一种基于二代高通量测序技术的地中海贫血症的基因检测试剂盒的制作方法

技术特征：

1.一种基于二代高通量测序技术的地中海贫血症的基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有：

1)基因组DNA提取试剂；

2)含有外切酶的片段化试剂；

3)片段修复与连接试剂；

4)PCR扩增试剂；

5)PCR产物纯化试剂；

6)捕获探针及其杂交捕获试剂；

7)杂交洗脱试剂；

8)阴性质控样本；

9)阳性质控样本。

2.根据权利要求1所述的地中海贫血症的基因检测试剂盒，其特征在于所述捕获探针覆盖

以下区域和位点，其核苷酸序列见核苷酸序列表：

1)hg19，chr16:189,137-232,194；

2)hg19，chr11：5,237,140-5,318,776；

3)KLF1基因的全部外显子区域以及5’UTR和3‘UTR区域；

4)156个SNP位点

3.根据权利要求1或2所述的地中海贫血症的基因检测试剂盒应用于遗传病筛查或诊断。

4.根据权利要求1所述的地中海贫血症的基因检测试剂盒的使用方法，其特征在于包括下述步骤：

1)用所述的1)基因组DNA提取试剂从受测试者唾液或者血液中提取基因组DNA；

2)用所述的2)含有外切酶的片段化试剂将基因组DNA进行片段化处理；

3)用所述的3)片段修复与连接试剂将DNA片段的末端进行修复；

4)用所述的3)片段修复与连接试剂将修复后的DNA片段与人工接头进行连接；

5)用所述的4)PCR扩增试剂以连接后的DNA片段作为模板进行PCR扩增；

6)用所述的5)PCR产物纯化试剂对PCR产物进行纯化；

7)用所述的6)捕获探针机器杂交捕获试剂与PCR产物进行杂交；

8)用所述的7)杂交洗脱试剂对杂交后的PCR产物进行纯化和洗脱；

9)用所述的4)PCR扩增试剂以洗脱后的PCR产物作为模板进行PCR扩增；

10)用所述的5)PCR产物纯化试剂对PCR产物进行纯化；

11)对纯化后的PCR产物进行二代高通量测序；

12)对测序结果进行分析获得受测试者的地中海贫血症相关基因的信息；

13)每个批次的检测都需要用所述的8)阴性质控样本和9)阳性质控样本作为质量控制。