一种提高硫酸软骨素纯度的方法
【专利摘要】本发明属于生物制药【技术领域】，具体涉及一种提高硫酸软骨素纯度的方法。该方法包括下述步骤：（1）将软骨和沸水混合；（2）在碱性条件下用超声波处理；（3）加入木瓜蛋白酶酶解反应；（4）加入胃蛋白酶水解；（5）过滤，取滤液，向滤液中加入乙醇溶液，沉降；（6）将沉降液离心，抽滤后将沉淀烘干，得到纯度较高的硫酸软骨素。该方法工艺简单、无污染，所得的硫酸软骨素纯度高，达到88%以上，符合国家标准，是一种提高其纯度的有效方法。
【专利说明】一种提高硫酸软骨素纯度的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物制药领域，具体涉及一种提高硫酸软骨素纯度的方法。
【背景技术】
[0002]硫酸软骨素(chondroitin sulfate，CS)又名牛磺软骨素、康得宁，是哺乳动物结缔组织的主要成分之一，多分布于软骨、鼻骨、喉骨、韧带、肌膜中。
[0003]CS在临床上主要用于治疗神经痛、关节炎、耳鸣以及促进溃疡愈合和防治高血脂等，动物口服后未发现临床毒性症状。CS也广泛应用于食品、化妆品行业。近年来，硫酸软骨素作为一种新型药用活性成分，在医药制剂、医学材料、日化产品、化妆品、生发剂、保健品等领域应用广泛，越来越受到人们的重视，市场需求趋旺。
[0004]目前，硫酸软骨素普遍提取的方法主要有盐解、碱解、酶解法以及碱-酶法，其分离纯化的方法有乙醇沉淀法、离子交换色谱法、季铵盐配合法、吸附法和纤维素分离法等。但是上述方法在现有生产工艺中普遍存在一个问题:生产工艺繁琐不易操作、碱酸乙醇使用量大、硫酸软骨素纯度不高、生产成本高昂，生产周期较长，产率低并且污染严重，不适合企业规模化生产需求。
[0005]实践中，由于制备硫酸软骨素的原料软骨原料表面附着许多脂肪和肌肉组织，这些组织往往成为了硫酸软骨素提取的主要杂质，又加上硫酸软骨素本身比较粘稠，这就使得硫酸软骨素的提取过滤非常困难，这也就直接导致规模化生产硫酸软骨素过滤效率低，生产周期长。本发明人经多方研宄，通过超声波辅助，探索得出一种由超声波辅助提取的碱-酶法提取硫酸软骨素。
【发明内容】
[0006]本发明提供一种提高硫酸软骨素纯度的方法，以期在缩短硫酸软骨素生产周期，简化生产工艺过程的同时提高硫酸软骨素的纯度，使得硫酸软骨素的生产适合现代企业的规模化生产，为企业和社会创造更大的经济效益。
[0007]为实现上述发明目的，本发明一种提高硫酸软骨素纯度的方法，该方法实施的具体步骤为:
(1)软骨和纯水以1:1-1:2的重量比例混合，将水煮沸10-15min，去除表面油残留物自然风干后粉碎；
(2)将粉碎后的软骨至于碱性条件下超声处理2-2.5h ;
(3)按照一定的比例加入木瓜蛋白酶，于50-60°C，pH6.5-7.0条件下酶解反应Ih ;升温到90°C灭酶；
(4)按照一定的比例加入胃蛋白酶，于30-50°C，pH6.5-7.0条件下酶解反应1.5_2h ；升温到90°C灭酶；
(5)过滤，取滤液，向滤液中加入乙醇溶液，使得乙醇体积分数达到60-70%，沉降Ih；
(6)将步骤(5)中的沉降液离心，取沉淀，抽滤，用乙醇洗涤1-2次，置于恒温干燥箱中干燥，得到硫酸软骨素。
[0008]所述的步骤(I)中，碱性条件为6%的NaOH溶液。
[0009]所述的步骤(2)中，软骨与纯水的重量比例为:1:1.5。
[0010]所述的步骤(3)中，木瓜蛋白酶占软骨的重量的0.5%，酶解反应的条件是:温度55°C, pH6.8。
[0011]所述的步骤(4冲，胃蛋白酶占软骨重的0.5%，于40°C，pH 6.8的条件下酶解反应1.5h0
[0012]所述的步骤(6)中，将沉降液离心的条件是:转速为6000rpm，离心时间为10-15min ;干燥温度为60°C。
[0013]本发明具有以下优点:
1.本方法制备的硫酸软骨素纯度高、质量好。
[0014]2.本方法工艺简单，容易操作，适合企业规模化生产。
【具体实施方式】
[0015]实施例1
一种提高硫酸软骨素纯度的方法，本发明包括下述生产工艺:
(1)软骨和纯水以1:1的重量比例混合，将水煮沸12min，去除表面油残留物自然风干后粉碎；
(2)将粉碎后的软骨浸于6%的氢氧化钠溶液中超声处理2h;
(3)按照木瓜蛋白酶与软骨的重量比为1:200的比例加入木瓜蛋白酶，于50°C，pH6.5条件下酶解反应Ih ;升温到90°C灭酶15min ；
(4)按照胃蛋白酶与软骨的重量比为1:200的比例加入胃蛋白酶于45°C，pH6.5条件下酶解反应1.5 ;升温到90°C灭酶15min ；
(5)过滤，取滤液，向滤液中加入乙醇溶液，使得乙醇体积分数达到70%，沉降Ih;
(6)将步骤(5)中的沉降液在转速6000rpm下离心lOmin，取沉淀，抽滤，用乙醇洗涤1-2次，置于恒温干燥箱中于60°C干燥，得到硫酸软骨素。
[0016]在该条件下，所得硫酸软骨素产品的产率为19.8%,纯度为88.7%,达到国家标准。
[0017]实施例2
一种提高硫酸软骨素纯度的方法，本发明包括下述生产工艺:
(1)软骨和纯水以1:1.5的重量比例混合，将水煮沸15min，去除表面油残留物自然风干后粉碎；
(2)将粉碎后的软骨浸于6%的氢氧化钠溶液中超声处理2h;
(3)按照木瓜蛋白酶与软骨的重量比为1:200的比例加入木瓜蛋白酶，于55°C，pH6.8条件下酶解反应Ih ;升温到90°C灭酶20min ；
(4)按照胃蛋白酶与软骨的重量比为1:200的比例加入胃蛋白酶于40°C，pH6.8条件下酶解反应2h ;升温到90°C灭酶20min ；
(5)过滤，取滤液，向滤液中加入乙醇溶液，使得乙醇体积分数达到70%，沉降Ih;
(6)将步骤(5)中的沉降液在转速6000rpm下离心lOmin，取沉淀，抽滤，用乙醇洗涤1-2次，置于恒温干燥箱中于60°C干燥，得到硫酸软骨素。
[0018]在该条件下，所得硫酸软骨素产品的产率为20.8%,纯度为90.3%,达到国家标准。
【权利要求】
1.一种提高硫酸软骨素纯度的方法，其特征在于，该方法由下述六个步骤组成: (1)软骨和纯水以1:1-1:2的重量比例混合，将水煮沸10-15min，去除表面油残留物自然风干后粉碎； (2)将粉碎后的软骨置于碱性条件下超声处理2-2.5h ; (3)按照一定的比例加入木瓜蛋白酶，于50-60°C，pH6.5-7.0条件下酶解反应Ih ;升温到90°C灭酶； (4)按照一定的比例加入胃蛋白酶，于30-50°C，pH6.5-7.0条件下酶解反应1.5_2h ；升温到90°C灭酶；(5)过滤，取滤液，向滤液中加入乙醇溶液，使得乙醇体积分数达到60-70%，沉降Ih； (6)将步骤(5)中的沉降液离心，取沉淀，抽滤，用乙醇洗涤1-2次，置于恒温干燥箱中干燥，得到硫酸软骨素。
2.如权利要求1所述的提高硫酸软骨素纯度的方法，其特征在于，所述的步骤(I)中，碱性条件为6%的NaOH溶液。
3.如权利要求1所述的提高硫酸软骨素纯度的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，软骨与纯水的重量比例为1.5。
4.如权利要求1所述的提高硫酸软骨素纯度的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中，木瓜蛋白酶占软骨的重量的0.5%，酶解反应的条件是:温度55°C，pH6.8。
5.如权利要求1所述的提高硫酸软骨素纯度的方法，其特征在于，所述的步骤(4)中，胃蛋白酶占软骨重的0.5%，于40°C，pH 6.8的条件下酶解反应1.5h。
6.如权利要求1所述的提高硫酸软骨素纯度的方法，其特征在于，所述的步骤(6)中，将沉降液离心的条件是，在6000rpm的转速下，离心1min ;干燥温度为60°C。
【文档编号】C08B37/08GK104448041SQ201410813502
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月24日 优先权日:2014年12月24日
【发明者】刘冠男, 郭利, 夏衬来 申请人:青岛九龙生物医药有限公司