一种环介导等温扩增反应套件的制作方法

本实用新型涉及一种环介导等温扩增反应套件，属于反应装置技术领域。

背景技术：

2000年，日本学者Notomi等建立了一种新颖的核酸扩增方法—环介导等温扩增反应(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)。该技术利用4种不同的特异性引物识别靶基因的6个特定区域，在恒温条件下进行反应，不需要模板的热变性和长时间的温度循环，具有简便、快速、仪器设备简单、适合现场使用、特异性好、敏感性高等优点，自问世之初很快受到了广大学者及各领域研究者的关注。

目前，LAMP研究中关于引物设计及反应操作使目标基因片段快速复制的技术已经趋于成熟，而对于LAMP扩增结果的测定及扩增进程的监测则出现了好多种，主要有凝胶电泳、荧光染料、生物传感器法、浊度法四大类，其中荧光染料法应用较多，也较方便，在反应前加入能够有效的避免开盖造成的环境污染，在现场检测中具有广阔的应用前景。常用的荧光染料主要有钙黄绿素(Calcein)，另外还有许多研究者应用SYBR Green I、羟基萘酚蓝(HNB)、Eva Green作为荧光染料在反应前加入，反应结束后通过观察颜色变化来判断反应。

目前，已公开使用的环介导等温反应扩增管有如下几种：

1、中国专利申请(CN202808796U)公开了一种环介导等温反应管，该反应管包括紧密配合的管体和管盖，其中，所述管盖的下底面设置有用于放置试剂的腔体，且所述管盖的下底面正对所述腔体处设置有用于刺破所述腔体的尖锐体。该发明工艺相对复杂，而且要求在反应管制造过程中将核酸染料直接放入腔体中，一次成型，生产成本较高。

2、中国专利申请(CN203474801U)公开了一种适用于环介导等温扩增反应的反应套件，包括反应管和注射器，所述反应管管口设有硅胶塞，所述注射器的针头可刺穿硅胶塞。但等温扩增实验各试剂添加量极微，该发明中并不能精准的控制染料添加量，且在试剂盒中放大量一次性注射器并不方便，同时注射器并不能保证正确定量吸取染料而不混入空气。

鉴于上述现有技术，亟需提供一种结构简单、易操作的环介导等温扩增反应套件。

技术实现要素：

本实用新型的目的是提供一种环介导等温扩增反应套件，能够解决环介导等温核酸扩增反应时出现的反应前加入核酸染料影响反应速度和反应结束后加入核酸染料造成环境污染以及染料添加量不精确的问题。

本实用新型所提供的环介导等温扩增反应套件，包括一反应管套和若干个反应管体；

所述反应套内设有与所述反应管体数量相等且相配合的置物孔；

所述反应管体包括一反应管和一内管，所述反应管与一管盖密封配合，所述内管设于所述反应管内且能密封配合于所述管盖上；

所述内管由熔点不高于65℃的材质制成。

所述的环介导等温扩增反应套件中，所述内管的底部与所述反应管的底部之间的间距不小于4cm。

所述的环介导等温扩增反应套件中，所述反应管的内径为0.8～1.5cm；

所述内管的内径为0.3～0.5cm。

所述的环介导等温扩增反应套件中，所述内管为石蜡内管，其中石蜡的熔点为58～65℃；

所述内管用于放置染料，待所述反应管内反应结束后，调节所述反应管的位置，将所述石蜡内管部分浸入恒温水体释放染料。

所述的环介导等温扩增反应套件中，所述石蜡内管通过石蜡熔融产生的粘附性连接于所述管盖上，如通过火燎所述石蜡内管的管口后产生的粘附性粘连于所述管盖上。

所述的环介导等温扩增反应套件中，所述反应管与所述管盖之间可为过盈配合。

所述的环介导等温扩增反应套件中，所述反应管与所述管盖之间可为螺纹配合。

所述的环介导等温扩增反应套件中，所述反应管套由不导热的低密度材料聚苯乙烯板制成。

本实用新型环介导等温扩增反应套件具有以下优点：

1、结构及生产工艺简单，石蜡管易制作，反应管可用普通离心管代替；

2、通过石蜡内管的设置，可精准控制核酸染料添加量；

3、装置结构小巧，节省空间。

附图说明

图1是本实用新型环介导等温扩增反应套件的反应管体的结构示意图。

图2为本实用新型环介导等温扩增反应套件的反应管体的拆分示意图。

图3为本实用新型环介导等温扩增反应套件的反应套管的结构示意图。

图中各标记如下：

1反应管、2石蜡内管、3管盖、4核酸染料、5反应管套、6置物孔。

具体实施方式

下面结合附图对本实用新型做进一步说明，但本实用新型并不局限于以下实施例。

如图1、图2和图3所示，本实用新型环介导等温扩增反应套件包括反应管1、石蜡内管2和反应管套5，反应管1与管盖3通过过盈配合的方式密封配合。反应管1的内径为0.8～1.5cm，石蜡内管2的内径为0.3～0.5cm。石蜡内管2内放置核酸染料4，安装石蜡内管2之前，使用移液枪加入提前定量分离的核酸染料4，然后通过火燎石蜡内管2的管口后产生的粘附性粘连于管盖3上，即将石蜡内管2放置于反应管3的管腔中，且控制石蜡内管2的底部与反应管1的底部之间的间距小于4cm。反应管1可放置于反应管套5的置物孔6内。进行LAMP反应时，调节反应管套5的位置使反应管3内的反应液部分浸入恒温水体后开始LAMP反应，反应结束后调节反应管套5的位置使管盖3处浸入恒温水体中，此时石蜡内管2处温度上升导致石蜡熔化而释放染料。

本实用新型中，内管还可以采用其他易熔融材质，如聚已内酯等。

本实用新型中，反应管1与管盖3之间还可以采用螺纹配合的方式进行密封配合。

本实用新型环介导等温扩增反应套件的构造简单，反应管1为普通离心管，生产方便，密封性好，配合石蜡内管2，解决了荧光染料对LAMP反应的影响问题，同时避免反应后从外界添加染料使反应出现假阳性结果，使用方便，生产成本低廉，反应管套5的存在可调节反应管浸入水浴锅的部分，并可防止反应管内温度过高导致石蜡熔化，并在反应结束后辅助比色。

以上显示和描述了本实用新型的基本原理和主要特征和本实用新型的优点。本行业的技术人员应该了解，本实用新型不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本实用新型的原理，在不脱离本实用新型精神和范围的前提下，本实用新型还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本实用新型范围内。本实用新型要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。