一种定量菌株的固态冷冻干燥物及制备方法和使用方法与流程

文档序号:11144688阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种定量菌株固态、冷冻干燥物的制备方法,包括如下步骤:

步骤1:制备GS保护剂,所述的保护剂包括4℃保存备用的A、B部分:

A部分:煮沸完全溶解于适量纯化水的明胶,煮沸完全溶解于适量纯化水的蔗糖,完全溶于适量纯化水的胰蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠、酵母粉、活性炭,将上述三者混合,调节pH值至7.2±0.2,121℃灭菌15min,4℃备用。

B部分:煮沸完全溶解于适量纯化水的葡萄糖,116℃灭菌15min,4℃备用;

步骤2:制备溶解剂。将含量分别为氯化钠0.8%-1%,磷酸氢二钾0.5%-1%,胰蛋白胨0.5%-2%,酵母粉0.5%-2%的水溶液分装后121℃灭菌15min,制备成溶解液,4℃备用;

步骤3:制备微生物悬液。包括接种微生物到相应的培养基上培养,培养完成后用适量溶解剂洗脱菌苔或孢子,4500rpm,离心8min,弃上清,再用步骤2中适量溶解剂溶解,重复清洗两次,最后用步骤2适量溶解剂将菌泥溶解混匀,十倍梯度稀释至所需的稀释级;

步骤4:将步骤3中所需稀释级的菌液取适当量进行冻前计数;

步骤5:制备冻干菌悬液。结合步骤4的计数结果,步骤3中通过冻干存活率计算所需稀释级别,该稀释级的菌液与GS保护剂以一定比例混合均匀制成冻干菌悬液,该菌悬液包括葡萄糖0.1%-0.5%、蔗糖5%-10%、明胶0.5%-1.5%、胰蛋白胨1%-2%、大豆蛋白胨0.5%-1%、氯化钠0.5%-1%、酵母粉0.2%-0.5%和活性炭0.2%-0.5%以及每50ul-100ul菌悬液冻干后存活菌数在100cfu-1000cfu的活菌;

步骤6:冻干成品。上述步骤5中冻干菌悬液进行制品冻干,冻干结束后,将制品在无菌干燥环境下转移至西林瓶中,每个西林瓶中含一个单位的圆柱形冻干制品,盖上瓶塞,转移回冻干机,在200mbar真空度下,25℃干燥1h,在该真空度下进行压塞,然后放气、出箱、压铝盖。

2.如权利要求1所述的定量菌株固态、冷冻干燥物的制备方法,其特征在于:所述的微生物包括接种于相应培养基上的细菌或/和真菌。

3.如权利要求2所述的定量菌株固态、冷冻干燥物的制备方法,其特征在于:所述的细菌包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌或/和生孢梭菌。

4.如权利要求2所述的定量菌株固态、冷冻干燥物的制备方法,其特征在于:所述的真菌包括黑曲霉或/和白色念珠菌。

5.如权利要求1所述的定量菌株固态、冷冻干燥物的制备方法,其特征在于:所述的步骤4具体包括将步骤3中菌悬液在无菌环境下分装至圆柱状模具中,放入冻干机中,-40℃预冻2h,再以200mbar的真空度,-30℃干燥8h,升温至25℃继续干燥,以压升测试180sec内压升范围小于50mbar为判断点结束干燥过程,将干燥完成的制品进行冻后计数,计算得到冻干后制品中活菌的存活率。

6.如权利要求1所述的定量菌株固态、冷冻干燥物的制备方法,其特征在于:步骤6中,50ul-100ul的冻干菌悬液作为一个单位进行制品冻干。

7.一种定量菌株的固态、冷冻干燥物,其特征在于:包括葡萄糖0.1%-0.5%、蔗糖5%-10%、明胶0.5%-1.5%、胰蛋白胨1%-2%、大豆蛋白胨0.5%-1%、氯化钠0.5%-1%、酵母粉0.2%-0.5%和活性炭0.2%-0.5%配置成溶液构成的保护剂,所述的保护剂与菌液按所需比例均匀混合被冻干制成圆柱状的干燥物,所述的圆柱状冻干物中含有100cfu-1000cfu存活菌量。

8.如权利要求7所述的定量菌株的固态、冷冻干燥物,其特征在于:所述的每个圆柱状冻干物由50ul-100ul冻干菌悬液冻干而成。

9.如权利要求7所述的定量菌株的固态、冷冻干燥物,其特征在于:所述的圆柱状冻干物中可定制特定范围含菌数。

10.一种如权利要求7的固态、冷冻干燥物或如权利要求1制成定量菌株固态、冷冻干燥物的使用方法,其特征在于:将冻干物倒入装有N ml溶解剂的无菌容器中,溶解该制品,混合均匀,每次取N/10ml,用于检测,菌含量小于100cfu,所述的溶解剂包括4℃备用氯化钠0.8%-1%,磷酸氢二钾0.5%-1%,胰蛋白胨0.5%-2%,酵母粉0.5%-2%的水溶液分装后121℃灭菌15min制备的溶解液,所述的N为1ml-10ml。

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