1.一种流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括RT-LAMP引物、2×反应缓冲液、酶混合物EM、荧光目视检测试剂、超纯水和流感病毒RNA模板,所述的RT-LAMP引物包括外引物F3与B3、内引物FIP与BIP;
其中引物的序列分别为:
F3 TCTGGAGGGGTGAAAATGGA
B3 GTGCAACTGATCCCCTCAG
FIP GCCCTCTGGGCAGCTGTTTGCGAAGGACAAGGGTTGCTTA
BIP AAGTCGAAACCCAGGAAACGCTAATGAGTGCTGACCGTGC
所述的2×反应缓冲液包括Tris-HCL、KCL、MgSO4、(NH4)2SO4、Tween20、Betaine和dNTPs。
2.根据权利要求1所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的流感病毒RNA模板取自病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒。
3.根据权利要求1所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的荧光目视检测试剂采用钙黄绿素荧光试剂,荧光试剂在反应前加入。
4.根据权利要求1所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的2×反应缓冲液包括Tris-HCL 35-50mM、KCL 15-35mM、MgSO4 15-20mM、(NH4)2SO4 15-25mM、Tween20 0.4-0.8℅、Betaine 1.5-3.0M 和dNTPs 2.5-4 mM。
5.一种流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,具体操作步骤包括:
(1)RT-LAMP引物的设计与合成
(2)流感病毒RNA模板的提取
(3)RT-LAMP反应体系建立
(4)RT-LAMP检测方法。
6.根据权利要求5所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,所述的RT-LAMP反应体系建立以25μl计,
2×反应缓冲液 12.5 μL
EM 1 μL
FIP 40 pmol
BIP 40 pmol
F3 5 pmol
B3 5 pmol
流感病毒RNA 5 μL
超纯水 补足25 μL。
7.根据权利要求5所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,所述的RT-LAMP检测方法是采用特异性检测、敏感性检测和荧光可视化检测的方法。
8.根据权利要求5所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,所述的RT-LAMP检测方法采用实时浊度仪进行密闭全程监控。