专利名称：棉花有丝分裂s期激酶蛋白相关基因skp1及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于分子生物学领域，涉及棉花细胞S期(DNA合成期)激酶蛋白相关基因 SKPl及其应用。
背景技术：
SCF复合体的名称最初源于发现的三个组成部分SKPl (DNA合成期激酶相关蛋白)、Culin/CDC53(细胞周期蛋白依赖性激酶)和F_box(F盒子)。在生物体内，选择性降解蛋白是一种重要的功能调节机制。而真核生物中，泛素/26S蛋白酶体是目前了解比较多的一种降解途径，而SCF复合体又是降解途径中泛素连接酶E3的组成成分。因此SCF复合体在泛素/26S蛋白酶体降解途径中起着比较重要的作用。SKPl，即 S 期激酶相关蛋白 1 (S-PHASE KINASE-ASSOCIATED PR0TEIN1, SKP1)，是真核生物中普遍存在的一类蛋白，是泛素连接酶SCF复合体的核心单位。SKPl参与SCF复合体的形成，还参与生物发育过程的多个代谢途径，调控着包括植物减数分裂过程及生长素、 赤霉素、茉莉酸、乙烯和脱落酸等激素代谢过程。拟南芥中对此基因的研究表明，SKPl基因功能的缺失，会出现雄性不育突变体。目前，国内外棉花中对此基因的研究尚未有报道。因此，棉花中对此基因功能的研究，为进一步创造雄性不育突变体奠定了基础。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供棉花有丝分裂S期激酶蛋白相关基因SKP1。为研究SKPl在棉花中的生物学效应奠定了基础。本发明还要解决的技术问题，是提供上述基因SKPl的应用。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下一种棉花有丝分裂S期激酶蛋白相关基因SKP1，该基因来源于陆地棉(Gossypium hirsutum L.)，具有如SEQ ID NO. 4所示的cDNA序列和如SEQ ID NO. 6所示的DNA序列。编码上述棉花有丝分裂S期激酶蛋白相关基因SKPl的氨基酸序列如SED ID NO. 5 所示。该蛋白是小分子量蛋白，其主要的生物学功能在于参与SCF((联会复合体))复合体的形成，是SCF复合体的核心亚单位，从而调控生物体内泛素介导的蛋白质降解，并参与多方面的生物发育过程。上述基因SKPl的超表达载体，为含有所述基因SKPl的植物表达载体PBI121。所述基因SKPl在棉花雄性不育系的不育株雄蕊中表达量高于其他组织中的应用。所述基因SKPl及所述基因SKPl的超表达载体在抑制烟草种子萌发、抑制烟草主根生长以及提高烟草激素含量中的应用。有益效果本发明用RACE方法克隆到了棉花S期激酶蛋白1相关基因SKP1，提供了一种棉花S期激酶蛋白1基因序列及其编码蛋白质序列和应用。①该基因表达量在棉花雄性不育系中抗A的不育株雄蕊高于可育株雄蕊，且同一植株雄蕊表达量高于雌蕊，说明此基因很有可能与棉花的雄性不育有关。②在雄蕊、胚根、幼根、幼茎等分化能力比较强的组织中表达量比较高，说明该基因与植株的生长发育可能有一定的关系。本发明构建了 35S =SKPl重组表达载体，通过农杆菌介导的遗传转化方式转化烟草验证功能。为研究SKPl在棉花中的生物学效应奠定了基础。通过转基因烟草Tl代分析， 在整个萌发过程中，SKPl的过量表达延缓了种子的萌发，降低了萌发率。在萌发50小时后转基因株系中某种激素或者化学物质出现了量的变化。转基因株系主根长度都短于野生型 CK, SKPl基因超表达影响了烟草的根系生长发育过程。超表达SKPl还影响了植株体内各种激素含量的变化。
图1棉花RNA的提取。图2SKP1中间片段PCR，M :Marker2000,1为目的片段。图 33，-RACE 片段 PCR，M :Marker2000。图 45，RACE 片段 PCR，M :Marker2000。图 5cDNA 全长 PCR，M :Marker2000, 2 为目的片段。图6基因组全长PCR，M :Marker2000,1为目的片段。图7植物超表达载体的阳性克隆。图8重组表达载体PCR检测。图9重组表达载体酶切鉴定，1号泳道已经酶切开，2号泳道为对照。图10转基因烟草Tl代抗性筛选，已经转入的植株可以健康生长。图11转基因烟草Tl代PCR检测，1-7是转基因植株，Marker2000, CK未转基因植株。图12SKP1在雄性不育系中的时空表达。图13转基因植株Tl代种子萌发统计。图14转基因植株主根短于非转基因植株。图15转基因植株Tl代主根长度的测量。图16a转基因植株Tl代激素ABA含量的测定。图16b转基因植株Tl代激素IAA含量的测定。图16c转基因植株Tl代激素GA含量的测定。图16d转基因植株Tl代激素观含量的测定。
具体实施例方式根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。实施例1 陆地棉(Gossypium hirsutum L.)棉花DNA和RNA的提取。棉花DNA的提取参照FANG等人的DNA提取方法[FANG G, Hammar S, Grumet R. Aquickand inexpensive method for removing polysaccharides from plant genomic DNA[J], Biotechniques, 1992，13 :52-56.]；棉花RNA的提取参照蒋建雄和张天真改进的CTAB法提取总RNA[蒋建雄，张天真·利用CTAB/酸酚法提取棉花组织总RNA[J].棉花学报，2003，15 (3) :166-167]。实施例2 :cDNA的制备。参照The first-strand cDNA Synthesis Kit 试剂盒说明书(TaKaRa，Japan)。实施例3 :RT-PCR中间片段的获得。(1)根据拟南芥SKPl基因的保守区设计简并引物(预计350bp左右大小)。前引物:5-GA(T/C) GG (C/T) GA (G/A) (A/G/T) (A/T/C) (A/G/T/C) TT (C/T) GAGGT-3 ；后引物5-ATCTC(T/C) TC (A/G/C/T) GG (A/T/G) GT (T/C) TT (C/G/T) CC-3。(2)25ul 反应体系为前引物 Iul，后引物 Iul，d NTP (2. 5mM) 2ul，10X 缓冲液!3ul， MgCl22ul，模板 lul，ddH20 14. 8ul，Taq 酶 0. 2ul(3) RT-PCR反应程序(图 2) :94°C，3m ；94°C，30s ；51 °C，45s ；72°C，70s，；35 个循环； 72°C, IOmin0(4)送上海生工测序，测序结果如SED ID N0. 1。(5)测序结果在NCBI上比对，与蓖麻、烟草、杨树、拟南芥等多个物种的SKPl基因同源性很高。实施例4 :3，RACE (3，片段的获得)。(1)引物3， CDS(12uM) :5' -AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC(T)30V N-3‘；(N = A, C, G, or T ;V = A, G, or C)；NUP :NUP(10 μ Μ)) 5' -AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3‘；3' GSP 5' -GGGACGCTGACTTTGTCAAGGTCG-3‘；3' NGSP 5' -ATTCTGGCAGCGAACTATTTGAACATC-3‘；10X UPM (通用引物混合物)；0. 4μΜ 长引物5 ‘ -CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3‘；2μΜ短引物5 ‘ -CTAATACGACTCACTATAGGGC-3‘；(2)3，-RACE-Ready cDNA 的制备参照TaKaRa公司的SMARTTM RACE cDNA扩增试剂盒操作说明(TaKaRa，Japan)。(3) 3，-RACE (快速扩增 3，末端 cDNA 片段)①混合物1的制备水34. 5ul，缓冲液5ul，dNTP (IOmM) Iul，聚合酶lul。②混勻简短离心。③分别加入3，cDNA2. 5ul，UPM5ul，3，GSP (10 μ Μ) Iul 和上述混合物 41. 5ul。④混勻简短离心。⑤25 个循环94°C，30sec(秒)；68°C，30sec ；72°C，3min。PCR产物作为下一反应的模板。⑥巢式PCR 引物为NUP和3NGSP，模板为上述⑤PCR产物。
程序:94°C,3min；94°C，30s ；58°C,45s ；72°C，70s，35 个循环；72°C IOmin ；结果见图3。⑦送上海生工测序，测序结果如SED ID NO. 2。⑧测序结果出现了连续的A，即mRNA的poly㈧尾巴，说明已经获得该基因的3’ 端全长。实施例5 :5，RACE (5，片段的获得)。(1)引物5，CDS(12u M) :5'-⑴ 25VN-3' (N = A，C，G，或 T ;V = A，G，或 C)SMART(12 μ M) 5' -AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG-3‘5GSP 5' -CGAATGCCCACTGGTTCTCCCGACG-3‘5NGSP 5' GAAAGTCTTCCTGATCTCTTCTGGGG3‘(2)5，-RACE-Ready cDNA 的制备参照TaKaRa公司的SMARTTM RACE cDNA扩增试剂盒操作说明(TaKaRa，Japan)。(3)5，-RACE:①混合物1的制备水34. 5ul，缓冲液5ul，dNTP (IOmM) Iul，聚合酶Iul。②混勻简短离心。③分别加入5，cDNA2. 5ul，UPM5ul，5，GSP (10 μ Μ) Iul 和①的混合物 41. 5ul。④简短离心收集液体。⑤25 个循环-MV，30s ；68°C，30s ；72°C，3min。⑥巢式PCR 引物NUP、5NGSP ；模板为⑤的PCR产物。程序-MV，3min；94°C，30s ；60°C，45s ；72°C，50s ；32 个循环，72°C，5min。结果如图4。⑦送上海生工测序，测序结果如SED ID NO. 3。⑧本测序结果与实施例3(5)的中间片段和实施例4(3)的3’片段拼接后BLAST 比对，含有完整的编码框，可知已经获得本基因的全长序列。实施例6 =SKPl基因全长的PCR扩增。设计特异性引物分别以陆地棉(Gossypium hirsutum L.)基因组DNA(由实施例 1获得)和cDNA(由实施例2获得)为模板，扩增SKPl基因的DNA序列和cDNA序列。(1)引物设计SKPl-Fl 5- |ATC^ TCGTCGTCGGGGAG-3，17 TM :56. 3 位置73SKP1-R2 5-CACTCGAAATTGACCCT |TCAj· -3，20TM :55. 8 位置560PCR 程序:94°C,3m ；94°C，30s ；61 °C，45s ；72°C，70s，32 个循环；72°C，5mim。(2) ORF(开放阅读框)的获得PCR结果如图5。测序结果如SED ID NO. 4。(3)基因组全长的获得PCR结果如图6。测序结果如SED ID N0. 6。(4)结果分析
扩增出的cDNA(SED ID NO. 4)与实施例5(3)⑧拼接的SKPl的ORF序列一致，且SKPl只有一个内含子(SED ID NO. 5)，大小为1395bp。实施例7 荧光定量 PCR技术检测SKPl在棉花中的表达模式分析。(1)反应体系25 μ 1 反应体系中加入 ddH20 14. 75 μ 1，IOx buffer 2. 5 μ L，上下游引物各 1 μ 1， dNTPl μ 1，TaqE 1 μ 1，SYBR Green I 染料 2. 5 μ 1，模板 DNAl μ 1，氯化镁 0. 25 μ 1，所有样品均在冰上加入，其中TaqE最后加以保持酶的活性。(2)反应条件94°C，5min ；94°C，30s ；64°C，30s ；72°C, Imin ；40 个循环，最后一个循环 72°C延伸 lOmin，4°C保存，并对反应产物电泳分析，确定其是否与扩增曲线结果吻合。(3)引物序列P rimerl :5，-ACGGGATACCGTTGCCTAATG-3，；ρ rimer2 :5， -GCGGATCGATCGTCTGTCTT-3，。(4)制定标准曲线根据不同浓度的质粒标准品的扩增曲线，在SDS软件下系统自动生成标准曲线， 通过标准曲线方程，可计算待测样品的基因相对含量。(5)结果分析(图12)①该基因表达量在棉花核雄性不育系中抗A的不育株雄蕊高于可育株雄蕊，且同一植株雄蕊表达量高于雌蕊，说明此基因可能与棉花的育性有关。②在雄蕊、胚根、幼根、幼茎等分化能力比较强的组织中相对表达量比较高(荧光定量PCR)，说明该基因与植株的生长发育可能有一定的关系。实施例8 :35S =SKPl双元表达载体的构建及鉴定。(1)35S :SKP1双元表达载体的构建①引物SKP1-Xbal5-CGC TCTAG AATGTCGTCGTCGGGGAG-3 ；SKP I-BamHl 5-CGC GGATCCCTCGAAATTGACCCTACA-3。PCR 程序:94°C,3min ；94°C，30s ；61 °C，45s ；72°C，70s，32 个循环；72°C，5min。②经上海生工测序，本载体已经成功引入Xbal和BamHl两个酶切位点，且顺序正确(SED ID NO. 7)。③酶切回收目的片段分别用)(bal和BamHl双酶切含有SKPl的克隆载体和植物表达载体PBI121，分别回收含有SKPl的目的片段以及PBI121大片段。④连接用T4连接酶将上述③两个回收的片段连接并转化大肠杆菌DH5 α获得阳性克隆 (图 7)。(2)35S =SKPl双元表达载体的PCR鉴定①引物SKPl-Xbal 5-CGC TCTAGA ATGTCGTCGTCGGGGAG-3SKPl-BamHl 5-CGC GGATCC CTCGAAATTGACCCTACA-3PCR 程序
94°C，3min ；94°C，30s ；61 °C，45s ；72°C，70s，32 个循环；72°C，5min。②提取上述阳性克隆的质粒做模板，用来PCR检测，结果如图8。③预计片段的大小为500bp左右，结果在图8中出现了预计500bp左右的条带。(3)重组表达载体PBI121-35S-SKP1的双酶切鉴定①酶切体系X-bal Iul, BamH I lul，缓冲液 lul，17ul 质粒总体系为20ul，37°C，3h。②结果如图9。③结果分析1号为X-bal和BamH I双酶切质粒结果，2号为未酶切的质粒，说明质粒已经切开， 初步说明成功引入了酶切位点。(4)重组表达载体PBI121-35S-SKP1测序鉴定结果如SED ID NO. 7，测序后酶切位点、保护碱基、基因内部的序列都没有发生突变；可进行转基因实验。实施例9 转基因烟草的获得。农杆菌(Agrobacterium tumefacjens)介导的烟草遗传转化法[Horsch RB, Fry JE, Hoffman NL, et al. A simple and general method for transferring gene into plants. Science，1985，227 (4691) :1229-1231]是目前研究最多、理论机理最清楚、技术方法最熟练的基因转化途径。迄今，近200种转基因植物中80%以上是利用该系统产生。根据农杆菌侵染植物细胞的化学机理侵染开始于受伤的植物细胞分泌一些酚类和糖类化学物质，农杆菌被这些化学信号所吸引(Ti质粒中VirA和VirG基因介导的趋化性)，这些化学物质进入农杆菌并诱导Ti质粒的基因表达，从而起到活化作用。(1)烟草转基因的准备工作①无菌苗的培养取本塞母氏烟草(由南京晓庄学院张边江赠与)种子，用30%的乙醇浸泡30s，然后无菌水清洗3次，再转至0. 1 %的升汞里面脱菌7min，最后用无菌水清洗5次，平铺于MS 固体培养基中，待烟草苗长至6片真叶即可用于侵染。 ②农杆菌菌液培养的准备。③MS1、MS2、MS3培养基的配置基本培养基MS1:MS分化培养基MS2 :MS+6-BA lug/ml+Cef (头孢霉素)500ug/ml生根培养基MS3 1/2MS+Kan (卡纳霉素)100ug/ml+IAA 0. 2g/l，其中 1/2MS 是指大量元素和铁盐减半，其它不变。④试剂配置70%的乙醇，0. 的生汞。另外，准备纯水升)、培养皿(装有滤纸)、打孔器、手术刀、封口膜(d = 2-5mm)、镊子把)等工具，枪头、离心管(50ml)、用于配抗生素的专用无菌水，所有这些都需要近期灭菌。(2)农杆菌介导的叶盘转换法①EHA105(Tiangen，Beijing)/PBI121 (TaKaRa，Japan)(菌株在甘油中于 _80°C保存，使用前在YEB培养基上，分别于和37°C下)经活化后，单菌落接种于aiil YEB液体培养基(分别加50ug/ml的利福平和25ug/ml的卡纳霉素)中，分别于和37°C震荡培养过夜，转速分别为220rpm和165rpm②以的接种量接种于100ml LB液体培养基(胰蛋白胨10g/L，酵母提取5g/L， 氯化钠5g/L) (kan 50ug/ml, Rif 25ug/ml)，震荡培养至对数生长中期(OD600 = 0 . 5)。③无菌状态下，4000rpm离心lOmin。④沉淀用20ml MSl液体培养基洗涤后，4000rpm离心lOmin，用20ml MSl液体培
养基悬浮。⑤从烟草幼苗(温室或完全培养箱栽培植株)上摘取完全展开的叶片，将叶片先用蒸馏水清洗2-3次，再用70%乙醇浸泡45秒，30%次氯酸钠或0. 1 %的生汞消毒6-8min 后，再用无菌水洗叶片5次，最后用无菌滤纸吸干多余的水分。⑥用打孔器从表面消毒后的烟草叶片中打得叶盘直径2cm左右。将叶盘放入步骤 5的菌液中，涡旋混合4-5min，使细菌与叶盘组织伤口部位充分接触。将叶盘从细菌悬浮液中取出，置于灭菌滤纸上吸干，然后置于MSl培养基(即MS培养基)上(叶片的光滑面朝上)，用封口膜封好后，在25°C的培养室里共培养2天。⑦把MSl培养基上的叶盘转接到分化培养基MS2(MS+6-BA lug/ml+Km IOOug/ ml+Cp500ug/ml)，在25°C光照周期14h (20001ux)培养2_3周，每隔5天换一次培养基，即每隔4天转接一次。转接过程中注意要将叶盘的边缘侵入到培养基里，以便叶盘吸收营养，而且转接当中要一直按照开始时转接的方式把叶片的光滑面朝上。⑧待愈伤组织分化成苗后，用解剖刀切取整体的小植株转入装有分化培养基MS2 的三角瓶中，继续培养。⑨植株长大后，切除多余的愈伤组织保留整株的植株转入生根培养基中 MS3(l/2MS+Km 100ug/ml+IAA 0. 2mg/l)中，让其生根。⑩待再生幼苗根系发达后，开盖培养2-3天。强化植株后，取出植株，用无菌水洗掉幼苗根部的琼脂再移栽到灭菌土的盆钵中，放置于室温中培养。注意观察整个过程转基因烟草的生长状况，注意浇水，开关灯等。实施例10 转基因烟草的筛选与鉴定。(1)通过抗性初步筛选利用表达载体的抗性基因，对转基因植株进行初步筛选，卡那霉素的浓度依据不同的植物以及不同的生长期不同而异。含有目的基因的转基因植株，会在抗性培养基中茁长生长。反之，就会不出芽或者即使出芽了，也会慢慢枯萎黄花而死亡。本实验采用的是PBI121表达载体，有卡那霉素抗性；转入基因的植株会在含有卡那霉素的培养基中健康生长(如图10)。(2)分子鉴定①引物SKPl-Fl :5，- |ATC^ TCGTCGTCGGGGAG-3’ ；SKP 1-R2 :5，-CACTCGAAATTGACCCT |TCA| -3，。PCR 程序94°C，3min ；94°C，30s ；61 °C，45s ；72°C，70s，32 个循环；72°C，5min。
②基因组PCR鉴定如图11，1至7是转基因植株，均有500bp左右的目的条带，CK是未转基因植株的对照，没有检测出目的条带，因此可以初步说明7个植株均已成功导入了目的基因SKP1。实施例11 通过转基因烟草Tl代分析SKPl的功能。(I)Tl代种子萌发延迟①实验方法取直径IOcm培养皿，铺上一层滤纸；用洗瓶加水至培养品中，至完全浸润为止；每个培养皿中撒100粒烟草种子；于温室中23°C放置，12小时光周期。以未转基因烟草为对照，总计选取7个转基因株系，每个株系做三次重复，取平均值，统计种子的萌发率。以种胚突破种皮视为萌发标准。种子萌发率=(萌发数/总数)X100%。②结果分析(图13):在萌发48小时后，野生型种子的萌发率已经达到了 68. 82 %，而此时7个转基因株系中最大的萌发率才49. 78%。持续萌发到M小时后，野生型种子萌发率为92. 85%，此时 7个转基因株系的萌发率均低于85. 00%。再持续萌发到63小时后，野生型种子和7个转基因株系的种子萌发率均达到95%左右，并趋于平衡，但是相对于野生型而言，转基因株系种子萌发率已经明显延迟。在所有转基因株系中，150、278和280三个株系的萌发速度比其他株系更慢。这说明，在整个萌发过程中，SKPl的过量表达延缓了种子的萌发，降低了萌发率。在萌发50小时后，转基因植株有萌发率出现陡增的现象，说明在此之后转基因株系中某种激素或者化学物质出现了量的变化，而非转基因株系没有此现象。(2) Tl代株系主根长度①测量方法待转基因烟草长至20天左右，以野生型为对照，测量主根长度，每个株系取100棵植株，每个株系测量三个重复，统计主根长度。②结果分析(图14和图15)发现野生型对照和7个转基因株系主根长度分别为0. 51 士 0. 054cm (CK)， 0. 34 + 0. 014cm(T150),0. 29 + 0. 018cm(T241),0. 30 + 0. 021em(T255), 0. 2 + 0. 005cm (T276) , 0. 46 + 0. 087cm (T278) , 0. 44 + 0. 036cm (T280)， 0.41 士0.049cm(T283)。结果显示，7个转基因株系主根长度都短于野生型CK。这说明SKPl 基因超表达影响了烟草的根系生长发育过程。(3)转基因烟草激素含量变化①测量方法分别选取萌发45小时、52小时、和60小时的种子以及幼株的叶片，用分析天平精确称取0. Ig样品，每个样品3次重复，将样品放入冷冻管中液氮速冻10-15分钟，置于-70 度冰箱备用。将待测样品送至中国农业大学化控实验室，使用酶联免疫法(ELSA)分别测定 IAA (生长素)、GA3 (赤霉素3)、ZR (玉米素)和ABA (脱落酸)的含量(ng每克鲜重)。实验数据用SAS8. 0软件进行统计分析。③结果分析(图16a d)
在种子萌发阶段野生型和7个转基因株系ABA的含量几乎一致，而到苗期野生型和7个转基因株系ABA的含量均骤降，且含量基本一致。IAA含量在种子萌发至营养生长阶段均呈现下降趋势，而7个转基因株系与野生型烟草IAA含量在每个阶段的含量基本没有变化。在种子萌发和营养生长阶段，GA的含量几乎没有什么变化，但是转基因烟草GA的含量普遍高于野生型烟草。玉米素观在种子萌发过程和营养生长阶段中的含量也是几乎没有什么变化，但是7个转基因株系在整个过程的含量均明显高于野生型烟草(图16a d)。这说明超表达SKPl影响了植株体内各种激素含量的变化。
权利要求
1.棉花有丝分裂S期激酶蛋白相关基因SKP1，其特征在于，该基因来源于陆地棉 (Gossypium hirsutum L.)，其 cDNA 序列如 SEQ ID NO. 4 所示，其 DNA 序列如 SEQ IDNO. 6 所示。
2.编码权利要求1所述基因SKPl的氨基酸序列如SEQID NO. 5所示。
3.权利要求1所述基因SKPl的超表达载体，其特征在于，含有权利要求1所述基因 SKPl的植物表达载体PBI121。
4.权利要求1所述基因SKPl在棉花雄性不育系的不育株雄蕊中表达量高于其他组织中的应用。
5.权利要求1所述基因SKPl在抑制烟草种子萌发、抑制烟草主根生长以及提高烟草激素含量中的应用。
6.权利要求3所述超表达载体在抑制烟草种子萌发、抑制烟草主根生长以及提高烟草激素含量中的应用。
全文摘要
本发明属于分子生物学领域，涉及棉花细胞S期(DNA合成期)激酶蛋白相关基因SKP1及其应用，该基因具有SEQ ID NO.4所示的cDNA序列和SEQ ID NO.6所示的DNA序列，其编码产物氨基酸序列为SED ID NO.5。包括该基因超表达载体的构建、超表达载体质粒的遗传转化以及应用。研究发现，该基因参与了SCF复合体的形成并调控着植物雄性减数分裂、生长素、赤霉素、脱落酸、茉莉酸和乙烯等生理发育过程，并且与植物的生长发育有密切关系。因此，本发明对于研究该基因对植物生长发育的影响，具有重要的意义。
文档编号C07K14/415GK102363785SQ20111033962
公开日2012年2月29日 申请日期2011年10月31日 优先权日2011年10月31日
发明者唐灿明, 张朝军, 胡德龙, 陈全战 申请人:南京农业大学