技术领域：本发明涉及蛹虫草多糖提取技术领域，具体涉及一种蛹虫草多糖的制备方法。
背景技术：
踊虫草，属于虫草属，麦角菌科，肉座菌目，又叫北冬虫夏草。蛹虫草中含有虫草多糖、虫草素、虫草酸、核哲、超氧化物歧化酶(SOD)、留醇类等主要活性成分，同时还含有各种蛋白质和人体必需的氨基酸，钙、锌、晒、铜、猛、磷等各种微量元素，以及软脂酸和亚油酸等主要分布在我国福建、河北、四川、安徽、吉林、辽宁、广西等地。虫草多糖是虫草最重要最丰富的活性成分之一，虫草多糖具有广泛的生物活性。大量研究结果表明虫草多糖能加强免疫细胞免疫功能，提高机体免疫力；虫草多糖能与病毒结合，抑制病毒与细胞的作用，可作为抗病毒药物加以应用；草多糖能清除超氧阴离子、轻基自由基等氧化物，清除体内过多自由基对机体的损害，进而起到抗氧化抗衰老的作用[；虫草多糖对损伤细胞还有修复的作用。总之，虫草多糖具有抗肿瘤、抗疲劳、抗氧化、抗病毒、抗炎、免疫调节、降血糖、降血脂、降血压、延缓寿命等多种药用功能。目前多糖提取常用的方法有热水提取法、酸碱提取法、微波辅助提取法、超声提取法，热水提取法因其操作简单方便、成本低、糖降解率低，成为多糖提取最常用的方法，超生提取法是利用超声波能在瞬间产生强大的压力致使细胞壁乃至生物体破裂，同时提取过程中超声波产生的振动会加快细胞内物质释放。但是，没有良好的将热水浸提、超声提取相结合的方式提取，不能良好的增加提取效率。
技术实现要素：
：本发明的目的提供一种为蛹虫草多糖的提取、开发应用提供了条件，方法简单，效率高的一种蛹虫草多糖的制备方法。本发明的目的是这样实现的。一种蛹虫草多糖的制备方法，其特征在于：主要工艺流程为：样品制备、热水提取、超声提取、浓缩、醇沉、离心、沉淀洗涤、真空干燥，具体操作方法依次按下列步骤：（1）样品制备：取蛹虫草母种接于PDA斜面培养基活化培养后，接入液体种子培养基于25℃，160r/min培养5-7d；种液培养结束后以5%接种量接入液体发酵培养基中以25°C，160r/min扩大培养5d；培养结束后发酵液经10000r/min，离心20min，收集菌丝体加去离子水冲洗2次；最后将菌丝体置于干燥箱中60℃供干粉碎后过60目蹄，制得样品蛹虫草菌丝体干粉，备用；（2）热水提取：称取蛹虫草样品1g，按料液比1:10-1:30的蒸馏水混匀并浸泡后，置于85℃，恒温水浴中持续浸提1-5h；（3）超声提取：接着把步骤（2）的物质置于超声功率20-90%中，20～60℃下超声波萃取10～90min，超声处理完后趁热以6000rpm/min离心10min，提取上清液；（4）浓缩：将上述上清液置于旋转蒸发仪内，在50-60℃进行减压浓缩，浓缩至原体积的1/4；（5）醇沉：采用80-90%的食用乙醇，按浓缩液与乙醇1:2的比例进行搅拌混合，多糖沉淀于容器基部；（6）离心:将加入乙醇后的浓缩液置1-4℃的低温下静置18-30小时后，以2500-4000r/min的转速离心20-30min，收集离心杯底部多糖；（7）沉淀洗涤：沉淀依次用乙醚和丙酮洗涤；（8）真空干燥：在真空度-0.095MPa，干燥温度20-50℃下，干燥20min，制得蛹虫草多糖。本发明有益效果：本发明采用热水浸提、超声提取相结合的方式，有效保护多糖的功能成分的同时，优化了操作参数、二者结合更加高效。具有节物、节能、环保的优越性。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明实施例1：一种蛹虫草多糖的制备方法，其特征在于：主要工艺流程为：样品制备、热水提取、超声提取、浓缩、醇沉、离心、沉淀洗涤、真空干燥，具体操作方法依次按下列步骤：（1）样品制备：取蛹虫草母种接于PDA斜面培养基活化培养后，接入液体种子培养基于25℃，160r/min培养5-7d；种液培养结束后以5%接种量接入液体发酵培养基中以25°C，160r/min扩大培养5d；培养结束后发酵液经10000r/min，离心20min，收集菌丝体加去离子水冲洗2次；最后将菌丝体置于干燥箱中60℃供干粉碎后过60目蹄，制得样品蛹虫草菌丝体干粉，备用；（2）热水提取：称取蛹虫草样品1g，按料液比1:10-1:30的蒸馏水混匀并浸泡后，置于85℃，恒温水浴中持续浸提1-5h；（3）超声提取：接着把步骤（2）的物质置于超声功率20-90%中，20～60℃下超声波萃取10～90min，超声处理完后趁热以6000rpm/min离心10min，提取上清液；（4）浓缩：将上述上清液置于旋转蒸发仪内，在50-60℃进行减压浓缩，浓缩至原体积的1/4；（5）醇沉：采用80-90%的食用乙醇，按浓缩液与乙醇1:2的比例进行搅拌混合，多糖沉淀于容器基部；（6）离心:将加入乙醇后的浓缩液置1-4℃的低温下静置18-30小时后，以2500-4000r/min的转速离心20-30min，收集离心杯底部多糖；（7）沉淀洗涤：沉淀依次用乙醚和丙酮洗涤；（8）真空干燥：在真空度-0.095MPa，干燥温度20-50℃下，干燥20min，制得蛹虫草多糖。实施例2（1）样品制备：取蛹虫草母种接于PDA斜面培养基活化培养后，接入液体种子培养基于25℃，160r/min培养5-7d。种液培养结束后以5%接种量接入液体发酵培养基中以25°C，160r/min扩大培养5d。培养结束后发酵液经10000r/min，离心20min，收集菌丝体加去离子水冲洗2次。最后将菌丝体置于干燥箱中60℃供干粉碎后过60目蹄，得试验用蛹虫草菌丝体干粉备用；（2）热水提取：称取蛹虫草样品1g，按料液比1:20的蒸馏水混匀并浸泡后，置于85℃,恒温水浴中持续浸提4h；（3）超声提取：接着把步骤（2）的物质置于超声功率60%中，20～60℃下超声波萃取30min，超声处理完后趁热以6000rpm/min离心10min，上清液进行下一步；（4）浓缩：将上述上清液置于旋转蒸发仪内，在50-60℃进行减压浓缩，浓缩至原体积的1/4即可；（5）醇沉：采用80-90%的食用乙醇，按浓缩液与乙醇1:2的比例进行搅拌混合，多糖沉淀于容器基部；（6）离心:将加入乙醇后的浓缩液置1-4℃的低温下静置24小时后，以2500-4000r/min的转速离心20-30min，收集离心杯底部多糖；（7）沉淀洗涤：沉淀依次用乙醚和丙酮洗涤；（8）真空干燥：在真空度-0.095MPa，干燥温度20-50℃下，干燥20min，得到蛹虫草多糖。实施例3（1）样品制备：取蛹虫草母种接于PDA斜面培养基活化培养后，接入液体种子培养基于25℃：，160r/min培养5-7d。种液培养结束后以5%接种量接入液体发酵培养基中以25°C，160r/min扩大培养5d。培养结束后发酵液经10000r/min，离心20min，收集菌丝体加去离子水冲洗2次。最后将菌丝体置于干燥箱中60℃供干粉碎后过60目蹄，得试验用蛹虫草菌丝体干粉备用；（2）热水提取：称取蛹虫草样品1g，按料液比1:20的蒸馏水混匀并浸泡后，置于85℃,恒温水浴中持续浸提4h；（3）超声提取：接着把步骤（2）的物质置于超声功率60%中，450℃下超声波萃取40min，超声处理完后趁热以6000rpm/min离心10min，上清液进行下一步；（4）浓缩：将上述上清液置于旋转蒸发仪内，在50-60℃进行减压浓缩，浓缩至原体积的1/4即可；（5）醇沉：采用80-90%的食用乙醇，按浓缩液与乙醇1:2的比例进行搅拌混合，多糖沉淀于容器基部；（6）离心:将加入乙醇后的浓缩液置1-4℃的低温下静置28小时后，以2500-4000r/min的转速离心20-30min，收集离心杯底部多糖；（7）沉淀洗涤：沉淀依次用乙醚和丙酮洗涤；（8）真空干燥：在真空度-0.095MPa，干燥温度20-50℃下，干燥20min，得到蛹虫草多糖。