片段缩合制备特利加压素的方法
【专利摘要】本发明公开了一种特利加压素的片段缩合方法，固相制备特利加压素的全保护第一肽片段序列树脂，环化形成二硫键，然后将环化的全保护第一肽片段序列从树脂上裂解下来；液相中环化的全保护第一肽片段序列与H-Gly-NH2缩合得到环化的全保护第二肽片段序列；液相或者固相制备特利加压素的第三肽片段序列；环化的全保护第二肽片段序列脱氨基端保护后与第三肽片段序列缩合，然后脱去所有保护基得到特利加压素粗品，纯化转盐得到产品醋酸特利加压素；第一肽片段序列为特利加压素序列中的第4-11位氨基酸，第二肽片段序列为特利加压素序列中的第4-12位氨基酸，第三肽片段序列为特利加压素序列中的第1-3位氨基酸。
【专利说明】片段缩合制备特利加压素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及制药领域，具体地说，涉及一种醋酸特利加压素的制备方法。
【背景技术】
[0002] 特利加压素的化学名称为三甘氨酰赖氨酸加压素，结构式如下：
[0003] H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-GIy-NH?
[0004] 它是一种新型的人工合成的长效血管加压素制剂，主要用于胃肠道和泌尿生殖 系统的出血，如食道静脉曲张、胃和十二指肠溃疡、功能性及其它原因引起的子宫出血、生 产和/或流产等等引起的出血的治疗，与血管加压素相比，它作用持久，不引起危险性并发 症。
[0005] 目前特利加压素的制备方法主要以固相缩合为主。例如专利CN1865282B和 CN101693738A 和 201310214366. 4,均以 Rink Amide 或者 Sieber 树脂为起始原料，以 Fmoc 保护的氨基酸为单体，以HBTU/H0Bt/DIEA、DIC/H0Bt或PyBOP/HOBt/DIEA为缩合剂，依次逐 个接上氨基酸，裂解获得还原型粗品，氧化获得特利加压素粗品，最后HPLC进行分离纯化， 获得目标产物。
[0006] 以上方法有如下一些问题：a)固相合成随着肽链的增长，偶联越来越困难，尤其 是最后几个氨基酸的缩合；最近另一申请专利《一种特利加压素及其杂质的超高效液相色 谱检测方法》（专利申请号 ：201310673625.X)指出逐个固相合成会出现多个氨基末端的缺 陷肽。b)使用Rink Amide或者Sieber树脂羧基端氨基酸取代值不能太高，合成不经济； 并且两种树脂相对于2-氯-三苯甲基氯树脂价格不菲，尤其后者。c)液相氧化二硫键反应 时间较长，产生较多废液。所以本领域技术人员仍然期待以高产品收率获得具有良好品质 的广品。
【发明内容】
[0007] 本发明所要解决的技术问题是针对现有制备方法收率低，而且产品纯化困难，不 易得到高纯度的特利加压素的缺点，提供一种片段缩合制备特利加压素的方法，提高了产 率和纯度；由于采用2-氯-三苯甲基氯树脂和固相环化使得成本降低，利于大规模生产。
[0008] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0009]方案一：
[0010] 一种特利加压素的片段缩合方法，固相制备特利加压素的全保护第一肽片段序列 树脂，在固相中使用I2氧化两个半胱氨酸形成二硫键，然后将环化的全保护第一肽片段序 列从树脂上裂解下来；液相中环化的全保护第一肽片段序列与H-Gly-NH2缩合得到环化的 全保护第二肽片段序列；液相或者固相制备特利加压素的第三肽片段序列；环化的全保护 第二肽片段序列脱氨基端保护后与第三肽片段序列缩合，然后脱去侧链保护得到特利加压 素粗品，经纯化转盐得到产品醋酸特利加压素；
[0011] 第一肽片段序列为特利加压素序列中的第4-11位氨基酸，
[0012] 第二肽片段序列为特利加压素序列中的第4-12位氨基酸，
[0013] 第三肽片段序列为特利加压素序列中的第1-3位氨基酸。
[0014] 上述特利加压素的片段缩合方法具体包括如下步骤：
[0015] a.固相制备特利加压素的全保护第一肽片段序列树脂；
[0016] 所述的全保护第一肽片段序列为：
[0017] Fmoc-Cys(Rl)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Rl)-Pro-Lys(Boc)-0H,
[0018] 其中，Rl 为 Trt 或者 Acm ;
[0019] I2氧化全保护第一肽片段序列树脂，使得第4和第9位的半胱氨酸形成二硫键， 得到环化的全保护第一肽片段序列树脂；将环化的全保护第一肽片段序列从固相树脂上裂 解；
[0020] b.将步骤a得到的脱除了固相树脂的环化的全保护第一肽片段序列与H-Gly-NH2 缩合得到环化的全保护第二肽片段序列；
[0021] c.液相或者固相合成特利加压素的第三肽片段序列；
[0022] 所述的第三肽片段序列为：R2-Gly-Gly-Gly_0H，其中R2为Boc或者Fmoc ;
[0023] d.脱除步骤b得到的环化的全保护第二肽片段序列的氨基端保护基，然后与步骤 c得到的第三肽片段序列缩合得到全保护特利加压素；
[0024] e.将全保护特利加压素裂解脱去所有保护基得到特利加压素粗品；
[0025] f.特利加压素粗品经纯化转盐得到醋酸特利加压素。
[0026] 步骤a中，全保护第一肽片段序列树脂是由氨基酸依次偶联在固相树脂上获得 的，其中，所用的固相载体为酸敏感树脂，优选为2-氯-三苯甲基氯树脂；
[0027] 固相制备特利加压素的全保护第一肽片段序列树脂的过程中，所使用的氨基脱保 护试剂为20 %哌啶的DMF溶液（V/V)、或者1 % DBU的DMF溶液（V/V);优选20 %哌啶的DMF 溶液（V/V);
[0028] 所用的偶联剂为HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合、或者DIC与HOBt按 摩尔比1:1的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合。优选HBTU与HOBt 与DIEA按摩尔比1:1:2的组合；待偶联的氨基酸与HOBt的摩尔比是1:1。
[0029] 使用的二硫键氧化剂为I2，二硫键与I2摩尔比为1:5?10,溶剂为DMF或者DCM。 优选二硫键与I 2摩尔比为1:6。反应时间优选为2小时。
[0030] 使用的裂解剂为体积百分含量为0. 5?1 %的TFA的DCM溶液、体积百分含量为 20 %的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1:2:7的混合物。优选体积百 分含量为〇. 5?1 % TFA的DCM溶液。
[0031] 步骤b中，缩合反应使用的缩合剂为HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组 合、或者HBTU与HOAt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合、或者EDC与HOBt按摩尔比1:1的组 合、或者PyBOP与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合，优选HBTU与HOBt与DIEA按摩尔 比1:1:2的组合；缩合反应的溶剂为DMF、DCM、NMP和DMSO中的任意一种或几种的组合，优 选 DMF。
[0032] 步骤c中，
[0033] 液相合成 Boc-Gly-Gly-Gly-OH 的方法是，首先 Boc-Gly-OH 与 H-Gly-OMe 反应得 到 Boc-Gly-Gly-OMe，脱去 Boc 保护后与 Boc-Gly-OH 反应得到 Boc-Gly-Gly-Gly-OMe，皂化 得到 Boc-Gly-Gly-Gly-OH ;
[0034] 液相合成 Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH 的方法是，首先 Fmoc-Gly-OH 与 H-Gly-OtBu 反应得到Fmoc-Gly-Gly-OtBu,脱去Fmoc保护后与Fmoc-Gly-OH反应得到 Fmoc-Gly-Gly-Gly-OtBu,然后 TFA:DCM 按体积比 1:1 反应，得到 Fmoc-Gly-Gly-Gly-〇H。
[0035] 固相合成R2-Gly-Gly-Gly-0H的方法是，Fmoc-Gly-OH与2-氯-三苯甲基氯树脂 反应得到肽树脂，脱去Fmoc保护后与Fmoc-Gly-OH反应得到二肽树脂，再脱去Fmoc保护后 与R2-Gly-0H反应得到三肽树脂；用裂解剂将R2-Gly-Gly-Gly-0H从固相树脂上裂解，得到 R2-Gly-Gly-Gly-0H，其中，所述的裂解剂为体积百分含量为0. 5?1%的TFA的DCM溶液、 体积百分含量为20 %的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1:2:7的混合 物。
[0036] 步骤d中，氨基脱保护为16 %的哌啶的DMF溶液，或者体积百分含量为1 %的DBU 的DMF溶液；缩合反应使用的缩合剂为HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合、或者 HBTU与HOAt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合、或者EDC与HOBt按摩尔比1:1的组合、或者 PyBOP与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合，优选HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2 的组合；缩合反应的溶剂为DMF、DCM、NMP和DMSO中的任意一种或几种的组合，优选DMF。
[0037] 步骤e中，全保护特利加压素裂解使用的裂解液为TFA与H2O按体积比95:5的混 合溶液、或者TFA与EDT与TIS与PhoH与H 2O按体积比80:5:5:5:5的混合溶液、或者TFA 与EDT与TIS与H2O按体积比92. 5:2. 5:2. 5:2. 5的混合溶液。优选TFA与EDT与TIS与 H2O按体积比92. 5:2. 5:2. 5:2. 5的混合溶液。
[0038] 步骤f中，纯化为反相高效液相色谱纯化换盐，即色谱柱为C18柱；流动相为醋酸 水溶液和乙腈水溶液。
[0039] 方案二：
[0040] 一种特利加压素的片段缩合方法，固相制备特利加压素的全保护第四肽片段序列 树脂，在固相中使用I2氧化两个半胱氨酸形成二硫键，然后将环化的全保护第四肽片段序 列从树脂上裂解下来；液相中环化的全保护第四肽片段序列与H-Gly-NH2缩合，然后脱去侧 链保护得到特利加压素粗品，经纯化转盐得到产品醋酸特利加压素；
[0041] 第四肽片段序列为特利加压素序列中的第1-11位氨基酸。
[0042] 上述特利加压素的片段缩合方法具体包括如下步骤：
[0043] a.固相制备特利加压素的全保护第四肽片段序列树脂，
[0044] 所述的第四肽片段序列为：
[0045] R2-Gly-Gly-Gly-Cys(Rl)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Rl)-Pro-Lys (Boc) -0H，其中 Rl 为 Trt 或者为 Acm，R2 为 Boc 或者 Fmoc ;
[0046] I2氧化全保护第四肽片段序列树脂，使得第4和第9位的半胱氨酸形成二硫键， 得到环化的全保护第四肽片段序列树脂；将环化的全保护第四肽片段序列从固相树脂上裂 解；
[0047] b.将步骤a得到的脱除了固相树脂的环化的全保护第四肽片段序列与H-Gly-NH2 缩合得到全保护特利加压素；
[0048] c.将全保护特利加压素裂解脱去所有保护基得到特利加压素粗品；
[0049] d.特利加压素粗品经纯化转盐得到醋酸特利加压素。
[0050] 步骤a中，全保护第四肽片段序列树脂是由氨基酸依次偶联在固相树脂上获得 的，其中，所用的固相载体为酸敏感树脂，优选为2-氯-三苯甲基氯树脂；
[0051] 固相制备特利加压素的全保护第四肽片段序列树脂的过程中，所使用的氨基脱保 护试剂为20 %哌啶的DMF溶液（V/V)、或者1 % DBU的DMF溶液（V/V);优选20 %哌啶的DMF 溶液（V/V);
[0052] 所用的偶联剂为HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合、或者DIC与HOBt按 摩尔比1:1的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合。优选HBTU与HOBt 与DIEA按摩尔比1:1:2的组合；待偶联的氨基酸与HOBt的摩尔比是1:1。
[0053] 使用的二硫键氧化剂为I2，二硫键与I2摩尔比为1:5?10,溶剂为DMF或者DCM。 优选二硫键与I 2摩尔比为1:6。反应时间优选为2小时。
[0054] 使用的裂解剂为体积百分含量为0. 5?1 %的TFA的DCM溶液、体积百分含量为 20 %的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1:2:7的混合物。优选体积百 分含量为〇. 5?1 %的TFA的DCM溶液。
[0055] 步骤b中，缩合反应使用的缩合剂为HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组 合、或者HBTU与HOAt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合、或者EDC与HOBt按摩尔比1:1的组 合、或者PyBOP与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合，优选HBTU与HOBt与DIEA按摩尔 比1:1:2的组合；缩合反应的溶剂为DMF、DCM、NMP和DMSO中的任意一种或几种的组合，优 选DMF
[0056] 步骤c中，全保护特利加压素裂解使用的裂解液为TFA与H2O按体积比95:5的混 合溶液、或者TFA与EDT与TIS与PhOH与H 2O按体积比80:5:5:5:5的混合溶液、或者TFA 与EDT与TIS与H2O按体积比92. 5:2. 5:2. 5:2. 5的混合溶液。优选TFA与EDT与TIS与 H2O按体积比92. 5:2. 5:2. 5:2. 5的混合溶液。
[0057] 步骤d中，纯化为反相高效液相色谱纯化换盐，即色谱柱为C18柱；流动相为醋酸 水溶液和乙腈水溶液。
[0058] 有益效果：本发明相对现有技术具有以下优点：
[0059] 1、本发明利用高荷载量（>0. 8mmol/g树脂）的树脂为起始原料，先采用标准的固 相肽合成（SPPS)技术合成选定结构的高纯度肽片段，再采用液相缩合技术使肽片段缩合， 从而获得商纯度（〉99 % )、商收率（MO % )的目标肤；
[0060] 2、相比较固相合成特利加压素的工艺，本发明：
[0061] a. 2-氯-三苯甲基氯树脂重复使用方法简便，相比Rink Amide树脂价格低廉；每 个片段可使用高荷载量（>〇.8mmol/g树脂）的固相载体，相比较Rink Amide树脂荷载量限 制（0. 25-0. 4mmol/g树脂），物料通量增加；
[0062] b.氨基酸及试剂投量为1. 5-2倍量，远低于固相肽合成常规的3-4倍甚至5倍过 量，节约物料成本；
[0063] c.固相环化利用固相载体假稀释作用，使得环化产率提高，减少反应时间。
[0064] 3、采用超酸敏感型树脂合成的10个或10个左右氨基酸的侧链保护肽片段序列纯 度非常高，不必用色谱技术纯化，只需要进行沉淀、研磨即可使用；片段液相偶合，其杂质主 要为未偶合的片段，而不是缺少一个或数个氨基酸的缺陷肽，在最终高效液相色谱纯化中 容易得多，从而减少制备次数，降低了特利加压素的制备成本，有利于实现规模化、产业化 生产。
【专利附图】
【附图说明】
[0065] 图1为本发明制备的特利加压素粗肽分析色谱图；
[0066] 图2为本发明制备的特利加压素纯肽分析色谱图；
[0067] 图3为本发明制备的特利加压素纯肽质谱图。
【具体实施方式】
[0068] 根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本 发明。
[0069] 本发明中，合成特利加压素所涉及的目的肽及中间体的各个肽片段的氨基酸序列 见表1。本发明中肽片段组合方式见表2。本发明所涉及氨基酸的缩写见表3。本发明中所 使用的物料缩写的含义见表4。
[0070] 表1特利加压素相应的编码氨基酸序列
[0071]
【权利要求】
1. 一种特利加压素的片段缩合方法，其特征在于，固相制备特利加压素的全保护第一 肽片段序列树脂，在固相中使用12氧化两个半胱氨酸形成二硫键，然后将环化的全保护第 一肽片段序列从树脂上裂解下来；液相中环化的全保护第一肽片段序列与H-Gly-NH2缩合 得到环化的全保护第二肽片段序列；液相或者固相制备特利加压素的第三肽片段序列；环 化的全保护第二肽片段序列脱氨基端保护后与第三肽片段序列缩合，然后脱去所有保护基 得到特利加压素粗品，纯化转盐得到产品醋酸特利加压素； 第一肽片段序列为特利加压素序列中的第4-11位氨基酸， 第二肽片段序列为特利加压素序列中的第4-12位氨基酸， 第三肽片段序列为特利加压素序列中的第1-3位氨基酸。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，它包括如下步骤： a. 固相制备特利加压素的全保护第一肽片段序列树脂； 所述的全保护第一肽片段序列为： Fmoc-Cys(Rl)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Rl)-Pr〇-Lys(Boc)-OH, 其中，R1为Trt或者Acm; 使用I2氧化全保护第一肽片段序列树脂，使得第4和第9位的半胱氨酸形成二硫键， 得到环化的全保护第一肽片段序列树脂；将环化的全保护第一肽片段序列从固相树脂上裂 解； b. 将步骤a得到的环化的全保护第一肽片段序列与H-Gly_NH2缩合得到环化的全保护 第二肽片段序列； c. 液相或者固相合成特利加压素的第三肽片段序列， 所述的第三肽片段序列为：R2-Gly-Gly-Gly-0H，其中R2为Boc或者Fmoc ; d. 脱除步骤b得到的环化的全保护第二肽片段序列的氨基端保护基，然后与步骤c得 到的第三肽片段序列缩合得到全保护特利加压素； e. 将全保护特利加压素裂解脱去所有保护基得到特利加压素粗品； f. 特利加压素粗品经纯化转盐得到醋酸特利加压素。
3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤a中，全保护第一肽片段序列树脂 是由氨基酸依次偶联在固相树脂上获得的，其中，所述的固相树脂为2-氯-三苯甲基氯树 脂； 固相制备特利加压素全保护第一肽片段序列树脂的过程中，所使用的氨基脱保护试剂 为体积百分含量为20%的哌啶的DMF溶液、或者体积百分含量为1 %的DBU的DMF溶液。 所用的偶联剂为HBTU与HOBt与DIEA的组合、或者DIC与HOBt的组合、或者PyBOP与 HOBt与DIEA的组合。 使用的二硫键氧化剂为12，二硫键与12摩尔比为1:5?10,溶剂为DMF或者DCM。 使用的裂解剂为体积百分含量为〇. 5?1%的TFA的DCM溶液、体积百分含量为20% 的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1:2:7的混合物。
4. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤b中，缩合反应使用的缩合剂为HBTU 与HOBt与DIEA的组合、或者HBTU与HOAt与DIEA的组合、或者EDC与HOBt的组合、或者 PyBOP与HOBt与DIEA的组合；缩合反应的溶剂为DMF、DCM、NMP和DMS0中的任意一种或几 种的组合。
5. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤c中， 液相合成Boc-Gly-Gly-Gly-OH的方法是，首先Boc-Gly-OH与H-Gly-OMe反应得到 Boc-Gly-Gly-OMe，脱去 Boc 保护后与 Boc-Gly-OH 反应得到 Boc-Gly-Gly-Gly-OMe，皂化得 到 Boc-Gly-Gly-Gly-OH ; 液相合成Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH的方法是，首先Fmoc-Gly-OH与H-Gly-〇tBu反应得到 Fmoc-Gly-Gly-〇tBu，脱去 Fmoc 保护后与 Fmoc-Gly-〇H 反应得到 Fmoc-Gly-Gly-Gly-〇tBu， 然后 TFA:DCM 按体积比 1:1 反应，得到 Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH。 固相合成R2-Gly-Gly-Gly-0H的方法是，Fmoc-Gly-OH与2-氯-三苯甲基氯树脂反应 得到肽树脂，脱去Fmoc保护后与Fmoc-Gly-OH反应得到二肽树脂，再脱去Fmoc保护后与 R2-Gly-0H反应得到三肽树脂；用裂解剂将R2-Gly-Gly-Gly-0H从固相树脂上裂解，得到 R2-Gly-Gly-Gly-0H，其中，所述的裂解剂为体积百分含量为0. 5?1%的TFA的DCM溶液、 体积百分含量为20 %的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1:2:7的混合 物。
6. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤d中，氨基脱保护为体积百分含量 16 %的哌啶的DMF溶液，或者体积百分含量为1 %的DBU的DMF溶液；缩合反应使用的缩合 剂为HBTU与HOBt与DIEA的组合、或者HBTU与HOAt与DIEA的组合、或者EDC与HOBt的组 合、或者PyBOP与HOBt与DIEA的组合；缩合反应使用的反应溶剂为DMF、DCM、NMP和DMS0 中的任意一种或几种的组合。
7. -种特利加压素的片段缩合方法，其特征在于，固相制备特利加压素的全保护第四 肽片段序列树脂，在固相中使用12氧化两个半胱氨酸形成二硫键，然后将环化的全保护第 四肽片段序列从树脂上裂解下来；液相中环化的全保护第四肽片段序列与H-Gly-NH2缩合， 然后脱去所有保护基得到特利加压素粗品，经纯化转盐得到产品醋酸特利加压素； 第四肽片段序列为特利加压素序列中的第1-11位氨基酸。
8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，它包括如下步骤： a. 固相制备特利加压素的全保护第四肽片段序列树脂， 所述的第四肽片段序列为： R2-Gly-Gly-Gly-Cys(Rl)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn (Trt)-Cys(Rl)-Pr〇-Lys(Boc )-0H，其中R1为Trt或者为Acm，R2为Boc或者Fmoc ; 使用I2氧化全保护第四肽片段序列树脂，使得第4和第9位的半胱氨酸形成二硫键， 得到环化的全保护第四肽片段序列树脂；将环化的全保护第四肽片段序列从固相树脂上裂 解； b. 将步骤a得到的脱除了固相树脂的环化的全保护第四肽片段序列与H-Gly_NH2缩合 得到全保护的特利加压素； c. 将全保护的特利加压素裂解脱去全部保护基得到特利加压素粗品； d. 特利加压素粗品经纯化转盐得到醋酸特利加压素。
9. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤a中，全保护第四肽片段序列树脂 是由氨基酸依次偶联在固相树脂上获得的，其中，所述的固相树脂为2-氯-三苯甲基氯树 脂； 固相制备特利加压素的全保护第四肽片段序列树脂的过程中，所使用的氨基脱保护试 剂为体积百分含量为20%的哌啶的DMF溶液、或者体积百分含量为1 %的DBU的DMF溶液。 所用的偶联剂为HBTU与HOBt与DIEA的组合、或者DIC与HOBt的组合、或者PyBOP与 HOBt与DIEA的组合。 使用的二硫键氧化剂为12，二硫键与12摩尔比为1:5?10,溶剂为DMF或者DCM。 使用的裂解剂为体积百分含量为〇. 5?1%的TFA的DCM溶液、体积百分含量为20% 的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1:2:7的混合物。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤b中，缩合反应使用的缩合剂为 HBTU与HOBt与DIEA的组合、或者HBTU与HOAt与DIEA的组合、或者EDC与HOBt的组合、 或者PyBOP与HOBt与DIEA的组合；缩合反应的溶剂为DMF、DCM、NMP和DMS0中的任意一 种或几种的组合。
【文档编号】C07K7/16GK104371008SQ201410554759
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年10月15日 优先权日:2014年10月15日
【发明者】常民, 王锐, 彭雅丽, 薛宏祥 申请人:兰州大学