一种氨基酸植物甾醇酯盐酸盐的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种氨基酸植物甾醇酯盐酸盐的制备方法。本发明采用的技术方案为：采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡啶和三乙胺复合催化剂催化植物甾醇与N-叔丁氧羰基氨基酸的酯化，先在0℃下反应2～10h，再升温至室温25℃下继续反应1～22h，反应混合物经硅胶柱层析分离纯化得到N-叔丁氧羰基氨基酸植物甾醇酯，将N-叔丁氧羰基氨基酸植物甾醇酯溶于3～4mol/L的氯化氢/乙酸乙酯溶液，在室温25℃下搅拌反应0～2h，减压旋转蒸发除去氯化氢/乙酸乙酯溶剂，得到氨基酸植物甾醇酯盐酸盐。本方法操作简单、能耗低且产率高，产品性质稳定，易于保存。
【专利说明】一种氨基酸植物留醇酯盐酸盐的制备方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种备植物留醇衍生物的方法，特别涉及一种氨基酸植物留醇酯盐酸盐的制备方法。本产品的应用开发涉及到食品、医药、化工和化妆品等【技术领域】。
【背景技术】
[0002]植物留醇是一类以环戊烷全氢菲为主体骨架的留体化合物，具有非常好的降胆固醇作用。近年来，还发现植物留醇在抗癌、抗炎、抗病毒和提高免疫力等方面具有重要作用，在化妆品工业中可作为乳化剂，目前受到了越来越多的重视。
[0003]然而，游离型植物留醇具有结晶性和难溶性，既不溶于水，在油中的溶解度也很小，限制了它在食品中的应用。目前植物留醇一般只添加于脂肪食品，在低脂肪食品、减肥食品、饮料和其它水基质食品中的应用还受到很大限制，这就要求在不影响植物留醇的生理功能前提下改变植物留醇的形式，改善植物留醇的水溶性，使其便于在食品加工中应用。
[0004]目前植物留醇衍生物主要是酯化型的植物留醇，例如饱和脂肪酸植物留醇酯和不饱和脂肪酸植物留醇酯，目的是改善植物留醇的油溶性。改善植物留醇水溶性的方法多集中在制备微乳体系或者微胶囊包埋等方面，但这两种方法面临贮藏稳定性和实际应用中添加形式受限制的问题。关于水溶性植物留醇衍生物的相关报道也比较少，目前只有柠檬酸植物留醇酯和丁二酸植物留醇糖醇酯。氨基酸是人类必须的营养物质，存在于蛋白质中的20种主要氨基酸中有8种人体必需氨基酸，所有的氨基酸都含有极性基团氨基和羧基(除脯氨酸是含亚胺基)，一些氨基酸还含有羟基，如丝氨酸和苏氨酸，其中有些氨基酸的水溶性很大，如脯氨酸、精氨 酸、赖氨酸、丝氨酸和甘氨酸，它们在水中的溶解度分别达到1620g/L、856g/L、739g/L、422g/L和250g/L，因此氨基酸植物留醇酯的水溶性应该会比植物甾醇的水溶性高，能方便植物留醇在水基质食品中的加工应用，同时氨基酸植物留醇酯能兼有植物留醇和氨基酸两者的生理活性，生物学效价得到提高。
[0005]目前关于氨基酸植物留醇酯的报道只有一篇文献，Pang等人以一水硫酸氢钠为催化剂，以正丁醇为溶剂，植物留醇和谷氨酸在70~90°C下反应6~10小时，但重复该试验，并不能得到谷氨酸植物留醇酯，尝试其它氨基酸，在相同反应条件下使其与植物留醇反应，也得不到相应的氨基酸植物留醇酯。本发明探索出一种氨基酸植物留醇酯盐酸盐的高效制备方法，先催化合成N-叔丁氧羰基(B0C-)氨基酸植物留醇酯，再脱除BOC保护基，虽然要分两步反应，但这两步反应都不需要加热和除水措施以促进反应，且第二步BOC脱除方法快速又简便，脱除率高达99%，产品不需要进一步分离纯化。
【发明内容】
[0006]本发明提供一种氨基酸植物留醇酯盐酸盐的制备方法。本方法分两步进行，第一步使用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、4_ 二甲氨基吡啶(DMAP)和三乙胺(Et3N)复合催化剂催化N-BOC-氨基酸与植物留醇酯化，第二步使用氯化氢/乙酸乙酯溶液脱除BOC保护基，两步方法都操作简单、能耗低且产率高，适合用于食品工业生产。[0007]本发明采用以下技术方案:
[0008]使用EDC，DMAP和Et3N复合催化剂催化植物留醇与N-BOC-氨基酸进行酯化，反应溶剂为无水二氯甲烷，间隔一定时间取样，采用薄层层析(TLC)检测反应进程，反应结束后反应混合物经硅胶柱层析分离纯化得到N-BOC-氨基酸植物留醇酯；将N-BOC-氨基酸植物甾醇酯溶于3~4mol/L的氯化氢/乙酸乙酯溶液，室温下搅拌反应O~2小时，减压旋转蒸发除去氯化氢/乙酸乙酯溶剂，得到氨基酸植物留醇酯盐酸盐；中间体N-BOC-氨基酸豆甾醇酯和产物氨基酸豆留醇酯盐酸盐经高效液相色谱(HPLC)测定纯度，红外光谱、质谱和核磁共振波谱进行结构表征。
[0009]本发明所述的植物留醇为谷留醇、豆留醇、菜油留醇和菜籽留醇中一种或几种以上的任意比例的混合物。
[0010]本发明所述的N-BOC-氨基酸为N-BOC-甘氨酸、N-BOC-谷氨酸和N-BOC-天冬氨酸。
[0011]本发明所述的植物甾醇与N-BOC-氨基酸的物质的量比为1:1~1: 3，优选1: 1.5;N-B0C-氨基酸与EDC，DMAP和Et3N的物质的量比为l:1:1: 1.5~1:2:2: 3，优选 1: 1.2: 1.2: 1.8。
[0012]本发明所述的反应温度为先在(TC冰浴下反应2~10小时，再升温至25°C室温下反应I~22小时，优选先在0°C下反应8小时，再升温至25°C室温下反应16小时。
[0013]本发明所述的N-BOC-氨基酸和植物留醇酯化反应的投料顺序为先将EDC和Et3N溶解在无水二氯甲烷中，再加入DMAP和N-BOC-氨基酸在0°C冰浴条件下活化羧基I小时，最后加入植物留醇在O°C冰浴下反应2~10小时之后升至25°C室温下继续反应I~22小时。
[0014]本发明所述的硅胶柱层析分离纯化，是利用N-BOC-氨基酸植物留醇酯、植物甾醇和N-BOC-氨基酸的极性差异及其在不同溶剂中的溶解性不同来实现，其步骤为:将含N-BOC-氨基酸植物留醇酯反应混合物溶解在三氯甲烷中，洗脱剂为乙酸乙酯/石油醚/甲酸混合溶液(3: 2: 0.05，v/v/v)，对收集到的组分进行液相分析，将同一组分合并，减压旋转蒸发除去溶剂，得到N-BOC-氨基酸植物留醇酯纯品，并对产品进行红外、质谱和核磁共振波谱分析表征。
[0015]本发明中植物留醇的酯化率采用高效液相法测定，分析条件为:symmetry-C18柱(5 μ m,4.6mmX 150mm, Waters),柱温 35°C,流动相为甲醇:甲酸=1000: l(v/v),流速为
1.0mL/min,使用蒸发光检测器，载气为N2，压力为0.25MPa，漂移管温度为85°C，喷雾级别为70%，进样量IOyL0
[0016]本发明的有益效果:
[0017]1.本发明首次合成了甘氨酸植物留醇酯盐酸盐、谷氨酸植物留醇酯盐酸盐和天冬氨酸植物留醇酯盐酸盐，改善了植物留醇的水溶性，拓宽了植物留醇的应用范围；
[0018]2.反应在0°C冰浴和25°C室温下即可进行，操作简单，无需加热，能耗低；
[0019]3.N-BOC-氨基酸与植物留醇的酯化反应几乎定量反应，酯化产率高达95%以上，且反应中不需要添加除水剂；
[0020]4.BOC保护基的脱除非常简便，且脱除率达到99%以上，产品无需再进行分离纯化；[0021]5.氨基酸植物甾醇酯盐酸盐性质稳定，易于保存。
【具体实施方式】
[0022]下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明所保护的内容不仅仅局限于下面的实施例，本领域内技术人员可以适当修改本发明参数。
[0023]实施例1:
[0024]在反应瓶中加入0.6894g(3.6mmol)EDC和 0.606g(5.4mmol) Et3N，加入无水二氯甲烷溶解，再加入0.4392g(3.6mmol)DMAP和0.525g (3mmol) N-BOC-甘氨酸，在(TC冰浴下磁力搅拌I小时，再加入0.824g(2mmol)豆甾醇，在0°C冰浴下搅拌反应8小时，再升至25°C室温下反应16小时，采用TLC监测反应进程，HPLC测定酯化率，反应结束后得到N-BOC-甘氨酸豆留醇酯粗产品，用硅胶柱层析法分离纯化，得到纯品，产率96.6 %。
[0025]将N-BOC-甘氨酸豆甾醇酯纯品0.569g(Immol)溶解在50mL3mol/L的氯化氢/乙酸乙酯溶液中，在室温下磁力搅拌反应0.5小时，减压旋转蒸发除去氯化氢/乙酸乙酯溶剂，得到甘氨酸豆留醇酯盐酸盐纯品。
[0026]中间体N-BOC-甘氨酸豆留醇酯和产物甘氨酸豆留醇酯盐酸盐经HPLC、红外光谱、质谱和核磁共振波谱分析进行结构表征。
[0027]N-BOC-甘氨酸豆甾醇酯:HPLC 保留时间(min) =10.810 ；IR(v, cm1):1170.61,1206.09 (C-O-C), 1719.39,1752.47 (C = O) ,3369.1O(N-H) ；MS (m/z):592.4 (M+Na) + !1HNMR(400MHz, CDCl3, δ，ppm): δ = 0.68 (3H, s’ 18-H)，0.80 (6H, d, J = 8.0Ηζ，26_27_Η)，
0.84 (3H, t, J = 6.0Hz，29-H)，1.02 (6H, m)，1.03 (3H, s, 19-H)，1.10-1.30 (5H, m)，
1.45 (9H, s’ (CH3) 3C-)，1.62-1.50 (8H, m)，1.65-1.73 (2H, m)，1.86-2.09 (5H, m)，2.33 (2H,d, J = 8.0Hz)，3.88 (2H, d, J = 4.0Hz, -CH2CO)，4.64-4.71 (1H, m, 3_H)，5.02 (1H, dd, J=8.0，16.0Hz，22-H or23-H)，5.15(1H, dd, J = 8.0，16.0Hz，22-H or23-H)，5.38 (1H, d,J = 8.0Hz，6-H) ；13C NMR (IOOMHz, CDCl3, δ，ppm): δ = 12.05 (29_CH3)，12.26(18_CH3)，18.99 (21-CH3)，19.29 (19_CH3)，21.02 (26-or27-CH3) ,21.09 (26-or27-CH3) ,21.23 (CH2)，
24.36 (Il-CH2)，25.41 (15_CH2) ,27.71 (CH2)，28.33 ((CH3) 3C_) ,28.91 (CH2) ,31.85 (CH2)，31.89 (2C, 8-and25-CH)，36.58 (quaternary C-10)，36.92 (CH2)，38.03 (CH2)，39.62 (CH2)，40.50 (20-CH) ,42.21 (quaternary C-13)，42.67 (-CH2CO)，50.04 (9-CH) ,51.24 (24-CH)，55.94 (17-CH)，56.79 (14-CH)，75.18 (3-CH) , 79.91 ((CH3) 3C-) , 122.92 (6-CH)，129.31 (22-CH)，138.30(23-CH)，139.36(quaternary C_5)，155.70(CONH)，169.75(CH2C =0)
[0028]甘氨酸豆甾醇酯盐酸盐:HPLC保留时间(min):1.479 ；IR( v , cm-1):1217.46 (C-O-C), 1731.67 (C = 0), 1623.65,3397.70 (N-H) ；MS (m/z):470.7 (M-HC1+H) + !1HNMR(400MHz, CDCl3, δ，ppm): δ = 0.70 (3H, s’ 18-H) ,0.80 (6H, d, J = 8.0Ηζ，26_27_Η)，
0.84 (3H, t, J = 6.0Hz，29-H)，1.02 (3H, s’ 19-H)，0.93-1.08 (6H, m)，1.12-1.28 (5H, m)，
1.38-1.58 (8H, m)，1.61-1.73 (2H, m)，1.86-2.09 (5H, m)，2.33 (2H, d, J = 8.0Hz)，3.40 (2H,s，-CH2CO) ,4.63-4.71 (lH，m，3-H)，5.03 (1H，dd, J = 8.0，16.0Hz，22—H or23_H)，5.16 (1H,dd, J = 8.0，16.0Hz，22-H or23-H), 5.38 (1H, d, J = 8.0Hz，6_H) ；13C 匪R(100MHz，CDCl3, δ , ppm): δ = 12.05 (29_CH3)，12.26 (18_CH3)，18.99 (21_CH3)，19.31 (19_CH3)，21.02 (26-or27-CH3) ,21.09 (26-or27_CH3)，21.23 (CH2) ,24.26 (I 1-CH2)，25.41 (CH2)，27.79 (15-CH2) ,28.91 (CH2) ,31.86 (CH2) ,31.89 (2C, 8-and25_CH) ,36.61 (quaternaryc-10)，36.96 (CH2)，38.14 (CH2)，39.63 (CH2)，40.50 (20-CH)，42.22 (quaternary C-13)，44.25 (-CH2CO)，50.05 (9-CH)，51.24 (24-CH)，55.95 (17-CH)，56.79 (14-CH)，74.61 (3-CH)，122.83(6-CH)，129.31 (22-CH)，138.30(23-CH)，139.49(quaternary C_5)，173.72 (C = 0)
[0029]实施例2:
[0030]在反应瓶中加入0.6894g(3.6mmol)EDC和 0.606g(5.4mmol) Et3N，加入无水二氯甲烷溶解，再加入0.4392g(3.6mmol)DMAP和0.741g(3mmol)N-B0C-谷氨酸，在(TC冰浴下磁力搅拌I小时，再加入0.824g(2mmol)豆甾醇，在0°C冰浴下搅拌反应8小时，再升至25°C室温下反应16小时，采用TLC监测反应进程，HPLC测定酯化率，反应结束后得到N-BOC-谷氨酸豆留醇酯粗产品，用硅胶柱层析法分离纯化，得到纯品，产率95.8 %。
[0031]将N-BOC-谷氨酸豆甾醇酯纯品0.641g (Immol)溶解在50mL3mol/L的氯化氢/乙酸乙酯溶液中，在室温下磁力搅拌反应0.5小时，减压旋转蒸发除去氯化氢/乙酸乙酯溶剂，得到谷氨酸豆留醇酯盐酸盐纯品。
[0032]中间体N-BOC-谷氨酸豆留醇酯和产物谷氨酸豆留醇酯盐酸盐经HPLC、红外光谱、质谱和核磁共振波谱分析进行结构表征。
[0033]N-BOC-谷氨酸豆甾醇酯:HPLC 保留时间(min):10.138 ；IR(v, cm_1):1170.39，1190.97，1253.60(C-O-C)，1720.25，1728.39，1741.17(C = O),3426.73 (N-H)，2500-3700 (O-H) ；MS (m/z):640.1 (M-H)+ NMR (400MHz，CDCl3, δ ,ppm): δ =0.70(3H，s，18-H) ,0.80(6H，d，J = 8.0Hz，26-27-H)，0.84(3H，t，J = 6.0Hz，29-H)，1.03 (3H，s，19-H)，
1.01 (6H, m)，1.14-1.30 (5H, m)，1.45 (9H, s’ (CH3) 3C_)，1.50-1.57 (8H, m)，1.60-1.72 (2H,m)，1.84-2.05 (5H, m)，2.19-2.26 (2H, m, -CH2CH2COOH) ,2.31 (2H, d, J = 8.0Hz)，
2.37-2.46 (2H, m, -CE.C00H)，4.33 (1H, m, -CHC0)，4.61-4.62 (1H, m, 3_H)，5.02 (1H, dd, J=8.0，12.0Hz，22-H or23-H)，5.16 (1H, dd, J = 8.0，12.0Hz，22-H or23-H)，5.37 (1H, d, J=8.0Hz，6-H)，8.04 (1H, s’ -NH-)，10.06 (1H, m, -C00H) ;13CNMR(100MHz，CDCl3, δ，ppm):δ = 12.05 (29-CH3)，12.26 (18_CH3)，19.00 (21-CH3), 19.31 (19_CH3) ,21.02 (26-or27-CH3)，21.09(26-or27-CH3) ,21.24 (CH2) ,24.36 (Il-CH2) ,25.41 (CH2) , 27.33 (CH2CH2COOH)，27.71 (15-CH2) ,28.30 ((CH3) 3C-) , 28.92 (CH2) ,30.85 (-CH2COOH) , 31.86 (8-or25-CH)，31.89 (8-or25-CH) , 36.60 (quaternary C-10) , 36.96 (CH2) , 38.06 (CH2) , 39.63 (CH2)，40.51 (20-CH) ,42.21 (quaternary C-13)，50.04 (9-CH) ,51.25 (24-CH) ,53.01 (-CHC0)，
55.94 (17-CH)，56.79 (14-CH)，74.57 (3-CH)，80.45 ((CH3) 3C-)，122.76 (6-CH)，129.30 (22-CH),138.31 (23-CH),139.52(quaternary C_5),155.78(CONH),172.55(CHC =0)，176.63(-C00H)
[0034]谷氨酸豆甾 醇酯盐酸盐:HPLC保留时间(min):3.336 ；IR( v , cm-1):1198.18,1230.17(C-O-C)，1731.92，1744.88(C = 0)，1599.79，3427.81(N-H)，2500-3700(0_H)；MS (m/z):540.1 (M-HCl-H)+ 5? NMR(400MHz, (CD3)2SO, δ，ppm): δ = 0.68 (3H, s，18-H)，0.77 (6H, d, J = 8.0Hz, 26-27-H)，0.82 (3H, t, J = 6.0Hz，29-H)，0.98 (6H, m)，1.01 (3H,s’ 19-H)，1.10-1.28 (5H, m)，1.37-1.65 (10H, m)，1.78-2.00 (5H, m)，2.03-2.12 (2H,m, -CH2COOH)，2.28 (2H, d, J = 8.0Hz)，2.40-2.59 (2H, m, CH2CH2COOH) ,3.91 (1H, m, -CHC0)，4.44-4.52 (1H, m, 3_H)，5.03 (1H, dd, J = 8.0，16.0Hz，22-H or23-H)，5.16 (1H, dd, J =8.0，16.0Hz，22-H or23-H), 5.34 (1H, d, J = 8.0Hz，6_H)，8.48 (3H，s’ -NH3+)，13.79 (1H，m, -COOH) ；13C NMR(IOOMHz, (CD3)2SO, δ , ppm): δ = 11.82 (29_CH3), 12.07 (18_CH3)，
18.83 (21-CH3)，18.94 (19_CH3)，20.72 (26-or27-CH3)，20.89 (26-or27-CH3)，21.09 (CH2)，23.85 (Il-CH2)，24.83 (CH2)，25.17 (CH2CH2COOH)，27.30 (15_CH2)，28.45 (CH2)，29.51 (-CH2COOH),31.35 (8-or25-CH),31.35 (8-or25-CH),36.09 (quaternary C-10)，36.47 (CH2)，37.62 (CH2)，39.13 (CH2)，39.88 (20-CH) ,41.73 (quaternary C-13)，50.58 (9-CH)，51.17 (24-CH)，55.35 (17-CH)，56.21 (14-CH)，59.70 (-CHCO)，73.54 (3-CH)，122.07(6-CH)，128.85(22-CH)，137.97(23-CH)，139.44(quaternary C_5)，170.48(CHC =0), 171.05(-C00H)
[0035]实施例3:
[0036]在反应瓶中加入0.6894g(3.6mmol)EDC和 0.606g(5.4mmol) Et3N，加入无水二氯甲烷溶解，再加入0.4392g(3.6mmol)DMAP和0.699g(3mmol)N-B0C-天冬氨酸，在(TC冰浴下磁力搅拌I小时，再加入0.824g(2mmol)豆甾醇，在0°C冰浴下搅拌反应8小时，再升至25°C室温下反应16小时，采用TLC监测反应进程，HPLC测定酯化率，反应结束后得到N-BOC-天冬氨酸豆留醇酯粗产品，用硅胶柱层析法分离纯化，得到纯品，产率95.2%。
[0037]将N-BOC-天冬氨酸豆甾醇酯纯品0.627g(Immol)溶解在50mL3mol/L的氯化氢/乙酸乙酯溶液中，在室温下磁力搅拌反应0.5小时，减压旋转蒸发除去氯化氢/乙酸乙酯溶剂，得到天冬氨酸豆留醇酯盐酸盐纯品。
[0038]中间体N-BOC-天冬氨酸豆留醇酯和产物天冬氨酸豆留醇酯盐酸盐经HPLC、红外光谱、质谱和核磁共振波谱分析进行结构表征。
[0039]N-BOC-天冬氨 酸豆甾醇酯:HPLC 保留时间(min):9.141 ；IR( v , cnT1):1167.79，1190.85，1220.20(C-O-C)，1720.05，1740.23，1750.07 (C = O),3426.27(N-H)，2500-3700 (O-H) ；MS (m/z):626.2 (M-H)+ NMR(400MHz, CDCl3, δ，ppm): δ = 0.70 (3H,s, 18-H) ,0.80 (6H, d, J = 8.0Hz, 26-27-H), 0.84 (3H, t, J = 6.0Hz, 29-H), 1.02 (6H,m)，1.03 (3H, s’ 19-H)，1.14-1.30 (5H, m)，1.45 (9H, s, (CH3) 3C_)，1.50-1.61 (8H, m)，
1.65-1.73 (2H, m)，1.85-2.09 (5H, m)，2.29-2.34 (2H, m)，2.78-3.06 (2H, m, -CH2COOH)，
4.53 (1H, m, -CHC0), 4.63-4.71 (1H, m，3_H)，5.02 (1H, dd, J = 8.0，16.0Hz, 22-H or23-H)，
5.16 (1H, dd, J = 8.0,16.0Hz, 22-H or23-H), 5.37 (1H, d, J = 8.0Hz，6_H)，6.22 (1H，m, -NH-) ；13C NMR(100MHz, CDCl3, δ，ppm): δ = 12.08 (29_CH3)，12.24 (18_CH3)，
19.02(21-CH3)，19.32 (19_CH3)，21.08 (2C，26-and27_CH3)，21.26 (CH2)，24.38 (I 1-CH2)，
25.41 (CH2) ,27.68 (15_CH2)，28.33 ((CH3) 3C_)，28.91 (CH2) ,31.90 (2C，8-and25_CH)，
36.60 (quaternary C-10)，36.69 (CH2COOH)，36.95 (CH2) , 37.91 (CH2)，39.67 (CH2)，40.49 (20-CH)，42.25(quaternary C-13)，50.08(2C,9-CH and-CHCO),51.27(24-CH)，
56.00 (17-CH)，56.83 (14-CH)，75.16 (3-CH)，80.30 ((CH3) 3C-)，122.96 (6-CH)，129.37 (22-CH),138.29(23-CH),139.35(quaternary C_5),155.56(CONH),170.27(CHC =0)，176.35(-C00H)
[0040]天冬氨酸豆甾醇酯盐酸盐:HPLC保留时间(min):2.545 ；IR( v，cm1):1190.85，1252.46(C-O-C)，1740.23，1746.65(C = 0)，1589.56，3426.91(N-H)，2500-3700(0_H)；MS (m/z):526.1 (M-HCl-H)+ NMR(400MHz, (CD3)2SO, δ，ppm): δ = 0.68 (3H, s，18-H)，0.78 (6H, d, J = 8.0Hz, 26-27-H)，0.82 (3H, t, J = 6.0Hz, 29-H)，0.99 (6H, m)，1.03 (3H,s, 19-H)，1.07-1.24 (5H, m)，1.41-1.70 (10H, m)，1.84-2.06 (5H, m)，2.28-2.30 (2H, m)，2.85-2.94(2H, m, -CH2COOH)，4.22(1H, m, -CHCO)，4.57 (1H, m,3_H)，5.03 (1H, dd, J =8.0,16.0Hz, 22-H or23_H)，5.16 (1H，dd, J = 8.0, 16.0Hz, 22-H or23-H) ,5.36 (1H,d, J = 8.0Hz,6-H) ,9.43 (1H, s, -COOH) ；13C NMR(100 MHz, (CD3)2SO, δ，ppm): δ =
11.82(29-CH3)，12.08(18_CH3)，18.83(21_CH3)，18.93 (19_CH3)，20.53 (26-or27-CH3)，20.90 (26-or27-CH3)，21.09 (CH2)，23.85 (Il-CH2)，24.83 (CH2)，27.05 (15_CH2)，28.43 (CH2)，31.30 (2C, 8-and25-CH)，34.31 (CH2COOH)，36.07 (quaternary C-10)，36.24 (CH2)， 37.51 (CH2)，38.93 (CH2)，39.97 (CH2) ,40.18 (20-CH) ,41.73 (quaternary C-13)，48.57 (9-CH)，49.38 (-CHCO)，50.57 (24-CH)，55.35 (17-CH)，56.17 (14-CH)，75.39 (3-CH)，122.40 (6-CH)，128.86 (22-CH)，137.97(23-CH)，139.07(quaternary C_5)，168.10 (CHC =0)，170.73(-COOH)。
【权利要求】
1.一种氨基酸植物留醇酯盐酸盐的制备方法，其特征在于所述的方法为:采用1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、4- 二甲氨基吡啶和三乙胺复合催化剂催化植物留醇与N-叔丁氧羰基氨基酸进行酯化反应，先将1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和三乙胺溶解于无水二氯甲烷中，再加入4- 二甲氨基吡啶和N-叔丁氧羰基氨基酸在0°C下搅拌lh，然后加入植物留醇，在0°C下反应2~IOh后，升温至室温25°C继续反应I~22h，反应混合物经硅胶柱层析分离纯化得到N-叔丁氧羰基氨基酸植物留醇酯，将N-叔丁氧羰基氨基酸植物留醇酯溶于3~4mol/L的氯化氢/乙酸乙酯溶液，在25°C下搅拌反应O~2h，减压旋转蒸发除去氯化氢/乙酸乙酯溶剂，得到氨基酸植物留醇酯盐酸盐。
2.如权利要求1所述的氨基酸植物留醇酯盐酸盐的制备方法，其特征在于所述的植物甾醇为谷留醇、豆留醇、菜油留醇和菜籽留醇中的一种或几种以上的任意比例的混合物，所述的N-叔丁氧羰基氨基酸为N-叔丁氧羰基甘氨酸、N-叔丁氧羰基谷氨酸和N-叔丁氧羰基天冬氨酸。
3.如权利要求1所述的氨基酸植物留醇酯盐酸盐的制备方法，其特征在于所述的植物甾醇与N-叔丁氧羰基氨基酸的物质的量比为1:1~1: 3，N-叔丁氧羰基氨基酸与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡唳和二乙胺的物质的量比为1:1:1: 1.5 ~1: 2: 2: 3。
【文档编号】C07J41/00GK103724392SQ201310717699
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年12月18日 优先权日:2013年12月18日
【发明者】贾承胜, 刘萍, 林蔚婷, 张晓鸣 申请人:江南大学