一种生物多肽的提取方法与流程

文档序号:12242486阅读:3559来源:国知局

本发明涉及免疫促进技术领域,特别是指一种生物多肽的提取方法。



背景技术:

当今社会,科学技术发展飞速,所以人们的生活水平逐步提高,生活质量也变得更好。但是与此同时,激烈的行业竞争,越来越快的生活节奏使得人类面对的生活和工作等方面的压力也越来越大,而压力与疾病是紧紧相连的。有研究显示,人的压力与免疫系统息息相关。当人们长时间处于压力状态,免疫功能就会下降,人体对疾病的敏感程度增大,容易导致疾病的易感和易发。还有报道显示,吸烟对人体有多方面的害处,其中一个就是会使得人体的免疫功能受损,使得人体免疫力下降。一个人的精神状态可能与身体的抵抗力有关,还有一个与免疫效应有关的环节。据相关文献,一定程度的心理压力会使得免疫系统受到伤害和功能减弱,故适当放松及对行为压力的调控身心健康有所帮助。当人体免疫功能紊乱,或者是免疫系统不完善时,就会导致某些疾病的反复发作。当人的身体处于免疫力低下状态时,就会很容易受到感染或者患上癌症;而当人体处于免疫力超常时也会有不好的情况发生,如有过敏反应的发生或想着容易引发自身免疫疾病。

随着现代医学的发展,我们逐渐认识到很多疾病的发生与发展和免疫系统功能的紊乱有着紧密的联系。影响免疫系统功能的因素有很多:①先天因素,主要为遗传因素和原发性免疫缺陷病;②后天因素,相对较为复杂,包含疾病因素、心理因素、神经内分泌因素、营养因素、某些药物治疗方法和年龄因素等。

免疫调节剂是一类能够增强、促进或调节免疫功能的生物制品,它对治某些继发性免疫缺陷症、某些恶性肿瘤免疫功能低下和等疾病有一定的作用,但对免疫功能正常的人及动物却不起什么作用。它的主要机制首先是通过非特异性的方式增强T、B淋巴细胞的反应性,或是提高了巨噬细胞的活性,也可以诱导干扰素或激活补体的产生。

脾脏生物多肽就是免疫调节剂中的一种,脾脏多肽存在于脾脏中。脾脏是人体免疫器官中最大的一个,它占全身所以淋巴细胞总量的25%,富含巨噬细胞和各种淋巴细胞,是人体细胞免疫和体液免疫的中心。脾脏是T淋巴细胞和B淋巴细胞定居的部位,也是各种免疫反应发生的场所。脾脏多肽是一种可透析的小分子多肽和核苷酸的复合物,由具有免疫活性的T淋巴细胞释放出的,存在于人或动物白细胞中,能够调节机体的免疫功能。多年来,脾脏多肽在治疗各种免疫疾病,肿瘤等都有一定的疗效。脾脏多肽可以作为一种良好的医药化工原料和功能性食品,据报道,脾脏多肽具有天然的生物活性,能够抑制肿瘤的生长,提高机体的免疫能力,还具有抗氧化,促进凝血等功能。

恶性肿瘤患者在接受放化疗的同时,机体的健康细胞便无可避免的遭受各种暂时性和长期性损害,如何提高恶性肿瘤患者的生存质量已成为近年十分重要的发展方向。

环磷酰胺是一种经典的抗癌药,在医学上常用于癌症的治疗,同时它也是一种疗效很好的免疫抑制剂,可抑制各类动物的体液免疫与细胞免疫应答。利用环磷酰胺诱导小鼠致免疫抑制模型,其机体免疫功能低下可从诸多方面看出。本实验选择测定抗体生成量、TNF-α和IL-2的水平和脏器系数这四个指标以观察脾脏多肽对小鼠机体免疫功能的影响。

目前,脾脏多肽可以用酶解法,冻融法等方法来制备。酶解法是采用DNA酶,RNA酶和胰蛋白酶对动物脾脏等器官组织进行消化处理,将水解产物透析之后得到的溶液,该方法对生产条件的要求较为严格,需要确定最佳的生产条件,故目前在生产中应用较少。冻融法则在生产过程中需要反复冷冻,这是一个相对耗时和耗能的环节,且需要确定最佳的冻融次数,所以生产成本相对较高。

因此,寻找一种新的提取制备工艺并检验其药物疗效显得非常必要,且由于近几年养猪业发达,生猪养殖数量较多,但是猪脾脏却通常被作为废弃物来处理,如能将其用于生产脾脏多肽,那么就能够变废为宝,能够为脾脏多肽的生产开辟广阔的药用资源,具有很好的市场前景。



技术实现要素:

有鉴于此,本发明所要解决的技术问题,就是提出一种生物多肽的提取方法。本方法分析了近几年海洋生物、大脑、肝脏、胸腺、脾脏多肽的制备工艺技术的科学成果,对以往的工艺进行改进,改进后的提取方法,制得的生物多肽产物活性强,工艺产量相对前者有所提高,成本低,大大提高了其经济效益。

为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案予以实现:

一种生物多肽的提取方法,包括如下步骤:

(1)将新鲜海洋生物或健康动物的大脑、肝脏、脾脏或胸腺剪去脂肪和外包膜后,用绞肉机绞碎、称重,以料液比为1:10,在冰浴中用高速匀质机进行均质处理,匀浆用8层纱布进行粗过滤,然后再用连续流离心机离心处理,收集上清液,使获得多肽的粒径在0.5μm-50μm之间;

(2)将获得的上清液用微波提取机提取处理,然后迅速置于4℃冰水中,使获得多肽的粒径在0.05μm-10μm之间;

(3)提取液在4℃冰水中进行超声处理,使获得多肽的粒径在0.01μm-5μm之间;

(4)超声后的提取液用截留分子量为1000-12500doltons的侧向超滤膜进行超滤;

(5)将获得的超滤液冷冻干燥后得到生物多肽干粉,低温储存备用。

作为优选地,所述步骤(1)中的新鲜海洋生物为蚝或虾或蟹或海参,健康动物为猪或马或牛或羊或鹅。

作为优选地,所述步骤(1)中匀浆处理为使用15000-25000rpm的高速匀质机处理15-30分钟。

作为优选地,所述步骤(1)中离心处理为使用12000×g连续流离心机,4℃条件下离心20分钟。

作为优选地,所述步骤(2)中提取处理为使用500-2500W的微波提取机处理15-45分钟。

作为优选地,所述步骤(3)中超声处理为使用声波强度在0.5-15W/cm2的超声波处理30-60分钟。

与现有技术相比,本发明具有的有益效果为:本发明的方法能提高生物多肽产量230%-450%,从而提高了动物内脏的提取生物多肽的得率,且制得产物活性强,成本低,大大提高了其经济效益。

具体实施方式

为让本领域的技术人员更加清晰直观的了解本发明,对本发明作进一步的说明。

一种生物多肽的提取方法,包括如下步骤:

(1)将新鲜健康动物脾脏剪去脂肪、外包膜后,用绞肉机绞碎、称重,料液比为1:10,在冰浴中用15000-25000rpm的高速匀质机进行匀浆15-30分钟,用8层纱布进行粗过滤,用连续流离心机在12000×g,4℃条件下离心20分钟,收集上清液,使获得多肽的粒径大约为0.5μm-50μm;

(2)将得到的上清液用500-2500W微波提取机处理15-45分钟,然后迅速置于4℃冰水中,使获得多肽的粒径大约为0.05μm-10μm;

(3)将得到的提取液置于4℃冰水中用声波强度在0.5-15W/cm2的超声波进行超声处理30-60分钟,使获得多肽的粒径大约为0.01μm-5μm;

(4)将经超声处理的提取液用截留分子量为1000-12500doltons的侧向超滤膜进行超滤;

(5)将超滤液冷冻干燥后得到生物多肽干粉,低温储存备用。

将本发明与传统方法相比,生物多肽的产量提高230%-450%,而且制备过程用时短,效率高,成本低。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

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