极光激酶和flt3激酶调节剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种具有式(1)的化合物以及其盐，所述化合物可用作极光激酶和FLT3激酶活性的调节剂；其中：R1为氢或C1-2烷基；并且R2、R3和R4为相同或不同的，并且各自选自氢、C1-2烷基、氟、氯、C1-2烷氧基以及三氟甲基，条件是R2、R3和R4中的至多两个不为氢。还提供含有所述化合物的药物组合物以及其在医学中的用途，尤其是在癌症治疗中的用途。
【专利说明】极光激酶和FLT3激酶调节剂
[0001]本发明涉及抑制或调节激酶(尤其是极光激酶和FLT3激酶)活性的化合物，涉及所述化合物在由激酶介导的疾病状态或病状的治疗或预防中的用途。还提供含有所述化合物的药物组合物、用于其制备的方法以及新型化学中间体。
[0002]发明背景
[0003]蛋白激酶构成结构相关性酶的大家族，所述酶负责细胞内广泛多种信号转导过程的控制(Hardie 和 Hanks (1995) The Protein Kinase Facts Book.1 and
II,Academic Press, San Diego, CA)。激酶可通过其所磷酸化的底物分类为家族(例如，蛋白质-酪氨酸、蛋白质-丝氨酸/苏氨酸、脂质等)。已鉴定了通常对应于这些激酶家族中的每一个的序列基序(例如，Hanks和Hunter, FASEB J.，(1995) 9.576-596 ；Knighton 等,Science, (1991)253, 407-414 ；Hiles 等,Cell, (1992)70, 419-429 ；Kunz等，Cell, (1993)73，585-596 ；Garcia-Bustos 等，EMBO J.，(1994) 13，2352-2361)。
[0004]蛋白激酶可通过其调控机制进行表征。这些机制包括例如自磷酸化、通过其它激酶的转移磷酸化、蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-脂质相互作用，以及蛋白质-多核苷酸相互作用。个别蛋白激酶可通过一种以上机制进行调控。
[0005]激酶通过添加磷酸基至靶蛋白来调控许多不同的细胞过程，包括但不限于增生、分化、细胞凋亡、运动性、转录、翻译以及其它信号传导过程。这些磷酸化事件充当分子打开/关闭开关，其可调节或调控靶蛋白生物学功能。靶蛋白的磷酸化响应于多种胞外信号(激素、神经递质、生长和分化因子等)、细胞周期事件、环境或营养应激等而发生。适当的蛋白激酶在信号传导途径中起到使例如代谢酶、调控蛋白、受体、细胞骨架蛋白、离子通道或离子泵或转录因子(直接或间接)活化或失活的作用。由于蛋白磷酸化的控制缺陷造成的信号失控已被认为与许多疾病相关，包括例如炎症、癌症、过敏/哮喘、免疫系统疾病和病状、中枢神经系统疾病和病状，以及血管发生。
[0006]极光激酶
[0007]迄今已在哺乳动物中发现极光激酶家族的三个成员(Nigg, Nat.Rev.Mol.CellB1l.(2001)2,21-32)。极光A激酶(在文献中也称为极光2)为涉及细胞周期的G2和M期的丝氨酸/苏氨酸激酶，并且是有丝分裂的重要调控剂。据信极光激酶A在有丝分裂关卡控制、染色体动力学和胞质分裂中起到一定作用(Adams等，Trends CellB1l.，(2001) 11，49-54)。激酶位于分裂间期细胞的中心体上、双极性纺锤体的极上或有丝分裂器的中间体中。
[0008]其它两种目前已知的极光激酶为极光B(在文献中也称为极光I)和极光C(在文献中也称为极光3)。极光激酶具有高度同源的催化结构域，但是其N端部分有很大差异(Katayama 等，Cancer Metastasis Rev.(2003) 22(4)，451-64)。
[0009]极光激酶A和B的底物已鉴定为包括驱动蛋白样运动蛋白、纺锤体器蛋白、组蛋白H3蛋白、着丝粒蛋白以及肿瘤抑制蛋白p53。
[0010]据信极光A激酶涉及纺锤体形成并且在早期G2期期间变得局部化于中心体上，在所述中心体处，所述极光A激酶使纺锤体相关蛋白磷酸化(Prigent等，Cell (2003) 114，531-535)。Hirota 等(Cell, (2003) 114，585-598)发现耗尽极光 A 蛋白激酶的细胞不能进入有丝分裂。此外，已发现(Adams，2001)在不同物种中极光A基因的突变或破坏导致有丝分裂异常，包括中心体分开和成熟缺陷、纺锤体畸变以及染色体分离缺陷。
[0011]极光激酶A在大多数正常组织中通常以低水平表达，例外的是具有高比例的分裂细胞的组织，如胸腺和睾丸。然而，已在许多人类癌症中发现升高水平的极光激酶(Giet等，J.Cell.Sc1.(1999) 112，3591 和 Katayama(2003))。此外，极光 A 激酶作图于染色体20ql3区域，在许多人类癌症中常常发现所述区域扩增。
[0012]因此，例如，已在人类乳房、卵巢和胰腺癌症中检测到显著的极光A过表达(参见Zhou 等，Nat.Genet.(1998)20，189-193 ；Tanaka 等，Cancer Res.(1999)59，2041-2044 以及 Han 等，Cancer Res.(2002)62，2890-2896)。
[0013]此外，Isola(American Journal of Pathology (1995) 147，905-911)已报道极光A基因座(20ql3)的扩增与患有淋巴结阴性乳腺癌的患者的不良预后相关。
[0014]在人类膀胱癌中观察到极光A的扩增和/或过表达，并且极光A的扩增与非整倍性和攻击性临床表现相关(参见 Sen 等，J.Natl.Cancer Inst.(2002)94，1320-1329)。
[0015]在超过50% 的结肠直肠癌(参见 Bischoff 等，EMBO J.(1998) 17，3052-3065 和Takahashi 等，Jpn.J.Cancer Res.(2000) 91，1007-1014)、卵巢癌(参见Gritsko 等，Clin.Cancer Res.(2003)9, 1420-1426)以及胃肿瘤(参见 Sakakura 等，British Journal ofCancer (2001) 84，824-831)中检测到极光A的表达升高。
[0016]Tanaka 等，(Cancer Research (1999) 59，2041-2044)发现极光 A 在 94% 的乳房的扩散性管腺癌中过表达的证据。
[0017]已在肾、子宫颈、成神经细胞瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、胰腺和前列腺肿瘤细胞系中发现高水平的极光 A 激酶(Bischoff 等，(1998), EMBO J.(1998) 17, 3052-3065 ；Kimura等，J.B1l.Chem.(1999) 274，7334-7340 ；Zhou 等，Nature Genetics, 20:189-193 (1998)；Li 等，Clin Cancer Res.9(3):991-7 (2003) ?
[0018]Royce等(Cancer.(2004) 100 (I), 12-19)报道已在大约四分之一的原发性乳腺肿瘤中注意到极光2基因(已知为STK15或BTAK)的表达。
[0019]Reichardt 等(Oncol Rep.(2003) 10(5), 1275-9)已报道，通过 PCR 的定量 DNA 分析以搜索神经胶质瘤中的极光扩增揭示具有不同WHO级别(I X II级、I X III级、3 x IV级)的5/16的肿瘤(31%)显示出极光2基因的DNA扩增。假设极光2基因的扩增可能是在人类神经胶质瘤中在肿瘤发生的遗传途径中起到一定作用的非随机遗传改变。
[0020]Hamada 等的结果(Br.J.Haematol.(2003) 121 (3)，439-47)也提不极光 2 是不仅指示疾病活性，还指示非霍奇金氏淋巴瘤的肿瘤发生的有效候选者。由限制此基因的功能造成肿瘤细胞生长迟缓可为非霍奇金氏淋巴瘤的治疗方法。
[0021]在Gritsko 等(Clin Cancer Res.(2003) 9 (4), 1420-6)的研究中，在患有原发性卵巢肿瘤的92个患者中检验极光A的激酶活性和蛋白水平。体外激酶分析揭示了 44例(48% )中的极光A激酶活性升高。在52(57%)个样本中检测到增加的极光A蛋白水平。极光A的高蛋白水平与升高的激酶活性良好相关。
[0022]Li 等(Clin.Cancer Res.2003 Mar ;9 (3): 991-7)获得的结果显示极光 A 基因在胰腺肿瘤和癌细胞系中过表达，并且提示极光A的过表达在胰腺癌症发生中可能起到一定作用。
[0023]类似地，已显示，极光A基因扩增以及相关的其编码的有丝分裂激酶的表达增加与人类膀胱癌中的非整倍性和攻击性临床表现相关。(J.Natl.Cancer Inst.(2002)94(17)，1320-9)。
[0024]若干组的研究(Dutertre和 Prigent, Mol.1nterv.(2003)3(3)，127-30 以及 Anand等，Cancer Cell.(2003) 3 (I)，51-62)提示极光激酶活性的过表达与对一些目前癌症疗法的抗性相关。例如，极光A在小鼠胚胎成纤维细胞中的过表达可减小这些细胞对紫杉烷衍生物的毒性作用的敏感性。因此，极光激酶抑制剂可在已发展出对现有疗法的抗性的患者中存在特定用途。
[0025]在迄今所做工作的基础上，设想极光A激酶的抑制将证明是阻止肿瘤发展的有效手段。
[0026]还已显示，与正常细胞相比，极光B在肿瘤细胞中的表达增加(Adams等，Chromasoma.(2001) 110, 65-74)。一个报道提示极光B的过表达通过组蛋白H3在丝氨酸10处的增加的磷酸化诱导非整倍性，并且提示过表达极光B的细胞形成攻击性更强的肿瘤并且具有较高的形成转移性肿瘤的趋势(Ota等，Cancer Res.(2002)62,5168-5177)。
[0027]在人类细胞中，极光B为纺锤体关卡功能以及中期染色体配对所需要(Adams等 J.Cell B1l.(2 01) 153，865-880 ;Kall1 等,Curr.B1l.(2002) 12, 900-905 以及 Murata-Hori 和 Wang Curr.B1l.(2002) 12, 894-899)。已证明，极光 B 激酶活性的抑制包括染色体配对、纺锤体关卡功能以及胞质分裂(Ditchfield等，J.Cell B1l.(2003)161, 267-280 以及 Hauf 等，J.Cell B1l.(2003)，161，281-294)。因此，在短暂延迟之后，细胞在没有分裂的情况下离开有丝分裂并且具有4N DNA含量，因此所述细胞迅速丧失其增生潜能。
[0028]Harrington等(Nat Med.(2004) 10 (3)，262-7)已证明，极光激酶的抑制剂在体内抑制肿瘤生长并且诱导肿瘤消退。在研究中，极光激酶抑制剂阻滞癌细胞增生，并且还在一个范围的癌细胞系(包括白血病细胞系、结肠直肠细胞系和乳房细胞系)中触发细胞死亡。此外，已显示出用于通过诱导白血病细胞的细胞凋亡来治疗白血病的潜能。VX-680有效杀死来自患者的治疗顽固性原发性急性髓性白血病(AML)细胞(Andrews，Oncogene (2005) 24，5005-5015)。
[0029]Manfredi等(PNAS(2007) 104, 4106-4111)已证明小分子的极光A抑制剂抑制体内肿瘤生长。在研究中，在HCT-116肿瘤携带小鼠和PC-3肿瘤携带瘤小鼠相对于媒介物治疗的小鼠中证明了剂量依赖性肿瘤生长抑制。针对HCT-116细胞异种移植物观察到达84%的肿瘤生长抑制，并且针对PC-3细胞异种移植物观察到达93%的肿瘤生长抑制。
[0030]Mortlock 等(Clin Cancer Res.(2007) 13 (12), 3682-3688)已证明小分子的极光B抑制剂抑制体内肿瘤生长。携带建立的SW620、HCT-116、Colo205、A549、Calu-6或HL-60肿瘤异种移植物的免疫缺陷小鼠经由皮下微泵输注经48h给予小分子抑制剂AZD1152。所有病例中肿瘤生长的抑制在55%至100%范围内，并且在携带HL-60异种移植物的11只动物中的8只中观察到完全肿瘤消退。
[0031]在迄今获得的证据的基础上，很可能认为极光激酶抑制剂应该在阻止肿瘤发展以及治疗癌症上尤其有用，所述癌症如乳房癌、膀胱癌、结肠直肠癌、胰腺癌和卵巢癌、非霍奇金氏淋巴瘤、神经胶质瘤、非子宫内膜状子宫内膜癌、急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、B-细胞淋巴瘤(套细胞)以及急性成淋巴细胞性白血病(ALL)。
[0032]FLT3
[0033]FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)是涉及造血细胞和非造血细胞的增生、分化和细胞凋亡的受体酪氨酸激酶(Scheijen 和 Griffin, Oncogene (2002) 21，3314-3333 以及Reilly, British Journal of Haematology (2002) 116，744-757)。作为天然配体(FL)结合的结果，FLT3受体由于其酪氨酸激酶结构域的活化、受体自磷酸化以及下游信号传导分子的募集而二聚化，所述信号传导分子如PI3K (磷脂酰肌醇3激酶)的p85亚基、PLC-Y (磷脂酶-C Y )、STAT5a(转录的信号转导剂和激活剂5a)，以及SRC家族酪氨酸激酶(Gilliland和 Griffin, Blood (2002) 100 (5)，1532-42 ；Drexler, Leukemia (1996) 10 (4)，588-99 以及Ravandi 等，Clin Cancer Res.(2003) 9 (2)，535-50)。
[0034]通过磷酸化活化这些下游信号传导分子导致FLT3的增生和促存活作用(Gilliland 和 Griffin (2002)以及 Levis 和 Small, Leukemia(2003) 17(9)，1738-52)。
[0035]在大约30 %的患有急性髓细胞性白血病(AML)(通过未成熟的骨髓白血细胞的过量产生导致的白血细胞癌)的患者中已证明了涉及受体的近膜区域中的内部串联重复或通过活化环中D835的点突变造成的FLT3的体细胞突变(Nakao等，Leukemia(1996) 10(12)，1911-8 ;Thiede 等，Blood(2002)99(12)，4326-35 ;Yamamoto等，Blood (2001) 97 (8)，2434-9 ；Abu-Duhier 等，Br.J.Haematol.(2000) 111(1)，190-5 以及Abu-Duhier 等,Br.J.Haematol.(2001) 113 (4), 983-8)。
[0036]近来描述了独立激活FLT3的突变的其它配体，有助于AML的白血病转化。在诊断上所述突变的存在与一些患者的较差预后相关(Jiang等，Blood(2004) 104 (6)，1855-8和Kindler 等，Blood(2005) 105(I)，335-40)。
[0037]我们的较早国际专利申请W02008/139161公开了一类取代的噁唑羧酰胺作为多种激酶(尤其是极光激酶、FLT3激酶和FLT4激酶)的抑制剂。
[0038]W02008/139161的第132页上的实施例M-12描述了化合物2-(1Η_吲哚-4-基)-5- (4-哌嗪-1-基-苯基)-噁唑-4-羧酸酰胺的制备，所述化合物具有以下列出的结构式。
【权利要求】
1.一种具有式(I)的化合物:
以及其盐；其中: R1为氢或CV2烷基；并且 r2、r3和R4为相同或不同的，并且各自选自氢、CV2烷基、氟、氯、CV2烷氧基以及三氟甲基，条件是R2、R3和R4中的至多两个不为氢。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1选自氢和甲基。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中R2选自氢、氟、氯、甲基、乙基以及甲氧基。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R3为氢。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中R4选自氢、氟、甲基以及乙基。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中(i)R1为氢；R2选自甲基、乙基、氟代基、氯代基以及甲氧基；R3为氢；并且R4为氢；或(ii)R1为氢；R2为氢；R3为氢；并且R4为甲基；或(iii)R1为氢；R2为氟代基；R3为氢；并且R4为甲基。
7.根据权利要求1所述的化合物，其选自下表中的化合物实施例1至实施例12以及其盐:
8.根据权利要求7所述的化合物，其选自实施例2、实施例3、实施例5和实施例7。
9.一种药物组合物，其包含如权利要求1至8中任一项所定义的化合物以及药学上可接受的赋形剂。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其适用于医学。
11.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其适用于如癌症的增生性疾病的预防或治疗。
12.如在本文实施方案1.1至1.43,2.1至2.30,3.1至3.2,4.1至4.4以及5.1至5.6中任一项所定 义的发明。
【文档编号】C07D413/14GK104169277SQ201380013544
【公开日】2014年11月26日 申请日期:2013年2月4日 优先权日:2012年2月6日
【发明者】J·C·瑞德尔 申请人:赛勒姆公司