治疗或改善偏头痛的方法与流程

本申请要求2014年6月23日提交的美国临时申请号62/015,727和2015年1月29日提交的美国临时申请号62/109,386的权益和优先权，所述申请各自特此以引用的方式整体并入。

背景

偏头痛是与复发的致衰弱发作相关的原发性、阵发性头痛病症，并且通常通过集中于血管引发剂的现有药物疗法不良控制。偏头痛发作的发病通常通过由皮质扩散性抑制现象引起的闪烁暗点或偏头痛先兆预示(SD；参见Ayata，Headache，50：725-30，2010；Eikerman-Haerter等人，Curr.Neurol.Neurosci.Rep.，10：167-73，2010；以及Sánchez-del-Rio等人，Curr.Opin.Neurol.，17(3)：289-93，2004)。SD是由细胞外钾的局部增加和谷氨酸的释放触发的皮质电图活动的缓慢传播抑制，其产生跨大皮质区域的缓慢去极化的自传播波。大约15％-30％的偏头痛患者经历具有先兆的偏头痛。

哺乳动物的中枢神经系统(CNS)采用许多神经活性肽以实现脑和脊髓内的特化信号传导，包括神经活性肽生长抑素、缩胆囊素、VIP、P物质、脑啡肽、神经肽Y(NPY)、神经降压素、TRH、CCK和强啡肽。(通常参见The Biochemical Basis of Neuropharmacology，Cooper，Bloom and Roth，第5版，Oxford University Press，New York，1986)。对在CNS中起作用的复杂信号传导途径的仔细阐明已导致鉴别由这些神经活性肽调节的特异性受体，所述神经活性肽为与CNS相关的各种病症提供重要的治疗靶标。

N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体(NMDAR)是牵涉在神经退行性病症(包括中风相关的脑细胞死亡、惊厥性病症)以及学习和记忆中的这样一种受体。NMDAR还在调节中枢神经系统中的正常突触传递、突触可塑性和兴奋毒性中起中心作用。NMDAR进一步参与长时程增强(LTP)。LTP是为学习和记忆的基础的神经元连接的持续加强(参见Bliss和Collingridge，1993，Nature 361：31-39)。

已经在中枢神经系统(CNS)中表征了谷氨酸受体的两种一般类别。它们是代谢型谷氨酸受体(其属于信号传导蛋白的G-蛋白偶联受体家族)和离子移变的谷氨酸受体(Muir和Lees，Stroke，1995，26，503-513)。离子移变类别通过激活它们的选择性配体进一步细分为AMPA、红藻氨酸和NMDA受体亚型。

已经针对潜在治疗用途开发了NMDA-调节小分子激动剂和拮抗剂化合物。然而，这些中的许多与非常窄的治疗指数和不期望的副作用相关，所述副作用包括幻觉、共济失调、非理性行为和显著毒性，所有这些限制了它们的有效性和/或安全性。

因此，仍然需要使用提供增加的功效和减少的不良副作用的化合物进行的偏头痛和其他相关疾病的改善治疗。

概述

在某些实施方案中，本公开涉及一种治疗偏头痛的方法，所述方法包括向有需要的患者施用药学有效量的GLYX肽。在某些实施方案中，所述偏头痛可以是阵发性偏头痛、慢性偏头痛、视网膜性偏头痛、眼肌麻痹性偏头痛、非头痛性偏头痛、偏头痛性病症、月经性偏头痛、腹型偏头痛、儿童期周期性综合征和/或丛集性头痛。在某些实施方案中，所述偏头痛是无先兆的偏头痛(普通偏头痛)。在某些实施方案中，所述偏头痛是有先兆的偏头痛(典型偏头痛)。在某些实施方案中，所述偏头痛伴随异常性疼痛。

例如，所公开的化合物可与NMDAR的甘氨酸位点在功能上相互作用或调节NMDAR的甘氨酸位点的作用以用于治疗偏头痛(例如，阵发性偏头痛、慢性偏头痛、视网膜性偏头痛、眼肌麻痹性偏头痛、非头痛性偏头痛、偏头痛性病症、月经性偏头痛、腹型偏头痛、儿童期周期性综合症或丛集性头痛)。

在某些实施方案中，本公开涉及一种治疗、抑制和/或预防皮层扩散性抑制(SD)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用药学有效量的GLYX肽。在某些实施方案中，本公开涉及治疗或改善有需要的患者的长期偏头痛后后遗症，其包括向所述患者施用药学有效量的GLYX肽。在某些实施方案中，所述GLYX肽具有以下结构：

或其药学上可接受的盐，或其具有NMDAR部分激动剂活性的衍生物。一方面，本发明涉及一种治疗有需要的患者的偏头痛的方法，所述方法包括向所述患者施用药学有效量的由下式表示的化合物：

或其药学上可接受的盐。另一方面，本发明涉及一种治疗、抑制和/或预防有需要的患者的皮层扩散性抑制的方法，所述方法包括向所述患者施用药学有效量的由下式表示的化合物：

或其药学上可接受的盐。另一方面，本发明涉及一种治疗或改善有需要的患者的长期偏头痛后后遗症的方法，所述方法包括向所述患者施用药学有效量的由下式表示的化合物：

或其药学上可接受的盐。

如下文更详细地描述，当在先兆施用时有效的药物将是对患者有效的，例如通过允许在偏头痛的早期阶段时干预。预期本文描述的方法适用于治疗有先兆的偏头痛，所述治疗包括在先兆时施用GLYX肽。

附图简要说明

图1示出海马切片的CA1场中的局灶性高[K⁺]诱导的扩散性抑制(SD)，从而导致反映神经元和神经胶质的大规模去极化的扩散波的亮度变化。

图2示出在脑切片中引发的SD的数据；在起始位点处SD的个别连续事件的基线面积之间不存在显著差异(Bonferroni多重比较检验，P＞0.20)，从而指示GLYX-13不会改变SD的起始。

图3示出证明GLYX-13增加SD起始的不应期的数据。SD能够在对照切片中的前一SD之后五分钟成功诱发(对照)，但不能在用GLYX-13处理的切片中引发(GLYX-13 30’)。

图4A示出亮度增加的SD“先兆”从起始移液管扩散并且在切片上传播，并且可用于计算SD传导速度(图4B)。

图5示出用于分析6个随后SD的使用重复测量值的单向方差分析(ANOVA)以便测试SD的重复事件是否维持稳定速度并且GLYX-13是否影响SD传导速度。

图6A示出在对照锥体神经元中响应于SD的两个事件的棘收缩，而图6B例示在10μM GLYX-13存在下的相同过程；图6C指示GLYX-13拯救SD后棘大小的恢复。

图7A示出(在雌激素处理的和非油处理的)大鼠中扩散性抑制的扩散距离，并且图7B示出(在雌激素处理的和非油处理的)大鼠中扩散性抑制的扩散速度，从而指示与油处理的大鼠相比扩散速度更快。

图8示出来自雌激素处理的大鼠的切片中的SD比油处理的大鼠行进更长。

图9A示出在GLYX-13存在下，与大鼠实验中的SD相关的亮度变化被延迟；图9B指示在GLYX-13存在下诱发SD。

图10示出在施加GLYX-13(F(1，8)＝3.1；p＜0.05)之前和之后GLYX-13对来自雌激素处理的大鼠的SD传播速度的影响；以及两组之间GLYX-13的预暴露(F(1，8)＝4.2；p＜0.05)。

图11A-11B示出爆炸后24小时在PEL测试中通过rapastinel(3mg/kg IV；爆炸后1小时)拯救爆炸诱导的学习缺陷。图11A示出爆炸恢复时间(正常走动的潜伏期)数据。图11B示出使用受试者间设计在爆炸后24小时进行的单次3分钟积极情绪学习(PEL)试验阶段的结果。N＝4-6/组。*P＜0.05(图11A)ANOVA，或(图11B)fisher PLSD事后检验，rapastinel+TBI对比媒介物+TBI。

详述

偏头痛分类

偏头痛在1988年首次全面分类。国际头痛学会最近更新了其2004年的头痛分类。根据这种分类，偏头痛主要是头痛连同紧张型头痛和丛集性头痛等。

偏头痛被分成七个亚类(其中一些包括进一步细分)：

无先兆的偏头痛或“普通偏头痛”涉及不伴随先兆的偏头痛。

有先兆的偏头痛或“典型偏头痛”通常涉及伴随先兆的偏头痛。较不常见的是，先兆可在没有头痛或在非偏头痛性头痛的情况下发生。两种另外种类是家族性偏瘫性偏头痛和散发性偏瘫性偏头痛，其中人患有有先兆的偏头痛并伴有运动无力。如果近亲属患有相同病状，则它被称为“家族性的”，否则它被称为“散发性的”。另一种类是基底型偏头痛，其中头痛和先兆伴随说话困难、世界旋转、耳鸣或许多其他脑干相关症状，但不伴随运动无力。这种类型最初被认为是由于基底动脉(供应脑干的动脉)的痉挛。有先兆的偏头痛的诊断指南例如在Eriksen等人，European Journal of Neurology 11：583-591，2004和International Classification of Headache Disorders，第二版(ICHD-II)中找到。有先兆的偏头痛的亚型包括在ICHD-II中列出的那些，如伴有偏头痛性头痛的典型先兆(IHS 1.2.1)、伴有非偏头痛性头痛的典型先兆(IHS 1.2.2)、无头痛的典型先兆(IHS 1.2.3)、家族性偏瘫性偏头痛(IHS 1.2.4)、散发性偏瘫性偏头痛(IHS 1.2.5)以及基底型偏头痛(IHS 1.2.6)。

通常为偏头痛前兆的儿童期周期性综合征包括周期性呕吐(偶尔的强烈呕吐期)、腹型偏头痛(腹痛，通常伴有恶心)和儿童良性阵发性眩晕(偶发眩晕发作)。

视网膜性偏头痛涉及伴随视觉障碍或甚至一只眼睛暂时失明的偏头痛。

偏头痛的并发症描述异常长或异常频繁的或与癫痫或脑损伤相关的偏头痛和/或先兆。

可能的偏头痛描述具有偏头痛的一些特征的病状，但是其中不存在足够证据来将其肯定地诊断为偏头痛(在存在并发药物过度使用的情况下)。

慢性偏头痛是偏头痛的并发症，并且是满足偏头痛的诊断标准的头痛且发生持续更大时间间隔。具体地说，大于或等于15天/月持续超过3个月。

存在偏头痛的四个可能的阶段，但是并非所有阶段都必须经历：(1)前驱期，其在头痛发作前数小时和数天发生；(2)先兆期，其在头痛即将发作前出现；(3)疼痛期，也称为头痛期；和(4)头痛后期，在偏头痛发作结束之后经历的效应。

前驱或前兆症状在约60％的患有偏头痛的患者中发生，在疼痛或先兆开始之前两小时至两天发病。这些症状可包括各种各样的现象，包括：情绪变化、易怒、抑郁或欣快、疲劳、对某些食物的渴望、肌肉僵硬(特别是在颈部)、便秘或腹泻以及对气味或噪声的敏感性。这可在患有有先兆的偏头痛或无先兆的偏头痛的患者中发生。

先兆是在头痛之前或期间发生的短暂局灶性神经学现象。它们在几分钟内逐渐出现，并且通常持续不到60分钟。症状在本质上可以是视觉、感觉或运动的，并且许多人经历多于一种。视觉效应最常发生；它们在达99％的病例中发生并且在超过50％的病例中不伴有感觉或运动效应。视觉障碍通常包括闪烁暗点(在视野中部分改变的区域，所述区域闪烁并且可干扰人阅读或驾驶的能力。)这些通常在视觉中心附近开始，并且然后向外扩散至具有锯齿形线的侧部，所述侧部被描述为看起来像城堡的防御工事或墙壁。通常所述线是呈黑色和白色，但一些人也看到彩色线。一些人失去其视野的一部分(称为偏盲)，而其他人经历模糊。

感觉先兆是第二最常见类型；它们在30％-40％的有先兆的人中发生。通常，发麻的感觉从手和手臂的一侧上开始，并且扩散至同一侧的鼻-口区域。麻木通常在麻刺感已经过去而位置感觉丧失之后发生。先兆期的其他症状可包括：言语或语言障碍、世界旋转以及不太常见的运动问题。运动症状指示这是偏瘫性偏头痛，并且与其他先兆不同，无力通常持续超过一小时。

先兆也可在无随后头痛的情况下发生。非头痛性偏头痛(也称为沉默性偏头痛)相对罕见，并且包括先兆和其他症状但无随后头痛(即，无疼痛期)。

在疼痛期期间，头痛通常是单侧、悸动和中度至重度强度的。它通常逐渐发生，并且通过身体活动加重。然而在超过40％的病例中，疼痛可以是双侧的，并且颈部疼痛通常是相关联的。双侧疼痛在患有无先兆的偏头痛患者中特别常见。较不常见的疼痛可主要发生在头部的后部或顶部。疼痛通常在成人中持续4至72小时，然而在幼儿中通常持续不到1小时。发作的频率是可变的，从一生几次至一周若干次，平均为约一月一次。

疼痛通常伴随恶心、呕吐、对光的敏感性、对声音的敏感性、对气味的敏感性、疲劳以及易怒。在基底型偏头痛(具有与脑干相关的神经学症状或具有身体两侧的神经学症状的偏头痛)中，常见效应包括：世界旋转、轻度头痛和混乱的感觉。恶心在几乎90％的人中发生，并且呕吐在约三分之一中发生。其他症状可包括：视力模糊、鼻塞、腹泻、尿频、苍白或出汗。头皮肿胀或压痛可能发生，颈部僵硬也可能发生。

偏头痛的效应可在主要头痛已经结束之后持续数天；这被称为偏头痛后期。许多人报告在偏头痛区域中的疼痛感觉，并且一些人报告在头痛已经过去后思维受损持续数天。患者可能感到疲倦并且具有头痛、认知障碍、胃肠道症状、情绪变化和乏力。

GLYX肽

GLYX-13是新近研发的速效、持久性抗抑郁剂，其对N-甲基-D-天冬氨酸谷氨酸受体(NMDAR)的活化具有前所未有的调节作用。这种试剂(其在NMDA受体上其活化所需的专性协同激动剂甘氨酸位点处起作用)使所述关键受体的活化标准化，从而在其太低时使其增加，并且在其太高时抑制它。通过这种作用，GLYX-13能够增强长时程增强(LTP)的诱导，同时抑制突触强度的LTD，并且恢复来自衰老动物的海马切片中的正常LTP。

如本文所用，术语“GLYX肽”是指具有NMDAR甘氨酸位点部分激动剂/拮抗剂活性的肽。GLYX肽可通过熟知的重组或合成方法获得，如在美国专利5,763,393和4,086,196中描述的方法，所述专利以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，GLYX是指具有氨基酸序列Thr-Pro-Pro-Thr或L-苏氨酰基-L-脯氨酰基-L-脯氨酰基-L-苏氨酸酰胺的四肽。

例如，GLYX-13是指被描述为下式的化合物：

还涵盖GLYX-13的多晶型物、同源物、水合物、溶剂化物、游离碱和/或适合的盐形式，如但不限于乙酸盐。肽可以是环化或非环化形式，如US 5,763,393中所进一步描述。在一些实施方案中，GLYX-13类似物可包括在Thr或Pro基团中的一个或多个上的部分的插入或缺失，如CH₂、OH或NH₂部分的缺失。在其他实施方案中，GLYX-13可任选地被一个或多个卤素、C₁-C₃烷基(任选地被卤素或氨基取代)、羟基和/或氨基取代。NMDAR的甘氨酸位点部分激动剂公开于US 5,763,393、US 6,107,271和Wood等人，NeuroReport，19，1059-1061，2008中，其全部内容以引用的方式并入本文。

可以理解，在此公开的肽可包括天然和非天然氨基酸，例如所有天然氨基酸(或其衍生物)、所有非天然氨基酸(或其衍生物)、或天然和非天然氨基酸的混合物。例如，GLYX-13中的一个、两个、三个或更多个氨基酸可各自独立地具有D-或L-构型。

GLYX-13可主要在含NR2B的NMDAR处起作用，并且可能不展现已知NMDAR调节剂如CPC-101，606和氯胺酮的典型副作用。在某些实施方案中，当以治疗有效量施用至受试者时，GLYX-13可产生基本上无镇静的抗偏头痛或其他治疗作用。在其他实施方案中，GLYX-13可能不具有滥用潜力(例如，可能不是易成瘾的)。

在一些实施方案中，GLYX-13可增加AMPA GluR1丝氨酸-845磷酸化。在某些实施方案中，糖原合酶激酶3β(GSK-3β)可被GLYX-13活化。在一些情况下，β-连环蛋白的水平可在施用GLYX-13后改变。

在一些实施方案中，GLYX-13或包含GLYX-13的组合物可相对于血浆水平提供更好的静脉内体内效力和/或脑水平浓度。

另外，与甘氨酸位点拮抗剂如L-701，324或具有窄治疗指数的产生治疗作用与共济失调之间非常窄的剂量范围的其他甘氨酸位点拮抗剂相比，GLYX-13可具有宽治疗指数。例如，L-701，324在产生共济失调的剂量下具有抗惊厥作用(Bristow等人，JPET 279：492-501，1996)。类似地，一系列Merz化合物在产生共济失调的剂量下具有抗惊厥作用(Parsons等人，JPET283：1264-1275，1997)。

方法

一方面，本发明涉及一种治疗有需要的患者的偏头痛的方法，所述方法包括向所述患者施用药学有效量的由下式表示的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，所述化合物以约0.01mg/kg至约1000mg/kg或约1mg/kg至约500mg/kg所述化合物的剂量施用至所述患者。

在某些实施方案中，所述偏头痛是阵发性偏头痛、慢性偏头痛、视网膜性偏头痛、眼肌麻痹性偏头痛、非头痛性偏头痛、偏头痛性病症、月经性偏头痛、腹型偏头痛、儿童期周期性综合征或丛集性头痛。

在某些实施方案中，所述偏头痛是阵发性偏头痛、慢性偏头痛、视网膜性偏头痛、眼肌麻痹性偏头痛、非头痛性偏头痛或丛集性头痛。

在某些实施方案中，所述偏头痛是有先兆的偏头痛(典型偏头痛)。

在某些实施方案中，所述偏头痛是无先兆的偏头痛(普通偏头痛)。

在某些实施方案中，所述偏头痛伴随异常性疼痛。

在某些实施方案中，所述方法包括施用约1至10mg/kg、约10mg/kg至约250mg/kg、约20mg/kg至约150mg/kg、约30mg/kg至约125mg/kg、约40mg/kg至约110mg/kg、约50mg/kg至约100mg/kg、约60mg/kg至约90mg/kg或约70mg/kg至约90mg/kg所述化合物。

在某些实施方案中，所述方法包括施用约1mg/kg、约2.5mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约50mg/kg、约70mg/kg或约100mg/kg所述化合物。

在某些实施方案中，所述方法包括约一天两次、约每天、每2天、每3天、每4天、每5天、约一周一次、约每两周或约每四周施用所述化合物。

另一方面，本发明涉及一种治疗、抑制或预防有需要的患者的皮层扩散性抑制或由皮层扩散性抑制引起的疾病或病状的方法，所述方法包括向所述患者施用药学有效量的由下式表示的化合物：

或其药学上可接受的盐。

另一方面，本发明涉及一种治疗或改善有需要的患者的长期偏头痛后后遗症的方法，所述方法包括向所述患者施用药学有效量的由下式表示的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，所述化合物以约0.01mg/kg至约1000mg/kg所述化合物的剂量施用至所述患者。在某些实施方案中，所述化合物以约1mg/kg至约500mg/kg所述化合物的剂量施用至所述患者。

在某些实施方案中，所述方法包括施用约1mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至20mg/kg、约10mg/kg至约250mg/kg、约20mg/kg至约150mg/kg、约30mg/kg至约125mg/kg、约40mg/kg至约110mg/kg、约50mg/kg至约100mg/kg、约60mg/kg至约90mg/kg或约70mg/kg至约90mg/kg所述化合物。

在某些实施方案中，所述方法包括施用约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约50mg/kg、约70mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg或约100mg/kg所述化合物。

在某些实施方案中，所述方法包括约一天两次、约每天、每2天、每3天、每4天、每5天、约一周一次或约每两周或例如每月施用所述化合物。

在某些实施方案中，所述方法还包括与阿片样物质、抗抑郁剂、抗癫痫剂、非类固醇抗炎药(NSAID)、血清素5HT1B/1D激动剂、N-甲基-D-天冬氨酸拮抗剂或抗炎化合物共同施用。

在许多实验情况下，NMDAR活化可促进SD或甚至是SD现象必不可少的。因此，防止NMDAR过度活化的化合物可以是用于减轻且甚至预防偏头痛发作的发病的重要新疗法。例如，下文论述的GLYX-13抑制体外海马切片中SD的产生和传播。在某些实验中，GLYX-13可通过细胞外钾浓度的局部增加来完全阻止SD的诱导，和/或如果不完全阻断SD则可减慢SD传播的速率。此外，GLYX-13可在SD后改进树突棘返回至其原始大小。例如，本文提供预防性地和/或急性治疗患者的偏头痛的方法。这种施用可改善患者的偏头痛发作的严重性(或在一些实施方案中，中止)。

在某些实施方案中，患者是人。所涵盖的患者包括女性患者和/或青少年患者。

本文还提供治疗治疗-耐药的患者的偏头痛(例如，阵发性偏头痛、慢性偏头痛、视网膜性偏头痛、眼肌麻痹性偏头痛、非头痛性偏头痛、偏头痛性病症、月经性偏头痛、腹型偏头痛、儿童期周期性综合症或丛集性头痛)或治疗难治性偏头痛(例如患有对至少一种或至少两种其他化合物或治疗剂的适当疗程没有反应和/或尚未反应的偏头痛的患者)的方法。例如，本文提供一种治疗治疗耐受的患者的偏头痛(例如，阵发性偏头痛、慢性偏头痛、视网膜性偏头痛、眼肌麻痹性偏头痛、非头痛性偏头痛、偏头痛性病症、月经性偏头痛、腹型偏头痛、儿童期周期性综合症或丛集性头痛)的方法，所述方法包括a)任选地将所述患者鉴别为治疗耐药的，以及b)向所述患者施用有效剂量的GLYX-13。在某些实施方案中，所述偏头痛是有先兆的偏头痛。

在一个实施方案中，本文提供急性治疗有需要的患者的偏头痛(例如，阵发性偏头痛、慢性偏头痛、视网膜性偏头痛、眼肌麻痹性偏头痛、非头痛性偏头痛、偏头痛性病症、月经性偏头痛、腹型偏头痛、儿童期周期性综合症或丛集性头痛)的方法，所述方法包括例如以单个单位剂量施用有效量的GLYX肽。例如，在一个实施方案中，本文涵盖一种在偏头痛发作发病时治疗有需要的患者的偏头痛的方法，所述方法包括急性施用(例如，单剂量)有效量的GLYX-13。此类方法可在所述施用之后缓解患者的至少一种偏头痛症状持续约2周或更短、1周或更短、1天或更短或1小时或更短(例如15分钟或更短、半小时或更短)。在一些实施方案中，此类方法可在所述施用后缓解患者的至少一种偏头痛症状持续约1天或更长、1周或更长或2周或更长。例如，本文提供一种方法，所述方法包括向患有偏头痛的患者施用有效量的GLYX肽，其中相较于施用用于治疗偏头痛的另一种药剂的同一患者，所述患者在第一次施用GLYX肽后基本上更早地基本上缓解至少一种偏头痛症状。本领域的技术人员将了解，此类急性施用方法在医院或门诊环境中可能是有利的。本文所述的方法还可适用于治疗在有先兆的偏头痛期间发生的异常性疼痛。

本发明的方法还可用于治疗患有抑郁症、患有创伤性脑损伤、癫痫或处于中风风险的患者。例如，在一个实施方案中，本文提供一种治疗创伤性脑损伤的方法，所述方法包括施用有效量的GLYX肽，例如GLYX-13。在另一个实施方案中，提供一种治疗癫痫的方法，所述方法包括施用有效量的GLYX肽，例如GLYX-13。

除了心血管病状外，有先兆的偏头痛患者可能处于其他神经学和/或心理学病状和病症的增加的风险。已经显示，例如，有先兆的偏头痛与重性抑郁症或自杀企图的共现增加了发展无端癫痫发作的风险(Hesdorffer等人，Epilepsy Res.75(2-3)：220-223，2007)。与有先兆的偏头痛相关的其他病状包括显著更高的NO活性标志物、增加的抑郁症发病率以及中风的遗传生物标志物相关性显著大于一般人群(Etminan等人，#MJ330(7482)：63，2005)。患有这些病状中的任一种或处于这些病状中的任一种的风险的偏头痛患者可服用药物来治疗或控制这些疾病，并且这些药物可能与当前使用的用于治疗有先兆的偏头痛的药物不利地相互作用。如本文所示，这些病状中的一些是曲坦疗法的的禁忌症(例如，中风和舒马曲坦疗法)。此外，FDA在2006年发布了关于血清素综合征的公共健康忠告，血清素综合征是当曲坦与为血清素再摄取抑制剂(SSRI)或选择性血清素/去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)的某些抗抑郁剂一起使用时可能发生的一种威胁生命的病状。因此，本文所述的方法可适用于治疗患有抑郁症的患者或已经患有中风或处于中风风险的患者。

剂量

本公开的任何组合物的剂量将取决于患者的症状、年龄和体重、待治疗或预防的病症的性质和严重程度、施用途径以及主题组合物的形式而变化。任何主题制剂可以单剂量或以分次剂量施用。用于本公开的组合物的剂量可通过本领域的技术人员已知或如本文教导的技术容易地确定。一般来说，当化合物以例如介于0.05mg与3000mg之间(作为固体形式测量的)，例如约10mg至约500mg或例如约1至约200mg/kg的每日剂量施用至人时可获得令人满意的结果。剂量范围包括，例如介于10-1000mg(例如，50-800mg)之间。在一些实施方案中，施用50、100、150、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000mg所述化合物。或者，可使用患者的体重来计算剂量的量。例如，施用至患者的化合物或其药物组合物的剂量可在1-500mg/kg(例如，5-250mg/kg)的范围内。在示例性非限制性实施方案中，剂量可在5-200mg/kg(例如，1、2、2.5、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50mg/kg)或15-100mg/kg(例如，55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200mg/kg)的范围内。在示例性非限制性实施方案中，剂量可在1-15mg/kg、50-100mg/kg、60-90mg/kg或70-80mg/kg的范围内。

GLYX-13可提供高治疗指数。例如，GLYX-13在约1至约10mg/kg、约10至约200mg/kg，例如约30mg/kg、约75mg/kg或约100mg/kg的静脉内或皮下剂量范围的情况下可以是治疗有效的。在一些实施方案中，在例如500mg/kg静脉内的剂量下不发生共济失调。

用于疗法中所需的GLYX肽的治疗有效量随所治疗的病状的形式、所需的治疗时间长度、患者的年龄和状况而变化，并且最终由主治医师确定。所需剂量可方便地以持续两周、一周、6、5、4、3、2或1天有效的单个剂量施用，或作为以适当时间间隔施用的多个剂量，例如作为每天两个、三个、四个或更多个亚剂量施用。

有效剂量或量以及对制剂的施用时间的任何可能的作用可能需要针对本公开的任何具体组合物加以鉴别。这可通过如本文所述的常规实验，使用一组或多组动物(优选每组至少5只动物)或(在适当的情况下)在人试验中完成。任何主题组合物以及治疗或预防方法的有效性可通过施用所述组合物且通过测量一个或多个适用指数评估所述施用的作用，并且将这些指数的治疗后值与在治疗之前相同指数的值进行比较来评估。

在给定患者中将产生最有效治疗的任何特定主题组合物的准确给药时间和量将取决于主题组合物的活性、药代动力学和生物利用度、患者的生理状况(包括年龄、性别、疾病类型和阶段、一般身体状况、对给定药物剂量和类型的反应性)、施用途径等。本文提供的指南可用于优化治疗，例如确定最佳给药时间和/或量，其将仅需要包括监测受试者和调节剂量和/或时间的常规实验。

在治疗受试者时，可通过在治疗时期期间的预定时间测量一个或多个相关指数来监测患者的健康。可根据这种监测的结果优化治疗(包括施用的组合物、量、次数和制剂)。可周期性地重新评价患者以通过测量相同的参数来确定改善的程度。可基于这些重新评价来进行对所施用的主题组合物的量的调整以及可能对施用时间的调整。

治疗可以低于化合物的最佳剂量的较小剂量开始。此后，剂量可以较小增量增加，直到达到最佳治疗作用。

主题组合物的使用可降低所述组合物中包含的任何单独药剂的所需剂量，因为不同药剂的起效和作用持续时间可以是互补的。

主题组合物的毒性和治疗功效可通过细胞培养物或实验动物中的标准药学程序来确定，例如以用于测定LD50和ED50。

可在配制用于人的剂量范围中使用由细胞培养试验和动物研究获得的数据。任何主题组合物的剂量优选处于包括ED50同时具有极小或无毒性的循环浓度的范围内。剂量可取决于所采用的剂型和所利用的施用途径而在这个范围内变化。对于本公开的组合物，可从细胞培养测定初步估计治疗有效剂量。

在某些实施方案中，GLYX肽作为预防性措施(即，在前驱期之前)施用。在某些实施方案中，GLYX肽在前驱期期间施用。在某些实施方案中，GLYX肽在先兆时施用。“在先兆时”意指在先兆发作之后且在偏头痛发作之前的任何时间。在某些实施方案中，GLYX肽在偏头痛发作之后施用。在某些实施方案中，GLYX肽在头痛后期期间施用，例如以减轻其症状。

如本文所用的术语“预防”是指预防本文所述的疾病、病症或病状的一种或多种症状或病状(例如，疼痛或有先兆的偏头痛以及伴有或不伴有异常性疼痛的偏头痛)的预防性治疗或治疗。预防性治疗可例如在所述疾病、病症或病状发作之前的事件(例如，在偏头痛先兆)之前(“暴露前预防”)或之后(“暴露后预防”)开始。包括施用本文所述的GLYX肽或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物的预防性治疗可以是急性、短期或慢性的。所施用的剂量可在预防性治疗过程期间变化。还参见：Kaniecki等人，“Treatment of Primary Headache：Preventive Treatment of Migraine.”In：Standards of Care for Headache Diagnosis and Treatment.Chicago(IL)：National Headache Foundation；2004，第40-52页。

制剂

本公开的GLYX肽可取决于其预期用途通过各种方式施用，如本领域中所熟知。例如，如果本公开的组合物有待口服施用，则它们可被配制为片剂、胶囊、颗粒剂、粉末或糖浆剂。或者，本公开的制剂可作为注射剂(静脉内、肌内或皮下)、滴剂输注制剂或栓剂胃肠外施用。对于通过眼粘膜途径施加，本公开的组合物可被配制为滴眼剂或眼用软膏。这些制剂可通过常规方式来制备，并且(如果需要)可将组合物与任何常规添加剂如赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、增溶剂、悬浮助剂、乳化剂或包衣剂混合。

还可使用任何已知的施用方法施用并入表达载体中的编码GLYX肽的DNA以在体内表达GLYX肽。

在本发明的制剂中，润湿剂、乳化剂和润滑剂如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁、以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂以及抗氧化剂可存在于所配制的药剂中。

主题组合物可适合于口服、局部(包括经颊和舌下)、直肠、阴道、气雾剂和/或胃肠外施用。制剂可方便地以单位剂型存在并且可通过药学领域中熟知的任何方法来制备。可与载体物质组合以产生单个剂量的组合物的量取决于所治疗的受试者和特定施用模式而变化。

制备这些制剂的方法包括使本公开的组合物与载体以及任选地一种或多种辅助成分缔合的步骤。一般来说，制剂是通过使药剂与液体载体或细碎固体载体或两者均一且精细缔合，并且接着必要时使产物成形来制备。

适合于口服施用的制剂可为如下形式：胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用经调味的基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶)、粉末、颗粒剂或为水性或非水性液体中的溶液或悬浮液、或为水包油或油包水乳剂、或为酏剂或糖浆剂、或为软锭剂(pastille)(使用惰性基质，如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)，其各自含有预定量的作为活性成分的其主题组合物。本公开的组合物还可作为大丸剂、药糖剂或糊剂施用。

在用于口服施用的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖锭剂、粉末、颗粒剂等)中，将主题组合物与一种或两种药学上可接受的载体(如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下中的任一种进行混合：(1)填充剂或增充剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如像羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)湿润剂，如甘油；(4)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐以及碳酸钠；(5)溶解延迟剂，如石蜡；(6)吸收加速剂，如季铵化合物；(7)润湿剂，例如像乙酰醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；以及(10)着色剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，所述组合物还可包含缓冲剂。在使用此类赋形剂如乳糖(lactose)或乳糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的软填充和硬填充的明胶胶囊中还可采用类似类型的固体组合物作为填充剂。

可通过压制或模制、任选使用一种或多种辅助成分来制成片剂。可使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，淀粉乙醇酸钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂来制备压制片剂。可通过在适合的机械中模制用惰性液体稀释剂润湿的主题组合物的混合物来制备模制片剂。可任选地使片剂和其他固体剂型如糖锭剂、胶囊、丸剂和颗粒剂具有刻痕或用包衣材料和胶囊壳(如制药领域中熟知的肠溶衣和其他包衣)来制备它们。

用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆剂和酏剂。除主题组合物之外，所述液体剂型可包含本领域中常用的惰性稀释剂，例如像，水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油(具体地说，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油以及芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇以及脱水山梨醇的脂肪酸酯、环糊精及其混合物。

除主题组合物之外，悬浮液还可包含悬浮助剂，例如像乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂以及黄芪胶、及其混合物。

用于直肠或阴道施用的制剂可作为栓剂呈现，可通过将主题组合物与一种或多种适合的无刺激性赋形剂或载体(包括，例如，可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯)混合来制备所述栓剂，并且所述栓剂在室温下为固体，但在体温下为液体并且因此在体腔中将会熔化且释放活性剂。适合于阴道施用的制剂还包括含有本领域中已知的适合的此类载体的阴道栓剂、止血栓、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂。

用于经皮施用主题组合物的剂型包括粉末、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液以及贴剂。

对于局部眼部施用，本发明的组合物可采取溶液、凝胶剂、软膏、悬浮液或固体插入物的形式，其被配制成使得单位剂量包含治疗有效量的活性成分或在组合疗法的情况下其一些多重活性成分。

适合于胃肠外施用的本发明的药物组合物包含主题组合物与以下中的一种或多种的组合：药学上可接受的无菌等渗水溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳剂、在临用之前可被重构成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末，它们可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使所述制剂与预期的接受者的血液等渗的溶质，或助悬剂或增稠剂。

可在本发明的药物组合物中采用的适合水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、及其适合混合物、植物油(如橄榄油)、以及可注射的有机酯(如油酸乙酯)和环糊精。可维持适当的流动性，例如，通过使用包衣材料(如卵磷脂)、在分散液的情况下通过保持所需的颗粒大小、以及通过使用表面活性剂。

组合疗法

本文所述的任何GLYX肽(例如GLYX-13)可单独使用或与其他药剂组合使用以治疗或预防本文论述的任何疾病或病状。例如，在一些组合治疗中，当单独施用时，一种或多种治疗化合物的剂量可从标准剂量减少。

本发明的方法还包括与阿片样物质、抗抑郁剂、抗癫痫剂、非类固醇抗炎药(NSAID)、血清素5HT1B/1D激动剂、N-甲基-D-天冬氨酸拮抗剂或抗炎化合物共同施用GLYX肽。

在某些实施方案中，本公开涉及单独或与一种或多种其他抗抑郁剂治疗(如三环抗抑郁剂、MAO-I、SSRI以及双重和三重摄取抑制剂)和/或抗焦虑药组合的GLYX肽用于制造用以治疗偏头痛(例如，阵发性偏头痛、慢性偏头痛、视网膜性偏头痛、眼肌麻痹性偏头痛、非头痛性偏头痛、偏头痛性病症、月经性偏头痛、腹型偏头痛、儿童期周期性综合症或丛集性头痛)的药剂的用途。可用于与GLYX肽组合的示例性药物包括氯米帕明(Anafranil)、盐酸多虑平(Adapin)、去甲替林(Aventyl)、盐酸阿米替林(Elavil)、地昔帕明(Norpramin)、去甲替林(Pamelor)、盐酸去甲丙咪嗪(Pertofrane)、多虑平(Sinequan)、曲米帕明(Surmontil)、盐酸丙咪嗪(Tofranil)、普罗替林(Vivactil)、反苯环丙胺(Parnate)、苯乙肼(Nardil)、马普兰(Marplan)、西酞普兰(Celexa)、依地普仑(Lexapro)、氟伏沙明(Luvox)、帕罗西汀(Paxil)、百忧解(Prozac)、左洛复(Zoloft)、安非他酮(Wellbutrin)、郁复伸(Effexor)、瑞美隆(Remeron)、欣百达(Cymbalta)、曲唑酮(Desyrel)以及路滴美(Ludiomill)。

在某些实施方案中，阿片样物质选自由以下组成的组：阿芬太尼、布托啡诺、丁丙诺啡、右马拉胺、地佐辛、右旋丙氧芬、可待因、二氢可待因、地芬诺酯、埃托啡、芬太尼、氢可酮、氢吗啡酮、凯托米酮、洛哌丁胺、左啡诺、左美沙酮、美普他酚、美沙酮、吗啡、吗啡-6-葡糖苷酸、纳布啡、纳洛酮、羟考酮、羟吗啡酮、喷他佐辛、哌替啶、哌腈米特、丙氧芬、瑞芬太尼、舒芬太尼、替利定以及曲马多。

在某些实施方案中，抗抑郁剂选自由以下组成的组：阿地唑仑、阿拉丙酯、安咪奈丁、阿米替林/利眠宁组合、阿替美唑、阿扎米安色林(azamianserin)、巴嗪普令、苯呋拉林、二苯美仑、苯奈达林(binodaline)、比培那醇、溴法罗明、卡罗沙酮、西文氯胺、氰帕明、西莫沙酮、西酞普兰、氯美醇、氯伏胺、氮卓尼尔、丹醇、地美替林、二苯西平、度琉平、屈昔多巴、乙非辛、艾司唑仑、依托哌酮、非莫西汀、酚加宾、非唑拉明、氟曲辛、咪唑克生、吲达品、茚洛秦、伊普吲哚、左丙替林、锂、利托西汀、洛非帕明、美地沙明、美他帕明、美曲吲哚、米安色林、米那普仑、米氮平、孟替瑞林、奈拉西坦、奈福泮、尼亚酰胺、诺米芬辛、诺氟西汀、奥替瑞林、奥沙氟生、匹那西泮、吡吲哚、苯噻啶、利坦色林、咯利普兰、sercloremine、司普替林、西布曲明、舒布硫胺、舒必利、替尼沙秦、托扎啉酮、促甲状腺激素释放素、噻奈普汀、替氟卡宾、曲唑酮、托芬那辛、托非索泮、托洛沙酮、托莫西汀、维拉必利、维洛沙秦、维喹啉、齐美利定以及氯苯吡卓(zometapine)。

在某些实施方案中，抗癫痫剂选自由以下组成的组：卡马西平、氟吡汀、加巴喷丁、拉莫三嗪、奥卡西平、苯妥英、瑞替加滨、托吡酯以及丙戊酸盐。

在某些实施方案中，NSAID选自由以下组成的组：阿西美辛、阿司匹林、塞来昔布、地拉考昔、双氯芬酸、二氟尼柳、乙水杨胺、依托芬那酯、依托考昔、非诺洛芬、氟芬那酸、氟比洛芬、氯拉唑酸、氯诺昔康、布洛芬、吲哚美辛、伊索昔康、酮保泰松、酮洛芬、酮咯酸、萘普生、萘丁美酮、尼氟灭酸、舒林酸、托美汀、吡罗昔康、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、莫非保松、羟基保泰松、帕瑞考昔、菲尼酮、苯基丁氮酮、吡罗昔康、丙帕他莫、异丙安替比林、罗非昔布、水杨酰胺、舒洛芬、噻洛芬酸、替诺昔康、伐地昔布、4-(4-环己基-2-甲基噁唑-5-基)-2-氟苯磺酰胺、N-[2-(环己基氧基)-4-硝基苯基]甲磺酰胺、2-(3，4-二氟苯基)-4-(3-羟基-3-甲基丁氧基)-5-[4-(甲基磺酰基)苯基]-3(2H)-哒嗪酮以及2-(3，5-二氟苯基)-3-[4-(甲基磺酰基)苯基]-2-环戊烯-1-酮。

在某些实施方案中，血清素5HT1B/1D激动剂选自由以下组成的组：依来曲普坦、氟伐曲坦、那拉曲坦、利扎曲坦、舒马曲坦以及佐米曲普坦。

在某些实施方案中，N-甲基-D-天冬氨酸拮抗剂选自由以下组成的组：金刚烷胺、阿替加奈、贝索普迪(besonprodil)、布地品、芋螺睡眠肽(conantokin)G、德鲁西明、地塞米诺、右美沙芬、右旋丙氧芬、非氨酯、氟非氨酯、加环利定(gacyclidine)、甘氨酸、伊培沙宗、凯托塞伐林(kaitocephalin)、氯胺酮、凯托米酮、拉尼西明、利可替奈、米达福太(midafotel)、美金刚、D-美沙酮、D-吗啡、米那普仑、奈拉美生、奥芬那君、瑞马西胺(remacemide)、sulfazocine、FPL-12，495(racemide代谢物)、托吡酯、(αR)-α-氨基-5-氯-1-(膦酰基甲基)-1H-苯并咪唑-2-丙酸、1-氨基环戊烷-甲酸、[5-(氨基甲基)-2-[[[(5S)-9-氯-2，3，6，7-四氢-2，3-二氧代-1H-，5H-吡啶并[1，2，3-de]喹喔啉-5-基]乙酰基]氨基]苯氧基]-乙酸、α-氨基-2-(2-膦酰基乙基)-环己烷丙酸、α-氨基-4-(膦酰基甲基)-苯乙酸、(3E)-2-氨基-4-(膦酰基甲基)-3-庚烯酸、3-[(1E)-2-羧基-2-苯基乙烯基]-4，6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸、8-氯-2，3-二氢哒嗪并[4，5-b]喹啉-1，4-二酮、与2-羟基-N，N，N-三甲基-乙铵的5-氧化物盐、N′-[2-氯-5-(甲硫基)苯基]-N-甲基-N-[3-(甲硫基)苯基]-胍、N′-[2-氯-5-(甲硫基)苯基]-N-甲基-N-[3-[(R)-甲基亚磺酰基]苯基]-胍、6-氯-2，3，4，9-四氢-9-甲基-2，3-二氧代-1H-茚并[1，2-b]吡嗪-9-乙酸、7-氯代硫犬尿喹啉酸、(3S，4aR，6S，8aR)-十氢-6-(膦酰基甲基)-3-异喹啉甲酸、(-)6，7-二氯-1，4-二氢-5-[3-(甲氧基甲基)-5-(3-吡啶基)-4-H-1，2，4-三唑-4-基]-2，3-喹喔啉二酮、4，6-二氯-3-[(E)-(2-氧代-1-苯基-3-亚吡咯烷基)甲基]-1H-吲哚-2-甲酸、(2R，4S)-rel-5，7-二氯-1，2，3，4-四氢-4-[[(苯基氨基)羰基]氨基]-2-喹啉甲酸、(3R，4S)-rel-3，4-二氢-3-[4-羟基-4-(苯基甲基)-1-哌啶基]-2H-1-苯并吡喃-4，7-二醇、2-[(2，3-二氢-1H-茚-2-基)氨基]-乙酰胺、1，4-二氢-6-甲基-5-[(甲基氨基)甲基]-7-硝基-2，3-喹喔啉二酮、[2-(8，9-二氧代-2，6-二氮杂双环[5.2.0]壬-1(7)-烯-2-基)乙基]-膦酸、(2R，6S)-1，2，3，4，5，6-六氢-3-[(2S)-2-甲氧基丙基]-6，11，11-三甲基-2，6-亚甲基-3-苯并吖辛因(benzazocin)-9-醇、2-羟基-5-[[(五氟苯基)甲基]氨基]-苯甲酸、1-[2-(4-羟基苯氧基)乙基]-4-[(4-甲基苯基)甲基]-4-哌啶醇、1-[4-(1H-咪唑-4-基)-3-丁炔基]-4-(苯基甲基)-哌啶、2-甲基-6-苯基乙炔基)-吡啶、3-(膦酰基甲基)-L-苯丙氨酸、以及3，6，7-四氢-2，3-二氧代-N-苯基-1H，5H-吡啶并[1，2，3-de]喹喔啉-5-乙酰胺。

在某些实施方案中，抗炎化合物选自由以下组成的组：阿司匹林、塞来昔布、可的松、地拉考昔、二氟尼柳、依托考昔、非诺洛芬、布洛芬、酮洛芬、萘普生、泼尼松龙、舒林酸、托美汀、吡罗昔康、甲芬那酸、美洛昔康、苯基丁氮酮、罗非昔布、舒洛芬、伐地昔布、4-(4-环己基-2-甲基噁唑-5-基)-2-氟苯磺酰胺、N-[2-(环己基氧基)-4-硝基苯基]甲磺酰胺、2-(3，4-二氟苯基)-4-(3-羟基-3-甲基丁氧基)-5-[4-(甲基磺酰基)苯基]-3(2H)-哒嗪酮以及2-(3，5-二氟苯基)-3-[4-(甲基磺酰基)苯基]-2-环戊烯-1-酮。

本公开具有多个方面，所述方面通过以下非限制性实施例说明。

实施例

实施例1

本文所述的研究利用SD传播速率的细胞外多位点电生理学监测，以及双光子激光扫描显微术用于体外海马切片中SD诱发的树突棘大小变化的实时成像。研究了新颖NMDAR受体功能性甘氨酸位点部分激动剂GLYX-13对SD的传播阈值和速率的影响，以及SD对树突棘形态的实时影响。GLYX-13通过细胞外钾浓度的局部增加偶尔完全阻止SD的诱导，并且一致地减慢其传播速率。SD通过海马CA1区域产生树突棘的快速回缩，其在神经元去极化恢复之后逆转。GLYX-13提高了树突棘在SD后返回至其原始大小和位置的速率和程度，从而指示所述药物和调节NMDA受体活性的其他药物能够保护大脑中的突触连接免受来自反复偏头痛发作的可能损害。

一般方法

药物

所有外部和膜片移液管溶液是用去离子蒸馏水制备的(电阻＞18MΩ cm^-2；Milli-Q系统)。用于制备细胞外溶液和细胞内溶液的化学品购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)。AlexaFluor 594购自Molecular Probes。

切片制备和细胞外记录

实验在来自14至21天大大鼠(Taconic Farms，Hudson，NY)的海马切片上进行。将大鼠用异氟烷深度麻醉，杀死并且快速去除大脑且将其置于充氧(95％O₂-5％CO₂)的冰冷人工脑脊液(ACSF)中，所述人工脑脊液含有(以mM计)：126NaCl、2.5KCl、2.6CaCl₂、1.3MgCl₂、1.25NaH₂PO₄、26NaHCO₃以及11葡萄糖。在切片期间，将所述大脑切成对半，切下额叶，并且使用氰基丙烯酸酯胶粘剂将个别大脑半球粘合至一个载物台上，所述载物台浸入连续充氧的冰冷ACSF中。使用振动切片机(Leica 1200s)切割含有海马的400μm厚冠状切片，并且将其转移至界面保持室以用于在室温下孵育最少一小时，之后转移至Haas-型界面室内以用于在32℃下记录。用在实验开始之前用95％O₂/5％CO₂饱和的ACSF灌注切片(4ml/分钟；ACSF mM：NaCl 126；KCl 3；NaH₂PO₄ 1.25；MgCl 1.3；CaCl₂ 2.5；NaHC0₃ 26；葡萄糖10)，并且浴施加所有药物。

使用具有Clampex(v.9)的MultiClamp 700B(Axon Instruments)进行细胞外记录，在1kHz下滤波且在3kHz下数字化。低电阻(在填充ACSF之后1-2MΩ)记录电极由薄壁硼硅酸盐玻璃制成，将其以与SD起始移液管大约150mm距离间隔插入CA1区域的放线层中的Schaffer侧支终止场的顶部树突区域中以监测SD的扩散。将浸没的记录室安装在配备有红外微分干涉相差(DIC)光学器件的Zeiss Axioskop 2FS直立显微镜上。10倍物镜用于对由SD引起的切片亮度变化成像。用通过PTI主系统控制的冷却式CCD相机(CoolSNAP HQ)每100ms对亮度变化成像。用Clampfit 9对电生理数据进行分析。将成像数据数字化且用ImageJ(NIH)重建。

将双极不锈钢刺激电极(FHC，Bowdoin，ME)置于CA3区域中的Schaffer侧支连合纤维中，并且施加电流脉冲且调整刺激强度，以便每30秒诱发一次大约50％最大fEPSP(50至100pA；100μs持续时间)。来自ISO-Flex隔离器的电刺激通过主八脉冲发生器(AMPI，Jerusalem，Israel)进行控制并且由Multiclamp700B(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)触发。用Digidata1322数字化信号且使用Multiclamp 700B放大器记录信号。通过线性插值最大负偏差的20％-80％测量fEPSP斜率，并且证实斜率在开始实验之前至少15分钟在10％内为稳定的。使用IBM兼容性个人计算机上的Clampfit(版本9；Axon Instrument)分析数据。记录放线层中的顶部树突区场中的诱发的fEPSP(最大振幅的50％，2-4mV)持续至少30分钟的稳定基线期。

海马扩散性抑制的诱导

将海马的短期冠状切片转移至显微镜载物台上的浸没的记录室并且用温热的ACSF(32℃)灌注，其中细胞外[K⁺]在3ml/分钟的灌注速率下升至8mM。通过3M KCl穿过玻璃移液管的压力注射喷出起始扩散性抑制。持续50-100ms的8-10psi的压力脉冲由Picospritzer II(Parker Hannifin，Hollis，NH)驱动。当填充3M KCl时移液管电阻是2±0.2MΩ。

树突棘回缩/恢复的动态成像分析

在具有Alexa Fluor 594(100μM)的海马切片中负载CA1锥体神经元持续15分钟之后，使用配备有60x/1.1nA水浸红外物镜加4倍数字变焦的定制双光子激光扫描Olympus BX61WI显微镜对三级树突成像，如先前所描述(Zhang等人，2008)。来自聚焦层的在+/-3μm范围内的XYZ扫描模式用于避免运动偏差，其中z步幅间隔为0.5μm，并且对于7秒的单深度剖面时间，每个图像花费0.45秒完成。应非常小心以避免荧光饱和和来自太多激发光的对小树突棘的光毒性的任何迹象。以5分钟间隔重复深度剖面以减少可能的染料光漂白和光毒性。调节至810nm的Mai/Tai激光器(固态激光器，Mountain View，CA)用于激发，并且通过Olympus FluoviewFV300软件(Olympus America，Melville，NY)控制图像采集。使用具有最大打开的小孔的共焦激光扫描头的光电倍增管检测荧光，并且针对超过背景的信号优化发射光谱窗。在transfluorescence途径中，565nm分色镜用于分离绿色和红色荧光，并且分别穿过HQ525/50和HQ605/50发射滤光片以消除透射或反射激发光(Chroma Technology，Rockingham，VT)，并且通过两个光电倍增管同时检测。所述图示出来自整个6μm Z-剖面的收缩图像，并且这些投影用于计算作为棘体积的指数的强度。

数据分析

将记录信号通过具有1kHz截止频率的八电极Bessel低通滤波器滤波，并且以100μs间隔通过Clampex(V.9)采样。在用Clampfit(V.9)计算fEPSP斜率之后，将数据用Origin 6.1(Microcal Software，MA)进一步加工并且用CorelDraw 10(Corel，Ottawa，Ontario，Canada)呈现。将所有数据使用SPSS软件(SPSS Inc.，Chicago，IL)通过单向方差分析(ANOVA)或学生t检验进行分析。显著性水平被预设为P＜0.05。数据被呈现为跨实验的平均值±SEM。

结果

局灶性、高[K+]诱导的海马切片的CA1场中的扩散性抑制

在人工脑脊液(ACSF)(其中[K+]o在32℃下升高至8mM)中，3M[K⁺]o单次局部喷出(100ms)到CA1放线层中的场上(图1，左下)可靠地诱导SD，所述SD以9±5.4mm/分钟(n＝16)的传播速率在海马的整个CA1区域内扩散。表征为负场电位偏移的SD(图1，右上)显示在海马CA1区域的放线层突触层中-8±1.5mV(n＝30)的最大偏移，这通常持续超过45秒。

每10分钟诱导SD以测试负电位偏移的面积(图1，右上，阴影区域)(K⁺的细胞外空间传导的有效量值和持续时间的量度)是否在反复SD情况下稳定。虽然从起始电极记录的负电位偏移的面积大于距离600μm的远端记录电极处(图1，下图)，但是在任一部位处在10分钟间隔引发的反复连续SD的个别事件的量值或传播速度方面不存在显著差异(Bonferroni多重比较检验，P＞0.20)。这些结果指示可在海马的CA1场中稳定、重复地诱发可再现的SD负电位偏移，至少持续前十。

GLYX-13遏制海马扩散性抑制的传播且增加海马扩散性抑制的不应期

为了测试新颖NMDA受体甘氨酸共激动剂位点部分激动剂GLYX-13能够通过调控生理范围内的NMDA受体活化且防止过度活化来升高SD的阈值或防止SD的假设，将GLYX-13在1、10或50μm处浴施加至海马切片持续30分钟，之后将高[K+](在膜片移液管中1mM)短暂喷射至CA1区域的放线层中并试图引发SD。首先在未经处理的切片中基于高[K+]喷射的时间构建剂量反应关系，且然后在三种测试浓度(1、10或50μM)下的每种下浴施加GLYX-1330分钟后构建剂量反应关系，同时记录DC电位以检测SD。

在无药物的ACSF中初始诱发至少三次SD之后，用GLYX-13灌注切片且继续每十分钟引发SD。如在图2上图中所示，对于10μM GLYX-13，在起始位点处SD的个别连续事件的基线面积之间不存在显著差异(Bonferroni多重比较检验，P＞0.20)，从而指示GLYX-13不会改变SD的起始。

接着对GLYX-13进行测试以确定在反复SD情况下是否影响在近处(近端)和远处(远端)记录位点处的SD量值的关系。将所述切片用10μM GLYX-13灌注并且继续每10分钟引发SD(图2，下图)。Bonferroni多重比较检验(P＞0.20)再次显示在对照切片中SD的个别连续事件的面积之间不存在显著差异。GLYX-13不影响在近端记录位点处SD的负电位偏移的起始。

在起始位点处的SD量值在远程记录处SD的负电位偏移的面积相关(图2，下图)。因此，比较在GLYX-13不存在和存在下的近端/远端面积比率。如在图2下图中所示，远程位点与起始位点之间的面积比率在10μM GLYX-13存在下通过施加第六个SD(6^th SD)而显著降低。双向ANOVA指示三种显著作用：1)在所有观察结果内相同切片中的时间作用反复SD(F(1，12)＝5.17，p＜0.05)；2)来自药物处理的作用(F(1，12)＝5.07，p＜0.05)；以及3)时间与处理之间的相互作用(F(1，12)＝30.91，p＜0.01)。这些结果指示SD的周期性负电位偏移改变远程位点与起始位点之间的幅值比；并且这种降低通过GLYX-13显著增强。这些发现表明GLYX-13能够显著抑制SD穿过脑的传播，特别是在多个SD事件之后。

在先前研究中，证明GLYX-13能够通过降低负场电位偏移的幅值且减慢传导速度来限制SD的传播(在多个SD之后最大的作用)。通过缩短每个SD起始之间的时间间隔，据发现对照切片中的每个SD对于下一个成功的SD具有3-4分钟的绝对不应期(n＝7)。10μM GLYX-13使这种不应期延长至5-6分钟(n＝6)。如图3中所示，SD能够在对照切片中的前一SD之后五分钟成功诱发(对照)，但不能在用GLYX-13处理的切片中引发(GLYX-13 30’)。

使用由SD诱导的细胞外空间体积位移产生的光密度的固有变化测量SD传播

当流体冲入去极化细胞中并且所述细胞溶胀时，SD引发细胞外空间体积的显著收缩，并且这可被视为体内固有光密度的变化。这种亮度强度变化也可使用透射光DIC显微镜在脑切片中容易地检测。图4A示出亮度增加的SD“先兆”从起始移液管扩散并且在切片上传播，并且可用于计算SD传导速度(图4B)。亮度增加的时程与使用电生理记录的SD的最大负电位偏移良好相关。因此，计算亮度随距离变化的时程提供用于测量SD传导速度的准确且方便的方式。

为了确定重复SD是否显示相同传导速度，在间隔150μm的5个点上监测亮度变化，如图4A的上图所示。具有重复测量值的单向ANOVA指示SD在单个切片内维持从P1至P5的稳定传输速度(F(5，35)＝2.42，p＞0.05)。因此，可使用从P1至P5的传输速度来测试连续事件内的SD稳定性。SD的平均传播速度是9.07±0.55mm/分钟，范围为7.54至11.14mm/分钟(n＝16)。

为了测试SD的重复事件是否维持稳定速度并且GLYX-13是否影响SD传导速度，使用ANOVA测试用重复测量值来分析6个随后SD，如图5中所示。分析揭示在对照与GLYX-13处理的切片之间的显著差异(F(1，50)＝3.66，p＜0.01)。SD序列占总方差的38.5％，从而指示SD传播速度随着SD数目的增加而显著减慢(F(5，50)＝14.01，p＜0.01)。虽然GLYX-13对所有重复SD内的SD传播速度的作用在双向ANOVA中未达到显著性，但SD的数目与GLYX-13处理之间存在显著相互作用(F(5，50)＝2.53，P＜0.05)，从而反映GLYX-13(实心圆圈)仅通过第7个SD显著降低SD传播速度。

扩散性抑制引起CA1锥体神经元树突棘在体积上可逆地收缩

脑中锥体神经元树突的解剖微结构出人意料地是响应于多种刺激不稳定的。去极化、氧/葡萄糖剥夺和N-甲基-D-天冬氨酸都已显示在体外海马CA1锥体神经元中产生树突棘的回缩。为了检查棘对SD的反应，将单个CA1锥体神经元用荧光染料AlexaFluor-594填充，并且使用从双光子激光扫描显微镜收集的连续z-堆叠区段(0.2μm步长跨越5μm)对树突棘形状成像。在将AlexaFluror-594负载至CA1锥体中后三十分钟已达到神经元内的平衡分布，通过将高[K+](在膜片移液管中1M)短暂喷射至海马切片的CA1区域的放线层中起始SD，其中Schaffer侧支轴突在CA1锥体神经元的顶端树突上形成突触。如图6A和6B中所示，由SD产生的去极化确实引发实质性棘收缩，如通过塌陷的z-堆叠荧光振幅所测量，其中棘体积在第一SD之后20-30分钟完全恢复。这证实SD诱导的去极化的后遗症之一是树突棘形态的改变。

GLYX-13改善在扩散性抑制后的树突棘恢复

最后，检查GLYX-13对树突棘对SD的动态形态响应的作用。研究GLYX-13是否能够减轻棘响应于SD的收缩，或改善它们的恢复。图6A示出在对照锥体神经元中响应于SD的两个事件的棘收缩，而图6B例示在10μM GLYX-13存在下的相同过程。重复测量值的ANOVA达到从如图6C的上图所示的树突棘的树突棘测量的荧光强度的显著性(F(8，64)＝17.53，p＜0.001)，并且这种显著性主要来自SD后时程(F(8，64)＝6.18，p＜0.01)，从而揭示虽然GLYX-13(实心圆圈)未改变由SD引起的收缩，但它确实拯救了SD后棘大小的恢复(F(8，64)＝2.81，p＜0.05)。

实施例2

海马切片制备：使用14至21天大的大鼠(Taconic Farms)进行实验。将大鼠用异氟烷深度麻醉，杀死并且快速去除大脑且将其置于充氧(95％O₂-5％CO₂)的冰冷人工脑脊液(ACSF)中，所述人工脑脊液含有(以mM计)：126NaCl、2.5KCl、2.6CaCl₂、1.3MgCl₂、1.25NaH₂PO₄、26NaHCO₃以及11葡萄糖。在切片期间，将所述大脑切成对半，切下额叶，并且使用氰基丙烯酸酯胶粘剂将个别大脑半球粘合至一个载物台上，所述载物台浸入连续充氧的冰冷ACSF中。使用振动切片机(Leica 1200s)切割含有海马的400μm厚冠状切片，并且将其转移至界面保持室以用于在室温下孵育最少一小时，之后开始实验。

海马扩散性抑制的诱导：将海马的短期冠状切片转移至显微镜载物台上的浸没的记录室并且用温热的ACSF(32℃)灌注，其中细胞外[K⁺]在3ml/分钟的灌注速率下升至8mM。通过3M KCl穿过玻璃移液管的压力注射喷出起始扩散性抑制。通常持续50ms的8-10psi的压力脉冲由picospritzer驱动。当填充3M KCl时移液管电阻是2±0.2MΩ。

电生理记录方法：使用具有Clampex(v.9)的MultiClamp 700B(Axon Instruments)进行细胞外记录，在1kHz下滤波且在3kHz下数字化。低电阻(在填充ACSF之后1-2MΩ)记录电极由薄壁硼硅酸盐玻璃制成，将其以与SD起始移液管大约150mm距离间隔插入CA1区域的放线层中的Schaffer侧支终止场的顶部树突区域中以监测SD的扩散。将浸没的记录室安装在配备有红外微分干涉相差(DIC)光学器件的Zeiss Axioskop 2FS直立显微镜上。10倍物镜用于成像由SD引起的切片亮度变化。用通过PTI主系统控制的冷却式CCD相机(CoolSNAP HQ)每100ms对亮度变化成像。用Clampfit 9对电生理数据进行分析。将成像数据数字化且用ImageJ(NIH)重建。所有实验在符合国家卫生研究院准则的批准方案下进行。

研究了与妇女和青少年患者相关的实施例1的发现。所述实验方案用于在体外海马脑中切片的CA1区域中引发扩散性去极化(SD)。为了更好地视觉观察扩散性抑制与起始位点的距离和在更长范围上的SD传播速度，用4倍物镜替换实施例1的10倍物镜以将视域扩大至1.6mm。对记录室进行修改以从两侧灌注切片，更有效的灌注不仅向脑切片提供足够的氧，而且有助于维持稳定的细胞外环境，因为扩散性抑制的每次事件引起细胞外和细胞内的显著离子组成变化。

两组2月龄卵巢切除的雌性大鼠包括于当前组研究中。一组卵巢切除的大鼠自手术后第7天开始每天注射雌激素持续7天，而另一组仅在进行实验之前注射作为对照的油媒介物持续7天。

在3M钾喷出之后将亮度变化视觉分类为失败(＜100mm)、局部扩散(＞100mm；＜800mm)或完全扩散(＞800mm)。在来自8只油处理的大鼠的39个切片中和来自7只雌激素处理的大鼠的35个切片中尝试SD诱导。表1总结在两组中通过相同方法诱发的SD的发生频率。在油处理组中，失败率显著高于雌激素处理组(卡方检验，P＝0.014)，从而指示雌激素本身增强脑组织在局灶性去极化时展示SD的倾向。

表1

使用亮度变化来估计扩散性抑制的传输速度，如以下图7中所示。通过将观察位点之间的SD距离除以SD在这些观察位点之间行进所花费的时间来从通过局灶性3M钾喷出诱导的局部和完全SD计算传播速度。如图7中所示，来自雌激素处理的大鼠的切片中的平均扩散速度是0.121±0.013mm/s，显著快于来自油处理的对照大鼠的切片中的传播速度(0.083±0.005mm/s，P＜0.05，学生t检验)。这些数据表明，雌激素在增强海马中以及可能新皮层中SD的倾向和速度中起重要作用。

通过测量SD远离起始位点的最大传播距离来测试雌激素如何影响SD的严重程度。如图8中所示，通过将显示从起始位点的最小可检测的亮度变化(从基线＞5％变化)的观察位点的距离与展示不可检测的亮度变化的紧邻观察位点的距离平均化并且测量与起始位点的这一距离来估计沿Schaffer侧支途径的扩散终点。如图8中所示，来自雌激素处理的大鼠的切片中的SD(0.594±0.071mm；n＝18)比来自油处理的大鼠的切片中的SD(0.394±0.051mm；n＝16，P＜0.05，学生t检验)行进显著更长距离。因此，雌激素处理的大鼠中的SD不仅更容易引发，而且传播更长距离。

然后在相距10分钟诱导2次Sd后，将10μM GLYX-13添加至灌注液，并且每10分钟继续诱导SD以确定SD的速度和规模是否受到影响。图9示出在施加GLYX-13之前和在暴露于10μM浴施加的GLYX-13 50分钟之后，来自雌激素处理的大鼠的切片中诱发SD的典型差异。测量在10个观察点处的亮度变化以评价GLYX-13对SD的作用。虽然SD仍然容易诱发，如图9B中所示，但图9A清楚地示出在GLYX-13存在下与SD相关的亮度变化被延迟。配对的t检验显示GLYX-13使平均SD传输速度从6.56±0.57mm/分钟显著降低至4.96±0.28mm/分钟(n＝5，P＜0.01，配对t检验)。进行来自油处理的大鼠的海马切片中的相同实验。虽然GLYX-13使平均SD传输速度从5.09±0.61mm/分钟降低至4.50±0.39mm/分钟(n＝5)，但是这种降低未达到统计显著性。

还进行了双向重复ANOVA以探究GLYX-13对跨两组的SD传播速度的影响。如图10所示，第一显著性来自在施加GLYX-13(F(1，8)＝3.1；p＜0.05)之前和之后的雌激素处理的大鼠；并且第二显著性来自两组之间的GLYX-13的预暴露(F(1，8)＝4.2；p＜0.05)。这些结果表明GLYX-13在雌激素处理的大鼠中具有更强的作用，从而将SD的传输速度显著减慢至油处理的大鼠的水平。

实施例3

方法

动物

成年雄性(2-3月龄)(SD)大鼠购自Harlan(USA)。将大鼠圈养在具有杨木片底层的Lucite笼中，维持在12小时：12小时光照：黑暗循环(在5AM光照)，并且在整个研究中给予随意获取大鼠食物(USA)和自来水。

创伤性脑损伤诱导

根据Goldstein等人(Goldstein，L.E.，等人(2012)“Chronic traumatic encephalopathy in blast-exposed military veterans and a blast neurotrauma mouse model，”Science Translational Medicine 4：134ra160)的方案进行修改用于在大鼠中使用，诱导单次爆炸诱导的创伤性脑损伤。通过异氟烷麻醉成年雄性大鼠，将耳塞插入大鼠的两只耳朵中，并且大鼠接受通过刺穿0.014英寸聚酯膜产生的单次约42PSI氦气爆炸。假对照被放置在爆炸半径之外。如下在爆炸后1小时向动物给予rapastinel(3mg/kg IV)或0.9％无菌盐水媒介物(1ml/kg IV)。使用3.5％-4％异氟烷将大鼠第一次麻醉，然后用1.5x 1.5mm泡沫塞(Pura-Fit耳塞，Moldex-Metric INC，Culver City，California)保护它们的耳朵。将大鼠置于头部可及啮齿动物胸部限制器(Stoelting，USA)中以保护其身体同时允许头部自由移动，其中头部距离铝激波管的端部10em(183x61cm；L-3Applied Technologies，USA)。大鼠接受通过刺穿0.014英寸的聚酯膜产生的单次约42PSI氦气爆炸。假对照被放置在爆炸半径之外。在爆炸后1小时向动物给予rapastinel(3mg/kg IV)或0.9％无菌盐水媒介物(1ml/kg IV)。记录从麻醉中恢复的潜伏期(图11A)。恢复被定义为展现眼睑和翻正反射以及正常走动(正常节律门，非圆形门，完全支撑的体重，一些嗅探和探索行为的证据)。在爆炸后1小时向动物给予GLYX-13(3mg/kg IV)或0.9％无菌盐水媒介物(1ml/kg IV)。N＝4-6/组；*P＜0.05(图11A)ANOVA。

积极情绪学习(PEL)图11B示出使用受试者间设计在爆炸后24小时进行的单次3分钟积极情绪学习(PEL)试验阶段的结果。N＝4-6/组。使用Fisher PLSD事后检验来评价结果(rapastinel+TBI对比媒介物+TBI)。

如先前所述(Burgdorf，J.，等人(2011)“Positive emotional learning is regulated in the medial prefrontal cortex by GluN2B-containing NMDA receptors，”Neuroscience 192：515-523)进行异种特异性打闹(rough-and-tumble)游戏，并且在给药后3小时和2周进行测试。通过实验者的右手施用异种特异性打闹游戏刺激。动物接受3分钟的异种特异性打闹游戏，所述游戏包括交替的15秒异种特异性游戏模块和15秒非刺激。记录高频超声波发声(USV)并且如先前所述(相同的)用Avasoft SASlab Pro(德国)通过声波图进行分析。对在每个非刺激周期期间发生的调频50-kHz USV进行量化以测量PEL。动物不习惯在测试前进行刺激。

结果

如图11A中所示，与假对照动物相比，接受TBI的动物显示从麻醉的更长恢复时间[F(1，13)＝41.7，P＜0.05]。如图11B中所示，rapastinel(3mg/kg IV)挽救TBI诱导的积极情绪学习的抑制[F(2，12)＝10.0，P＜.05；Fisher PLSD事后检验rapastinel+TBI对比媒介物+TBI，假对比媒介物+TBI对比，P＜0.05]。此外，麻醉恢复时间与PEL的发生率不显着相关[r(15)＝-0.14，P＞.05]。在积极情绪学习测试中，单剂量的rapastinel(3mg/kg IV)完全拯救由TBI诱导的学习和情绪的不足。因此，在这种临床前模型中，rapastinel有效治疗TBI的核心认知和情感症状，并且rapastinel似乎具有治疗PTSD的治疗潜力。

等效方案

虽然已经讨论了本公开的特定实施方案，但以上说明书是示例性而非限制性的。在查阅本说明书之后，本领域的技术人员将显而易见本公开的许多变化方案。本公开的整个范围应通过参考权利要求书与其等效物的整个范围以及说明书与这类变化来确定。

除非另外指明，否则本说明书和权利要求书中所用的表示成分的量、反应条件、参数、描述性特征等的所有数字应理解为在所有情况下都由术语“约”来修饰。因此，除非相反指明，否则本说明书和所附权利要求书中提出的数值参数是近似值，所述近似值可根据试图通过本公开得到的所希望的性质而变化。

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