基于颜色判定的环介导等温扩增(LAMP)技术检测雪松疫霉根腐病菌的制作方法

文档序号:11145783阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于检测雪松疫霉根腐病菌的LAMP引物,其特征在于:其包括四条特异性引物F3、B3、FIP、BIP和一条环引物LB,引物序列分别如SEQ ID NO. 1至 SEQ ID NO. 5所示。

2.一种基于颜色判定的雪松疫霉根腐病菌的LAMP检测方法,其特征在于:提取待测样品的DNA作为模板,利用权利要求1所述的引物进行LAMP扩增反应,反应后,在常光下肉眼观察,以羟基萘酚蓝的颜色变化进行结果判定;常光下,天蓝色表示检测结果为阳性,即样品中检测到雪松疫霉根腐病菌,紫色表示检测结果为阴性,即样品中未检测到雪松疫霉根腐病菌。

3.根据权利要求2所述的LAMP检测方法,其特征在于:其LAMP扩增反应体系为:2.5 μL 10×ThermoPol Buffer(0.1% Trion-X, 20 mM Tris-HCl, 10 mM KCl,10 mM (NH4)SO4, pH 8.8),4 μL MgSO4(50 mM),4 μL 甜菜碱(5 M),3.5 μL dNTPs(10 mM),内引物FIP和BIP(20 μM)各2 μL,外引物F3和B3(10 μM)各0.5 μL,环引物LB(10 μM)1 μL,2 μL HNB(2.4 mM),1 μL Bst DNA 聚合酶(8 U·μL-1),模板DNA 2 μL,用灭菌去离子水补足体积至26 μL。

4.根据权利要求3所述的LAMP检测方法,其特征在于:其LAMP扩增反应程序为:62℃,80min。

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