水至全量，搅拌10分钟以上，半成品送检，除菌过滤，滤器孔径不大于0.22um，将药液按灌装装量分装入经洗瓶灭菌的西林瓶中、半压胶塞(经清洗灭菌)，冻干，制品温度降至-3(TC以下，保持2-5小时，冷凝器降温到-45'C以下，开始抽真空，设定板温-25IO'C，升华开始，当制品冰层完全消失，冷凝器温度明显降低，制品温度与板温接近时，提高板层温度，产品进入二次干燥；制品温度达到3545°C，保持13小时，压塞，出箱，轧盖，包装，即得。(3)制备全程充氮气取适量注射用水，氮气饱和，加热使温度7080'C,加入右旋糖酐(必要时其他支持剂如氯化钠、乳糖、葡萄糖)、甘草酸单铵盐，搅拌使溶解，加入甘氨酸使溶解，加入无水亚硫酸钠(必要时和金属络合剂)使溶解，加入盐酸半胱氨酸使溶解，调节药液pH值至5.57.5范围内，加入0.10.2%(g/ml)的针用活性炭，保持20分钟，过滤除炭，并用适量水冲洗，加入注射用水至全量，搅拌，半成品送检，除菌过滤(孔径不大于0.22nm)，灌装入西林瓶中、半压胶塞，按上述(1)或(2)方法冻干即得。(4)制备全程充氮气取右旋糖酐(必要时其他支持剂如氯化钠、乳糖、葡萄糖)、甘草酸单铵盐、甘氨酸、无水亚硫酸钠(必要时和金属络合剂)、盐酸半胱氨酸使混合，调节确定装量，按无菌生产工艺分装，充氮，轧盖，包装，即得。(5)取除盐酸半胱氨酸外所有物料，置配液罐(桶)中，加入适量注射用水，加热搅拌使辯解；取盐酸半胱氨酸，用适量注射用水溶解，搅拌加入配液罐(桶)中，用10%氢氧化钠溶液调节pH值至5.57.5，加入0.050.3%(m/v)的针用活性炭，搅拌2030分钟，过滤除炭，并用适量注射用水冲洗，除菌过滤(滤器孔径不大于0.22um)，加入注射用水至全量，搅拌，灌装入西林瓶中、半压胶塞，冻干，即得。上述方法均能得到良好的质量稳定的可常温贮藏的产品，本发明的复方甘草酸苷类粉针注射剂的制备方法并不局限于上述方法。本发明的复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂的质量控制方法可以为1、性状本品为白色或类白色冻干块状物或粉末。2、鉴别(1)在甘草酸苷(或甘草酸单铵S)含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与甘草酸单铵对照品溶液主峰的保留时间一致。'(2)取本品，加水制成每lml中约含盐酸半胱氨酸1.0mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液2ml，加亚硝基铁氰化钠试液(1—20)2滴，摇匀，加氨试液2滴，摇匀，溶液呈紫红色。(3)取本品，加水制成每lml中约含甘氨酸20mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液2ml，加三氯化铁试液5滴，产生棕色沉淀，加过量的盐酸，沉淀溶解，再加氨试液，棕色沉淀又出现。氨试液过量，为棕色溶液。3、检査3.1酸碱度取本品，加水制成每lml中约含甘草酸苷10mg的溶液，依沫测定(中国药典2005年版二部附录VIH)，pH值应为5.57.5。3.2溶液的澄清度与颜色取本品，加水制成每lml中约含甘草酸苷5mg的溶液，应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液(中国药典2005年版二部附录IXB)比较，均不得更浓；如显色，与黄色3号标准比色液(中国药典2005年版二部附录IXA第一法)比较，均不得更深。3.3有关物质取本品的粉末适量(约相当于甘草酸苷25mg)，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液5ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照溶液。照甘草酸苷含量测定项下方法，量取对照溶液iow注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高约为记录仪满量程15%~25%。精密量取对照溶液和供试品溶液各10nl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。供试品溶液的色谱图如显杂质峰，除去辅料、溶剂峰外，最大杂质峰的面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍(10.0%),次大杂质峰的面积不得大于对照溶液主峰面积(5.0%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3.2倍(16.0%)。3.4干燥失重取本品1.0g，以五氧化二磷为干燥剂，在60。C减压干燥至恒重，减失重量不得过3.0%(中国药典2005年版二部附录VDIL)。3.5热原取本品，加0.9%生理盐水制成每lml中约含甘草酸苷2mg的溶液，依法检査(中国药典2005年版二部XID)，剂量按家兔体重每lkg注射10ml，应符合规定。3.6无菌取本品，依法检查(中国药典2005年版二部附录XIH)，应符合规定。'3.7其他应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版二部附录IB)。4、含量测定4.1甘草酸苷(或甘草酸单铵S)照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录VD)测定。色谱条件与系统适用性用辛垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.02mol/L醋酸铵(用冰醋酸调节pH至3.0)(35:65)为流动相；检测波长257nm。理论板数按甘草酸苷峰计算应不低于3000。测定法取装量差异项下的粉末适量(约相当于甘草酸苷50mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取lml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取甘草酸单铵对照品约10mg(含量须乘以0.9797折算为甘草酸苷含量)，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液与供试品溶液各1(^1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。4.2盐酸半胱氨酸取装量差异项下的粉末适量(约相当于盐酸半胱氨酸60mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加水5ml使溶解，加入lmol/L盐酸溶液5ml，放置15分钟，加水稀释至刻度，摇勾，滤过，精密量取续滤液50ml，置碘瓶中，加稀盐酸5ml，煮沸5分钟，迅速冷却，精密加入溴滴定液(O.lmol/L)25ml，再加盐酸5ml，密塞，振摇，放置片刻，注意微启瓶塞，加碘化钾试液5ml，立即密塞，振摇，在暗处静置15分钟，用少量水冲洗碘瓶塞和瓶颈，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液(O.lmol/L)滴定至近终点，加淀粉指示液lml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，每lml的溴滴定液(0.1mol/L)相当于2.627mg的C3H7N02S'HC1。4.3甘氨酸精密量取盐酸半胱氨酸含量测定项下的续滤液10ml，加甲基红指示液l滴，用氢氧化钠滴定液(O.lmol/L)滴定至黄色，再加中性甲醛溶液(对酚酞指示液显中性)10ml，振摇，放置10分钟，用氢氧化钠滴定液(O.lmol/L)滴定，近终点，加酚酞指示液lml，继续滴定至溶液呈橘红色。从第二次滴定消耗的氢氧化钠滴定液(O.lmol/L)的量，减去取样量中盐酸半胱氨酸应消耗氢氧化钠滴定液(O.lmol/L)的量[每lml的氢氧化钠滴定液(O:lmol/L)相当于15.76mg的C3H7N02S'HCi;^Ml每lml的氢氧化钠滴定液(O.lmol/L)相当于7.507mg的C2H5N02。在该质量控制方法的含量测定方法中，可根据具体需要将甘草酸苷折算成甘草酸单铵S、C3H7N02S.HC1折算成C3H7N02S.HC1H20。具体实施例方式以下实施例只是更具体地说明本发明，本发明并不仅限于以下实施例的内容。基本处方规格1、注射用复方甘草酸苷规格l:甘草酸苷20mg、盐酸半胱氨酸10mg、甘氨酸200mg;规格2:甘草酸苷40mg、盐酸半胱氨酸20mg、甘氨酸400mg;规格3:甘草酸苷80mg、盐酸半胱氨酸40mg、甘氨酸800mg;'规格4:甘草酸苷0.12g、盐酸半胱氨酸0.06g、甘氨酸L2g2、注射用复方甘草酸单铵S规格l:甘草酸单铵S20mg、盐酸半胱氨酸15mg、甘氨酸0.2g;规格2:甘草酸单铵S40mg、盐酸半胱氨酸30mg、甘氨酸0.4g;规格3:甘草酸单铵S80mg、盐酸半胱氨酸60mg、甘氨酸0.8g;规格4:甘草酸单铵S0.16g、盐酸半胱氨酸0.12g、甘氨酸1.6g上述列举的处方规格是临床常用规格，本发明的处方规格可以按照上述规格比例放大或縮小，并不局限于上述的处方规格。本发明的实施例中均以规格2(注射用复方甘草酸苷甘草酸苷40mg、盐酸半胱氨酸20mg、甘氨酸400mg;注射用复方甘草酸单铵S:甘草酸单铵S40mg与盐酸半胱氨酸30mg与甘氨酸0.4g)为例说明。注射用复方甘草酸苷中盐酸半胱氨酸指C3H7N02SHC1，而注射用复方甘草酸单铵S中盐酸半胱氨酸指C3H7N02SHC1H20。实施例11、各处方工艺样品的制备1.1处方工艺1处方甘草酸单铵盐S(以甘草酸苷计)400g，盐酸半胱氨酸200g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠160g，右旋糖酐40500g。制法称取右旋糖酐40加入10-15倍的注射用水，加热搅拌使溶解；加入0.2。/。(m/v)的药用炭，搅拌2030分钟，脱炭，得右旋糖酐40溶液，取配制量20%~50%的注射用水与右旋糖酐40溶液，加入配液罐(桶)中搅拌均匀；将甘氨酸加入配液罐(桶)，搅拌溶解；将无水亚硫酸钠用适量注射用水溶解，加入配液罐(桶)中，搅拌；将甘草酸单铵盐S加入配液罐(桶)中，搅拌至溶解；将处方量的盐酸半胱氨酸用适量注射用水(4(TC5(TC)溶解，边搅拌边加入配液罐(桶)中，搅拌；药液温度控制在45X:以下。用10。/。NaOH溶液调节药液pH值至5.57.5范围内，加入0.iy。(m/v)针用活性炭，搅拌2030分钟，过滤除炭，并用适量水冲洗。根据批量及处方量计算稀配定容体积，加入注射用水至定容体积(25000mL)，搅拌10分钟以上，半成品送检(控制pH在5.57.0值之间，甘草酸单铵盐、盐酸半胱氨酸、甘氨酸应为标示量的90.0%110.0%)，药液进行除菌过滤，滤器孔径不大于0.2211111，将药液传至灌装间，按2.5mL/支分装入洗瓶传来的西林瓶中、半压塞，入箱。预冻制品温度降至4(TC以下，保持25小时。升华冷凝器降温到-45。C以下，开始抽真空，设定板温-2510'C，升华开始，当制品冰层完全消失，冷凝器温度明显降低,制品温度与板温接近时，提高板层温度，产品进入二次干燥；二次干燥制品温度达到3545°C,保持13小时。用冻干机板层将丁基胶塞压入瓶中，冻干机泄压后，药品出箱。轧盖，灯检，包装，即得。1.2处方工艺2处方甘草酸单铵盐S(以甘草酸苷计)400g，盐酸半胱氨酸200g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠160g，甘露醇950g。制法除将右旋糖酐40换成甘露醇外，其他同处方工艺1同法制备。1.3处方工艺3处方甘草酸单铵盐S(以甘草酸苷计)400g，盐酸半胱氨酸200g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠160g，甘露醇950g，依地酸钠钙40g。制法除将右旋糖酐40换成甘露醇及将依地酸钠钙和无水亚硫酸钠一起溶解外，其他同处方工艺1同法制备。1.4处方工艺4处方甘草酸单铵盐S(以甘草酸苷计)400g，盐酸半胱氨酸200g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠160g，氯化钠125g。制法除没有右旋糖酐40步骤及将氯化钠和甘氨酸混合溶解外，其他同处方工艺l同法制备。1.5处方工艺5处方同处方工艺4，制法除将pH调节剂换成氨水外，其他同处方工艺4同法制备。1.6处方工艺6.处方甘草酸单铵S400g，盐酸半胱氨酸300g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠240g，右旋糖酐40500g。制法同处方工艺1同法制备。1.7处方工艺7处方甘草酸单铵S400g，盐酸半胱氨酸300g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠210g，甘露醇950g。制法同处方工艺2同法制备。1.8处方工艺8处方甘草酸单铵S400g，盐酸半胱氨酸300g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠210g，甘露醇950g，依地酸钠钙40g。制法同处方工艺3同法制备。1.9处方工艺9处方甘草酸单铵S400g，盐酸半胱氨酸300g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠210g，氯化钠125g。制法同处方工艺4同法制备。,1.10处方工艺10处方同处方工艺9，制法除将pH调节剂换成氨水外，其他同处方工艺9同法制备。2、影响因素试验取上述处方工艺110制备的样品，分别在强光(4500士500LX)、高温(6(TC)的条件下放置10天，并于第5天、第10天取样按上述质量控制方法考察其各项质量检测指标(热原、无菌项除外)，再与O天的检测结果比较，结果表明(1)0天各处方工艺样品均能符合上述质量控制方法要求。(2)强光对各处方工艺样品影响很小，仅10天时部分处方工艺样品盐酸半胱氨酸、甘氨酸含量有略微下降，但均在合格范围内，pH值无明显变化。(3)处方工艺25及处方工艺710样品在高温(60°C)的条件下放置5天，复溶时即全部出现多量沉淀，而处方工艺l、处方工艺6样品在高温(60°C)的条件下放置5天、10天样品按上述质量控制方法考察检测均符合规定，并与0天的检测结果一致。'对处方工艺l、处方工艺6样品进一步的高温(60'C)的条件试验30天，经考察检验样品按上述质量控制方法考察检测均符合规定，且与0天的检测结果一致。结果表明右旋糖酐能很好保证药品的质量安全稳定。3、配伍试验取处方工艺1、处方工艺6样品各2瓶分别用0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液250ml稀释，于25'C下放置24小时，于0小时、2小时、4小时、8小时、24小时取样，按上述质量控制方法检测pH值、溶液的澄清度与颜色、含量、有关物质的变化。考察结果表明处方工艺l、处方工艺6样品用0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液稀释放置24小时后，溶液的pH值、澄清度与颜色、含量和有关物质均无明显变化，溶液性质稳定，无配伍反应，临床使用安全。4、稳定性试验'4.1样品实施例1中处方工艺110样品及实施例2、实施例3样品4.2考察项目及方法考察项目性状、酸碱度、澄清度与颜色、干燥失重、可见异物、有关物质、含量等。考察方法按上述质量控制方法考察。4.3试验内容加速试验取样品，置于温度4(TC土2。C的条件下放置6个月，分别于第l、2、3、6月取样，考察各项指标。长期留样试验取样品，置于温度25。C土2。C条件下保存，分别于第3、6、9、12、18、24、36月取样，考察各项指标。4.4实验结果表1复方甘草酸苷类粉针注射剂加速试验结果(一)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表3复方甘草酸苷类粉针注射剂加速试验结果(三)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>备注处方工艺25，710由于加速试验1个月即样品均出现复溶沉淀，即未继续检测其他指标项目，并停止进一步的加速试验和长期常温留样稳定性试验。.按处方工艺1、处方工艺6及实施例2、实施例3同法分别重新试制连续三批生产规模样品并按上述稳定性条件进行加速试验6个月，考察结果表明加速试验6个月后样品各项质量检测指标无明显变化，均符合规定，表明其处方工艺稳定可行。表4复方甘草酸苷类粉针注射剂长期稳定性试验结果(一)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表5复方甘草酸苷类粉针注射剂长期稳定性试验结果(二)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表6复方甘草酸苷类粉针注射剂长期稳定性试验结果(三)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>5、溶血试验5.1试验目的'检查本品与兔红细胞混悬液温育后是否产生溶血和凝聚反应，以确保临床用药安全。5.2实验材料(1)动物健康成年家兔4只，2.8-3.0kg，供抽血用。(2)试验药物处方工艺l、处方工艺6、实施例2、实施例3样品。临用前分别加5%葡萄糖注射液分别稀释为2mg/ml作为供试品溶液。5.3实验方法制备2%兔红细胞生理盐水混悬液取家兔血15ml去除纤维蛋白原，移入刻度离心管内，加生理盐水，摇匀，离心，去除上清液，反复洗几次直至上清液呈无色透明为止，然后按红细胞的容积用生理盐水稀释成2%的混悬液。溶血试验各样品分别取试管7支，按表8加入各种液体。第7支不加入供试品溶液，并用蒸馏水代替生理盐水，将各管轻轻摇匀，在37'C水浴中保温4h,定时观察并记录结果。'判断标准试管内溶液出现透亮的红色，判为溶血阳性。红细胞全部下沉，如振摇后未能打散，判为真凝聚，否则为假凝聚。5.4检査结果，见表8。由表8可见本品0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml管，在37。C保温4h，均未出现溶血和凝聚反应，第7管(阳性对照管)在15分钟内即可出现溶血现象。表8溶血性试验结果1234567供试品(ml)0.10.20.30.40.5生理盐水(ml)2.42.32.22.12.02.5蒸馏水2%细胞悬液(ml)2.52.52.52.52.52.52.515分钟+30分钟45分钟+1小时结果+2小时结果+3小时结果4小时结果--一一一—+注结果中"+"表示溶血；表示不溶血5.5结论处方工艺l、处方工艺6、实施例2、实施例3样品均无溶血及凝聚作用，符合静脉注射用安全性检査的要求。186、血管刺激试验6.1试验目的观察家兔静脉推注本品后对血管所产生的刺激反应情况，以确保临床用药安全。.6.2实验材料(1)动物家兔12只，雌雄兼用，2.8-3.0kg。(2)试验药物处方工艺1、处方工艺6、实施例2、实施例3样品。临用前加5%葡萄糖注射液稀释为2mg/ml作为供试品溶液。6.3试验方法分别取健康家兔3只，于一侧耳缘静脉以无菌操作缓慢推注供试品lml/Kg，另一侧推注等体积0.9%氯化钠注射液，5分钟注射完。每次注射于同一注射部位，连续给药7天(7次)。于第7次给药后24h，先用肉眼观察注射部位的血管及周围组织的变化，然后用2%普鲁卡因注射液2ml局部麻醉后，离注射部位lcm处剪下兔耳(含血管)约34cm，放入10%甲醛溶液中固定，送病理切片检査。6.4试验结果.家兔耳缘静脉推注供试品lml/Kg，给药7次，外观检查注射局部未见异常，组织学检査均未见有内皮损伤和组织变性。6.5结论2mg/ml静脉多次推注本品对家兔血管无明显刺激反应，表明本品血管刺激试验符合规定。7、过敏试验7.1试验目的考察本品全身给药后对动物引起的过敏反应。7.2实验材料(1)实验动物豚鼠，雌雄兼用，体重250350g。(2)试验药物处方工艺1、处方工艺6、实施例2、实施例3样品。临用前加5%葡萄糖注射液稀释为2mg/ml作为供试品溶液。7.3实验方法与结果取健康无伤豚鼠60只，随机分为5组，每组12只。按无菌操作，药物组隔日每只分别腹腔注射样品溶液0.5ml，共3次，阳性组同法注射5X马血清0.5ml/只，每组均取3只，于首次注射后的第14天，分别由静脉注射本品或5%马血清lml/只进行攻击；分别另取3只于首次注射后的第21闩同法进行攻击。观察注射15分钟内动物有无喂音、竖毛、呼吸困难、痉挛、干呕或咳嗽3声、休克甚至死亡等过敏症状。结果见表9。表9过敏试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>可见所有药物组于第一次注射后的14日与21日攻击，均无明显反应。未发生咳嗽、竖毛、呼吸困难、抽搐、虚脱等过敏反应症状。阳性组给予5%马血清攻击后6只动物全部死亡，阳性率100%。7.4结论本发明的复方甘草酸苷类注射剂，致敏攻击后，阳性率为0，表明该药过敏试验符合规定。实施例2处方甘草酸单铵盐S(以甘草酸苷计)400g，盐酸半胱氨酸200g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠160g，右旋糖酐40430g，氯化钠75g。'制法称取右旋糖酐40加入1015倍的注射用水，加热搅拌使溶解；加入0.2o/。(m/v)的药用炭，搅拌2030分钟，脱炭，得右旋糖酐40溶液，取配制量20%~50%的注射用水与右旋糖酐40溶液，加入配液罐(桶)中搅拌均匀；将甘氨酸加入配液罐(桶)，搅拌溶解；将无水亚硫酸钠、氯化钠用适量注射用水溶解，加入配液罐(桶)中，搅拌；将甘草酸单铵盐S加入配液罐(桶)中，搅拌至溶解；将处方量的盐酸半胱氨酸用适量注射用水(40'C50°C)溶解，边搅拌边加入配液罐(桶)中，搅拌；药液温度控制在45'C以下。用10%NaOH溶液调节药液pH值至5.57.5范围内，加入0.P/。(m/v)针用活性炭，搅拌2030分钟，过滤除炭，并用适量水冲洗，加入注射用水至定容体积(25000mL)，搅拌10分钟以上，半成品送检(控制pH在5.57.5值之间，甘草酸单铵盐、盐酸半胱氨酸、甘氨酸应为标示量的90.0%~110.0°/。)，药液进行除菌过滤，滤器孔径不大于0.22Pm，将药液传至灌装间，按2.5mL/支分装入洗瓶传来的西林瓶中、半压塞，入箱。预冻制品温度降至-4(TC以下，保持25小时。升华冷凝器降温到-45'C以下，开始抽真空，设定板温-2510'C，升华开始，当制品冰层完全消失，冷凝器温度明显降低,制品温度与板温接近时，提高板层温度，产品进入二次干燥；二次干燥制品温度达到3545°C,保持13小时。用冻干机板层将丁基胶塞压入瓶中，冻干机泄压后，药品出箱。轧盖，灯检，包装，即得。实施例3处方甘草酸单铵S400g，盐酸半胱氨酸300g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠240g，右旋糖酐40430g，氯化钠75g。制法同实施例2同法制备。实施例4处方甘草酸单铵盐S(以甘草酸苷计)400g，盐酸半胱氨酸200g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠160g，右旋糖酐40300g，依地酸钠钙40g。制法除处方中不含氯化钠及将依地酸钠钙和无水亚硫酸钠一起溶解外，.其他同实施例2制备。实施例5处方同实施例l中处方工艺l。'制法取50~60%左右的注射用水(70~80°C)，置浓配罐(桶)中，加入除盐酸半胱氨酸外所有物料，搅拌使溶解；取盐酸半胱氨酸，用适量注射用水(5(TC以下)溶解，搅拌加入浓配罐(桶)中，药液温度控制在55。C以下，用10。/。氢氧化钠溶液调节pH值至5.57.5，加入0.3c/。(m/v)的针用活性炭，搅拌2030分钟，过滤除炭，并用适量注射用水冲洗，除菌过滤(滤器孔径不大于0.22&0，加入注射用水至定容体积(25000mL)，搅拌10分钟以上，半成品送检，将药液传至灌装间，按2.5mL/支分装入洗瓶传来的西林瓶中、半压塞，入箱。预冻制品温度降至-40'C以下，保持25小时。升华冷凝器降温到-45'C以下，开始抽真空，设定板温-2510'C，升华开始，当制品冰层完全消失，冷凝器温度明显降低，制品温度与板温接近时，提高板层温度，产品进入二次干燥；二次干燥制品温度达到3545'C，保持13小时。用冻干机板层将丁基胶塞压入瓶中，冻干机泄压后，药品出箱。轧盖，灯检，包装，即得。'实施例6处方同实施例1中处方工艺6。制法同实施例5同法制备。实施例7处方同实施例2。制法同实施例5同法制备。实施例8处方同实施例3。制法同实施例5同法制备。实施例9处方同实施例4。'制法同实施例5同法制备。实施例10处方甘草酸单铵盐S(以甘草酸苷计)400g，盐酸半胱氨酸200g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠160g，右旋糖酐40450g，甘露醇60g，依地酸钠钙40g。制法除处方中不含氯化钠及将依地酸钠钙和无水亚硫酸钠、甘露醇和右旋糖酐40—起溶解外，其他同实施例2制备。或同实施例5同法制备。实施例11处方同实施例1中处方工艺6。制法在入冷冻干燥箱以前，工艺过程全程充氮。取所有物料，加入50~60%左右的注射用水(50~60°C)，置配液罐(桶)中，搅拌使溶解，用10n/。氢氧化钠溶液调节pH值至5.57.5，加入0.3。/。(m/v)的针用活性炭，搅拌20-30分钟，过滤除炭，并用适量注射用水冲洗，除菌过滤(滤器孔径不大于0.22iim)，加入注射用水至定容体积(25000mL)，搅拌10分钟以上，半成品送检，将药液传至灌装间，按2.5mL/支分装入洗瓶传来的西林瓶中、半压塞，入箱。预冻制品温度降至-4(TC以下，保持2-5小时。升华冷凝器降温到-45'C以下，开始抽專空，设定板温-25l(TC，升华开始，当制品冰层完全消失，冷凝器温度明显降低,制品温度与板温接近时，提高板层温度，产品进入二次干燥；二次干燥制品温度达到3545t:，保持13小时。用冻干机板层将丁基胶塞压入瓶中，冻干机泄压后，药品出箱。轧盖，灯检，包装，即得。实施例12处方甘草酸单铵盐S(以甘草酸苷计)400g，盐酸半胱氨酸200g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠160g，右旋糖酐20700g。制法除将右旋糖酑40换成右旋糖酐20外，其他同实施例1中处方工艺1同法制备。实施例13处方甘草酸单铵S400g，盐酸半胱氨酸300g，甘氨酸4000g,无水亚硫酸钠240g，右旋糖酐70250g。制法除将右旋糖酐40换成右旋糖酐70外，其他同实施例1中处方工艺1同法制备。实施例14处方甘草酸单铵S400g，盐酸半胱氨酸300g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠400g(或另加依地酸钠钙50g)，右旋糖酐40400g。制法取经精致无菌的上述物料，混合，按无菌生产工艺分装于10000支西林瓶中，充氮气，压塞，轧盖，灯检，包装，即得。实施例15处方甘草酸单铵盐S(以甘草酸苷计)400g，盐酸半胱氨酸200g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠160g，右旋糖酐40400g，乳糖100g。除将乳糖与右旋糖酐40—起溶解外，其他同实施例1中处方工艺1同法制备。或同实施例17方法制备。实施例16'处方甘草酸单铵S400g，盐酸半胱氨酸300g，甘氨酸4000g，无水亚硫酸钠240g，右旋糖酐40500g,葡萄糖50g。除将葡萄糖与右旋糖酐40—起溶解外，其他同实施例1中处方工艺1同法制备。或同实施例17方法制备。实施例17处方同实施例l处方工艺l制法取除盐酸半胱氨酸外所有物料，置配液罐(桶)中，加入适量注射用水，加热搅拌使溶解；取盐酸半胱氨酸，用适量注射用水溶解，搅拌加入配液罐(桶)中，用10%氢氧化钠溶液调节pH值至5.57.5，加入0.050.3%(m/v)的针用活性炭，搅拌2030分钟，过滤除炭，并用适量注射用水冲洗，除菌过滤(滤器孔径不大于0.22um)，加入注射用水至全量，搅拌10分钟以上，半成品送检，将药液传至灌装间，按灌装装量分装入经洗瓶灭菌的西林瓶中、半压塞，入箱。预冻制品温度降至-40'C以下，保持25小时。升华冷凝器降温到-45'C以下，开始抽真空，设定板温-2510。C,升华开始，当制品冰层完全消失,冷凝器温度明显降低，制品温度与板温接近时，提高板层温度，产品进入二次干燥；二次干燥制品温度达到3545'C，保持13小时，压塞，出箱，轧盖，包装，即得。实施例18处方同实施例l处方工艺l。制法除配液总体积为2000ml夕卜，其他同实施例1处方工艺1同法制备。或同实施例17方法制备。实施例19处方同实施例1处方工艺6制法除配液总体积为3000ml外，其他同实施例1处方工艺6同法制备。或同实施例17方法制备。权利要求1、一种复方甘草酸苷类粉针注射剂，为由处方中含有的作为活性成分的甘草酸苷(或甘草酸单铵盐)、甘氨酸、盐酸半胱氨酸和医学上可接受的载体制成的冻干粉针注射剂、无菌分装粉针剂，其特征在于其医学上可接受的载体含右旋糖酐。按制成1000支制剂产品计，其处方活性成分组成重量比例为甘草酸苷(甘草酸单铵盐折算成甘草酸苷计)9～200g盐酸半胱氨酸5～135g甘氨酸100～2000g2、根据权利要求1所述的复方甘草酸苷类冻千粉针注射剂，其特征在于其医学上可接受的载体右旋糖酐含量为0.16%(g/ml)。3、根据权利要求1所述的复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂，其特征在于其医学上可接受的载体右旋糖酐为右旋糖酐40。4、根据权利要求3所述的复方甘草酸苷类冻千粉针注射剂，其特征在于其医学上可接受的载体右旋糖酐40含量为14%(g/ml)。5、根据权利要求1所述的复方甘草酸苷类冻千粉针注射剂，其特征在于其处方中含抗氧剂，抗氧剂可以为无水亚硫酸钠。6、根据权利要求1所述的复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂，其特征在于其处方中可含金属络合剂，金属络合剂可以为依地酸钠钙。7、根据权利要求1所述的复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂，其特征在于其处方中含pH调节剂，pH调节剂可以为氢氧化钠。8、根据权利要求1所述的复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂，其特征在于其处方活性成分组成重量比例为-甘草酸苷(甘草酸单铵盐折算成甘草酸苷计)40mg盐酸半胱氨酸20mg甘氨酸0.4g9、根据权利要求1所述的复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂，其特征在于其处方活性成分组成重量比例为-甘草酸单铵S40mg盐酸半胱氨酸30mg'甘氨酸0.4g10、根据权利要求1所述的复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂的制备方法，其特征在于取右旋糖酐(必要时和其他支持剂，如乳糖等)加入适量注射用水，加热搅拌使溶解；加入0.10.3%(m/v)的药用活性炭，搅拌2030分钟，脱炭，得溶液，取适量注射用水与上述溶液，加入配液罐(桶)中搅拌均匀；将甘氨酸加入配液罐(桶)，搅拌溶解；将抗氧剂、金属络合剂等用适量注射用水溶解，加入配液罐(桶)中，搅拌；将甘草酸单铵盐加入配液罐(桶)中，搅拌至溶解；将盐酸半胱氨酸用适量注射用水溶解，边搅拌边加入配液罐(桶)中，搅拌；用10。/。氢氧化钠溶液调节药液pH值至5.57.5范围内。加入0.050.3%%(m/v)针用活性炭，搅拌2030分钟，过滤除炭，并用适量水冲洗。加入注射用水至全量，搅拌IO分钟以上，半成品送检，除菌过滤，滤器孔径不大于0.22um。将药液按灌装装量分装入经洗瓶灭菌的西林瓶中、半压胶塞(经清洗灭菌)，冻干，制品温度降至-4(TC以下，保持25小时，冷凝器降温到-45'C以下，开始抽真空，设定板温-2510'C，升华开始，当制品冰层完全消失，冷凝器温度明显降低，制品温度与板温接近时，提高板层温度，产品进入二次干燥；制品温度达到3545'C，保持13小时，压塞，出箱，轧盖，包装，即得。11、根据权利要求1所述的复方甘草酸苷类冻干粉针注射剂的制备方法，其特征在于取l^盐酸半胱氨酸外所有物料，置配液罐(桶)中，加入适量注射用水，加热搅拌使溶解；取盐酸半胱氨酸，用适量注射用水溶解，搅拌加入配液罐(桶)中，用10%氢氧化钠溶液调节pH值至5.57.5，加入0.050.3%(m/v)的针用活性炭，搅拌2030分钟，过滤除炭，并用适量注射用水冲洗，除菌过滤(滤器孔径不大于0.22um)，加入注射用水至全量，搅拌IO分钟以上，半成品送检，将药液传至灌装间，按灌装装量分装入经洗瓶灭菌的西林瓶中、半压塞，入箱。预冻诺U品温度降至-40'C以下，保持25小时。升华冷凝器降温到-45。C以下，开始抽真空，设定板温-2510'C，升华开始，当制品冰层完全消失，冷凝器温度明显降低,制品温度与板温接近时,提高板层温度，产品进入二次干燥；二次干燥制n^温度达到3545'C，保持13小时，压塞，出箱，轧盖，包装，即得。全文摘要本发明涉及一种复方甘草酸苷类粉针注射剂及其制备方法，尤其涉及注射用复方甘草酸苷和注射用复方甘草酸单铵S粉针注射剂及其制备方法，特征在于处方中含有作为活性成分的甘草酸苷(或甘草酸单铵盐)、甘氨酸、盐酸半胱氨酸和医学上可接受的载体组成的粉针注射剂及其制备方法，其中医学上可接受的载体含右旋糖酐，本发明的复方甘草酸苷类粉针注射剂可常温保存，显著提高了药品的稳定性，更好保证了药物安全有效性，并有效降低了诸如药品生产贮存、运输过程中的仓贮运输成本。文档编号A61K31/704GK101317852SQ20081011571公开日2008年12月10日申请日期2008年6月27日优先权日2008年6月27日发明者烽刘,岳元婷,勇张,军胡申请人:北京京卫信康医药科技发展有限公司