一种异丙醇-盐双水相体系分离纯化栀子苷的方法
【专利摘要】本发明涉及一种高收率及纯度的栀子苷提取方法。本发明提供高效温和双水相技术分离纯化栀子苷的方法，包括下述步骤：用栀子果原料生产栀子黄废液，将其经异丙醇-盐双水相体系萃取分离、浓缩干燥得栀子苷结晶初品，再经重结晶后得纯度为98.5%以上的栀子苷结晶。本发明从药食两用药材资源中分离纯化出高纯度的栀子苷天然产物。该方法操作简便，绿色高效，经济省时、易于放大。它不仅拓宽了萃取栀子苷的双水相体系种类，提高了栀子苷分离纯化的效率，而且该工艺也可应用于其他色素的提取和生产。
【专利说明】—种异丙醇-盐双水相体系分离纯化栀子苷的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于天然产物活性成分提取的【技术领域】，具体涉及一种从桅子果中高收率及纯度提取桅子苷的方法。
【背景技术】
[0002]桅子苷是桅子果实中一种有效成分，具有抗氧化、抗炎等作用，在医药、保健、生物检测等方面有着广泛应用。桅子苷为环烯醚萜苷类化合物，异名京尼平苷。在食品工业主要可以制成天然食用着色剂桅子蓝和桅子红。在我国部2760 — 2007《食品添加剂使用卫生标准》中列出的56种色素中蓝色素仅有桅子蓝色素和藻青素(即藻蓝蛋白色素)两种。目前，天然蓝色素在国内外市场上均供不应求，因此积极开发高效提取桅子苷技术，必将具有极大的现实意义和可观的市场前景。关于桅子苷的提取在我国已有专利报道，但这些专利的方法大多使用大孔吸附树脂法制备桅子苷。如专利(^1939458八采用大孔吸附制备桅子提取物，由于大孔吸附树脂内孔残存惰性溶剂高，预处理难度大，解吸不充分，影响分离效果，树脂再生困难，生产成本增加。并且同一生产企业生产的同一型号树脂，各批之间比表面积和功能基团含量差别大，在分离纯化中重现性差，不利于连续化生产。双水相体系(八丁？幻以其具有操作方便，分离效率高，对分离物质零破坏等诸多特性，被广泛应用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品分离和提取。虽然已有文献报道利用乙醇/磷酸氢二钾双水相体系进行桅子苷萃取的研究，但是得到的桅子苷纯度只有62.12%，收率为96.32%。影响双水相体系萃取效率的因素主要有溶剂种类、盐的种类以及溶剂和盐的质量比。即使同一种双水相体系萃取不同物质时，由于萃取物的结构和性质对溶剂溶解能力的影响，其体系中的溶剂和盐的质量比也有差异。异丙醇具有价廉、低毒、粘度较小等优势，目前利用异丙醇作萃取剂与无机盐形成双水相体系分离纯化桅子苷尚未见报道。为此，我们通过对异丙醇与钾盐、钠盐和铵盐的双水相体系的稳定性以及对体系中的醇盐比和邱值进行研究，建立分离纯化桅子苷的异丙醇/盐双水相新体系。该方法操作简便，绿色高效，经济省时、易于放大。它不仅拓宽了萃取桅子苷的双水相体系种类，提高了桅子苷分离纯化的效率，而且该工艺也可应用于其他色素的提取和生产。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种利用双水相萃取技术高收率及纯度提取桅子苷的方法。利用桅子果原料生产桅子黄废液，将其经异丙醇-盐双水相体系萃取分离、浓缩干燥得桅子苷结晶初品，再经重结晶后，得高纯度桅子苷晶体。
[0004]所述的一种分离纯化桅子苷的方法，其特征在于:室温下配制异丙醇与盐双水相体系并绘制相图，根据成相稳定性确定适宜的双水相体系为异丙醇/盐双水相体系。
[0005]所述的一种分离纯化桅子苷的方法，其特征在于:绘制双水相体系相图所用的盐类为钾盐、钠盐或铵盐。所述钾盐为；钠盐为；氨盐为順4?:1、(順0 2304、琴⑶3等。
[0006]所述的一种分离纯化桅子苷的方法，其特征在于:室温下配制异丙醇与钠盐双水相体系，将桅子黄废液加入到该双水相体系，在10?50°C，300r/min条件下恒温磁力搅拌30?60min,同时调节pH,使桅子苷富集，静置60?10min,经1000?2000rpm离心20?40min,分离出桅子苷富集相,在-0.04?-0.09MPa, 20?90°C条件下经真空旋转浓缩干燥得桅子苷结晶粗品。用有机溶剂进行重结晶，得到高纯度的桅子苷晶体。
[0007]所述的一种分离纯化桅子苷的方法，其特征在于所述异丙醇与钠盐双水相体系具体可为异丙醇与碳酸钠，所述碳酸钠与异丙醇质量百分比可为5%?30%，体系pH可为9?12。
[0008]所述的一种分离纯化桅子苷的方法，其特征在于所述重结晶的溶剂具体可为丙酮、乙酸乙酯或石油醚中的任意一种，所述重结晶溶剂的体积为桅子苷初品质量的4?10倍。
[0009]本发明利用异丙醇-盐双水相技术分离纯化桅子黄废液，经重结晶以高收率得到高纯度桅子苷晶体。该方法操作简便，绿色高效，经济省时、易于放大。它不仅拓宽了萃取桅子苷的双水相体系种类，提高了桅子苷分离纯化的效率，而且该工艺也可应用于其他色素的提取和生产。本发明相对于现有技术中的双水相技术分离纯化桅子黄废液，取得了如下效果:
1.本发明开发出了一种异丙醇一盐双水相技术分离纯化桅子黄废液，具体为异丙醇一碳酸钠双水相体系，现有技术中没有相关报导；
2.在本发明条件下，能够以纯度达到98.5%的晶体、收率最高为98.2%获得目标产品桅子苷，相比于现有技术产生了预料不到的技术效果。
【具体实施方式】
[0010]下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。
[0011]下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0012]实施例1
室温下按碳酸钠与异丙醇质量百分比10%配制双水相体系20mL，将浓缩的桅子黄废液5mL加入到该双水相体系,恒温磁力搅拌(1(TC, 300r/min)40min,同时调节pH=9,使桅子苷富集，静置80min,经1500rpm离心30min,分离出桅子苷富集相，在-0.06MPa, 20°C条件下经真空旋转浓缩干燥得桅子苷结晶粗品。用8倍体积的乙酸乙酯进行重结晶得到桅子苷晶体。测定桅子苷的纯度为98.5%，产品收率达到98.2%。
[0013]实施例2
室温下按碳酸钠与异丙醇质量百分比30%配制双水相体系20mL，将浓缩的桅子黄废液5mL加入到该双水相体系,恒温磁力搅拌(35°C, 300r/min) 30min,同时调节pH=9,使桅子苷富集，静置60min,经100rpm离心20min,分离出桅子苷富集相,在_0.04MPa, 50°C条件下经真空旋转浓缩干燥得桅子苷结晶粗品。用4倍体积的石油醚进行重结晶得到桅子苷晶体。测定桅子苷的纯度为96.7%，产品收率达到96.6%。
[0014]实施例3
室温下按碳酸钠与异丙醇质量百分比30%配制双水相体系20mL，将浓缩的桅子黄废液51111加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌(501^ ,30017111111) 60111111,同时调节邱二12，使桅子苷富集，静置100111111，经2000印111离心40111111，分离出桅子苷富集相，在-0.0蘭?3，901条件下经真空旋转浓缩干燥得桅子苷结晶粗品。用10倍体积的丙酮进行重结晶得到桅子苷晶体。测定桅子苷的纯度为96.9%，产品收率达到95.4%。
[0015] 实施例4
室温下按磷酸氢二钾与异丙醇质量百分比10%配制双水相体系200匕将浓缩的桅子黄废液51111加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌(501^，3001-/111111)60111111,同时调节？诉9，使桅子苷富集，静置100111111，经2000印111离心40111111，分离出桅子苷富集相，在-0.0蘭?3，901条件下经真空旋转浓缩干燥得桅子苷结晶粗品。用10倍体积的丙酮进行重结晶得到桅子苷晶体。测定桅子苷的纯度为93.6%，产品收率达到95.5%。
【权利要求】
1.一种异丙醇-盐双水相体系分离纯化桅子苷的方法，其特征在于利用桅子果原料生产桅子黄废液，将其经异丙醇-盐双水相体系萃取分离、浓缩干燥得桅子苷初品，再经有机溶剂重结晶后得高纯度桅子苷结晶。
2.根据权利要求1所述分离纯化桅子苷的方法，其特征在于包括以下具体步骤:室温下配制异丙醇-盐双水相体系，将桅子黄废液加入到该双水相体系，在10?50°C，300r/min条件下恒温磁力搅拌30?60min,同时调节pH=9?12,使桅子苷富集,静置60?10min,经1000?2000rpm离心20?40min，分离出桅子苷富集相，在-0.04?-0.09MPa, 20?90°C条件下经真空旋转浓缩干燥得桅子苷结晶粗品，用有机溶剂进行重结晶，得到高纯度的桅子苷晶体。
3.根据权利要求1或2所述的分离纯化桅子苷的方法，其特征在于:所述有机溶剂为乙酸乙酯、丙酮或石油醚的一种或几种的混合物。
4.根据权利要求书I或2所述分离纯化桅子苷的方法，其特征在于:所述异丙醇-盐双水相体系盐类为钾盐、钠盐或铵盐。
5.根据权利要求书4所述分离纯化桅子苷的方法，其特征在于:所述盐类中钾盐为K2HPO4, K2CO3> KCl ;钠盐为 Na2C03、NaCUNa2SO4 ;铵盐为 NH4C1、(NH4) 2SO4、NH4HCO3。
6.根据权利要求5所述分离纯化桅子苷的方法，其特征在于:所述盐类进一步优选为碳酸钠。
7.根据权利要求书6所述分离纯化桅子苷的方法，其特征在于:所述异丙醇-盐双水相体系为异丙醇-碳酸钠体系，其中碳酸钠与异丙醇的质量百分比为5%?30%，体系pH为9 ?12。
8.根据权利要求书3所述分离纯化桅子苷的方法，其特征在于:所述重结晶溶剂溶剂为乙酸乙酯,加入量为桅子苷粗品质量的4?10倍。
9.根据上述任意一项权利要求所述分离纯化桅子苷的方法，其特征在于:桅子苷晶体纯度高达98.5%以上，产品收率达到98.2%。
【文档编号】C07H17/04GK104356184SQ201410721860
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年12月3日 优先权日:2014年12月3日
【发明者】张红萍, 李婷, 李永斌 申请人:邵阳学院