1号染色体替换野生小家鼠品系C57BL/6.枣庄2‑Chr1的构建的制作方法与工艺

技术特征：
1.一种1号染色体替换实验小鼠品系C57BL/6.枣庄2-Chr1的建立方法，其特征在于，所述方法包括：(1)以枣庄2品系雄性小鼠作为父本、C57BL/6品系雌性小鼠作为母本进行杂交，获得F1代小鼠；(2)将F1代雌性小鼠与C57BL/6品系雄性小鼠杂交，获得回交一代小鼠；该雄性回交小鼠中，Y染色体和线粒体DNA已被替换为C57BL/6品系来源的；使用多核苷酸多态性位点鉴定雄性回交小鼠的1号染色体，选择1号染色体多核苷酸多态性位点鉴定结果为枣庄2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；使用短串联重复序列位点鉴定选择到的雄性回交小鼠，选择1号染色体短串联重复序列位点鉴定结果为枣庄2品系小鼠所特有的回交小鼠；(3)将选择到的1号染色体短串联重复序列位点鉴定结果为枣庄2品系小鼠所特有的回交小鼠中雄性回交小鼠与C57BL/6品系雌性小鼠杂交，获得下一代回交小鼠，该雄性回交小鼠中，X染色体已被替换为C57BL/6品系来源的；(4)使用多核苷酸多态性位点鉴定步骤(3)获得的雄性回交小鼠的1号染色体，选择1号染色体多核苷酸多态性位点鉴定结果为枣庄2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；使用短串联重复序列位点鉴定选择到的雄性回交小鼠，选择1号染色体短串联重复序列位点鉴定结果为枣庄2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；(5)重复步骤(3)～(4)5-50次；从而获得染色体替代动物品系，其以C57BL/6品系小鼠为背景，且其1号染色体被枣庄2品系小鼠的1号染色体替换；其中，所述的1号染色体多核苷酸多态性位点包括：rs30719154，其在1号染色体上所处位置为chr1：3052360；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为G，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为T；rs31426703，其在1号染色体上所处位置为chr1：12720994；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为C，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为T；rs32086848，其在1号染色体上所处位置为chr1：17643006；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为G，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为A；rs31928308，其在1号染色体上所处位置为chr1：28659508；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为A，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为G；rs32139742，其在1号染色体上所处位置为chr1：40806614；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为G，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为A；rs31336640，其在1号染色体上所处位置为chr1：47136503；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为G，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为A；rs6297658，其在1号染色体上所处位置为chr1：57382018；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为A，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为G；rs6302815，其在1号染色体上所处位置为chr1：69463837；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为A，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为G；rs30146639，其在1号染色体上所处位置为chr1：76144374；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为G，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为A；rs32011713，其在1号染色体上所处位置为chr1：79917356；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为C，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为A；rs6212353，其在1号染色体上所处位置为chr1：84131501；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为C，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为A；rs32662004，其在1号染色体上所处位置为chr1：98333575；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为G，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为A；rs32495825，其在1号染色体上所处位置为chr1：124737843；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为G，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为A；rs31580048，其在1号染色体上所处位置为chr1：133446374；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为G，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为A；rs30694738，其在1号染色体上所处位置为chr1：142191205；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为A，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为G；rs30902647，其在1号染色体上所处位置为chr1：150127783；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为T，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为C；rs3678938，其在1号染色体上所处位置为chr1：158391632；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为G，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为A；rs30776510，其在1号染色体上所处位置为chr1：168028380；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为T，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为G；rs32297231，其在1号染色体上所处位置为chr1：183890447；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为G，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为A；rs31145145，其在1号染色体上所处位置为chr1：192018789；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为C，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为T；rs32357522，其在1号染色体上所处位置为chr1：192018789；在枣庄2品系小鼠染色体相应位置的碱基为C，在C57BL/6品系小鼠染色体相应位置的碱基为T；其中，所述的1号染色体的短串联重复序列位点包括：D1MIT64，其在1号染色体上所处位置为3.7cM；在枣庄2品系小鼠基因组和C57BL/6品系小鼠染色体中，相应位置上基因序列长度差异20bp，枣庄2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠少10个2bp碱基重复；D1MIT236，其在1号染色体上所处位置为25.7cM；在枣庄2品系小鼠基因组和C57BL/6品系小鼠染色体中，相应位置上基因序列长度差异16bp，枣庄2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠少8个2bp碱基重复；D1MIT303，其在1号染色体上所处位置为32cM；在枣庄2品系小鼠基因组和C57BL/6品系小鼠染色体中，相应位置上基因序列长度差异20bp，枣庄2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多10个2bp碱基重复；D1MIT49，其在1号染色体上所处位置为44cM；在枣庄2品系小鼠基因组和C57BL/6品系小鼠染色体中，相应位置上基因序列长度差异6bp，枣庄2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠少3个2bp碱基重复；D1MIT445，其在1号染色体上所处位置为58cM；在枣庄2品系小鼠基因组和C57BL/6品系小鼠染色体中，相应位置上基因序列长度差异14bp，枣庄2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多7个2bp碱基重复；D1MIT506，其在1号染色体上所处位置为71cM；在枣庄2品系小鼠基因组和C57BL/6品系小鼠染色体中，相应位置上基因序列长度差异30bp，枣庄2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多15个2bp碱基重复；D1MIT113，其在1号染色体上所处位置为79cM；在枣庄2品系小鼠基因组和C57BL/6品系小鼠染色体中，相应位置上基因序列长度差异14bp，枣庄2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多7个2bp碱基重复；D1MIT150，其在1号染色体上所处位置为81cM；在枣庄2品系小鼠基因组和C57BL/6品系小鼠染色体中，相应位置上基因序列长度差异10bp，枣庄2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多5个2bp碱基重复；D1MIT209，其在1号染色体上所处位置为96cM；在枣庄2品系小鼠基因组和C57BL/6品系小鼠染色体中，相应位置上基因序列长度差异8bp，枣庄2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多4个2bp碱基重复。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过SNP位点引物PCR结合连接酶检测反应来确定1号染色体多核苷酸多态性位点鉴定结果。3.用于区分枣庄2品系小鼠和C57BL/6品系小鼠1号染色体的试剂盒，其中包括以下引物：rs30719154上游引物SEQIDNO:1和下游引物SEQIDNO:2；rs31426703上游引物SEQIDNO:3和下游引物SEQIDNO:4；rs32086848上游引物SEQIDNO:5和下游引物SEQIDNO:6；rs31928308上游引物SEQIDNO:7和下游引物SEQIDNO:8；rs32139742上游引物SEQIDNO:9和下游引物SEQIDNO:10；rs31336640上游引物SEQIDNO:11和下游引物SEQIDNO:12；rs6297658上游引物SEQIDNO:13和下游引物SEQIDNO:14；rs6302815上游引物SEQIDNO:15和下游引物SEQIDNO:16；rs30146639上游引物SEQIDNO:17和下游引物SEQIDNO:18；rs32011713上游引物SEQIDNO:19和下游引物SEQIDNO:20；rs6212353上游引物SEQIDNO:21和下游引物SEQIDNO:22；rs32662004上游引物SEQIDNO:23和下游引物SEQIDNO:24；rs32495825上游引物SEQIDNO:25和下游引物SEQIDNO:26；rs31580048上游引物SEQIDNO:27和下游引物SEQIDNO:28；rs30694738上游引物SEQIDNO:29和下游引物SEQIDNO:30；rs30902647上游引物SEQIDNO:31和下游引物SEQIDNO:32；rs3678938上游引物SEQIDNO:33和下游引物SEQIDNO:34；rs30776510上游引物SEQIDNO:35和下游引物SEQIDNO:36；rs32297231上游引物SEQIDNO:37和下游引物SEQIDNO:38；rs31145145上游引物SEQIDNO:39和下游引物SEQIDNO:40；rs32357522上游引物SEQIDNO:41和下游引物SEQIDNO:42。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括以下探针：用于鉴定rs30719154位点的SEQIDNO:43、SEQIDNO:44和SEQIDNO:45所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs31426703位点的SEQIDNO:46、SEQIDNO:47和SEQIDNO:48所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs32086848位点的SEQIDNO:49、SEQIDNO:50和SEQIDNO:51所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs31928308位点的SEQIDNO:52、SEQIDNO:53和SEQIDNO:54所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs32139742位点的SEQIDNO:55、SEQIDNO:56和SEQIDNO:57所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs31336640位点的SEQIDNO:58、SEQIDNO:59和SEQIDNO:60所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs6297658位点的SEQIDNO:61、SEQIDNO:62和SEQIDNO:63所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs6302815位点的SEQIDNO:64、SEQIDNO:65和SEQIDNO:66所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs30146639位点的SEQIDNO:67、SEQIDNO:68和SEQIDNO:69所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs32011713位点的SEQIDNO:70、SEQIDNO:71和SEQIDNO:72所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs6212353位点的SEQIDNO:73、SEQIDNO:74和SEQIDNO:75所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs32662004位点的SEQIDNO:76、SEQIDNO:77和SEQIDNO:78所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs32495825位点的SEQIDNO:79、SEQIDNO:80和SEQIDNO:81所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs31580048位点的SEQIDNO:82、SEQIDNO:83和SEQIDNO:84所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs30694738位点的SEQIDNO:85、SEQIDNO:86和SEQIDNO:87所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs30902647位点的SEQIDNO:88、SEQIDNO:89和SEQIDNO:90所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs3678938位点的SEQIDNO:91、SEQIDNO:92和SEQIDNO:93所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs30776510位点的SEQIDNO:94、SEQIDNO:95和SEQIDNO:96所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs32297231位点的SEQIDNO:97、SEQIDNO:98和SEQIDNO:99所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs31145145位点的SEQIDNO:100、SEQIDNO:101和SEQIDNO:102所示核苷酸序列的探针；用于鉴定rs32357522位点的SEQIDNO:103、SEQIDNO:104和SEQIDNO:105所示核苷酸序列的探针。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括以下通用探针：SEQIDNO:106和SEQIDNO:107所示核苷酸序列的探针。6.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括以下引物：D1MIT64上游引物SEQIDNO:108和下游引物SEQIDNO:109；D1MIT236上游引物SEQIDNO:110和下游引物SEQIDNO:111；D1MIT303上游引物SEQIDNO:112和下游引物SEQIDNO:113；D1MIT49上游引物SEQIDNO:114和下游引物SEQIDNO:115；D1MIT445上游引物SEQIDNO:116和下游引物SEQIDNO:117；D1MIT506上游引物SEQIDNO:118和下游引物SEQIDNO:119；D1MIT113上游引物SEQIDNO:120和下游引物SEQIDNO:121；D1MIT150上游引物SEQIDNO:122和下游引物SEQIDNO:123；D1MIT209上游引物SEQIDNO:124和下游引物SEQIDNO:125。7.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括：PCR扩增试剂；LDR反应试剂；电泳试剂；序列分析软件；和/或使用说明书。8.权利要求3-7任一所述的试剂盒的用途，用于鉴别枣庄2品系小鼠和C57BL/6品系小鼠的1号染色体。