一种纯化特利加压素的方法
【专利摘要】本发明涉及一种纯化特利加压素的方法，其特征包括以下步骤：步骤1，将特利加压素粗品用水溶解，调节pH到3-4；步骤2，使用含有表面活性剂的离子对流动相A冲洗C18反相填料柱；步骤3，将步骤1溶液载入C18反相填料中；步骤4，梯度程序为：洗脱梯度的初始状态流动相B为5%，保持5min，然后60min内将流动相B比例增至30%，收集部分目的峰洗脱馏分；步骤5，纳滤膜脱盐后，经过冷冻干燥得到纯品特利加压素。
【专利说明】一种纯化特利加压素的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种多肽类药物一特利加压素的纯化方法，是一种具有长效血管加压素类似物的纯化方法。
【背景技术】
[0002]特利加压素,英名为:Terlipressin,为一种环状多肽,结构式如下:
【权利要求】
1.一种纯化特利加压素的方法，该方法使用C18反相填料，流动相采用含有表面活性剂的离子对试剂，可使成品特利加压素中的杂质[PAsp8]-特利加压素含量降低到0.1 %以下，其特征在于，所述方法包括以下步骤: 步骤I，将特利加压素粗品用水溶解，调节PH到3-4 ； 步骤2，使用含有表面活性剂的离子对流动相A冲洗C18反相填料柱； 步骤3，将步骤I溶液载入C18反相填料中； 步骤4，梯度程序为:洗脱梯度的初始状态流动相B为5 %，保持5 min，然后60 min内将流动相B比例增至30 %，收集部分目的峰洗脱馏分； 步骤5，纳滤膜脱盐后，经过冷冻干燥得到纯品特利加压素； 其中，C18反相填料柱为(10 μπι,50 mm X 250 mm)； 流动相A:5 mmol/L磷酸二氢铵+25 mmol/L表面活性剂(使用磷酸调pH:3_4)； 流动相B:乙腈； 梯度程序为:初始状态流动相B为5 %，保持5 min，然后60 min内将流动相B比例增至30 %,收集部分目的 峰洗脱懼分；流速为:80 mL/min ;检测波长为220 nm。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是:包括以下步骤: 步骤1，样品处理: 将1.00 g特利加压素粗肽溶解于50-100 mL纯净水中，使用磷酸调节pH为3.5±0.2 ； 步骤2，平衡 使用含有表面活性剂的离子对流动相A冲洗C18反相填料柱5 min ； 步骤3，上样 将样品溶液载入制备柱中； 步骤4，洗脱 梯度程序为:梯度的初始状态流动相B为5 %，保持5 min，然后60 min内将流动相B比例增至30 %;流速为:80 mL/min ;检测波长为220 nm ;收集目的峰纯度大于99.80 %的洗脱馏分，中控检测:用C18 (5 um, 150X3.0mm)色谱柱；以硫酸铵缓冲液(取硫酸铵1.32 g，加水2000 mL，加硫酸0.4 mL) —甲醇(1440:320)为流动相A，硫酸铵缓冲液一甲醇(550:240)为流动相B ;流速为0.6ml/min ;柱温为30 °C;检测波长为210 nm ;洗脱梯度的初始状态为15 %流动相B，保持35 min，然后在20 min内将流动相B升至100 %，保持5 min，然后在I min内回到初始状态，保持19 min ； 步骤5，脱盐 将洗脱馏分经过纳滤膜脱盐，收集截留液； 步骤6,冻干 将截留液经过冻干得到纯品特利加压素。
3.如权利要求1所述的表面活性剂，其特性在于该表面活性剂为:己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、癸烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠的中的一种，优选癸烷磺酸钠。
【文档编号】C07K7/16GK103992391SQ201410051178
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2014年2月14日 优先权日:2014年2月14日
【发明者】路杨, 杨东晖, 周俊, 周亮 申请人:杭州诺泰制药技术有限公司