本发明涉及医药领域，具体涉及rock激酶和去甲肾上腺素转运体抑制剂，更具体的涉及ar-13324抑制剂的制备方法。
背景技术：
ar-13324是rock激酶和去甲肾上腺素转运体抑制剂。现有方法中通常通过手性hplc法或者sfc法进行制备，hplc法是目前的常用方法，但手性固定相的成本太高，手性流动相添加剂使色谱条件复杂化；采用sfc(超临界流体色谱)制备ar-13324存在同样的问题，不仅成本高、而且收率还低。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种操作简单、成本低的ar-13324的制备方法。
本发明的具体技术方案如下：
一种ar-13324的制备方法，利用手性配体手性诱导合成ar-13324，手性配体的结构式如式5所示：
优选的手性配体的合成步骤如下：
(1)通过tbscl或tipscl对4-(羟基甲基)苯乙酸中的羟基进行保护，得到粗品化合物4；
(2)将化合物4、不对称合成手性助剂溶于有机溶剂中，加入草酰氯，干冰丙酮降温，在催化剂作用下反应得到手性配体，手性配体的结构式如式5所示：
优选的利用手性配体手性诱导合成ar-13324包括如下步骤：
(1)通过tbscl或tipscl对4-(羟基甲基)苯乙酸中的羟基进行保护，得到粗品化合物4；
(2)将化合物4、不对称合成手性助剂溶于有机溶剂中，加入草酰氯，干冰丙酮降温，在催化剂作用下反应得到手性配体，手性配体的结构式如式5所示：
(3)将化合物5、六甲基二硅胺钠、化合物13溶于有机溶剂中，干冰丙酮降温，搅拌反应，然后升温至室温并搅拌过夜，得到粗品化合物6，过柱纯化得到纯品化合物6；
(4)将化合物6加入有机溶剂和水中，冰水冷却，然后加入氢氧化锂，搅拌反应，调节ph值，减压蒸出有机溶剂、然后过滤，滤液经萃取、干燥、减压蒸干得到化合物7；
(5)将化合物7、1-羟基苯并三唑、三乙胺加入到干燥二氯甲烷中，氮气保护，降温，向反应液中加入edci，升温搅拌，然后将反应液减压蒸干至无溶剂，向残余物中加入冰水，调节ph，经萃取、纯化得到化合物7a；
(6)将化合物7a、6-氨基异喹啉和edci加入吡啶中，氮气保护，然后加入4-二甲氨基吡啶，反应过夜，反应完全后减压蒸干得到化合物8；
(7)将化合物8溶于有机溶剂中，向其中加入水合肼，加热至回流，反应完成后冷却，过滤，得到化合物9；
(8)引入叔丁氧羰基对化合物9中的氨基进行保护，得到化合物10；
(9)将化合物10加入有机溶剂中，然后加入四丁基氟化氨进行反应，反应完成后减压蒸干，得到化合物11；
(10)将2,4-二甲基苯甲酸和二甲基甲酰胺加于甲苯中，冷却，加入草酰氯，升温反应、反应完成后减压蒸干得到黄色油状物、将其溶于二氯甲烷中得到二氯甲烷的酰氯溶液；
将化合物11、三乙胺、加入到二氯甲烷中，氮气保护，然后加入二氯甲烷的酰氯溶液，反应完成后减压蒸干，然后经洗涤、过滤后得到化合物12；
(11)将化合物12溶于二氯甲烷中，然后加入甲磺酸或1,4-二氧六环的氯化氢溶液于室温下搅拌，减压旋蒸、过滤得到ar-13324甲磺酸盐或者盐酸盐；
优选的步骤(2)中，将化合物4溶于无水四氢呋喃中，降温至-8～-12℃，缓慢滴加草酰氯，保温，得到酰氯；同时另外将不对称合成手性助剂加入无水四氢呋喃中，用干冰丙酮降温至-78℃，加入正丁基锂，保温搅拌，然后加入酰氯继续反应1～3小时，升温至室温搅拌过夜；终止反应，除去四氢呋喃溶剂，残留物经萃取、洗涤、干燥得到粗品化合物5，纯化后得到纯品化合物5；加入的化合物4与不对称合成手性助剂的摩尔比为0.8～1.3:1，化合物4与草酰氯的摩尔比为1～2:1。
优选的步骤(3)中，将化合物5溶入无水四氢呋喃中，干冰丙酮降温降温至-78℃度，加入六甲基二硅胺钠保温反应0.5～1.5小时；将化合物13溶于无水四氢呋喃后加入前述反应体系中，保温反应2～4小时，自然升温至室温并搅拌过夜，反应完全后除去溶剂四氢呋喃，残留物经萃取、洗涤、干燥得到粗品化合物6，纯化后得到纯品化合物6；加入的化合物5与六甲基二硅胺钠的摩尔比为16～17:20，加入的化合物5与化合物13的摩尔比为17～18:20。
优选的步骤(4)中，将化合物6加入有机溶剂和水中，冰水冷却至0℃，然后加入氢氧化锂搅拌反应2.5～3.5小时，减压蒸出有机溶剂、然后过滤，滤液经萃取、干燥、减压蒸干得到化合物7；加入的化合物6与氢氧化锂的摩尔比为0.5～1.5:3，有机溶剂与水的体积比为1～3:1。
优选的步骤(5)中，将化合物7、1-羟基苯并三唑、三乙胺加入到干燥二氯甲烷中，氮气保护，降温至0℃，向反应液中加入edci，升温至室温搅拌，反应过夜，然后将反应液减压蒸干至无溶剂，向残余物中加入冰水，调节ph至3-4，经萃取、纯化得到化合物7a；加入的化合物7与1-羟基苯并三唑的摩尔比为0.8～1.3:1，加入的化合物7与edci的摩尔比为0.7～1:1，化合物7与三乙胺的摩尔比为0.2～0.3:1。
优选的步骤(6)中，加入的化合物7a与6-氨基异喹啉的摩尔比为4.5～5.5:6，加入的化合物7a与edci的摩尔比为4.5～5.5:6。
优选的步骤(7)中，冷却至4～6℃，加入的化合物8与水合肼的摩尔比为0.05～0.2:1。
优选的步骤(8)中，将化合物9溶于二氯甲烷中，然后加入三乙胺和二碳酸二叔丁酯进行反应，反应完成后减压蒸干，得到化合物10；加入的化合物9与三乙胺的摩尔比为0.06～0.08:1，加入的化合物9与二碳酸二叔丁酯的摩尔比为66～68:1。
步骤(9)中，对四丁基氟化氨的加入量没有特别要求，采用本领域内常规加入量即可。
优选的步骤(10)中，将2,4-二甲基苯甲酸和二甲基甲酰胺溶于甲苯中，冷却至2-5℃，加入草酰氯后升温到室温，搅拌过夜，减压蒸干得到黄色油状物、将其溶于二氯甲烷中得到二氯甲烷的酰氯溶液，加入的2,4-二甲基苯甲酸与草酰氯的摩尔比为9～11:13；
将化合物11、三乙胺加入到二氯甲烷中，氮气保护，然后于0-5℃缓慢加入二氯甲烷的酰氯溶液进行反应，反应完成后减压蒸干，然后经洗涤、过滤后得到化合物12，加入的化合物11与加入的2,4-二甲基苯甲酸的摩尔比为0.7～0.8:1。
优选的步骤(11)中，加入的化合物12与甲磺酸的摩尔比为0.5～1.5:3；1,4-二氧六环的氯化氢溶液中氯化氢的摩尔浓度为3.5～4.5mol/l；化合物12与1,4-二氧六环的氯化氢溶液中氯化氢的摩尔比为0.1～0.15:1。
本发明中的有机溶剂可采用1,4-二氧六环,甲醇，乙醇，异丙醇中的一种。
本发明利用手性配体手性诱导合成ar-13324，与现有的手性hplc法或者sfc法相比，采用化学合成的方法制备得到ar-13324具有操作简单、合成条件简单、成本低的特点，高纯度获得手性单体，并且收率高。
附图说明
图1为ar-13324盐酸盐的1hnmr谱图。
具体实施方式
本发明所述的“tlc”指薄层色谱(thinlayerchromatography)，又称薄层层析。
本发明中的edci指1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
1,4-二氧六环的氯化氢溶液中氯化氢的摩尔浓度指的是将hcl气体溶解在1,4-二氧六环中的浓度，如1,4-二氧六环的氯化氢溶液中氯化氢的摩尔浓度为4mol/l指4molhcl气体溶于1l二氧六环。
以下结合实施例进一步说明本发明，本发明未提及部分均为现有技术。
实施例1
合成化合物2
将50g化合物1(4-甲基苯乙酸)溶入200毫升四氯化碳中，加热至回流，加热状态下分批加入nbs(n-溴代丁二酰亚胺)(62g，0.35mol)，加完后继续保持回流状态持续3小时，有大量固体析出来，tlc显示原料反应完全，将反应液冷却至室温，搅拌状态下倒入500毫升冰水中，继续搅拌20分钟，过滤，滤饼用水洗涤3次(每次300毫升)，得到白色固体，将白色固体于50℃烘干10小时得到51g化合物2(4-溴甲基苯乙酸)，化合物2不需继续纯化直接进行下一步反应。
合成化合物3
将化合物2(50g)加入200毫升水中，搅拌加热至回流并保持2小时，反应变澄清，然后冷却至室温，冰浴降温至2度左右，析出白色固体，过滤，滤饼用水洗涤2次得到白色固体，将白色固体于50℃烘干10小时得到约33克化合物3。
合成化合物4
将化合物3(30g)以及咪唑(18.5g)溶入300毫升dmf中，冰浴降温至0度，分批加入tbscl(32.65g)，自然升温至室温并搅拌过夜，tlc显示原料完全消失，冰浴降温至0℃左右，用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用1m稀盐酸调节ph值至3～4，升温至室温搅拌半小时，用甲基叔丁基醚萃取3次(每次200毫升)，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到粗品化合物4(46g)，该粗品不需进一步纯化直接用于下一步反应。
合成化合物5(手性配体)
将化合物4(40g，142.64mmol)溶入无水四氢呋喃(500毫升)中，干冰丙酮降温至-10度，缓慢滴加草酰氯(11.0g)，保持滴加温度不高于-10度，制备得到酰氯；同时在另外一个三口瓶中将21.16g(r)-4-苯基-2-噁唑烷酮加入500毫升无水四氢呋喃中，氮气置换，用干冰丙酮降温至-78度，缓慢滴加正丁基锂(2.5m，60ml)并保持温度在-78度，滴加完成后继续在-78度下搅拌1小时，然后通过恒压漏斗慢慢滴加前面制备的酰氯，保持滴加温度在-78度，滴加完成后继续保持-78度反应2小时，然后自然升温至室温搅拌过夜。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，旋蒸除去四氢呋喃溶剂，残留物用乙酸乙酯萃取3次(每次300ml)，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到粗品化合物5，过柱纯化得到纯品化合物5(40.5g)，收率73.39％。
合成化合物6
将纯品化合物5(40g，94mmol)溶入无水四氢呋喃(400ml)中，氮气置换，干冰丙酮降温至-78度，缓慢滴加六甲基二硅胺钠的四氢呋喃溶液(112.8mmol，六甲基二硅胺钠的浓度为2mol/l)，滴加完成后体系于-78度下搅拌1小时；化合物13(108mmol)溶于400毫升无水四氢呋喃(thf)中，通过恒压漏斗慢慢滴加前述体系中，控制滴加温度低于-70度，滴加结束后反应保持在-78度下搅拌3小时，自然升温至室温并搅拌过夜。tlc显示原料反应完全，用饱和氯化铵水溶液500毫升淬灭反应，旋蒸除去溶剂四氢呋喃，残留物用乙酸乙酯萃取3次(每次200毫升)，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到粗品化合物6，过柱纯化得到纯品化合物6(43g)，收率(78.24％)。
合成化合物7
将纯品化合物6(29.2g,0.05mol)加入300ml四氢呋喃和100ml水中，冰水冷却反应体系至0℃，然后加入氢氧化锂(6.3g,0.15mol)，于0℃搅拌3小时。lc-ms监控反应至化合物6消失，减压蒸出有机溶剂有大量白色固体析出，过滤，室温下将滤液用1n的盐酸水溶液调ph至3-4，乙酸乙酯(100ml)萃取四次，硫酸钠干燥，减压蒸干得白色泡沫状固体20.1g，未进一步纯化，直接用于下一步,纯度94.5％。
合成化合物7a
将化合物7(22.5g,0.05mol)，hobt(1-羟基苯并三唑)(6.75g,0.05mol)和三乙胺(25ml)加入干燥二氯甲烷(300ml)，氮气保护，降温至0℃，然后向反应液中加入edci(22.5g,0.05mol)，搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升温至室温，反应过夜。将反应液减压蒸干至无溶剂，向残余物中加入200ml冰水，用冰冷过的盐酸水溶液调ph至2-3，ea萃取、过柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝20:1-10:1)得到化合物7a(18.65g)白色泡沫状固体，收率85％；lc-ms(m-1)438。
合成化合物8
在室温下将化合物7a(10.9g,25mmol)，6-氨基异喹啉(4.32g,30mmol)和edci(6.68g,35mmol)加入吡啶(100ml)中，氮气保护，然后加入dmap(4-二甲氨基吡啶)(4.2g,35mmol)，反应过夜，tlc(dcm:ma＝20:1)监控反应至原料化合物7a消失，减压蒸干，3摩尔的醋酸水溶液调节到ph＝4-5,dcm(100ml*4)萃取,合并过柱得到化合物8(11.02g),收率78％；lc-ms(m+1)566,纯度：97.4％。
合成化合物9
将化合物8(11.02g,19.5mmol)用乙醇(100ml)溶解，向其中加入水合肼(85％，9.75g,195mmol)，加热至回流，约2小时候后有大量白色固体生成，然后继续反应3小时，冷却至5度，过滤，滤饼用冷乙醇洗涤，减压蒸干，用油泵减压至无溶剂，得到化合物9(11.4g)，直接用于下一步。
合成化合物10
将上步获得的化合物9(11.4g,19.5mmol)溶解在100ml二氯甲烷中，然后向其中加入三乙胺(10ml)，缓慢滴加(boc)2o(二碳酸二叔丁酯)(6.4g,0.29mmol)有大量气体放出，tlc(乙酸乙酯)监控反应至化合物9消失，减压蒸干，柱层析(ea:pe＝1:1)获得白色固体产物(9.49g)，即为化合物10,收率：90％。
合成化合物11
将上步获得的化合物10(8g,15mmol)加入100mlthf(四氢呋喃)中，然后向其中加入四丁基氟化氨(7.83g,30mmol)，搅拌过夜，tlc(ea)检测反应无化合物10，减压蒸干，残余物加入200ml水，搅拌30min，静止一段时间，倒去水，将黄褐色油状物溶于ea中硫酸钠干燥，移除有机溶剂得到化合物11(7.86g)，为进一步处理，直接用于下一步。
合成化合物12
将2,4-二甲基苯甲酸(1.5g,10mmol)和催化量的dmf加于甲苯中，冷却至2-5℃，滴加草酰氯(1.64g，13mmol)，滴加完后升温到室温，搅拌过夜，在此过程中固体逐渐溶解得一澄清液，减压蒸干得一黄色油状物，用二氯甲烷(10ml)溶解得到二氯甲烷的酰氯溶液；
将化合物11(3.2g,7.7mmol)和三乙胺(2ml)加入20ml二氯甲烷中，氮气保护，将上述制备得到的二氯甲烷的酰氯溶液在0-5℃下滴入，加完后搅拌，反应过夜；tlc(二氯甲烷：甲醇＝20:1)监控反应，反应完毕，减压蒸干，然后用饱和碳酸钠溶液搅拌，过滤，滤饼用水洗涤3次，烘干得到3.9g白色固体，即为化合物12；纯度：99.1％，光学纯度：100％(chiralpakas-h，0.46cmi.d.×15cml，meoh+0.1dea)/co2＝20/80(v/v，2.0ml/min)，r型，rt＝3.253min；s型rt＝4.3min)。
将化合物12(3.9g)加入dcm中，搅拌得澄清液，然后向其中滴加1,4-二氧六环的氯化氢溶液15ml(浓度为4mol/l，4molhcl气体溶于1l二氧六环中)，然后在室温下搅拌4小时，减压旋蒸、过滤得3.65g白色固体产物，经hnmr检测所得物质即为ar-13324盐酸盐，其1hnmr谱图参见图1所示，ms，纯度，99.4％，1hnmr(400mhz，dmso，300)δ(ppm)。11.773(s,1h),9.702(s,1h),8.740(d,1h),8.560(d,1h),8.469(d,1h),8.360(d,1h),8.280(s,3h),8.158(dd,1h),7.777(d,1h),7.577(d,2h),7.496(d,2h),7.134(s,1h),7.111(d,1h),5.281(s,2h),4.504(q,1h),3.609(q,1h),3.139(q,1h),2.483(s,3h),2.302(s,3h)。
ar-13324盐酸盐的结构式如下所述：
实施例2
该实施例中，除了对化合物12的处理步骤不一样外，其余与实施例1相同。
对化合物12的处理步骤如下：将化合物12(3.9g)溶于40ml二氯甲烷中，然后滴加甲磺酸(2g，21.6mmol)，在室温下搅拌过夜，减压旋蒸，向其中加入100ml乙醚，搅拌，产生大量白色固体，过滤，烘干得到白色固体(4.54g)，收率，97.8％，纯度98.2％，经1hnmr检测所得物质即为ar-13324甲磺酸盐。
实施例3
该实施例中，除了化合物5的合成步骤不一样外，其余与实施例1相同。
合成化合物5a(手性配体)
化合物4(50g，178.3mmol)溶入无水四氢呋喃(500毫升)中，干冰丙酮降温至-10度，缓慢滴加草酰氯(13g)，保持滴加温度不高于-10度，得到酰氯；同时在另外一个三口瓶中将28.7g(r)-4-苄基-2-噁唑烷酮加入500毫升无水四氢呋喃中，氮气置换，用干冰丙酮降温至-78度，缓慢滴加7.2ml正丁基锂溶液(浓度为2.5mol/l)并保持温度在-78度，滴加完成后继续在-78度下搅拌1小时，将前面制备的酰氯通过恒压漏斗慢慢滴加到该三口瓶中，保持滴加温度在-78度，滴加完成后反应继续保持-78度2小时，然后自然升温至室温搅拌过夜。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，旋蒸除去四氢呋喃溶剂，残留物用乙酸乙酯萃取3次(每次300ml)，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到粗品化合物5a，过柱纯化得到纯品5a(50g)，收率70.13％。
实施例3的合成路线如下：