含有由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖作为有效成分的用于改善性功能的组合物的制作方法

文档序号:11632201阅读:218来源:国知局
本发明涉及一种用于改善性功能的组合物,所述用于改善性功能的组合物含有如下有效成分:由撕裂蜡孔菌(ceriporialacerata)生成的胞外多糖、或包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或提取物。
背景技术
:男性的性功能由性欲、阴茎勃起、射精及性高潮构成。阴茎勃起是由于如下现象而被诱发:通过勃起神经的刺激使得海绵体平滑肌弛缓,从而小孔得到膨胀,由于小动脉扩张引起的血流增加而使得阴茎内压增加,据此,在较硬的白膜和小孔之间存在的白膜下静脉由于小孔的膨胀而被挤压,从而阻止静脉血的流出,因此使得阴茎内压更加增加。根据统计,成人男性中约20~60%诉苦性功能障碍,而且呈现随着年龄的增加发病率也增加的趋势。就在10余年前所述性功能障碍被认为大部分是因为心理性问题,但是随着现代医学的发达,被揭示性功能障碍患者的约50%以上是由于血管系统、神经系统以及内分泌系统疾病、糖尿病、高血压、药物服用等器质性原因引起的。最近,作为口服用勃起功能障碍治疗剂得到了开发并在全世界正在使用的西地那非(sildenafil,商品名:伟哥(viagra))被广为人知,其使得特异性分布于阴茎海绵体的pde-5(磷酸二酯酶-5(phosphodiesterase-5))的阻碍引起的cgmp的浓度增加,因此使得阴茎海绵体内血流增大,从而诱导勃起,并具有勃起功能障碍的治疗效果。此外,通常作为勃起功能障碍治疗剂广为人知的pde-5抑制剂,其作为环鸟苷酸3',5'-单磷酸盐(cyclicguanosine3',5'-monophosphate)-特异性磷酸二酯酶五型(cgmp-特异性pde-5)酶的选择性抑制剂,有乌地那非(udenafil,c25h36n6o4s)、西地那非(sildenafil,c22h30n6o4s)、伐地那非(vardenafil,c23h33n6o4s)以及他达拉非(tadalafil,c22h19n3o4)等,所述药物分别公开于韩国专利第0353014号(乌地那非)、韩国专利第0262926号(西地那非)、韩国专利第0430355号(伐地那非)、韩国专利第0357411号(他达拉非)。但是,现有的药物被报告有头痛、热潮红、消化不良及心脏麻痹等很多副作用,从而要求可代替或者补充它们的新的药剂的必要性。因此,实情为,要求开发一种没有由现有治疗方法带来的副作用且不是化学合成的产品、以天然物为主要原料的男性性功能改善剂。天然物的临床效能很久以前就得到了证实,通常比化学物质副作用少,因此是用于开发改善性功能的组合物的合适的候补物质。众所周知,撕裂蜡孔菌作为白腐菌的一种,为了在生态界利用纤维素(cellulose)、半纤维素(hemicellulose)、其他多糖类及甘油(glycerol)等碳源,执行被称为木质素(lignin)分解的共代谢(cometabolism)。但是实情为,撕裂蜡孔菌自2002年首次在学界得到报告后,其的产业化研究尚不完备。对此,本发明人发现由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或提取物具有改善性功能的效果,并完成本发明,本发明涉及将其作为有效成分含有的用于改善性功能的组合物。技术实现要素:本发明的目的在于,提供一种含有由撕裂蜡孔菌生成的药理活性成分的用于改善性功能的组合物。本发明的又另一个目的在于,提供一种含有由撕裂蜡孔菌生成的药理活性成分的用于改善性功能的健康功能食品。为了实现所述目的,本发明提供一种含有如下成分作为有效成分的用于改善性功能的组合物:由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖;包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液;所述菌丝体培养液的干燥粉末;或者所述菌丝体培养液的提取物。为了实现所述目的,本发明提供一种含有如下成分作为有效成分的具有改善性功能效能的健康功能食品:由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖;包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液;所述菌丝体培养液的干燥粉末;或者所述菌丝体培养液的提取物。为了实现所述目的,本发明提供一种改善性功能方法,所述方法包括将如下成分用药于需要改善性功能的对象:由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖;包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液;所述菌丝体培养液的干燥粉末或所述菌丝体培养液的提取物。为了实现所述目的,本发明提供一种用于制造改善性功能的药剂的由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖;包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液;所述菌丝体培养液的干燥粉末;或所述菌丝体培养液的提取物的用途。根据本发明的含有由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、所述菌丝体培养液的干燥粉末或提取物作为有效成分的组合物因为表现出对pde-5活性的抑制效果,所以能够有效地用作改善性功能的用途。附图说明图1是表示由撕裂蜡孔菌(ceriporialacerata)生成的胞外多糖的对pde-5活性的抑制效果的图表。具体实施方式以下,对本发明进行详细说明。本发明提供一种用于改善性功能的组合物,所述用于改善性功能的组合物含有如下有效成分:由撕裂蜡孔菌(ceriporialacerata)生成的胞外多糖、或包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、所述菌丝体培养液的干燥粉末或提取物。就根据本发明的组合物而言,所述胞外多糖可以包括约40~60重量%的糖和约30~40重量%的蛋白质、约40~50重量%的糖和约32~38重量%的蛋白质、或约43~47重量%的糖和约33~36重量%的蛋白质,优选地,可以包括约45重量%的糖和约34重量%的蛋白质。所述糖可含有甘露糖(mannose)、半乳糖(galactose)及葡萄糖(glucose)。所述胞外多糖可具有约100~150kda、约110~140kda或约115~125kda的分子量,优选地可具有约120kda的分子量。作为一个优选的具体例子,所述胞外多糖可通过包括如下步骤的制造方法制造:(a)对撕裂蜡孔菌的菌丝体进行液体培养,从而制造撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液;(b)使得撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液干燥从而进行粉末化;以及(c)用溶剂对撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液粉末进行提取后,对其进行过滤并减压浓缩。在所述(a)步骤中的用于对撕裂蜡孔菌菌丝体进行液体培养的培养基包括糖、葡萄糖、淀粉、高粱粉、大麦粉、大豆粉、硫酸镁(mgso4)、磷酸二氢钾(kh2po4)、磷酸氢二钾(k2hpo4)及水,氢离子浓度(ph)可以为4.5~6.0。作为一个优选的具体例子,所述培养基可包括糖0.2~3重量%、葡萄糖0.2~3重量%、淀粉0.2~4重量%、高粱粉0.1~0.5重量%、大麦粉0.1~0.5重量%、大豆粉0.2~3重量%、硫酸镁(mgso4)0.05~0.1重量%、磷酸二氢钾(kh2po4)0.05~0.25重量%、磷酸氢二钾(k2hpo4)0.05~0.25重量%,剩余为水。在所述(a)步骤中的液体培养可以在蓝色led光源下执行,并且可以将二氧化碳的浓度保持在1,000~2,000ppm的状态下执行。此时,就液体培养而言,例如,在20~25℃下,氢离子浓度(ph)为4.5~6.0,光源为蓝色led,光照度保持0.5lux,并且空气以0.5~1.5kgf/cm2注入,二氧化碳的浓度保持为1,000~2,000ppm的同时可进行8~13天,在22℃、ph5.0、1.0kgf/cm2、1,500ppm条件下进行10天,此时胞外多糖的含量较高,因此是优选的。作为所述(a)步骤中的亲株可使用经过如下培养过程的物质:将以马铃薯葡萄糖琼脂(potatodextroseagar,pda)培养基状态在4℃下保管中的1个优良菌株,在锥形瓶上使用马铃薯葡萄糖肉汤(potatodextrosebroth,pdb)培养基,并在振荡培养器中,保持25℃的恒温,并经过7~9天培养。此时,作为接种体要投入的菌丝体的量以将要培养的溶液的量为基准,优选为0.5%(w/v)程度。菌丝体量(%/100ml)多,并非胞外多糖的含量也一起升高,因此优选地,培养基组成使用使得胞外多糖的含量形成得最高的选择性培养条件,而不是对菌丝体的生长最好的营养比例及环境条件。所述培养液能够分离精制为菌丝体和水溶液。为了所述分离精制,可通过多片压滤机(multi-sheetfilterpress)和震动离心膜分离机(pallsep)对通过离心分离机去除菌丝体的溶液进行反复精制后,进行1分钟紫外线(uv)照射。此外,溶液需要在去除氧后进行密封保管,这是因为,溶液中存在菌丝的情况下,氧使得菌丝生长,并致使有效成分的含量发生变化。在所述(b)步骤中,使得在所述(a)步骤所制造的菌丝体培养液真空干燥或冻结干燥,从而能够粉末化。优选地,所述干燥为了防止消除有效物质,在40℃以下的温度,优选地,在30℃以下的温度下执行48~96小时。并且优选地,就在(b)步骤中的干燥而言,相比真空干燥机使用真空冻结干燥机使得有效物质含量变化最小化,所述真空干燥机将蒸发温度设置为相对较高。在所述(c)步骤中,用溶剂对在(b)步骤中所得到的菌丝体培养液干燥粉末进行提取后,对根据本发明的组合物的有效成分胞外多糖进行分离、制造。具体而言,干燥粉末5g中添加蒸馏水100ml,从而充分悬浊后,进行离心分离(8,000rpm,20min),从而能够向其的上清液中添加相当于其的量的2~3倍的提取溶剂,并放置于冰箱(4℃),从而静放12小时。在所述的静放物中仅对上清液重新进行离心分离(8,000rpm,20min)后,回收沉淀物,从而能够制造粗制(crude)的胞外多糖。优选地,在30℃以下对所述粗制的胞外多糖进行真空冻结干燥。所述提取溶剂可以是选自由如下物质组成的群中的溶剂或它们的混合溶剂:水、乙醇(ethanol)、甲醇(methanol)、丙酮(acetone)、丁醇(butanol)及乙酸乙酯(ethylacetate),并且优选地,可以是水或50%(w/w)~80%(w/w)的乙醇水溶液。在根据本发明的含有由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖;包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液;所述菌丝体培养液的干燥粉末或提取物作为有效成分的用于改善性功能的组合物中还可包括通常使用的适当的担体、赋形剂及稀释剂。相对于组合物总重量,包含0.1至80重量%的所述胞外多糖,优选地可包含0.1至50重量%,并且撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或提取物能够以相当于所述胞外多糖的含量的量适当地被包含。但是,最优选的胞外多糖或包含胞外多糖的培养液、培养液的干燥粉末或提取物的有效含量能够根据组合物的使用方法及目的适当地调节。可根据通常的方法分别对根据本发明的组合物进行剂型化并使用。作为适合的剂型有锭剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖衣片剂、硬质或软质的胶囊剂、溶液剂、悬浊剂或乳化液剂、注射剂、坐剂等,但是并非限定于此。根据本发明的组合物能够利用药学非活性有机或无机担体来制造适当的剂型。换句话说,剂型为锭剂、涂覆的锭剂、糖衣片剂及硬质胶囊的情况,可以使用乳糖(lactose)、蔗糖(sucrose)、淀粉或其衍生物、滑石(talc)、碳酸钙(calciumcarbonate)、明胶(gelatin)、硬脂酸(stearicacid)或其的盐。此外,剂型为软质胶囊的情况,可以使用植物性油、蜡(wax)、脂肪、半固体及液体的多元醇(polyol)。此外,剂型为溶液或糖浆(syrup)形态的情况,可以使用水、多元醇、甘油(glycerol)及植物性油等。根据本发明的组合物除了所述担体以外,还可包括保存剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、溶解剂、甜味剂、着色剂、渗透压调节剂、防氧化剂等。根据本发明的组合物的用药方法能够根据剂型而易于选择,并且能够进行口服或非口服用药。用药量虽然根据患者的年龄、性别、体重、病情、用药途径而可以不同,但是通常以有效成分胞外多糖为基准,5至500mg/kg的量,优选地,能够将100至250mg/kg的量按照每天一次至三次进行用药。但是,所述用药量无论从任何方面来讲都不对本发明的范围构成限定。根据本发明的组合物不仅提供优秀的改善性功能效果,而且几乎不存在药物毒性及副作用,从而以改善性功能为目的而长期用药也能够放心。由此,本发明的组合物能够用于需要改善性功能的疾病,例如,勃起功能障碍、糖尿病勃起功能障碍等的预防及治疗。此外,本发明提供用于改善性功能的健康功能食品,所述健康功能食品含有如下有效成分:由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖;包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、所述菌丝体培养液的干燥粉末;或者所述菌丝体培养液的提取物。根据本发明的健康功能食品可以是粉末、颗粒、锭剂、胶囊或饮料的形态,可以是糖果、巧克力、饮料、口香糖、茶、维他命复合剂、健康辅助食品等。此时,所述食品中的根据本发明的胞外多糖或包含胞外多糖的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或提取物通常为整体食品重量的0.01至50重量%,优选地以0.1至20重量%的形式被包含,健康饮料组合物的情况,能够以100ml为基准,以0.02至10g的形式,优选地以0.3至1g的比例被包含。所述食品中,与本发明的由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖;包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、所述菌丝体培养液的干燥粉末;或者所述菌丝体培养液的提取物一起,还可包括食品学能够允许使用的食品辅助添加剂。本发明提供改善性功能方法,所述方法包括将如下成分用药于需要改善性功能的对象:由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖;包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液;所述菌丝体培养液的干燥粉末;或者所述菌丝体培养液的提取物。所述需要改善性功能的对象可以是哺乳动物,更为具体地可以是人类。此外,本发明提供用于制造改善性功能药剂的由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖;包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、所述菌丝体培养液的干燥粉末;或者所述菌丝体培养液的提取物的用途。所述由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖;包含所述胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液;所述菌丝体培养液的干燥粉末;或者所述菌丝体培养液的提取物如前所述。此外,所述改善性功能方法能够用于需要改善性功能的疾病,例如,勃起功能障碍、糖尿病勃起功能障碍等的预防及治疗。以下,通过以下实施例对本发明进行更加详细的说明。但是,以下实施例只是用于对本发明进行示例,本发明的范围并非限定于此。【实施例】制造例1.撕裂蜡孔菌培养液、其的干燥粉末、提取物及胞外多糖(exopolysaccharide;以下称“eps”)的制造1.1撕裂蜡孔菌培养液的制造使得从在庆尚北道尚州市采集的柞树活组织中分离的撕裂蜡孔菌,通过传代培养而培养毛霉菌,将其在-80℃进行冷冻保管,并将保管中的菌株在pda(potatodextroseagar)培养基(87塑料培养皿;培养基(difco),贝克顿迪金森公司(bectondickinsonandcompany))中传代2~3次后,将菌株(以下称为“pda培养菌株”)在4℃冰箱中保管后进行使用。并且在锥形瓶上形成pdb(potatodextrosebroth)培养基(difco,bectondickinsonandbompany)600ml后,在此放入一个pda培养菌株,并在25℃下进行八天的震荡培养,从而获得了pdb培养菌株。之后,将液体培养培养基在800l发酵槽中以1.5kgf/cm2形式注入121℃的空气并杀菌20分钟后,在冷却至23℃的状态下,作为起子(starter)接种pdb培养菌株600ml,并以0.5~1.5kgf/cm2进行通气的同时,光源为蓝色led,照度保持在0.5lux,二氧化碳的浓度为2,000ppm,并且使得撕裂蜡孔菌菌丝体在23℃的恒温下进行10天的液体培养,从而制造撕裂蜡孔菌菌丝体培养液,所述液体培养培养基包括:糖1.5重量%、葡萄糖0.5重量%、土豆淀粉0.5重量%、高粱粉0.25重量%、大麦粉0.25重量%、大豆粉0.75重量%、硫酸镁(mgso4)0.05重量%、磷酸二氢钾(kh2po4)0.05重量%、磷酸氢二钾(k2hpo4)0.05重量%,剩余为水。1.2撕裂蜡孔菌培养液干燥粉末的制造通过真空冻结干燥机使得在制造例1.1中所制造的撕裂蜡孔菌菌丝体培养液在25℃下进行72小时的冻结干燥,从而使其粉末化,因此制造撕裂蜡孔菌菌丝体培养液的干燥粉末。1.3撕裂蜡孔菌培养液提取物的制造向在制造例1.2中所制造的撕裂蜡孔菌菌丝体培养液的干燥粉末5g中添加蒸馏水100ml,进行充分悬浊后,以8,000rpm进行20分钟离心分离后,向此上清液中加入相当于其量的2~3倍的乙醇,并在4℃下静放12小时。之后从静放物中提取上清液,从而制造撕裂蜡孔菌菌丝体培养液的提取物。1.4从撕裂蜡孔菌培养液的eps的制造对在制造例1.3中所制造的撕裂蜡孔菌菌丝体培养液的提取物重新以8,000rpm进行20分钟离心分离后,回收沉淀物,从而获得粗制(crude)的eps。使得所述粗制eps在冻结干燥机中在25℃下真空冻结干燥72小时,从而获得由撕裂蜡孔菌生成的eps。实施例1.eps的特性评价1.1利用凝胶渗透色谱法(gelpermeationchromatography,gpc)进行的eps的分子量测定使得所述制造例1中所制造的eps在0.1mna2so4/0.05mnan3(通过冰醋酸(glacialaceticacid)将ph调整为4)溶液中以成为1%(w/v)的形式溶解后,以4,000rpm进行0.5小时的离心分离,之后通过0.45μm针筒式过滤器(syringefilter)仅过滤上清液,从而通过gpc进行分析。具体地,就gpc分析条件而言,通过检测器利用折射指数,就gpc柱层(column)而言,利用ohpaksb805hq(shodex,japan),就流动相而言,使用了0.1mna2so4/0.05mnan3(通过冰醋酸将ph调整为4),流动相的流速以流速1.0ml/分钟的形式流入。标准曲线利用具有各自不同的分子量(130kda、400kda、770kda或1200kda)的葡聚糖(dextran)(americanpolymercorporation,usa)来制作,并且利用折射指数(refractivityindex,ri)测定器knauerk-2310(germany)来测定eps的分子量。如果对测定条件进行整理,则如下表1。【表1】分子量的测定hplc系统knauerk-501系统柱层ohpaksb805hq(shodex,japan)流动相0.1mna2so4/0.05mnan3/ph4流速1.0ml/min测定器ri(knauerk-2310)结果,本发明的eps的分子量表现为约120kda。1.2eps的糖及蛋白质含量测定对在制造例1中所制造的eps进行二次精制,并且用蛋白水解酶进行处理,从而测定糖及蛋白质含量。具体而言,将一次精制的eps(在制造例1中所制造的eps)溶入蒸馏水后,以8,000rpm进行20分钟的离心分离,从而分离上清液后,向所分离的上清液添加相当于其量的2~3倍的乙醇,并放入4℃下的冰箱,从而静放12小时。之后,在静放物中再次仅对上清液以8,000rpm进行20分钟的离心分离后,对沉淀物进行回收,从而获得2次精制的eps。将所述二次精制的eps向蒸馏水溶解后,用作为蛋白水解酶的碱性蛋白酶(alcalase)以0.5%(w/v)的浓度在50℃下处理30分钟。之后,糖含量通过酚-硫酸法(phenol-sulfuricacidmethod)进行测定。具体地,向按照不同浓度稀释的标本1ml中添加80%(v/v)酚25μl后,添加硫酸2.5ml,从而在室温下进行冷却,并在465nm下测定吸光度从而对糖含量进行计算。此外,蛋白质含量通过bca方法(参考smithpk等,analyticalbiochemistry,150(1):76-85(1985))得到测定,并作为标准物质使用牛血清白蛋白(albumin)。如上所述,测定的糖含量及蛋白质含量显示在如下表2,糖含量表现为45~51重量%,蛋白质含量表现为33~34重量%。【表2】*酶处理:碱性蛋白酶(alcalase)0.5%,50℃,30分钟各数值为平均±se(n≥3)此外,eps的糖构成分析结果,eps表现为主要含有甘露糖(mannose)、半乳糖(galactose)及葡萄糖(glucose)。实施例2.eps的改善性功能效果验证为了调查从撕裂蜡孔菌菌丝体培养液所分离的eps的性功能改善效果,以1ug/ml、3ug/ml、10ug/ml、30ug/ml及100ug/ml的浓度在pde-5a分析试剂盒(获得处:bps生物科学)对所述制造例1中所制造的eps进行处理,从而参照记载于文献(franciss.h.等,prog.nucleicacidres.&molecularbio.,vol.65,pp.1-52,2001)的方法对pde-5酶的抑制力进行测定。将各个实验组的pde-5活性表示于表3及图1中。【表3】如表3所示,能够确认的是,根据本发明的eps的浓度随着从1ug/ml向30ug/ml增加,pde-5活性逐渐减少。其表示根据本发明的eps以浓度依赖性的形式阻碍pde-5活性,此外,酶的活性减少50%的值的ic50值为29.5±1.236ug/ml。由此,所述结果显示根据本发明的eps即使使用少量也具有改善性功能的效果。当前第1页12
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