一种羧基化的荧光微球、制备方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种羧基化的荧光微球、制备方法及其应用。采用水解反应方法制备得到侧链带有羧基的聚亚芳香基乙炔撑聚合物，经N-(3-二甲氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺将羧基活化后，以5μm单分散性氨基改性的多孔聚甲基丙烯酸缩水甘油酯APGMA微球为基质球，荧光聚合物将以共价键结合在APGMA微球上，从而制备得到基于共轭聚合物的羧基化的荧光微球，该荧光微球具有生物反应位点。本发明提供的荧光微球具有良好的生物偶联性能，可检测到生物分子BSA。若将所需的抗体通过聚合物侧链上的羧基偶联微球上，得到具有抗体标记的荧光微球，可用于相应抗原的检测。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明涉及荧光共轭聚合物传感材料【技术领域】，特别涉及一种基于共轭聚合物的 具有用于生物偶联的反应位点的荧光微球、制备方法及其应用。 -种羧基化的荧光微球、制备方法及其应用
【背景技术】
[0002] 在提高整个人类社会公众健康的良好愿景下，高通量技术诊断检测在学术和临床 领域已引起研究者极大的关注。与基于如平面阵列等常规方法的测定法相比，新出现的基 于微球的悬浮阵列具有许多优点。通常，悬浮阵列技术由于球体的高流动性可以达到更 快的检测速度；由于可以与分析物在三维空间中结合因而具有高灵敏性；检测结果是基于 超过10, 000个微球的统计信息的特点也使悬浮阵列技术的精度更高；此外由于便利的洗 涤和分离步骤使得悬浮阵列技术也更易操作i/? 2002，％，9; Lab on a Chip 2003, 3, 60N; Journal of biomolecular screening 2004, 9, 173; Angewandte Chemie International Edition 2006, 45, 6104; Science 2007, 315, 1393; 2007, 7, 527 )。突光微球是悬浮阵列最常用 也至关重要的载体。这些微球必须具备一些便于信号读取和分析的特性，如尺寸在微米级 别上并且具有单分散性，均匀稳定的发光性，最好具有羧基或氨基的基团可以直接与生物 分子结合以便检测的进行等。目前适合于这种技术的商业可用的荧光微球数量有限且非常 昂贵。因此非常迫切需要发展新的方法以可接受的成本来制造足够的具有所需性能的荧光 微球并使最普通的人受益。
[0003] 共轭聚合物（CPs)作为荧光团，拥有许多独特的优点：如耐光漂白性，结构易于 调整，和高的热 / 机械稳定性 7/?temaiio/? 2001，必， 2591; 2009，7你，897)。然而，尽管有许多报道采用有机染料或量子 点制备荧光微球，但由于共轭聚合物的制备过程比较复杂，有关共轭聚合物应用于荧光微 球的技术方案较少见报道。
【发明内容】
[0004] 本发明针对现有技术存在的不足，提供一种制备工艺简单，基于共轭聚合物的，具 有用于生物偶联的反应位点的，可用于生物检测的荧光微球、制备方法及其应用。
[0005] 实现本发明目的的技术方案是提供一种羧基化的荧光微球的制备方法，包括如下 步骤： 1、采用水解反应制备得到侧链带有羧基或羧酸盐的聚亚芳香基乙炔撑聚合物CP1和 CP2 ； 所述CP1的结构式为：
【权利要求】
1. 一种羧基化的荧光微球的制备方法，其特征在于包括如下步骤： (1) 采用水解反应制备得到侧链带有羧基的聚亚芳香基乙炔撑聚合物CP1或CP2 ; 所述CP1的结构式为：
所述CP2的结构式为：
(2) 制备浓度为1?20 μΜ的CP1或CP2溶液，加入羧基活化剂N-(3-二甲氨基丙 基）-Ν' -乙基碳二亚胺盐酸盐和Ν-羟基琥珀酰亚胺，对侧链带有羧基的聚亚芳香基乙炔撑 聚合物CP1或CP2的侧链羧基进行活化处理，得到CP1或CP2的羧基活化溶液； (3) 以直径为5 μ m的单分散性氨基改性的多孔聚甲基丙烯酸缩水甘油酯APGMA微球 为基质球，将APGMA微球置于步骤（2 )得到的CP1或CP2的羧基活化溶液中，常温下避光振 荡处理3?6小时，经洗涤、干燥，得到羧基化的荧光微球APGMA-CP1或APGMA-CP2。
2. 根据权利要求1所述的一种羧基化的荧光微球的制备方法，其特征在于：步骤（2)中 制备CP1溶液的方法为：将CP1溶于pH 5?6的混合溶剂中；所述的混合溶剂包括四氢呋 喃和缓冲溶液，所述缓冲溶液为摩尔浓度〇. 01?1M的无机钾盐或无机钠盐的水溶液。
3. 根据权利要求1所述的一种羧基化的荧光微球的制备方法，其特征在于：步骤（2)中 制备CP2溶液的方法为：将CP2溶于pH 5?6的缓冲溶液中，所述缓冲溶液为摩尔浓度 0. 01?1M的无机钾盐或无机钠盐的水溶液。
4. 根据权利要求2或3所述的一种羧基化的荧光微球的制备方法，其特征在于：所述 的无机钠盐为 Na2HP04、NaH2P04、NaCl、Na2S04、NaHS0 4、NaHS03、Na2S03、Na2C0 3、NaHC03、Na2B407 中的一种，或它们的任意组合。
5. 根据权利要求2或3所述的一种羧基化的突光微球的制备方法，其特征在于：所述 的无机钾盐为 K2HP04、KH2P04、KC1、K 2S04、KHS04、K2C03、khco 3、KHS03、K2S03 中的一种，或它们 的任意组合。
6. 按权利要求1所述的制备方法得到的羧基化的荧光微球。
7. -种如权利要求6所述的羧基化的突光微球的应用，其特征在于：将突光微球与生 物分子进行共价结合，用于生物分子的检测。
【文档编号】C08G81/02GK104119540SQ201410327407
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2014年7月10日 优先权日:2014年7月10日
【发明者】范丽娟, 许海波 申请人:苏州大学