专利名称：磷脂组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种磷脂组合物。具体来说，本发明涉及一种作为乳化剂使用能够制得乳剂的磷脂组合物，该乳剂在进行加热灭菌时不易发生反乳化作用，其pH也不易降低。
磷脂组合物通常由含磷脂的天然物质、如蛋黄、大豆或细菌中制得。磷脂组合物的制备方法因所用磷脂的来源而异。例如，在使用蛋黄作为磷脂来源的情况下，一般是用一种醇作用于干燥蛋黄，从中萃取磷脂成分，然后从萃取物中除去醇，制得磷脂组合物。这种方法中，根据需要一般用丙酮对上述磷脂组合物进行纯化处理，而纯化处理也会从上述磷脂组合物中除去中性脂类。
所得磷脂组合物广泛用作乳化剂，用于制备药品、化妆品、食品及诸如此类。在这些领域中，将该磷脂组合物用作乳化剂所制得的乳剂(如脂肪乳)通常在使用前要进行加热灭菌。因此需要乳剂能耐受加热灭菌；也就是说，需要乳剂在加热灭菌过程中不易发生反乳化作用。而且，考虑到乳剂在加热灭菌时经常会发生pH降低，pH的变化要尽可能地小。但是，常规的磷脂组合物从这点上来看不能够令人满意。
因此，本发明的一个主要的目的即是提供一种新颖的能够制得乳剂的磷脂组合物，该乳剂不存在上述问题。
为达到上述目的，本发明人进行了广泛研究，结果终于完成了本发明。
本发明提供了一种含有两种或以上磷脂的磷脂组合物，该磷脂组合物在去离子水中的5重量％悬液的电导率和pH分别在130至220μS/cm和6.5至9.5的范围内。
本发明进一步提供了一种上述磷脂组合物的制备方法，和一种含有该磷脂组合物的乳化剂。
以下将对本发明进行详细描述。
本发明中，磷脂包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、其溶血形式的化合物、或神经鞘磷脂。进一步的磷脂组合物是含有两种或两种以上上述磷脂的组合物，该组合物中磷脂含量为20％或以上，其余成分主要由中性脂类组成。
这样的磷脂组合物的具体实例包括一种一般含有至少20％磷脂的磷脂组合物，该磷脂由有机溶剂(醇)从蛋黄中萃取而得，或者是再将该磷脂组合物纯化至磷脂含量为80％或以上而得的磷脂组合物；和一种一般含有至少50％磷脂的磷脂组合物，该磷脂组合物是由大豆色拉油制备方法中的脱胶步骤所得的含水胶质脱水而得，或者是再将该磷脂组合物纯化至磷脂含量至少为80％而得的磷脂组合物。
经测量，本发明的磷脂组合物在去离子水中的5重量％悬液所具有的电导率在130至220μS/cm的范围内，pH在6.5至9.5的范围内。本文所用“去离子水”指不含溶解的离子的纯净水，具体来说，指电导率不超过2μS/cm的纯净水。进一步地，“磷脂组合物在去离子水中的5重量％悬液”指用一种均化器将5重量份磷脂组合物分散在95重量份去离子水中而得。而且本发明中的电导率也是在20℃测量上述磷脂组合物的5重量％悬液的电导率所得的值，测量使用一种电导仪(如“DS-14电导仪”，日本屈场制作所制造)；pH也是在20℃测量上述磷脂组合物的5重量％悬液的pH所得的值，测量使用一种pH计(如“F-22pH计”，日本屈场制作所制造)。
若电导率小于130μS/cm，则将该磷脂组合物用作乳化剂所制得的乳剂的pH在对乳剂进行加热灭菌时易发生显著降低。另一方面，若电导率大于220μS/cm，则该乳剂在加热灭菌时易发生反乳化作用。有鉴于此，本发明的磷脂组合物具有上述范围的电导率是必要的。电导率的优选范围为150至200μS/cm。
而且，即使电导率在130至220μS/cm的范围内，若pH低于6.5，则将该磷脂组合物用作乳化剂所制得的乳剂在加热灭菌时还是易发生反乳化作用。另一方面，若pH高于9.5，则不仅该乳剂在加热灭菌时易发生反乳化作用，而且该乳剂的pH易显著降低。因此，对本发明的磷脂组合物来说，具有上述范围的pH也是必要的。优选的pH范围为7.0至9.0。
进一步地，本发明的磷脂组合物含有两种或两种以上磷脂。仅含有一种磷脂的磷脂组合物用作乳化剂所制得的乳剂在加热灭菌过程中容易发生反乳化作用，即使该磷脂组合物在去离子水中的5重量％悬液的电导率和pH分别在130至220μS/cm和6.5至9.5的范围内也是如此。
以下将对本发明磷脂组合物的代表性的制备方法进行描述。
用醇作用于干燥的蛋黄，从中萃取磷脂成分，得到粗磷脂组合物(磷脂含量约20至60％)，然后从萃取液中除去醇，或者，进一步用1至10倍于上述粗磷脂组合物的丙酮处理该粗磷脂组合物，以除去中性脂类(三酰基甘油、胆甾醇等)，得到磷脂含量高达80％或以上如95至99％的磷脂组合物，将该磷脂组合物溶于3至20倍于磷脂组合物的极性溶剂(甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙酮、水或诸如此类)或极性溶剂与非极性溶剂(正戊烷、正己烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、苯或诸如此类)的混合溶剂，然后使所得溶液与离子交换树脂接触，使电导率和pH分别达到130至220μS/cm和6.5至9.5的范围内，再在减压下蒸馏除去溶剂，得到所需的磷脂组合物。
用于上述方法的离子交换树脂的实例包括强酸或弱酸型阳离子交换树脂(前者例如包括“Amberlite IR 120B”和“Amberlite IR 200C”,Rohm & Haas公司制造，“Dowex 50W”和“Dowex MSC-1”,Dow化学公司制造，“DouLite C-20”和“DouLite C-25D”,DiamondShamrock公司制造；后者例如包括“Amberlite IRC 50”、“AmberliteIRC 84”、“Dowex CCR-2”和“DouLite CC-4”)，和强碱或弱碱型阴离子交换树脂(前者例如包括“Amberlite IRA400”、“AmberliteIRA900”、“Dowex1”和“DouLite A-101D”，后者例如包括“AmberliteIRA68”和“Amberlite IRA45”)。这些离子交换树脂根据需要可单独使用，也可两种或两种以上结合使用。
现在参考下列实施例和试验例，将对本发明进行更为具体的描述。注意本发明中“％”指“重量％”。实施例1用一种醇(95％乙醇)从干燥蛋黄中萃取磷脂成分，减压下从萃取液中除去溶剂(乙醇)，然后用6倍于残余物的丙酮处理之，制得下列纯化的蛋黄磷脂组合物。
组成磷脂酰胆碱 78.0(％)磷脂酰乙醇胺18.3胆甾醇 2.0其他杂质余量总计100.0(％)电导率710μS/cm
将100g上述蛋黄磷脂组合物溶于500ml己烷-甲醇(80∶20)。向此溶液中加入10ml强酸型阳离子交换树脂(“AmberliteIR 120B”(H型)，Rohm&Haas公司制造)和20ml强碱型阴离子交换树脂(“Amberlite IRA400”(OH型)，Rohm & Haas公司制造)，混合物搅拌30分钟。然后，过滤除去离子交换树脂，减压蒸馏除去溶剂，得到具有下列组成的磷脂组合物，其电导率和pH分别为172μS/cm和7.5。
组成磷脂酰胆碱 79.1(％)磷脂酰乙醇胺16.7胆甾醇 1.6其他杂质余量总计100.0(％)该磷脂组合物的电导率和pH按下列方法测量(后述实施例和试验例也使用类似的方法)。
将5g磷脂组合物加入到95g蒸馏水(电导率1.4μS/cm)中，混合物在20000转每分的高速均化器(“PHYSCOTRON”，日本日音医理科器械制作所制造)中搅拌5分钟，得到一悬液。之后立即在20℃下分别用电导仪(“DS-14电导仪”，日本屈场制作所制造)和pH计(“F-22pH计”，日本屈场制作所制造)测量该悬液的电导率和pH。实施例2用醇(95％乙醇)从干燥蛋黄中萃取磷脂成分，减压下从萃取液中除去溶剂(乙醇)，制得下列蛋黄磷脂组合物。
组成磷脂酰胆碱 51.9(％)磷脂酰乙醇胺8.1胆甾醇 5.7三酰基甘油 33.5其他杂质余量总计100.0(％)电导率674μS/cm将100g上述蛋黄磷脂组合物溶于300ml己烷-甲醇(80∶20)。向此溶液中加入6ml强酸型阳离子交换树脂(“Amberlite IR 120B”(H型)，Rohm & Haas公司制造)和12ml强碱型阴离子交换树脂(“Amberlite IRA400”(OH型)，Rohm & Haas公司制造)，混合物搅拌30分钟。然后，过滤除去离子交换树脂，减压蒸馏除去溶剂，得到具有下列组成的磷脂组合物，其电导率和pH分别为195μS/cm和7.6。
组成磷脂酰胆碱 52.3(％)磷脂酰乙醇胺7.5胆甾醇 5.6三酰基甘油 33.6其他杂质余量总计100.0(％)实施例3将大豆色拉油制备方法的脱胶步骤中所得的含水胶质用5倍于胶质的丙酮处理，制得下列纯净的大豆磷脂组合物。
组成磷脂酰胆碱 27.5(％)磷脂酰乙醇胺24.0磷脂酰肌醇 15.0磷脂酸 11.5其他杂质余量总计100.0(％)电导率994μS/cm将100g上述大豆磷脂组合物溶于500ml己烷-甲醇(80∶20)。向此溶液中加入8ml强酸型阳离子交换树脂(“Amberlite IR 120B”(H型)，Rohm & Haas公司制连)和16ml强碱型阴离子交换树脂(“Amberlite IRA400”(OH型)，Rohm & Haas公司制造)，混合物搅拌30分钟。然后，过滤除去离子交换树脂，减压蒸馏除去溶剂，得到具有下列组成的磷脂组合物，其电导率和pH分别为156μS/cm和7.2。
组成磷脂酰胆碱 28.5(％)磷脂酰乙醇胺23.2磷脂酰肌醇 15.4
磷脂酸 10.7其他杂质余量总计100.0(％)试验例试验方法(a)磷脂组合物的制备除了改变所用离子交换树脂的总量、但不改变强酸型阳离子交换树脂与强碱型阴离子交换树脂之间的比例以外，按照与实施例1相同的方法制得八种具有不同电导率的磷脂组合物，如表1所示。这些样品的pH也如表1所示。(b)乳剂(脂肪乳)的制备在加热条件下，将每种如上制得的磷脂组合物(重量为24g，以磷脂计算)溶于400g大豆油。在用10000转每分的高速搅拌机(日本特殊机化工业株式会社制造)搅拌10分钟的同时，缓慢向此溶液中加入45g浓甘油和蒸馏水(使总量达到2升)，于是得到粗乳剂。之后，该乳剂进一步用高压均化器(日本IZUMI食品机械株式会社制造)在500kg/cm2压力下处理5分钟，得到细乳剂。于是制得八种不同的乳剂(脂肪乳)(1号至8号样品)。
然后，用氢氧化钠水溶液将这些样品的pH调至8.5。将每一份调节好pH的50ml样品置于50ml小瓶中，然后用氮气置换小瓶的液上空气。将这些小瓶气密密封，置于121℃高压灭菌器中30分钟进行加热灭菌，观察样品中是否因反乳化作用而有油滴生成，并测量样品pH降低的程度。试验结果观察和测量结果如下表1所示。
表1<
注因反乳化作用而引起的油滴生成
◎没有观察到任何油滴○观察到仅有非常少量油滴△观察到有少量油滴×观察到有大量油滴上表1所示结果证明，为了防止乳剂的反乳化作用、即为了使乳剂稳定，也为了防止乳剂pH降低，磷脂组合物的电导率应在130至220μS/cm范围内；该磷脂组合物优选的电导率范围为150至200μS/cm。试验例2试验方法(a)磷脂组合物的制备向30g试验例1的1号磷脂组合物样品(电导率16.3μS/cm,pH7.0)中加入蒸馏水使总重为600g。混合物在高速均化器(“PHYSCOTRON”，日本日音医理科器械制作所制造)中搅拌，得到该磷脂组合物的5％悬液。向每一份如此得到的5％悬液中适当加入氢氯酸或氢氧化钠的水溶液和电导率调节剂，所得混合物冷冻干燥得到七种具有150至160μS/cm电导率和不同pH的磷脂组合物(9号至15号样品)，如表2所示。
所用的电导率调节剂是一种浓度均为10mM的含有氯化钾、氯化钠、氯化钙、氯化镁和氯化铁的水溶液。(b)乳剂(脂肪乳)的制备使用如上制得的9号至15号样品，按照与上述试验例1相同的方法制得乳剂，观察是否因反乳化作用而有油滴生成，并按照与试验例1相同的方法测量pH降低的程度。实验结果观察和测量结果如下表2所示。
表2
注因反乳化作用而引起的油滴生成◎没有观察到任何油滴○观察到仅有非常少量油滴△观察到有少量油滴×观察到有大量油滴上表2所示结果证明，为了防止乳剂的反乳化作用、即为了使乳剂稳定，也为了防止乳剂pH降低，不仅磷脂组合物的电导率应在130至220μS/cm范围内，而且该磷脂组合物的pH也应在6.5至9.5的范围内；该磷脂组合物优选的pH范围为7.0至9.0。试验例3试验方法(a)磷脂组合物的制备按照实施例1的方法制得磷脂组合物，所述磷脂组合物不用离子交换树脂处理，而用日本专利未决申请128278/1994号公开的高效液相色谱法进行纯化，得到仅含有磷脂酰胆碱作为其磷脂成分的磷脂组合物。
高效液相色谱按下列条件进行。
条件柱50mm(内径)×1000mm(长度)柱填充物硅胶(完全为多孔球形硅胶，粒径为40至60微米)移动相乙醇/水=92/8v/v,150ml/min检测紫外吸收(λ=204nm)所得磷脂组合物的磷脂酰胆碱含量测得为99.9％。该磷脂组合物的电导率和pH分别为60μS/cm和5.1。
向30g如上所得磷脂组合物中加入蒸馏水，使总重为600g，混合物在高速均化器中搅拌，得到该磷脂组合物的5％悬液。向每一份如此得到的5％悬液中适当加入氢氧化钠水溶液和与实验例2所用相同的电导率调节剂，所得混合物冷冻干燥得到四种pH7.3至7.5和不同电导率的磷脂组合物(16号至19号样品)，如表3所示。(b)乳剂(脂肪乳)的制备使用如上制得的16号至19号样品，按照与上述试验例1相同的方法制得乳剂，观察是否因反乳化作用而有油滴生成，并按照与试验例1相同的方法测量pH降低的程度。实验结果观察和测量结果如下表3所示。
表3
注因反乳化作用而引起的油滴生成◎没有观察到任何油滴○观察到仅有非常少量油滴△观察到有少量油滴×观察到有大量油滴上表3所示结果证明，为了防止乳剂的反乳化作用、即为了使乳剂稳定，也为了防止乳剂pH降低，不仅磷脂组合物的电导率和pH应当分别在130至220μS/cm和6.5至9.5的范围内，而且该磷脂组合物应当含有两种或两种以上磷脂。
将本发明的磷脂组合物用作乳化剂能够制得乳剂，该乳剂在进行加热灭菌时不易发生反乳化作用，其pH也不易降低。有鉴于此，预期本发明的磷脂组合物作为一种乳化剂，可广泛应用于药品、化妆品、食品等一般包含加热灭菌步骤的制备方法领域。
权利要求
1．一种含有两种或两种以上磷脂的磷脂组合物，该磷脂组合物在去离子水中的5重量％悬液的电导率和pH分别在130至220μS/cm和6.5至9.5的范围内。
2．根据权利要求1的磷脂组合物，其中该磷脂组合物在去离子水中的5重量％悬液的电导率在150至200μS/cm的范围内。
3．根据权利要求1或2的磷脂组合物，其中该磷脂组合物在去离子水中的5重量％悬液的pH在7.0至9.0的范围内。
4．一种用于制备如上述权利要求1至3中任一项的磷脂组合物的方法，该方法包括步骤将从含有磷脂的天然物质萃取而得的粗磷脂组合物或者是进一步纯化处理粗磷脂组合物而得的纯化的磷脂组合物溶于溶剂中，使所得溶液与离子交换树脂接触，和从溶液中除去溶剂。
5．根据权利要求4的用于制备如上述权利要求1至3中任一项的磷脂组合物的方法，该方法包括步骤用醇从干燥蛋黄中萃取磷脂成分，再从萃取液中除去醇，将所得粗磷脂组合物直接或者进一步纯化该粗磷脂组合物而得的纯化的磷脂组合物溶于溶剂中，所述纯化方法为用丙酮处理粗磷脂组合物，得到丙酮不溶性物质，从丙酮不溶性物质中除去丙酮，使所得溶液与离子交换树脂接触，和从溶液中除去溶剂。
6．一种含有磷脂组合物的乳化剂，该磷脂组合物含有两种或两种以上磷脂，该磷脂组合物在去离子水中的5重量％悬液的电导率和pH分别在130至220μS/cm和6.5至9.5的范围内。
7．根据权利要求6的乳化剂，其中该磷脂组合物在去离子水中的5重量％悬液的电导率在150至200μS/cm的范围内。
8．根据权利要求6或7的乳化剂，其中该磷脂组合物在去离子水中的5重量％悬液的pH在7.0至9.0的范围内。
全文摘要
本发明涉及一种含有两种或两种以上磷脂的磷脂组合物,该磷脂组合物在去离子水中的5重量%悬液的电导率和pH分别在130至220μS/cm和6.5至9.5的范围内;其制备方法;及其用途。
文档编号C07F9/10GK1208419SQ97191668
公开日1999年2月17日 申请日期1997年11月11日 优先权日1996年11月13日
发明者奈良部均, 田边圣子, 重松康彦, 石川范行, 山田满里, 小林英明 申请人:Q·P·公司