专利名称：一种贻贝蒸煮液中多糖类化合物的提纯方法
技术领域：
本发明涉及一种贻贝蒸煮液中多糖类化合物的提纯方法，其属于水产品深加工技术领域。
背景技术：
多糖，又称多聚糖，是单糖通过糖苷链连接而成的天然高分子化合物，其分子量一般为数万甚至达数百万，广泛存在于高等动植物细胞膜和微生物细胞壁中。活性多糖专指具有某种特殊生物活性的多糖化合物。自20世纪50年代末人们发现真菌多糖具有抗肿瘤活性以来，多糖的研究受到越来越广泛的重视。目前，人类已在自然界中发现了几百种多糖，并在研究多糖 资源的开发、多糖的提取分离、多糖结构的分析、多糖药理作用及临床应用，尤其在抗肿瘤和免疫作用、抗病毒、降血糖等作用方面，做了大量的工作。贻贝多糖经过初步纯化去掉部分杂质后，要想得到高纯度的单一组分多糖，需要经过进一步的纯化处理。多糖的纯化分级可以采用的方法很多，如:金属络合法、季铵盐沉淀法、制备性区域电泳等。贻贝(Mytilus sp.)在贝类分类学上隶属软体动物门，瓣鳃纲，异柱目，贻贝族，贻贝科，是一种营足丝附着生活的双壳类软体动物。贻贝分布广泛，不同的气候、纬度和海况有不同的品种，其主要经济种类有紫贻贝、翡翠贻贝和厚壳贻贝。贻贝除带壳鲜销外，力口工方式主要是制成罐头或油炸、焙烧、水煮、汽蒸、烟熏和冷冻等产品。贻贝废弃液是工业化大生产中处理贻贝原料所得到的液态副产品，包含贻贝软体部分的水溶性物质，如水溶性的蛋白质、糖类、氨基酸、色素等。多糖类物质是贻贝废弃液中的主要成分之一。对这些废弃的贻贝蒸煮液采用新技术进行再加工，在提高原料利用率、减少浪费和创造经济效益方面都具有非常重要的意义。
发明内容
本发明针对现有技术中贻贝蒸煮液利用率较低而造成原料浪费的不足，提供一种贻贝蒸煮液中多糖类化合物的提纯方法。本发明解决上述技术问题的技术方案如下:一种贻贝蒸煮液中多糖类化合物的提纯方法，其特征在于包括如下步骤:A、蛋白脱除，采用酶解法与Sevag法联用来脱除原料液中的粗蛋白；酶解法:PH值为7.1，枯草杆菌中性蛋白酶加入量为0.52%(v/w)，温度为41°C，氯化钙加入量为0.74% (w/w)，酶反应时间为3h ；Sevag法:氯仿与正丁醇的比例为5:1 (v/v)，料液比为4:1 (w/v),振摇时间为20min,经过三次脱蛋白处理；B、醇沉，脱蛋白后的样品中加入乙醇使最终溶液中乙醇浓度达到80% ；C、脱色，用活性炭脱色，最佳条件为:温度50°C，PH值为3.0，时间为20min，粉末活性炭用量1% (w/v)；D、离子交换柱纯化分级，贻贝多糖DEAE——纤维素离子交换柱纯化分级，始缓冲液为20mmol/L磷酸盐缓冲液，PH值为6.8，洗脱剂为O 2.0mol/L NaCl的缓冲液，温度为
室温；先用PH值为6.8，20mmol/L磷酸盐缓冲液洗脱，自动部分收集器收集，苯酹——硫酸法跟踪检测收集液的0D.，洗至收集液中无多糖成分检出，并收集所得峰组分；再用O
2.0mol/L NaCl的缓冲液洗脱，自动部分收集器收集，苯酚——硫酸法跟踪检测收集液的OD490,并收集所得峰组分。E、凝胶柱层析，SephroseCL_6B凝胶柱纯化分级时,起始缓冲液为20mmol/L磷酸盐缓冲液，PH值为6.8，洗脱剂为20mmol / L磷酸盐缓冲液，pH值为6.8 ;温度为室温；用pH值为6.8，20mmol / L磷酸盐缓冲液洗脱，利用自动部分收集器收集，苯酹——硫酸法跟踪检测收集液的OD49tl,并收集所得峰组分。F、浓缩冻干，即得多糖类化合物成品。本发明的 有益效果是:充分利用来源丰富、且未得到有效利用的贻贝加工下脚料一蒸煮液，具有提取率高、无污染、过程易控制等特点；通过脱蛋白、脱色、层析纯化等操作提取得到多糖类化合物，有效提高了产品的品质和原材料的利用率。
具体实施例方式以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。一种贻贝蒸煮液中多糖类化合物的提纯方法，包括如下步骤:取贻贝蒸煮液浓缩液500ml，采用酶法与Sevag法联用来脱除粗蛋白，酶法的具体条件为:PH值为7.1，枯草杆菌中性蛋白酶加入量0.52% (v / W)，温度41°C，氯化钙加入量0.74% (w / w)，酶反应时间3h;灭酶后采用Sevag法，具体条件为:氯仿与正丁醇的比例为5:1 (V / V),料液比为4:1 (w / V),振摇时间为20min。然后采用醇沉法提取,具体条件为:脱蛋白后的样品中加入乙醇使最终溶液中乙醇浓度达到80%，样品干燥后保存。取
干燥样水溶后DEAE-纤维素离子交换柱法纯化分级，条件为:始缓冲液:20mmol / L磷
酸盐缓冲液，PH值为6.8，洗脱剂为O — 2.0mol / L NaCl的缓冲液，温度为室温。先用pH值为6.8，20mmol / L磷酸盐缓冲液洗脱，利用自动部分收集器收集，苯酹——硫酸法跟踪检测收集液的OD49tl,洗至收集液中无多糖成分检出，并收集所得峰组分。再用0-2.0mol /LNaCl的缓冲液洗脱，利用自动部分收集器收集，苯酚——硫酸法跟踪检测收集液的0D.，并收集所得峰组分。再采用Sephix)SeCL-6B (是专业术语)凝胶柱纯化分级，条件为:起始缓冲液为20mmol / L磷酸盐缓冲液，其pH值为6.8，洗脱剂为20mmol / L磷酸盐缓冲液，其pH值为6.8，温度为室温。用pH值为6.8，20mmol / L磷酸盐缓冲液洗脱，利用自动部分收集器收集，苯酚一硫酸法跟踪检测收集液的0D.，并收集所得峰组分。将所得组分冻干后得到多糖类化合物。以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种贻贝蒸煮液中多糖类化合物的提纯方法，其特征在于包括如下步骤: A、蛋白脱除，采用酶解法与Sevag法联用来脱除原料液中的粗蛋白； 酶解法:PH值为7.1，枯草杆菌中性蛋白酶加入量为0.52%(v/w)，温度为41°C，氯化钙加入量为0.74% (w/w)，酶反应时间为3h ； Sevag法:氯仿与正丁醇的比例为5:1 (v/v),料液比为4:1 (w/v),振摇时间为20min,经过三次脱蛋白处理； B、醇沉，脱蛋白后的样品中加入乙醇使最终溶液中乙醇浓度达到80%； C、脱色，用活性炭脱色，最佳条件为:温度50°C，pH值为3.0，时间为20min，粉末活性炭用量 1% (w/v)； D、离子交换柱纯化分级，贻贝多糖DEAE—纤维素离子交换柱纯化分级，始缓冲液为20mmol/L磷酸盐缓冲液，PH值为6.8，洗脱剂为O 2.0moI/L NaCl的缓冲液，温度为室温； 先用PH值为6.8，20mmol/L磷酸盐缓冲液洗脱，利用自动部分收集器收集，苯酹——硫酸法跟踪检测收集液的0D.，洗至收集液中无多糖成分检出，并收集所得峰组分；再用O .2.0mol/L NaCl的缓冲液洗脱，利用自动部分收集器收集，苯 )——硫酸法跟踪检测收集液的OD49tl,并收集所得峰组分。
E、凝胶柱层析，SephroseCL-6B凝胶柱纯化分级时,起始缓冲液为20mmol/L磷酸盐缓冲液，PH值为6.8，洗脱剂为20mmol / L磷酸盐缓冲液，pH值为6.8 ;温度为室温；用pH值为6.8，20mmol / L磷酸盐缓冲液洗脱，利用自动部分收集器收集，苯酹——硫酸法跟踪检测收集液的OD49tl,并收集所得 峰组分。
F、浓缩冻干，即得多糖类化合物成品。
全文摘要
本发明涉及一种贻贝蒸煮液中多糖类化合物的提纯方法，其属于水产品深加工技术领域。它解决了贻贝蒸煮液利用率较低而造成原料浪费的不足，其主要包括如下步骤蛋白脱除——醇沉——脱色——离子交换柱纯化分级——凝胶柱层析——浓缩冻干。本发明充分利用来源丰富、且未得到有效利用的贻贝加工下脚料——蒸煮液，具有提取率高、无污染、过程易控制等特点；通过脱蛋白、脱色、层析纯化等操作提取得到多糖类化合物，有效提高了产品的品质和原材料的利用率。
文档编号C08B37/00GK103204950SQ20131014285
公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月23日 优先权日2013年4月23日
发明者李苹苹, 刘艳蔚, 任秀娟, 胡树凯, 李进伟, 迟君德 申请人:李苹苹