用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒及其构建方法和用途与流程

文档序号:12346452阅读:来源:国知局

技术特征:

1.用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒,其特征在于:所述重组质粒包含一个或两个以上相互串联的抗氧化反应元件以及基础转录元件、分泌型荧光素酶基因、分泌型碱性磷酸酶基因;所述抗氧化反应元件为SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1 所述的用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒,其特征在于:所述基础转录元件包含SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1 所述的用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒,其特征在于:所述分泌型荧光素酶基因是源于Gaussia princeps的分泌型荧光素酶基因。

4.根据权利要求3所述的用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒,其特征在于:所述源于Gaussia princeps的分泌型荧光素酶基因包含其野生型序列以及SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列或SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。

5.根据权利要求1 所述的用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒,其特征在于:所述分泌型碱性磷酸酶基因包含SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列或SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。

6.根据权利要求1 所述的用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒,其特征在于:所述重组质粒还包含有抗性基因。

7.根据权利要求1 所述的用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒,其特征在于:所述抗性基因选自新霉素抗性基因或嘌呤霉素抗性基因或潮霉素抗性基因。

8.权利要求1至5任意一项所述的用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒的构建方法,其特征在于:包括以下步骤:

(1)在含有分泌型荧光素酶基因和含有CMV启动子序列的分泌型碱性磷酸酶质粒中,将基础转录元件通过分子克隆技术构建到分泌型荧光素酶基因的上游;

(2)通过分子克隆技术将一个或两个以上相互串联的抗氧化反应元件构建到步骤(1)获得的质粒的基础转录元件的上游,从而获得重组质粒;

(3)将步骤(2)获得的重组质粒转染至体外培养的细胞中,然后加入含有TBHQ或者SF培养基,对细胞刺激诱导,继续培养2-24h后,取出培养基上清,然后加入荧光素酶检测试剂,检测荧光素酶活性,选出对TBHQ或者SF诱导响应最高的质粒即为所述用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒。

9.权利要求1至7任意一项所述的重组质粒在筛选抗氧化剂中的应用。

10.采用权利要求1至7任意一项所述的重组质粒筛选抗氧化剂的方法,包括以下步骤:

(1)将所述重组质粒转染到细胞,然后加入待筛选的药物,继续培养2-24h;

(2)取出培养基上清,加入荧光素酶检测试剂反应5~15min,然后检测荧光素酶的相对活性,若随待筛选的药物浓度增加,荧光素酶的相对活性也增加,则判定该药物具有抗氧化活性。

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