1.引物组合,为如下(a1)或(a2)或(a3):
(a1)由引物组Ⅰ、引物组Ⅱ和引物组Ⅲ组成;
(a2)由所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ和所述引物组Ⅲ中的任意两个组成;
(a3)所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ或所述引物组Ⅲ;
所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ-F3、引物Ⅰ-B3、引物Ⅰ-FIP、引物Ⅰ-BIP、引物Ⅰ-LF和引物Ⅰ-LB组成;
所述引物Ⅰ-F3为如下(b1)或(b2);
(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子;
(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅰ-B3为如下(b3)或(b4);
(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子;
(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅰ-FIP为如下(b5)或(b6);
(b5)序列表的序列3所示的单链DNA分子;
(b6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅰ-BIP为如下(b7)或(b8);
(b7)序列表的序列4所示的单链DNA分子;
(b8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅰ-LF为如下(b9)或(b10);
(b9)序列表的序列5所示的单链DNA分子;
(b10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅰ-LB为如下(b11)或(b12);
(b11)序列表的序列6所示的单链DNA分子;
(b12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子;
所述引物组Ⅱ由引物Ⅱ-F3、引物Ⅱ-B3、引物Ⅱ-FIP、引物Ⅱ-BIP、引物Ⅱ-LF和引物Ⅱ-LB组成;
所述引物Ⅱ-F3为如下(c1)或(c2);
(c1)序列表的序列7所示的单链DNA分子;
(c2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅱ-B3为如下(c3)或(c4);
(c3)序列表的序列8所示的单链DNA分子;
(c4)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅱ-FIP为如下(c5)或(c6);
(c5)序列表的序列9所示的单链DNA分子;
(c6)将序列9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列9具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅱ-BIP为如下(c7)或(c8);
(c7)序列表的序列10所示的单链DNA分子;
(c8)将序列10经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列10具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅱ-LF为如下(c9)或(c 10);
(c9)序列表的序列11所示的单链DNA分子;
(c10)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅱ-LB为如下(c11)或(c12);
(c11)序列表的序列12所示的单链DNA分子;
(c12)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的DNA分子;
所述引物组Ⅲ由引物Ⅲ-F3、引物Ⅲ-B3、引物Ⅲ-FIP、引物Ⅲ-BIP、引物Ⅲ-LF和引物Ⅲ-LB组成;
所述引物Ⅲ-F3为如下(d1)或(d2);
(d1)序列表的序列13所示的单链DNA分子;
(d2)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅲ-B3为如下(d3)或(d4);
(d3)序列表的序列14所示的单链DNA分子;
(d4)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列14具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅲ-FIP为如下(d5)或(d6);
(d5)序列表的序列15所示的单链DNA分子;
(d6)将序列15经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列15具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅲ-BIP为如下(d7)或(d8);
(d7)序列表的序列16所示的单链DNA分子;
(d8)将序列16经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列16具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅲ-LF为如下(d9)或(d10);
(d9)序列表的序列17所示的单链DNA分子;
(d10)将序列17经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列17具有相同功能的DNA分子;
所述引物Ⅲ-LB为如下(d11)或(d12);
(d11)序列表的序列18所示的单链DNA分子;
(d12)将序列18经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列18具有相同功能的DNA分子。
2.权利要求1所述引物组合在制备试剂盒中的应用;所述试剂盒的用途为如下(e1)或(e2)或(e3):
(e1)检测待测菌是否含有产ESBL酶的耐药基因CTX-M-1、CTX-M-9和/或GES-1;
(e2)鉴定产ESBL酶的耐药基因CTX-M-1、CTX-M-9和/或GES-1;
(e3)检测待测样本中是否含有产ESBL酶的耐药基因CTX-M-1、CTX-M-9和/或GES-1。
3.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒;所述试剂盒的用途为如下(e1)或(e2)或(e3):
(e1)检测待测菌是否含有产ESBL酶的耐药基因CTX-M-1、CTX-M-9和/或GES-1;
(e2)鉴定产ESBL酶的耐药基因CTX-M-1、CTX-M-9和/或GES-1;
(e3)检测待测样本中是否含有产ESBL酶的耐药基因CTX-M-1、CTX-M-9和/或GES-1。
4.权利要求3所述试剂盒的制备方法,包括将各条引物单独包装的步骤。
5.一种检测待测菌中是否有耐药基因CTX-M-1和/或CTX-M-9和/或GES-1的方法,包括如下步骤:
(1)提取待测菌的基因组DNA;
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板,分别采用所述引物组合中的每个引物组进行环介导等温扩增,然后进行如下判断:
如果采用所述引物组Ⅰ可以实现以所述基因组DNA为模板的特异性扩增,待测菌中含有或候选含有CTX-M-1;
如果采用所述引物组Ⅱ可以实现以所述基因组DNA为模板的特异性扩增,待测菌中含有或候选含有CTX-M-9;
如果采用所述引物组Ⅲ可以实现以所述基因组DNA为模板的特异性扩增,待测菌中含有或候选含有GES-1。
6.一种检测待测样本中是否含有含有耐药基因CTX-M-1和/或CTX-M-9和/或GES-1的方法,包括如下步骤:
(1)提取待测样本的总DNA;
(2)以步骤(1)提取的总DNA为模板,分别采用所述引物组合中的每个引物组进行环介导等温扩增,然后进行如下判断:
如果采用所述引物组Ⅰ可以实现以所述总DNA为模板的特异性扩增,待测样本中含有或疑似含有耐药基因CTX-M-1;
如果采用所述引物组Ⅱ可以实现以所述总DNA为模板的特异性扩增,待测样本中含有或疑似含有耐药基因CTX-M-9;
如果采用所述引物组Ⅲ可以实现以所述总DNA为模板的特异性扩增,待测样本中含有或疑似含有耐药基因GES-1。
7.权利要求1所述引物组合在检测待测菌是否含有耐药基因CTX-M-1和/或CTX-M-9和/或GES-1中的应用。
8.权利要求1所述引物组合在检测待测样本中是否含有耐药基因CTX-M-1和/或CTX-M-9和/或GES-1中的应用。
9.权利要求1所述引物组合在鉴定产ESBL酶的耐药基因CTX-M-1、CTX-M-9和/或GES-1中的应用。