专利名称：一种奇曼碱a的制备方法
技术领域：
本发明属于天然植物提取领域，具体涉及ー种奇曼碱A的制备方法。
背景技术：
奇曼碱A (Chimanine A)，分子式C13H15NO,分子量201. 27。奇曼碱A是从芸香科(Rutaceae)长叶图腊树longiflora Krause树皮、根、莖、皮和叶中提取分离的一种喹啉生物碱类化合物。实验研究表明，奇曼碱A具有抗寄生虫作用。体外抗5株利什曼原虫的IC9tl为100 μ g/ml，抗5株克氏锥虫的IC9tl为lOOyg/ml。体内对感染利什曼虫L. amazonensis PH8的小鼠也有效。 目前，国内尚未见奇曼碱A的提取纯化方法方面的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供ー种奇曼碱A的制备方法，该方法操作简单、得率高、安全环保，可快速大量分离高纯度奇曼碱A。为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下
(1)提取取长叶图腊树叶粉碎成粗粉，用5-10倍量70-95%的こ醇溶液，25-55°C下进行连续逆流超声提取20-100min，得到こ醇提取液；
(2)氧化铝柱层析上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集奇曼碱A流分，浓缩；
(3)制备型液相色谱分离上述浓缩液采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集奇曼碱A组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得奇曼碱A粗晶；
(4)重结晶将奇曼碱A粗晶用氯仿-丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度奇曼碱A晶体。步骤(I)所述超声频率为50-80KHZ。步骤(2)所述氧化铝为80-120目，氯仿-丙酮体积比为1:1，用量为柱体积的4_7倍。步骤(3)所述制备型液相色谱的流动相为こ腈-O. 15%こニ胺水溶液，体积比为32 :68，紫外检测波长为228nm。步骤(4)所述氯仿-丙酮的体积比为2-3:1。本发明的优点在于1)操作简单、耗时短，易于产业化放大；2)提取、柱层析、制备液相分离等步骤中的溶剂用量少，并可回收再利用；3)具有较高的经济效益和学术价值，本发明所得产品纯度高，可为奇曼碱A的进ー步开发提供药理原料和实践支持。
具体实施例方式 下面结合具体实施例对本发明进ー步说明
实施例I:
取长叶图腊树叶Ikg,粉碎成粗粉,从连续逆流超声提取设备头部进料ロ进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入ロ加入10倍95%こ醇溶液，55°C下进行连续逆流超声提取20min，超声频率为80KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝(120目)拌匀、干燥后装柱，用7倍柱体积的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脱，薄层检测，收集奇曼碱A流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经O. 45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以こ腈-O. 15%こニ胺水溶液为流动相，体积比为32 :68，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10 μ m，柱长为15cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为25ml,控制流速为50ml/min,紫外在线检测,检测波长为228nm,收集目标成分,减压回收试剂得奇曼碱A粗晶，用氯仿-丙酮(2. 5:1)重结晶，冷冻干燥得到高纯度奇曼碱A晶体，经HPLC检测，纯度96. 5%。实施例2:
取长叶图腊树叶Ikg,粉碎成粗粉,从连续逆流超声提取设备头部进料ロ进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入ロ加入10倍80%こ醇溶液，45°C下进行连续逆流超声提取lOOmin，超声频率为60KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，加氧化铝(80目)拌匀、干燥后装柱，用4倍柱体积的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脱，薄层检测，收集奇曼碱A流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经O. 45 μ m微滤膜过 滤，得到样品溶液取滤液进样，以こ腈-O. 15%こニ胺水溶液为流动相，体积比为32 :68，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10 μ m，柱长为10cm、直径为1cm，六通阀进样，进样体积为5ml,控制流速为10ml/min,紫外在线检测,检测波长为228nm,收集目标成分,减压回收试剂得奇曼碱A粗晶，用氯仿-丙酮(3:1)重结晶，冷冻干燥得到高纯度奇曼碱A晶体，经HPLC检测，纯度97. 8%。实施例3:
取长叶图腊树叶IOkg,粉碎成粗粉,从连续逆流超声提取设备头部进料ロ进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入ロ加入6倍70%こ醇溶液，35°C下进行连续逆流超声提取50min,超声频率为50KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，加氧化铝(100目)拌匀、干燥后装柱，用6倍柱体积的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脱，薄层检测，收集奇曼碱A流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经O. 45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以こ腈-O. 15%こニ胺水溶液为流动相，体积比为32 :68，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10 μ m，柱长为25cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为20ml，控制流速为20ml/min，紫外在线检测，检测波长为228nm，收集目标成分，减压回收试剂得奇曼碱A粗晶，用氯仿-丙酮(2:1)重结晶，冷冻干燥得到高纯度奇曼碱A晶体，经HPLC检测，纯度98. 5%。实施例4:
取长叶图腊树叶IOkg,粉碎成粗粉,从连续逆流超声提取设备头部进料ロ进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入ロ加入5倍80%こ醇溶液，25°C下进行连续逆流超声提取SOmin,超声频率为60KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，加氧化铝(100目)拌匀、干燥后装柱，用7倍柱体积的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脱，薄层检测，收集奇曼碱A流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经O. 45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以こ腈-O. 15%こニ胺水溶液为流动相，体积比为32 :68，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10 μ m，柱长为50cm、直径为5cm，六通阀进样，进样体积为50ml，控制流速为150ml/min，紫外在线检测，检测波长为228nm，收集目标成分，减压回收试剂得奇曼碱A粗晶，用氯仿-丙酮(2:1)重結晶，冷冻干燥得到高纯度奇曼碱A晶体，经 HPLC检测，纯度97. 2%。
权利要求
1.一种奇曼碱A的制备方法，其特征在于它包括以下步骤 (1)提取取长叶图腊树叶粉碎成粗粉，用5-10倍量70-95%的乙醇溶液，25-55°C下进行连续逆流超声提取20-100min，得到乙醇提取液； (2)氧化铝柱层析上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集奇曼碱A流分，浓缩； (3)制备型液相色谱分离上述浓缩液采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集奇曼碱A组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得奇曼碱A粗晶； (4)重结晶将奇曼碱A粗晶用氯仿-丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度奇曼碱A晶体。
2.根据权利要求I所述的奇曼碱A的制备方法，其特征在于步骤(I)所述超声频率为50-80KHz。
3.根据权利要求I所述的奇曼碱A的制备方法，其特征在于步骤(2)所述氧化铝为80-120目，氯仿-丙酮体积比为I: I，用量为柱体积的4-7倍。
4.根据权利要求I所述的奇曼碱A的制备方法，其特征在于步骤(3)所述制备型液相色谱的流动相为乙腈-O. 15%乙二胺水溶液，体积比为32 :68，紫外检测波长为228nm。
5.根据权利要求I所述的奇曼碱A的制备方法，其特征在于步骤(4)所述氯仿-丙酮的体积比为2-3:1。
全文摘要
本发明公开了一种奇曼碱A的制备方法，其制备方法是(1)取长叶图腊树叶粗粉，70-95%的乙醇溶液连续逆流超声提取，得到提取液；(2)将提取液浓缩，再经氧化铝柱层析；(3)制备型液相色谱分离；(4)氯仿-丙酮重结晶，得到高纯度的奇曼碱A结晶产品。本发明方法简单、得率高，可得到高纯度产品，具有较高的经济价值和学术价值。
文档编号C07D215/233GK102838538SQ201210345840
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月18日 优先权日2012年9月18日
发明者刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司