一种流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒及其应用的制作方法

文档序号:11145961阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括RT-LAMP引物、2×反应缓冲液、酶混合物EM、荧光目视检测试剂、超纯水和流感病毒RNA模板,所述的RT-LAMP引物包括外引物F3与B3、内引物FIP与BIP;

其中引物的序列分别为:

F3 TCTGGAGGGGTGAAAATGGA

B3 GTGCAACTGATCCCCTCAG

FIP GCCCTCTGGGCAGCTGTTTGCGAAGGACAAGGGTTGCTTA

BIP AAGTCGAAACCCAGGAAACGCTAATGAGTGCTGACCGTGC

所述的2×反应缓冲液包括Tris-HCL、KCL、MgSO4、(NH4)2SO4、Tween20、Betaine和dNTPs。

2.根据权利要求1所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的流感病毒RNA模板取自病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒。

3.根据权利要求1所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的荧光目视检测试剂采用钙黄绿素荧光试剂,荧光试剂在反应前加入。

4.根据权利要求1所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的2×反应缓冲液包括Tris-HCL 35-50mM、KCL 15-35mM、MgSO4 15-20mM、(NH4)2SO4 15-25mM、Tween20 0.4-0.8℅、Betaine 1.5-3.0M 和dNTPs 2.5-4 mM。

5.一种流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,具体操作步骤包括:

(1)RT-LAMP引物的设计与合成

(2)流感病毒RNA模板的提取

(3)RT-LAMP反应体系建立

(4)RT-LAMP检测方法。

6.根据权利要求5所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,所述的RT-LAMP反应体系建立以25μl计,

2×反应缓冲液 12.5 μL

EM 1 μL

FIP 40 pmol

BIP 40 pmol

F3 5 pmol

B3 5 pmol

流感病毒RNA 5 μL

超纯水 补足25 μL。

7.根据权利要求5所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,所述的RT-LAMP检测方法是采用特异性检测、敏感性检测和荧光可视化检测的方法。

8.根据权利要求5所述的流感病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒的应用,其特征在于,所述的RT-LAMP检测方法采用实时浊度仪进行密闭全程监控。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1