一种与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记及其应用的制作方法

文档序号:12109196阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记,其特征在于所述的与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记的编号为TM508-007和TM508-118,其扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。

2.根据权利要求1所述的与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记,其特征在于所述的分子标记所对应的2个位点的引物序列分别为:

TM508-007序列为TM508-007F:5’- CACCATGGTTTGGCTTTCAT -3’,

TM508-007R:5’- GCAAAATGCAAAAAGGCAAT -3’;

TM508-118序列为TM508-118F:5’- ACCAACATGGCCAAACCTTA -3’,

TM508-118R:5’- GCGAGGAAAAGCCAGTAAAA -3’。

3.一种权利要求1或2所述的与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记的应用,其特征在于所述的与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记在检测烟草基因组DNA中是否存在烟草抗TMV病基因N中的应用。

4.根据权利要求3所述的与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记的应用,其特征在于是分别以TM508-007序列的引物和TM508-118序列的引物分别扩增待检测烟草基因组DNA,检测PCR扩增产物,如果PCR扩增产物中分别含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列即为含有烟草抗TMV病的纯和基因NN;如果PCR扩增产物中分别含有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示序列即为不含有烟草抗TMV病的纯和基因NN,而含有其感病的纯合等位基因nn;如果PCR扩增产物中含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列,同时含有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示序列即为含有烟草抗TMV病的杂合基因Nn。

5.根据权利要求4所述的与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记的应用,其特征在于以TM508-007序列的引物进行PCR扩增的反应体系为:20uL,其中包含2.0 mL 的1´ buffer (10 mM Tris-Cl, PH=8.4, 50 mM KCl, 1.5 mM MgCl2),200 mM 的 dNTPs(Takara Biotechnology Co. Ltd., Dalian, China),0.5 mM 的上下游引物(Takara),1.0 U 的 rTaq 聚合酶(Takara),20-50ng模板DNA,最后用ddH2O补齐20uL,反应条件为:95℃预变性5分钟,30个循环(95℃变性30秒,复性30s,72℃延伸30s),72℃延伸5分钟,4℃保存。

6.根据权利要求4所述的与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记的应用,其特征在于以TM508-118序列的引物进行PCR扩增的反应体系为:20uL,其中包含2.0 mL 的1´ buffer (10 mM Tris-Cl, PH=8.4, 50 mM KCl, 1.5 mM MgCl2),200 mM 的 dNTPs(Takara Biotechnology Co. Ltd., Dalian, China),0.5 mM 的上下游引物(Takara),1.0 U 的 rTaq 聚合酶(Takara),20-50ng模板DNA,最后用ddH2O补齐20uL,反应条件为:95℃预变性5分钟,30个循环(95℃变性30秒,复性30s,72℃延伸30s),72℃延伸5分钟,4℃保存。

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