专利名称：：白药子提取物在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种白药子提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。技术背景肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，是我国位居第二的癌症"杀手"，常见于中年男性。因其恶性度高、病情进展快，病人早期一般没有什么不适，但一旦出现症状就诊，就已经属于中晚期。故肝癌的治疗难度大，一般患者发病后生存时间仅为6个月，人称"癌中之王"。根据调査结果表明，目前男性前三位的新发癌症分别是肺癌、结肠癌和鼻咽癌，女性则是乳癌、结肠癌及肺癌，充分说明了肺癌和结肠癌在新发癌症群中的危害性。从植物中寻找高效低毒的抗癌药物，成为国内外抗癌药物研究的重点。有效的抗癌化合物和中草药有效部位的抗癌复方制剂都具有重要的临床价值。白药子是金线吊乌龟的块根。金线吊乌龟(5Ye/力ay^'ac印/sr朋z^aHayata)为防己科植物(植物名实图考)，又称金线吊蛤蟆(浙江)、独脚乌柏(广东)、铁秤砣(江西)、白药(江西和广西)。分布地区西北至陕西汉中地区，东至浙江、江苏和台湾，西南至四川东部和东南部、贵州东部和南部，南至广西和广东。《中药鉴别手册》记载清热解毒，止痛。治急性肝炎，恶性疟疾，急性阑尾炎，急性菌痢，毒蛇咬伤，急性胃肠炎，腹痛及其它炎症。白药子在制备抗肿瘤药物中的应用未见有报道。
发明内容本发明的目的是提供白药子提取物的一种新用途。本发明所提供的白药子提取物的用途是白药子提取物在制备抗肿瘤药物中的应用；所述白药子提取物按照如下方法制备是用水和/或有机溶剂作为提取剂，从白药子中提取得到白药子提取物。其中，所述有机溶剂具体可为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。所述提取剂具体可为体积百分含量为95%的乙醇水溶液。所述提取可为回流提取。所述提取的温度可为60-100°C。所述提取中，至少提取一次，每次提取的时间为l-4小时。所述肿瘤可为肝癌、结肠癌或肺癌。根据如上方法所制备的预防和/或治疗肿瘤药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。如上制备的预防和/或治疗肿瘤药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。上述预防和/或治疗肿瘤药物的用量一般为200-800mg白药子提取物/kg体重/天，疗程为10至15天。本发明的制备白药子提取物的方法简单、成本低廉。实验证明，本发明的白药子提取物能够有效的抑制人肿瘤细胞的生长，如人肝癌、结肠癌或肺癌细胞。因此本发明所提供的白药子提取物对制备抗肿瘤药物，尤其是抗肝癌、肺癌、结肠癌药物具有重要的意义。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。实施例l、白药子提取物的制备取白药子(北京同仁堂股份有限公司)200g，将其以1:3(白药子95%乙醇)的重量份数比与95%乙醇(乙醇水=95:5，体积比)混合，在6(TC条件下回流提取3h，抽滤，收集第一次回流提取液l和滤渣l;将得到的所有滤渣1与95%乙醇混合，95%乙醇的量与第一次相同，在6(TC条件下回流提取3h，收集第二次回流提取液2和滤渣2，并将提取液2与提取液1合并；将得到的所有滤渣2与95%乙醇混合，95%乙醇的量与第一次相同，6(TC回流提取3h，抽滤，收集第三次回流提取液3;将提取液l、提取液2和提取液3合并，将所得的提取液进行真空减压浓縮、真空干燥(去除乙醇和水)至恒重，得到1.3g白药子提取物。实施例2、白药子提取物在抑制肿瘤细胞生长中的应用将对数生长的肿瘤细胞(人肝癌细胞H印G-2、人肝癌细胞BEL-7402、人结肠癌细胞HCT-8、人肺癌细胞A-549)用0.25%的胰蛋白酶消化，然后用含10%(体积百分含量)胎牛血清的DMEM完全培养基悬浮细胞，制成细胞悬液，并分别将各肿瘤细胞稀释至1.0X105个/mL，再将其接种至96孔培养板中，每孔200uL，各肿瘤细胞分别接种3个孔，于37"C，5n/。C02的培养箱内培养24h;然后倾去各孔培养液。将实施例1制得的白药子提取物溶解于DMSO中，然后用DMEM完全培养基进行稀释，得到白药子提取物溶液，使白药子提取物的终浓度为50ug/mL，使DMSO的浓度为10%(体积百分含量)。同时设实验组、对照组和空白组进行实验实验组将白药子提取物溶液依次分别加入上述肿瘤细胞H印G-2、BEL-7402、HCT-8、A-549的培养孔内，各自接种3个孔，每孔加入200ul;对照组向上述各肿瘤细胞的培养孔内加入含10。/。(体积百分含量)面S0的DMEM完全培养基，各自接种3个孔，每孔加入200ul;空白组向不含肿瘤细胞的空培养孔内加入含1(FQ(体积百分含量)DMS0的200ul的DMEM完全培养基；将以上各组的培养板同时置于37t:、5%C02的培养箱内培养2天。2天后向每孔加入20ul新鲜配制的5mg/ml四甲基偶氮唑盐(MTT)溶液，并在37。C、5%C02的条件下继续培养4h;小心弃上清，每孔加入200uLDMSO，室温放置15-20min，每5min振荡一次；在酶标仪上测定各孔在波长490nm处的光密度值(OD值)，按公式计算肿瘤细胞生长抑制率。抑制率(％)=1-(OD-OD空白)/(OD对照-OD空白)X100%。实验设三次重复，结果取平均数。白药子提取物对人不同肿瘤细胞H印G-2、BEL-7402、HCT-8、A-549的抑制作用的结果如表1所示。表l、白药子提取物对人不同肿瘤细胞的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>白药子提取物的对多种肿瘤细胞的抑制作用实验结果表明(表l)，白药子提取物在浓度为50ug/mL时对人肝癌细胞H印G-2抑制活性较低，对肝癌细胞BEL-7402有较好的抑制活性，对结肠癌细胞HCT-8抑制活性最高，对肺癌细胞A-549也有一定程度的抑制作用。这一结果表明，白药子提取物对肝癌、结肠癌、肺癌肿瘤细胞存在不同程度的抑制作用，最高可达50%以上。因此，白药子提取物可以用于制备抗肝癌、结肠癌、肺癌的药物。权利要求1、白药子提取物在制备抗肿瘤药物中的应用；所述白药子提取物按照如下方法制备是用水和/或有机溶剂作为提取剂，从白药子中提取得到白药子提取物。2、根据权利要求l所述的应用，其特征在于所述有机溶剂为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。3、根据权利要求l所述的应用，其特征在于所述提取剂为体积百分含量为95%的乙醇水溶液。4、根据权利要求l-3中任一所述的应用，其特征在于所述提取为回流提取。5、根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述提取的温度为60-10(TC。6、根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于所述提取中，至少提取一次，每次提取的时间为l-4小时。7、根据权利要求1至6中任一所述的应用，其特征在于所述肿瘤为肝癌、结肠癌或肺癌。8、一种白药子提取物，所述白药子提取物是以体积百分含量为95°/。的乙醇水溶液作为提取剂，从白药子中提取得到的。9、根据权利要求8所述的白药子提取物，其特征在于所述提取为回流提取;所述提取的温度为60-100°C。10、根据权利要求9所述的白药子提取物，其特征在于所述提取中，至少提取一次，每次提取的时间为l-4小时。全文摘要本发明公开了白药子提取物的新用途。该新用途是白药子提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。所述提取物是按照如下方法制备的是用水和/或有机溶剂作为提取剂，从白药子的中提取得到白药子提取物。本发明所提供的白药子提取物对制备抗肿瘤药物，尤其是抗肝癌、肺癌、结肠癌药物具有重要的意义。文档编号A61P35/00GK101306083SQ20081011566公开日2008年11月19日申请日期2008年6月26日优先权日2008年6月26日发明者岩刘,向俊锋,唐亚林,玮戴,莉谭申请人:中国科学院化学研究所